CD+T细胞及Treg细胞表面PD-1水平与肺癌患者术后预后的关系

目的 探讨CD⁺T细胞及调节性T(Treg)细胞表面程序性死亡受体1(PD-1)水平与肺癌患者术后预后的关系。方法 选取行肺癌根治术的肺癌患者126例,统计术后2年内预后不良发生率,并根据其预后情况将其分为良好组和不良组,单因素分析肺癌患者术后预后不良的影响因素,Logistic回归分析肺癌患者术后预后不良的影响因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析CD⁺T细胞及Treg PD-1水平对肺癌患者术后预后的预测价值。结果 两组肿瘤淋巴结转移(TNM)分期、CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺及Treg PD-1水平比较,均有显著差异(P<0.05);Logistic回归分析显示,CD3⁺、CD3⁺CD4⁺是肺癌患者术后预后不良的独立保护因素,CD3⁺CD8⁺、Treg PD-1是肺癌患者术后预后不良的独立危险因素(...     

过继性免疫治疗对非小细胞肺癌患者外周血T细胞亚群的影响

目的 研究细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞治疗对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者外周血T细胞亚群及一般情况的影响。方法 采集非小细胞肺癌患者外周血,常规方法体外扩增CIK细胞,分三次回输患者体内,流式细胞仪检测非小细胞肺癌患者治疗前与治疗3次后T细胞亚群的变化,分析其与健康对照组相比外周血T细胞亚群的差异,并观察CIK细胞治疗前后患者一般情况变化。结果 与对照组相比,NSCLC患者外周血中CD3⁺ T 细胞比例、CD3⁺CD4⁺T细胞比例、CD4⁺/CD8⁺ 比值显著下降（P<0.05）,CD3⁺CD8⁺ T细胞比例显著升高（P<0.05）。CIK细胞治疗后与治疗前,CD3⁺ T 细胞比例、CD3⁺CD4⁺ T细胞比例、CD4⁺/CD8⁺ T细胞比值显著升高（P<0.05）,CD3⁺CD8⁺ T细胞比例显著降低（P<0.05）。CIK细胞治疗后与对照组相比,CD3⁺ T 细胞比例、CD4⁺/CD8⁺T细胞比值显著下降（P<0.05）。CD3⁺CD4⁺ T细胞比例、CD3⁺CD8⁺ T细胞比例升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。CIK细胞治疗前Tregs较对照组显著升高（P<0.05）。CIK细胞治疗后与治疗前相比,Tregs比例显著下降（P<0.05）。结论 CIK细胞输注治疗可以增强NSCLC患者的免疫功能,并改善患者的一般情况,提高生活质量,且未见明显不良反应。     

卵巢癌细胞外泌体抑制外周单个核细胞源性树突状细胞成熟的机制研究

目的 探究卵巢癌细胞源性外泌体对人外周血树突状细胞(DCs)成熟的影响。方法 从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠从中分选出CD14⁺的细胞;采用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白介素-4(rhIL-4)联合刺激的办法诱导CD14⁺/PBMC分化为未成熟树突状细胞(iDCs),光镜确认细胞形态;超速离心提取卵巢癌顺铂耐药细胞外泌体(A2780cis-外泌体),蛋白质印迹法检测其特征性蛋白标志物,透射电镜(TEM)观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)检测外泌体粒径分布;iDCs与A2780cis-外泌体共培养后给予重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)诱导,流式细胞术检测CD83⁺/HLA-DR⁺/CD1a⁺细胞比例变化。结果 超速离心提取的卵巢癌顺铂耐药细胞外泌体,TEM下可检测到直径约为60 nm的“杯盏状”外泌体颗粒。蛋白质印迹法结果显示A2780cis细胞各蛋白表达均为1,A2780cis-外泌体中CD9、CD8...     

中晚期宫颈鳞癌患者治疗前外周血Treg计数分析

背景与目的：中晚期宫颈鳞癌同期放化疗(concurrent chemoradiotherapy,CCRT)治疗前性价比高的疗效判断方法较有限,该研究拟通过检测治疗前外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/-调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)亚群计数及血清鳞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCC-Ag)水平,评价两者预测临床疗效的可行性。方法：采集44例Ⅱ_B~Ⅳ_A期宫颈鳞癌患者行CCRT治疗前的外周血标本,分别利用流式细胞免疫表型分析和酶联免疫法检测外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/- Treg计数及血清SCC-Ag水平。收集临床和病理资料,并统计检验2个指标对疗效的预测作用。结果：治疗前外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/- Treg计数在临床有效组低于无效组［(8.78±2.80)% vs (10.95±2.56)%,P<0.05］,血清SCC-Ag在不同临床疗效组间差异无统计学意义,且这2个、指标之间未发现相关性(Spearman’rho=-0.093,P=0.540)。经受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线确定治疗前外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/- Treg及血清SCC-Ag最佳界值分别为9.76%与9.50 ng/mL。单因素分析显示,治疗前外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/- Treg计数(OR=1.901,95%CI：1.112~3.219,P=0.017)对CCRT疗效有预测作用,而血清SCC-Ag水平无预测作用(OR=0.998,95%CI：0.001~4.253,P=0.897)。多因素Logistic回归分析显示,治疗前外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/- Treg为独立的临床疗效预测因子(OR=3.115,95%CI：1.253~7.742,P=0.014)。结论：治疗前外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/- Treg计数用于中晚期宫颈鳞癌患者CCRT临床疗效预测具有可行性。     

小鼠衰老所致“正虚”过程中免疫功能衰退表征的特点

目的：基于小鼠渐进衰老模型探讨衰老所致“正虚”的免疫功能衰退表征的特点。方法：使用不同月龄(2、6、15月龄)C57BL/6小鼠,通过流式细胞术检测并比较小鼠外周血和脾组织中T细胞、髓源性抑制细胞(MDSC)及其亚群的丰度变化。结果：外周血中T细胞亚群表型为CD3⁺CD4⁺CD44-CD62L⁺的幼稚CD4⁺T细胞(2 vs 6月龄,P=0.137;2 vs 15月龄,P=0.004;6 vs15月龄,P=0.105)和表型为CD3⁺CD8⁺CD44-CD62L⁺的幼稚CD8⁺T细胞(2 vs 6月龄,P=0.179;2 vs 15月龄,P=0.001;6 vs15月龄,P=0.015)出现与衰老有关的细胞比例降低,差异具有统计学意义。表型为CD3⁺CD4⁺CD44⁺CD62L⁺的中央记忆CD8⁺T细胞出...     

白细胞介素-35对肝细胞癌患者CD4+CD25+CD127dim/-调节性T细胞的调控作用

目的 观察肝细胞肝癌(HCC)患者外周血白细胞介素-35(IL-35)水平和CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-调节性T细胞(Treg)比例,评估IL-35对Treg数量和功能的影响。方法 共有51例HCC患者和25例对照者,分离外周血单个核细胞(PBMC)和血浆,实时定量PCR法检测PBMC中IL-35亚基mRNA相对表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血IL-35水平,流式细胞术检测PBMC中CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-Treg比例。使用重组人IL-35(1 ng/ml)刺激HCC组PBMC 24 h,观察Treg比例和EBI3、IL-12p35 mRNA相对表达量的变化。分选17例HCC患者的Treg,经重组人IL-35刺激后与自体PBMC共培养48 h,通过检测细胞增殖和细胞因子表达评估IL-35对Treg功能的影响。组间比较采用t检验或配对t检验。结果 HCC组血浆IL-35水平显著高于对照组[(1024±218.0)pg...     

信迪利单抗对晚期非小细胞肺癌患者T淋巴细胞亚群的影响及其治疗效果研究

目的 探讨信迪利单抗对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者T淋巴细胞亚群的影响及其治疗效果。方法 根据治疗方法的不同将145例晚期NSCLC患者分为对照组(n=71)和观察组(n=74),对照组患者采用吉西他滨+顺铂(GP)方案化疗,观察组患者在对照组的基础上给予信迪利单抗治疗。比较两组患者的临床疗效、T淋巴细胞亚群[CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺、调节性T细胞(Treg)、辅助性T细胞1(Th1)/辅助性T细胞2(Th2)]、肿瘤标志物[血清铁蛋白(SF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状细胞癌抗原(SCCA)、癌胚抗原(CEA)]及不良反应发生情况。结果 观察组患者的客观缓解率(ORR)为29.73%,与对照组患者的22.54%比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。观察组患者的疾病控制率(DCR)为63.51%,高于对照组患者的46.48%,差异有统计学意义(P﹤0.05)。治疗后,两组患者的CD4⁺水平、CD4⁺/CD8⁺     

EGFR单抗及小分子酪氨酸激酶抑制剂联合放疗对非小细胞肺癌细胞放疗敏感性的影响

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)单抗及EGFR小分子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)联合放疗对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞放疗敏感性的影响,并分析其作用机制。方法将83例非小细胞肺癌患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组41和观察组42例。对照组给予EGFR-TKI联合放疗,观察组在对照组治疗基础上给予EGFR单抗治疗,比较2组治疗前后外周血T淋巴细胞亚群水平(CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺)、血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、癌胚抗原(CEA)水平,不良反应,NSCLC细胞放疗敏感性及平均无疾病进展生存时间。结果治疗8周后,对照组CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺水平较治疗前明显下降,观察组CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺水平显著高于对照组(P<0.05)。治疗8周后,2组血清MMP-9、CEA水平均显著下降(P<0.05),且观察组血清MMP-9、CEA水平均低于对照组(P<0.05)。观察组不良反应发生率与对照组无显著差异(P>0.05),放疗敏感性、平均无疾病进展生存时间均高于对照组(P<0.05)。结论EGFR单抗与EGFR-TKI具有协同作用,联合放疗可增强NSCLC细胞放疗敏感性,提高疗效。     

不同乳腺癌干细胞亚群的自我更新和致瘤能力差异

目的 分析原代培养乳腺癌细胞中不同乳腺癌干细胞亚群的自我更新、致瘤能力差异。方法 采用流式细胞术和免疫荧光实验,从乳腺癌原代培养细胞中分选、鉴定CD44⁺CD24^-/low、ALDH1⁺和ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low细胞亚群,分析各分选细胞占总肿瘤细胞的比例;通过克隆形成实验观察各组细胞的自我更新能力;通过裸鼠致瘤实验观察各组细胞的致瘤能力。结果 CD44+CD24^-/low细胞占总细胞比例的7.2%,ALDH1⁺细胞所占比例为4.6%,ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low细胞所占比例为1.5%。三组细胞自我更新和致瘤能力由强至弱依次为ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low、ALDH1⁺、CD44⁺CD24^-/low细胞,各组细胞间比较差异均存在统计学意义（P<0.05）。 结论 乳腺癌组织中CD44+CD24-/low、ALDH1⁺和ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low三组乳腺癌干细胞亚群之间的自我更新和致瘤能力有明显差异,ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low亚群细胞具有最强的自我更新和致瘤能力,提示ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low可能是更具有特异性的乳腺癌干细胞标志物。     

康莱特注射液联合化疗对晚期非小细胞肺癌患者血清肿瘤标志物的影响

目的 探讨康莱特注射液联合化疗对晚期非小细胞肺癌患者血清肿瘤标志物的影响。方法 将200例晚期非小细胞肺癌患者按照治疗方式的不同分为单独化疗组和联合用药组,每组100例,单独化疗组采用常规化疗方案,联合用药组加用康莱特注射液治疗,两组均治疗2个疗程。比较 两组患者的治疗总有效率、免疫功能指标、血清肿瘤标志物、生活质量以及不良反应发生率。结果联合用药组患者的总有效率明显高于单独化疗组,差异有统计学意义(P﹤0.01)。治疗后,联合用药组患者CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺及生命质量测定量表各维度评分均明显高于单独化疗组,血清癌胚抗原、糖类抗原125、糖类抗原19-9水平均明显低于单独化疗组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。联合用药组患者不良反应总发生率低于单独化疗组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论 康莱特注射液联合化疗可有效改善晚期非小细胞肺癌患者的免疫功能,降低血清肿瘤标志物水平和不良反应发生率,提高生活质量,疗效确切。     

结直肠癌肿瘤微环境中调节性T细胞CD39、CD73亚群及二者双阳性亚群的临床意义

目的 观察结直肠癌肿瘤组织微环境中浸润的调节性T细胞的临床意义,并探究其CD39、CD73及CD39,CD73双阳性亚群与肿瘤微环境中其他淋巴细胞及临床病理参数之间的关系。方法 收集24例结直肠癌患者根治术后组织标本,剪碎并分离培养组织内肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor infiltrating lymphocyte,TIL),以流式细胞术观察调节性T细胞CD39⁺、CD73⁺及CD39⁺CD73⁺亚群与患者临床病理参数之间的关联。结果 结直肠癌肿瘤组织微环境中浸润的调节性T细胞CD73⁺亚群,CD39⁺CD73⁺亚群与淋巴结转移及分化程度不良具有相关性,并且其机制与肿瘤相关性炎症密切相关。结论 相比Treg中的其他亚群,CD39⁺CD73⁺阳性的结直肠肿瘤浸润Treg具有更为独特的生物学活性,本研究为预测结直肠癌预后提供了新思路与理论依据。     

高强度聚焦超声对前列腺癌小鼠的疗效及T细胞亚群的影响

目的探讨高强度聚焦超声（high intensity focused ultrasound, HIFU）对前列腺癌荷瘤小鼠的疗效及T细胞亚群的影响。方法RM-1细胞接种于C57BL6小鼠建立小鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,随机分为肿瘤对照组、HIFU组、放疗组和HIFU联合放疗组。观察治疗后各组的肿瘤生长曲线,计算肿瘤体积倍增时间（DT）。2周后,通过流式细胞仪检测正常小鼠和荷瘤小鼠外周血CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺ 细胞占白细胞总数的百分比。结果与肿瘤对照组相比,HIFU组、放疗组肿瘤生长延缓,DT显著延长。HIFU组小鼠的CD3⁺(%)、CD4⁺(%)显著高于肿瘤对照组,而放疗组与肿瘤对照组差异无统计学意义。HIFU联合放疗组的DT较HIFU组显著延长,小鼠的CD3⁺(%)、CD4⁺(%)显著高于HIFU组,且CD4⁺(%)显著高于正常小鼠。结论HIFU治疗前列腺癌不仅能局部抑制肿瘤生长,而且能通过对T细胞亚群的影响提高机体的细胞免疫水平。HIFU联合放疗能进一步提高疗效。     

基于CD19/IgM亚群分析套细胞淋巴瘤骨髓中T细胞的构比异常

目的:研究T细胞在初诊IV期套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma, MCL)骨髓单个核细胞中的差异表达。方法:首先流式检测健康供者及MCL组中CD19^-/IgM^-,CD19^-/IgM⁺,CD19⁺/IgM^-,CD19⁺/IgM⁺亚群的比例;其次检测CD45⁺CD3⁺T细胞在两组中的总比例;最后检测T细胞在两组四个亚群中的占比。结果:四个亚群在组内有极其显著的差异(P<0.000 1),两组间无统计学差异。T细胞在MCL组占(0.46±0.13)%较健康供者组(1.10±0.06)%显著减少(P=0.025 1)。四个亚群中T细胞占比在健康供者组内有极其显著的差异(P<0.000 1),而MCL组内差异消失(P=0.329 4)。T细胞在MCL组CD19^-/IgM^-亚组中占(0.02±0.01)%较...     

CD44和CD24标记的宫颈癌细胞亚群特性

目的 考察Siha细胞系中的CD44^+/CD24⁺能否富集宫颈癌干细胞。方法 用流式细胞仪分选出CD44⁺/CD24⁺Siha细胞,用无血清悬浮培养观察成球能力、裸鼠移植瘤实验观察成瘤能力、透射电子显微镜观察辐射前后两组细胞形态变化,并通过Transwell侵袭实验比较细胞侵袭能力的差异。结果 耐放疗细胞中CD44^+/CD24⁺Siha细胞比例明显高于其在亲代Siha细胞中的比例;无血清培养CD44⁺/CD24⁺Siha细胞组可以形成致密且体积较大的细胞球,CD44^+/CD24⁺Siha细胞组致瘤时间早,成瘤率高;辐射后CD44⁺/CD24⁺Siha细胞较亲代Siha细胞更抗凋亡;CD44⁺/CD24⁺Siha细胞组的迁移细胞数明显高于亲代Siha细胞组,所有数据均具有统计学意义。结论 CD44⁺/CD24⁺Siha具备部分干细胞特性,CD44⁺/CD24⁺可能成为宫颈癌干细胞特异性表面标志物。     

硼替佐米联合地塞米松、来那度胺化疗方案治疗多发性骨髓瘤的疗效和安全性评价

目的 探讨硼替佐米联合地塞米松、来那度胺化疗方案治疗多发性骨髓瘤的疗效及安全性。方法 将多发性骨髓瘤患者96例按随机数字表法分为观察组和对照组。对照组采用硼替佐米联合环磷酰胺、地塞米松化疗方案，观察组采用硼替佐米联合地塞米松、来那度胺化疗方案，均连续给予3个疗程的治疗(28 d为1个疗程)。将2组患者的各项指标进行统一的对比分析。结果 治疗后观察组患者的临床总有效率(93.75%)高于对照组(79.17%);治疗后2组患者的血清白细胞介素(IL)-6、IL-17、C反应蛋白(CRP)、M蛋白、β2微球蛋白水平、骨髓瘤细胞比例、外周血CD3⁺CD8⁺水平与治疗前比较均降低，观察组较对照组均处于较低水平；治疗后2组患者外周血CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD4⁺/CD3⁺CD8⁺、Treg、血清血红蛋白(Hb)水平与治疗前比较均升高，观察组较对照组均处于较高水平，有显著性差异(P均<0.05);治疗期间2组不良反应...     

信迪利单抗联合安罗替尼对Ⅲb～Ⅳ期非小细胞肺癌患者的疗效及安全性分析

目的 探讨信迪利单抗联合安罗替尼在Ⅲb～Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的应用效果。方法 选取Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者132例,根据治疗方案不同分为2组,其中对照组61例、研究组71例。对照组采用安罗替尼+紫杉醇方案化疗,研究组采用信迪利单抗+安罗替尼方案化疗,统计比较2组客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)、治疗前后肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)]水平、黏附分子[可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、可溶性血管黏附分子-1(sVCAM-1)]含量、免疫指标(CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺)、生存质量(FACT-L)及不良反应发生率。结果研究组ORR为66.20%、DCR为85.92%,高于对照组的49.18%、65.57%(P<0.05);治疗3个周期后研究组血清CEA、CA125水平及sICAM-1、sVCAM-1含量较对照组低(P<0.05);治疗3个周期后研究组CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺及FA...     

程序性死亡受体1抑制剂在慢性阻塞性肺疾病合并非小细胞肺癌患者中的应用效果

目的 探讨程序性死亡受体1(PD-1)抑制剂在慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的应用效果,并观察其对患者免疫功能、生活质量的影响。方法 根据治疗方案的不同将90例COPD合并NSCLC患者分为对照组(n=50)和观察组(n=40),对照组患者给予多西他赛+顺铂化疗,观察组患者给予纳武利尤单抗联合多西他赛+顺铂化疗。比较两组患者的临床疗效、免疫功能指标(CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺)、肿瘤标志物[糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)]水平、生活质量[卡氏功能状态(KPS)评分]和不良反应发生情况。结果 观察组患者的客观缓解率为72.00%,高于对照组患者的50.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组不同TNM分期患者CD3⁺、CD4⁺水平和CD4⁺/CD8⁺均高于对照组,CD8⁺、CA...     

纳布啡与羟考酮自控镇痛对非小细胞肺癌患者术后免疫因子水平影响的比较

目的 比较纳布啡与羟考酮自控静脉镇痛(Patient controlled intravenous analgesia,PCIA)对非小细胞肺癌患者术后免疫因子水平的影响。方法 选择我院择期行胸腔镜肺叶切除术的非小细胞肺癌患者80例,分为纳布啡组(N组)和羟考酮组(O组)。术后给予PCIA镇痛,配置方法:N组为1 mg/kg纳布啡+10 mg托烷司琼,O组为羟考酮20 mg+10 mg托烷司琼,均用生理盐水稀释至150 mL。分别在术前30 min(T₀)、术后4 h(T₁)、8 h(T₂)、12 h(T₃)、24 h(T₄)时抽取外周静脉血5 mL,用于测定血清IgG、IgM、IgA、TGF-β1、VEGF及IL-17水平,并计数CD4⁺、CD8⁺T细胞、NK细胞及CD4⁺/CD8⁺比值;分别在T₁、T₂、T₃、T₄时对所有患者进行VAS评分。结果 两组患者术后各时间点VAS评分、PCIA泵有效按压次数及总消耗量均无统计学差异(P＞0.05);与O组比较,N组血清IgG水平在T₁~T₄,IgM、IgA水平则在T₂~T₄时要明显更高,而TGF-β1及VEGF水平在T₂~T₄,IL-17水平在T₁~T₄时要更低,CD4⁺T、NK细胞及CD4⁺/CD8⁺比值在T₂~T₄要更高,而CD8⁺T细胞则在T₁~T₄时要更高,差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 纳布啡用于非小细胞肺癌患者行胸腔镜肺叶切除术后PCIA能够有效控制术后疼痛,能够增加机体免疫球蛋白及免疫细胞水平,降低肿瘤免疫抑制因子水平,减轻围术期免疫抑制程度,改善机体免疫功能。     

乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究

目的 通过乳腺癌细胞系及其干细胞的培养,化疗药干预和流式细胞仪筛选鉴定,探讨不同乳腺癌细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例,及富集乳腺癌干细胞相关亚群的方法。方法 通过细胞培养乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231,观察生长曲线,比较化疗药物干预下生长情况;利用流式细胞仪检测两种乳腺癌细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例;无血清悬浮培养,化疗药(多西紫杉醇、表阿霉素)干预这两种乳腺癌细胞系,观察其是否形成细胞球。结果 (1)MDA-MB-231细胞系倍增时间短,生长速率高于MCF-7细胞系;(2)MCF-7细胞系中可能存在较大比例肿瘤干细胞,其对化疗抵制,能自我更新;(3)化疗敏感性用两独立样本t检验,MCF-7细胞,差异没有统计学意义;MDA-MB-231细胞,差异有统计学意义,提示MDA-MB-231细胞系对该方案化疗较敏感;(4)无血清悬浮培养,MDA-MB-231细胞系未发现明显细胞球;MCF-7细胞系初次无血清培养约6天出现细胞球。加入化疗药筛选后两种细胞,见大部分肿瘤细胞逐渐死亡,未发现明显细胞球;(5)流式细胞仪检测,MCF-7、MDA-MB-231两种细胞系中主要是CD44⁺CD24⁺亚群和CD44^-CD24⁺亚群,CD44⁺CD24^-/low细胞比例分别2.07%和0.20%。结论 (1)MDA-MB-231细胞系增值较快,恶性度相对较高,其对TA联合化疗药物较敏感;MCF-7细胞系中可能存在少量肿瘤干细胞,对化疗抵制,能自我更新;(2)无血清培养液培养MCF-7细胞系能形成悬浮细胞球;流式细胞仪检测两种细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例小;(3)CD44⁺CD24^-/low表型可能不是乳腺癌干细胞唯一特异性的表面标志。     

载脂蛋白C3 转基因小鼠脾脏免疫细胞表型及其活性分析

目的：分析载脂蛋白C3（Apo C3）转基因小鼠脾脏免疫细胞的表型及活性。方法：以12只ICR背景Apo C3转基因小鼠为研究模型,选取鼠龄/性别匹配的野生型小鼠作为对照,采集小鼠球后静脉丛血液,以酶反应显色比色法联合酶标仪测定血浆甘油三酯水平,选取血浆甘油三酯含量≥ 1 000 mg/dL （11.3 mmol/L）的小鼠用于后续实验。取小鼠脾脏制备成单细胞悬液,采用细胞膜表面分子、胞内分子及核内分子染色法,通过流式细胞术检测转基因小鼠和野生型小鼠脾脏免疫细胞频率和表型。再将转基因小鼠或野生型小鼠脾脏细胞与结肠癌细胞MC38分别以1：1、1：3、3：1效靶比共培养72 h后,通过流式细胞术检测CD8⁺ T细胞CD107a的表达。结果：Apo C3转基因小鼠血浆甘油三酯含量较野生型小鼠显著升高（P<0.01）,而体质量差异无统计学意义（P>0.05）。与野生型小鼠相比,Apo C3转基因小鼠脾脏CD3⁺CD8⁺、CD3⁺CD8⁺NKG2D⁺细胞频率明显增多,髓系抑制性Gr-1⁺CD11B⁺细胞频率增加,脾脏NK1.1⁺NK、NK1.1⁺NKG2D⁺细胞的频率明显减少（P均>0.05）;脾脏CD3⁺CD4⁺NKG2D⁺、CD3⁺CD4⁺IL-17⁺细胞频率以及调节性T细胞,NKT细胞,γδT细胞,B细胞和巨噬细胞频率均无明显变化（P均>0.05）。Apo C3转基因小鼠CD8⁺CD62L^-CD44⁺、CD8⁺CD44⁺KLGR1⁺频率升高,以效应性T细胞为主,且CD8⁺ T细胞分泌IFN-γ活性增强;转基因小鼠中CD8⁺ T淋巴细胞CD107a的表达增加差异均具有统计学意义（P均<0.05）。结论：Apo C3转基因小鼠呈现高水平血浆甘油三酯,其免疫细胞表型及活性具有显著变化,其中CD8⁺ T细胞频率及生物活性上调,髓系抑制性细胞频率升高,NK细胞频率降低;并且转基因小鼠中CD8⁺T淋巴细胞对靶细胞杀伤能力增强。