lncRNA BLACAT1靶向结合miR-29a-3p调控甲状腺癌细胞TPC-1的生物学行为

目的:探讨长链非编码RNA BLACAT1(lncRNA BLACAT1)调控microRNA-29a-3p（miR-29a-3p）对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的作用及其可能机制。方法:收集2018年06月至2019年03月在我院行甲状腺癌切除术的31例患者的肿瘤组织和相应的癌旁组织。采用qRT-PCR检测lncRNA BLACAT1、miR-29a-3p在甲状腺癌组织、癌旁组织、5种甲状腺癌细胞系（SW579、 PDTC-1、 HMGA1、 TPC-1、 KAT-5）及正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的表达水平;调控TPC-1甲状腺癌细胞系中lncRNA BLACAT1、miR-29a-3p的表达,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力。用生物信息分析和双荧光素酶报告基因法预测和验证lncRNA BLACAT1与miR-29a-3p的靶向关系。结果:与癌旁组织和正常甲状腺细胞相比,甲状腺癌组织和细胞系中lncRNA BLACAT1的表达水平显著上调,miR-29a-3p的表达水平显著下调（P＜0.05）;过表达lncRNA BLACAT1促进TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭;在甲状腺癌组织中lncRNA BLACAT1的表达水平与miR-29a-3p的表达水平呈负相关（r2 =0.492,P＜0.001）;双荧光素酶分析证实lncRNA BLACAT1能特异性结合miR-29a-3p,并能降低其表达;过表达miR-29a-3p抑制TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭,且miR-29a-3p可以抑制由lncRNA BLACAT1过表达引起的TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的增强。结论:lncRNA BLACAT1通过靶向调控miR-29a-3p表达影响甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,从而促进甲状腺癌的发展。     

lncRNA TUG1通过miR-524-5p/BRAF轴调节甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖、凋亡和EMT进程

目的：lncRNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)对甲状腺乳头状癌（PTC）细胞（TPC-1）增殖、凋亡和EMT进程的影响及作用机制。方法：qPCR检测人PTC组织（2019年5月至2021年4月期间在河北省唐山市工人医院手术切除的35例PTC组织及对应癌旁组织标本）与人PTC细胞TPC-1、BHP10-3、K1、SW-1736及人正常甲状腺上皮Nthyori 3-1细胞中lncRNA TUG1的表达。体外培养TPC-1细胞,将其分为对照组、si-NC组、si-TUG1组、miR-NC组、miR-524-5p mimic组、si-TUG1+NC inhibitor组、si-TUG1+miR-524-5p inhibitor组、miR-524-5p mimic+pcDNA组、miR-524-5p mimic+pcDNABRAF）组,对细胞进行si-TUG1、miR-524-5 pmimic、miR-524-5p inhibitor、pcDNA BRAF和各自相应的对照质粒转染,采用CCK-8法、FCM法分别检测TPC-1细胞增殖、凋亡情况;WB法检测TPC-1细胞中BRAF、P...     

过表达miR-202对甲状腺癌细胞恶性表型的影响及作用机制

目的探讨过表达miR-202对甲状腺癌细胞恶性表型的影响及作用机制。方法选取2017年1月至2018年12月间深圳大学附属第一医院收治的行手术治疗的甲状腺癌患者的癌组织及癌旁正常组织各32例,用qRT-PCR检测miR-202在甲状腺癌组织中的表达,对甲状腺癌细胞进行miR-202模拟物转染或miR-202模拟物与ROCK1表达载体共转染,采用qRT-PCR检测转染效率,用CCK8实验和Caspase-3实验检测转染后甲状腺癌细胞的增殖和凋亡能力。采用qRT-PCR检测miR-202模拟物转染后ROCK1、E-cadherin、Twist、N-cadherin和MMP2的表达。采用双荧光素酶报告基因法检测ROCK1与miR-202之间的靶向关系。结果 miR-202在甲状腺癌组织中下调,miR-202的上调可抑制甲状腺癌细胞增殖,促进甲状腺癌细胞凋亡。miR-202上调促进E-cadherin表达,抑制N-cadherin、Twist和MMP2的表达。ROCK1是miR-202的靶基因,miR-202通过靶向ROCK1调控甲状腺癌细胞的增殖和凋亡能力及相关基因表达。结论 miR-202通过靶向ROCK1基因调节甲状腺癌细胞的增殖和凋亡。     

miR-138-5p靶向调控SOX4对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的:研究微小RNA-138-5p(miR-138-5p)通过调控SOX4抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡的机制。方法:分别利用miR-NC与miR-138-5p体外模拟物(mimics)转染骨肉瘤细胞系MG63,构建阴性对照与miR-138-5p上调表达模型;采用CCK8法检测细胞增殖活力;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力和迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡变化;通过双荧光素酶活检检测miR-138-5p与SOX4的相互作用关系;利用Real-time PCR(RT-PCR)法检测不同处理组中miR-138-5p与SOX4的mRNA水平表达变化;利用Western blot法检测不同处理组中SOX4及凋亡相关蛋白BAX与BCL2的表达变化。结果:利用miR-138-5p mimics转染MG63细胞后,细胞中miR-138-5p表达较对照组显著上调(t=8.661,P=0.001);miR-NC与miR-138-5p mimics分别转染细胞24 h、48 h以及72 h后,CCK8结果显示MG63细胞的增殖能力较对照组显著降低(24 h:t=4.145,P...     

miR-93-5p靶向CCNG2基因对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:研究miR-93-5p对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR、Western blot检测甲状腺癌细胞SW579、人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-93-5p、CCNG2的表达;将anti-miR-93-5p组（转染anti-miR-93-5p）、anti-miR-NC组（转染anti-miR-NC）、pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-CCNG2组（转染pcDNA-CCNG2）、anti-miR-93-5p+si-con组（共转染anti-miR-93-5p和si-con）、anti-miR-93-5p+si-CCNG2组（共转染anti-miR-93-5p和si-CCNG2）,均用脂质体法转染至SW579细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1相比,甲状腺癌细胞SW579中miR-93-5p表达显著升高,CCNG2表达显著降低（P<0.05）;抑制miR-93-5p、过表达CCNG2均可抑制SW579细胞增殖,促进凋亡;miR-93-5p可直接抑制SW579细胞中CCNG2的表达,敲减CCNG2可逆转抑制miR-93-5p对SW579细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:抑制miR-93-5p可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向负调控CCNG2有关,将可为分化型甲状腺癌的预防和治疗提供新靶点。     

微RNA-524-5p通过靶向抑制SOX9基因表达增加胃癌细胞的顺铂敏感性北大核心CSCD

目的:探讨微RNA-524-5p(microRNA-524-5p,miR-524-5p)介导顺铂治疗胃癌的作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测胃癌组织、癌旁组织以及顺铂耐药和亲本胃癌细胞系中miR-524-5p的表达水平。顺铂耐药性胃癌SGC-7901和MKN-45细胞经miR-524-5p模拟物或对照RNA转染后,采用CCK-8法检测细胞活力。采用荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法鉴定miR-524-5p靶向蛋白SOX9(SRY-related high mobility group-box 9)的表达情况。采用'拯救'实验检测SOX9过表达后miR-524-5p诱导胃癌细胞对顺铂的耐药性变化。结果:与正常胃上皮黏膜细胞GES1相比,胃癌细胞SGC-7901和MKN-45中miR-524-5p水平明显下调(P值均<0.05);与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-524-5p水平明显下调(P <0.05)。与敏感性亲代细胞相比,顺铂处理后的胃癌耐药细胞SGC-7901和MKN-45中miR-524-5p表达水平均降低(P值均<0.05)。miR-524-5p模拟物转染后,顺铂耐药性胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的化疗敏感性均明显增强(P值均<0.05)。SOX9是miR-524-5p的功能靶蛋白;SOX9过表达可以抵消miR-524-5p的化疗增敏作用,即与单独miR-524-5p模拟物转染组相比,SOX9过表达质粒+miR-524-5p模拟物转染后的胃癌细胞SGC-7901和MKN-45对顺铂的敏感性均明显降低(P值均<0.05)。结论:miR-524-5p影响人胃癌细胞对顺铂作用的敏感性,提示其可能成为治疗化疗耐药性胃癌患者的新靶点。     

miR-32-5p通过靶向下调EZH2的表达抑制胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为与裸鼠移植瘤生长

目的:探究miR-32-5p通过靶向zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)对胰腺癌PANC-1细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法:利用GEPIA数据库分析胰腺癌组织中EZH2的表达水平及其与患者的预后生存期的关系,并分析miR-32-5p表达与患者临床病理因素的关系。qPCR法检测正常胰腺HPDE6-C7细胞和胰腺癌PANC-1、AsPC-1、SW1990细胞中miR-32-5p和EZH2 mRNA的表达,通过Lipofectamine^TM2000将miR-NC、miR-32-5p mimic、miR-32-5p inhibitor、pcDNA-NC、pcDNA EZH2质粒分别转染PANC-1细胞,其分为对照组(不转染)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-32-5p mimic组(转染miR-32-5p mimic)、Anti-miR-32-5p组(转染miR-32-5p inhibitor)、miR-NC+pcDNA-NC组(转染miR-NC+pcDNA-NC)、miR-NC+pcDNA EZH2组(转染miR-NC+pcDNA EZH...     

miR-32-5p靶向TOB1基因调控结直肠癌细胞放射增敏性及迁移侵袭能力机制研究

目的 探讨miR-32-5p对结直肠癌细胞放射敏感性及迁移侵袭能力的影响及其潜在作用机制。方法 培养人结直肠癌SW480细胞和正常结肠上皮NCM460细胞,将结直肠癌细胞分为未转染组和转染组(分别转染anti-miR-NC、anti-miR-32-5p、pcDNA、pcDNA-TOB1、anti-miR-32-5p+si-NC、nti-miR-32-5p+si-TOB1)。RT-qPCR和Western blot分别检测细胞中miR-32-5p、TOB1 mRNA和蛋白表达,克隆形成实验检测转染各组细胞放射敏感性,Transwell实验检测转染各组细胞迁移、侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-32-5p是否靶向TOB1。结果 与人正常结肠上皮细胞相比,结肠癌细胞中miR-32-5p表达明显上调(P<0.05),TOB1 mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05)。与anti-miR-NC比较,anti-miR-32-5p组细胞放射增敏比1.801,细胞迁移和侵袭数目均明显减少(P<0.05);与pcDNA组比较pcDNA-TOB1组细胞放射增敏比1.764,细胞迁移数目和侵袭数目均明显减少(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果证实miR-32-5p靶向负调控TOB1蛋白表达。与anti-miR-32-5p+si-NC组比较,anti-miR-32-5p+si-TOB1组细胞放射增敏比为0.591,细胞迁移数目和侵袭数目均明显增多(P<0.05)。结论 抑制miR-32-5p表达能够明显增强结直肠癌细胞放射敏感性,抑制细胞迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向促进TOB1表达有关。     

miR-32-5p靶向TOB1基因调控结直肠癌细胞放射增敏性及迁移侵袭能力机制研究

目的 探讨miR-32-5p对结直肠癌细胞放射敏感性及迁移侵袭能力的影响及其潜在作用机制。方法 培养人结直肠癌SW480细胞和正常结肠上皮NCM460细胞,将结直肠癌细胞分为未转染组和转染组(分别转染anti-miR-NC、anti-miR-32-5p、pcDNA、pcDNA-TOB1、anti-miR-32-5p+si-NC、nti-miR-32-5p+si-TOB1)。RT-qPCR和Western blot分别检测细胞中miR-32-5p、TOB1 mRNA和蛋白表达,克隆形成实验检测转染各组细胞放射敏感性,Transwell实验检测转染各组细胞迁移、侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-32-5p是否靶向TOB1。结果 与人正常结肠上皮细胞相比,结肠癌细胞中miR-32-5p表达明显上调(P<0.05),TOB1 mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05)。与anti-miR-NC比较,anti-miR-32-5p组细胞放射增敏比1.801,细胞迁移和侵袭数目均明显减少(P<0.05);与pcDNA组比较pcDNA-TOB1组细胞放射增敏比1.764,细胞迁移数目和侵袭数目均明显减少(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果证实miR-32-5p靶向负调控TOB1蛋白表达。与anti-miR-32-5p+si-NC组比较,anti-miR-32-5p+si-TOB1组细胞放射增敏比为0.591,细胞迁移数目和侵袭数目均明显增多(P<0.05)。结论 抑制miR-32-5p表达能够明显增强结直肠癌细胞放射敏感性,抑制细胞迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向促进TOB1表达有关。     

miR-143-3p靶向KRAS阻滞PI3K/Akt信号通路抑制分化型甲状腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨miR-143-3p对分化型甲状腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:采用qRT-PCR检测miR-143-3p在30例分化型甲状腺癌组织和对应的癌旁组织,以及人分化型甲状腺癌细胞（TCP-1、FTC-133、SW579、BCPAP）和甲状腺滤泡上皮正常细胞（Nthy-ori3-1）中的表达水平。将miR-143-3p mimic和miR-143-3p mimic+pcDNA3.1-KRAS转染于FTC-133细胞中,采用CCK-8检测FTC-133细胞增殖活力;Transwell检测FTC-133细胞侵袭和迁移能力。双荧光素酶报告基因验证miR-143-3p和KRAS的靶向关系。Western blot检测蛋白的表达水平。结果:miR-143-3p在分化型甲状腺癌组织中的表达水平明显低于对应的癌旁组织。miR-143-3p在分化型甲状腺癌细胞系中的表达水平低于甲状腺滤泡上皮正常细胞的表达,尤其在FTC-133细胞中表达最低。过表达miR-143-3p显著抑制了FTC-133细胞增殖、侵袭和迁移能力。此外,双荧光素酶报告基因证实,KRAS为miR-143-3p的靶基因。进一步,过表达KRAS通过激活PI3K/Akt信号通路缓解了仅过表达miR-143-3p对FTC-133细胞增殖、侵袭和迁移能力的抑制作用。结论:过表达miR-143-3p通过靶向KRAS且阻滞PI3K/Akt信号通路,进而抑制分化型甲状腺癌细胞恶性生物学行为。     

lncRNA MEG3通过调控miR-21表达增加肺癌细胞放射敏感性

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) MEG3对肺癌细胞H1299的放射敏感性调控机制。方法 运用qRT-PCR法检测具有放射抗性的H1299细胞中MEG3、miR-21-5p的表达。将过表达对照组(转染pcDNA3.1)、过表达MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-21-5p组(转染anti-miR-21-5p)、过表达MEG3+过表达miR-NC组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-NC)、过表达MEG3+过表达miR-21-5p组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-21-5p mimics)均用脂质体法转染。克隆形成实验检测细胞存活分数,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MEG3与miR-21-5p的结合力。结果 与正常肺上皮细胞相比,H1299细胞中MEG3表达明显降低,miR-21-5p表达明显升高;过表达MEG3或抑制miR-21-5p均可促进H1299细胞凋亡,增强放射敏感性;MEG3可靶向调控miR-21-5p的表达。过表达miR-21-5p可逆转MEG3对H1299细胞放射增强作用。结论 lncRNA MEG3可增强H1299细胞放射敏感性,其机制也许可能与靶向miR-21-5p有关。     

miR-590-5p介导lncRNA SNHG1信号影响卵巢癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨miR-590-5p在卵巢癌组织中的表达情况以及其对卵巢癌细胞增殖的影响及作用机制。方法:Real-time PCR和双荧光素酶实验确定miR-590-5p与lncRNA SNHG1之间的调控作用。Real-time PCR检测卵巢癌、癌旁组织以及卵巢癌细胞中miR-590-5p的表达。分别采用NC mimic或者miR-590-5p mimic转染两株卵巢癌细胞，CCK-8检测各组细胞的增殖情况。此外，Real-time PCR检测两株细胞中SOX2、RECK和YAP1的表达。结果:Real-time PCR结果显示下调SNHG1后miR-590-5p的表达显著升高。双荧光素酶结果显示转染miR-590-5p mimic和野生型SNHG1片段的细胞中荧光素酶的活性显著降低。此外，Real-time PCR结果显示miR-590-5p在卵巢癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织。CaOV3、OV-90细胞中miR-590-5p的表达水平明显低于其他卵巢癌细胞。转染miR-590-5p mimic显著上调了CaOV3、OV-90细胞中miR-590-5p的表达并且抑制了这两株细胞的增殖，同时抑制了两株细胞中SOX2、RECK和YAP1的表达。结论:miR-590-5p的低表达与卵巢癌的进展密切相关，miR-590-5p能够介导SNHG1信号并且通过对其下游靶基因的调控抑制卵巢癌细胞的增殖。     

miR-155-5p通过调控hMLH1促进甲状腺乳头状癌增殖侵袭的研究

摘 要：［目的］ 探讨microRNA-155-5p（miR-155-5p）在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）中的表达及作用,验证其对靶基因错配修复酶人类mutL同系物1（human mutL homologue 1,hMLH1）的调控作用。［方法］采用实时定量PCR法检测miR-155-5p在PTC组织和细胞中的表达水平。采用MTT增殖实验、Transwell侵袭实验观察miR-155-5p对PTC细胞增殖和侵袭能力的影响。采用蛋白免疫印迹技术（Western blot）和荧光素酶报告实验验证miR-155-5p对hMLH1的表达调控。［结果］与癌旁正常组织相比,miR-155-5p在PTC组织中的表达水平明显增加,差异有统计学意义（t=3.492,P=0.002）;转染miR-155-5p mimics的PTC细胞中miR-155-5p的表达水平相比对照组明显增加,差异有统计学意义（TPC-1细胞株：t=4.214,P=0.002,BCPAP细胞株：t=4.268,P=0.002）;转染miR-155-5p mimics的PTC细胞相比对照组增殖能力明显增强,差异有统计学意义（TPC-1细胞株：48h t=4.378,P=0.012;BCPAP细胞株：48h t=22.106,P<0.001）;转染miR-155-5p mimics组通过Matrigel基质胶的细胞数量明显多于对照组,差异具有统计学意义（TPC-1细胞株：t=3.182,P=0.013;BCPAP细胞株：t=7.872,P<0.001）;转染miR-155-5p mimics的PTC细胞中hMLH1蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义（TPC-1细胞株：t=5.137,P=0.007;BCPAP细胞株：t=3.684,P=0.021）。［结论］ miR-155-5p促进PTC增殖侵袭,其机制可能是通过调控hMLH1实现,这为PTC的治疗提供新的靶点。     

miRNA-182-5p对食管鳞癌细胞增殖和侵袭的影响及分子机制

目的探讨miR-182-5p对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖和侵袭的影响, 并探讨其可能的分子机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ESCC组织和细胞中miR-182-5p的表达。将miR-182-5p抑制剂、miR-182-5p模拟物及阴性对照转染食管鳞癌Eca109和TE1细胞, RT-qPCR检测转染后ESCC细胞中miR-182-5p的表达水平, 细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测ESCC细胞的增殖能力, Transwell小室法检测ESCC细胞的侵袭能力。双荧光素酶报告实验分析miR-182-5p与细胞黏附分子2(CADM2)的相互作用, RT-qPCR检测ESCC组织中CADM2的表达, 并分析其与miR-182-5p表达的相关性。Western blot检测转染后CADM2、粘着斑激酶(FAK)、p-Akt和Akt蛋白的表达。结果 ESCC组织中miR-182-5p的相对表达水平为2.180±1.295, 显著高于正常组织(0.890±0.284, P<0.001)。miR-182-5p高表达ESCC患者的生存率低于低表达患者(P<0.0...     

miR-1271-5p在胃癌组织的表达及对胃癌AGS细胞生物学行为的影响

目的 探讨miR-1271-5p在胃癌组织和细胞中的表达及其对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 收集2011年6月至2014年6月广西医科大学附属肿瘤医院90例手术切除胃癌组织及相应癌旁组织。采用qRT-PCR法检测胃癌组织及相应癌旁组织,人胃癌细胞系（SGC-7901、MGC-803、AGS）和人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miR-1271-5p的表达情况。利用瞬时转染法将miR-1271-5p mimics（过表达miR-1271-5p组）和miR-NC（阴性对照组）分别转染胃癌AGS细胞,建立过表达miR-1271-5p的胃癌AGS细胞系,然后采用CCK-8法检测转染后的胃癌AGS细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果 miR-1271-5p在胃癌组织和胃癌细胞（SGC-7901、MGC-803、AGS）中的表达均低于相应癌旁组织及人正常胃黏膜上皮GES1细胞（均P<0.01）。与阴性对照组相比,过表达miR-1271-5p组胃癌AGS细胞增殖活力降低（P<0.01）,细胞集落形成数减少（P<0.01）,迁移和侵袭细胞数量亦减少（P<0.01）。结论 miR-1271-5p在胃癌组织和细胞中低表达,上调miR-1271-5p可抑制胃癌AGS细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-150-5p在甲状腺癌中的表达及其生物学功能研究

摘 要：［目的］ 探讨微小RNA-150-5p（miR-150-5p）在甲状腺癌组织中的表达水平及其通过PI3K/Akt信号通路对甲状腺癌细胞增殖和凋亡能力的影响。［方法］ qRT-PCR检测68例甲状腺癌患者病变组织及其相应癌旁组织中miR-150-5p的表达水平。将miR-150-5p抑制剂和阴性对照转染至人甲状腺癌TPC-1细胞株,以空脂质体作为对照,qRT-PCR检测转染结果,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,生物信息学网站Targetscan 预测miRNA-150-5p与PI3K的靶向结合情况,荧光素酶试验验证miR-150-5p与PI3K的靶向关系,Western blotting检测Cleaved caspase-3、PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达。［结果］ 68例甲状腺癌患者病变组织及相应癌旁组织中miR-150-5p的相对表达水平分别为0.96±0.06和1.66±0.11,差异有统计学意义（P＜0.05）;空白对照组和阴性对照组中miR-150-5p的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,miR-150-5p抑制剂组中miR-150-5p的相对表达量为0.12±0.02,明显低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。空白对照组和阴性对照组24、48和72h细胞增殖率的差异无统计学意义（P＞0.05）,而miR-150-5p抑制剂组24、48和72h细胞增殖率分别为9.56%±1.38%、24.36%±4.66%和33.63%±5.32%,同一时间点均明显低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。空白对照组和阴性对照组48h细胞凋亡率的差异无统计学意义（P＞0.05）,而miR-150-5p 抑制剂组的细胞凋亡率为16.25%±2.98%,明显高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.01）。TargerScan网站预测结果显示,miR-150-5p可与PI3K互补结合,荧光素酶报告基因分析证实miR-150-5p与PI3K存在靶向结合位点。空白对照组和阴性对照组间PI3K、p-Akt和Cleaved caspase3蛋白表达的差异无统计学意义（P＞0.05）,miR-150-5p抑制剂组PI3K、p-Akt蛋白表达低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.01）,Cleaved caspase3蛋白表达高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.01）,3组间Akt蛋白表达的差异无统计学意义（P＞0.05）。［结论］ miR-150-5p在甲状腺癌组织中表达异常升高,干扰miR-150-5p表达能够抑制甲状腺癌TPC-1细胞株的增殖,并通过上调Cleaved caspase-3促进细胞凋亡,其调控作用可能与PI3K/Akt信号通路有关。     

miR-144-5p通过靶向ACTG1和STAT1调控甲状腺乳头状癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:探讨miR-144-5p在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)细胞中的表达趋势及对 PTC 细胞系增殖、侵袭及迁移能力的影响及相关分子机制研究。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)检测人PTC细胞系TPC-1、 BCPAP及人正常甲状腺滤泡细胞系Nthy-ori 3-1中miR-144-5p的表达情况。将miR-144-5p-mimics、miR-144-5p-inhibitor及inhibitor-NC和mimics-NC分别以LipofectaminTM2000转染至TPC-1细胞。分为4组:阴性对照组(mimics-NC 组)和过表达组(mimics-144-5p组)。阴性对照组(inhibitor-NC 组)和抑制组(inhibitor-144-5p组)。以CCK-8生长曲线、小室侵袭实验和划痕实验检测4组细胞增殖、侵袭和迁移能力。ENCORI数据库验证miR-144-5p在TCGA中的表达趋势。在线数据库预测miR-144-5p下游靶基因。通过STING得到靶基因蛋白互作网络图。通过Cytascap插件CytoHubba得Degree值为 Top10的基因。GEPIA数据库检测ACTG1和STAT1在TCGA数据库中的表达趋势。HPA 数据库验证ACTG1和STAT1蛋白表达水平。qRT-PCR和TaretScan在线数据库验证miR-144-5p与ACTG1和STAT1之间的调控关系。结果:PTC细胞系中miR-144-5p表达趋势明显低于Nthy-ori 3-1人正常甲状腺滤泡上皮细胞。上调miR-144-5p后TPC-1细胞的增殖活性、侵袭和迁移能力明显下降，而抑制miR-144-5p则起到相反的作用。在线数据库预测miR-144-5p下游靶基因为584个。通过STING得到靶基因蛋白互作网络图。通过Cytascap插件CytoHubba得Degree值为 Top10的基因。在线数据库ENCORI验证ACTG1和STAT1可能是miR-144-5p的下游靶基因。qRT-PCR验证miR-144-5p与ACTG1和STAT1之间存在负调控关系。结论:miR-144-5p在PTC细胞中低表达，过表达或敲低miR-144-5p可能是通过调控ACTG1和STAT1影响PTC细胞的增殖、侵袭及迁移。     

miR-125在甲状腺癌组织中的表达及通过靶向负调控RAB11A促进甲状腺癌细胞活性的研究

目的:探讨miR-125在甲状腺癌组织中的表达及促进甲状腺癌细胞增殖的相关机制。方法:采用RT-PCR法检测26例甲状腺乳头状癌（PTC）标本和4株PTC细胞株中miR-125的表达水平。采用CCK-8法、细胞集落形成实验、Transwell实验以及流式细胞法验证miR-125在PTC细胞中的作用。采用双荧光素酶实验验证RAB11A是否是miR-125的直接靶点。结果:miR-125在甲状腺癌组织中的相对表达水平显著高于癌旁正常组织（P＜0.05）;与Nthy-Ori3-1相比,甲状腺癌细胞株TPC-1、NPA、KTC-1、WRO中的miR-125表达水平显著升高（P＜0.05）。与miRNA NC组相比,miR-125 mimics组的细胞克隆形成数量及侵袭细胞数量明显增多,miR-125 inhibitor组显著减少（P＜0.05）。Transwell实验结果显示,miRNA NC组细胞的迁移速度明显比miR-125 mimics组慢,但显著快于miR-125 inhibitor组。流式细胞检测显示,miRNA NC组、miR-125 mimics组、miR-125 inhibitor组的凋亡细胞比例分别为（5.1±0.08）%、（1.5±0.06）%、（7.8±0.07）%,两两比较后发现,miR-125 mimics组凋亡细胞比例最低,miR-125 inhibitor组最高。荧光素酶报告显示,RAB11A是miR-125的直接靶点。将miR-125模拟物、抑制剂或miRNA NC(100 nmol/L)转染KTC-1细胞后,RAB11A mRNA水平均无明显改变。但Western blot检测显示,与对照组相比,miR-125 mimics组RAB11A蛋白表达显著降低,miR-125 inhibitor组RAB11A蛋白表达显著增加。表明miR-125不影响RAB11A mRNA的稳定性,但在转录后水平调节RAB11A蛋白的表达。结论:miR-125通过在转录后水平负调控RAB11A蛋白的表达而发挥促甲状腺癌的作用。miR-125有望成为PTC患者诊断和治疗的新靶点。     

LncRNA TUG1靶向miR-138-5p调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1（TUG1）和微小RNA 138-5p（miR-138-5p）在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:应用RT-qPCR法检测胰腺癌组织及其细胞系中TUG1和miR-138-5p表达水平。通过小干扰RNA下调PANC-1细胞中TUG1水平或转染miR-138-5p mimics至PANC-1细胞，MTT、Transwell法检测细胞活力、迁移和侵袭。starBase v2.0在线预测和双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA TUG1和miR-138-5p的靶向关系。共转染TUG1-siRNA和miR-138-5p mimics至PANC-1细胞，MTT、Transwell法检测细胞活力、迁移和侵袭。结果:在胰腺癌组织及其细胞系中，TUG1表达上调（P<0.05）而miR-138-5p表达下调（P<0.05）。在PANC-1细胞中敲减TUG1或过表达miR-138-5p，细胞活力、迁移和侵袭能力下降（P<0.05）。starBase v2.0在线预测和双荧光素酶报告基因实验结果表明，TUG1可靶向调控miR-138-5p表达。MTT、Transwell实验结果显示，降低miR-138-5p的表达可逆转TUG1-siRNA对PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:敲减TUG1能够通过上调miR-138-5p水平抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

微小RNA-380-5p 在宫颈癌组织及细胞中的表达及其通过下调RHOA抑制C33A细胞的增殖和迁移

[摘要] 目的：检测微小RNA-380-5p（miR-380-5p）在人宫颈癌组织和细胞系中的表达,探讨其抑制宫颈癌C33A细胞增殖和迁移的作用机制。方法：收集2016 年12 月至2017 年7 月同济医学院附属武汉中心医院妇产科手术切除的16 例宫颈癌患者癌组织和对应的癌旁组织标本,以及宫颈癌细胞系HCC94、C33A、Hela、SiHa 和人子宫颈上皮永生化细胞H8,用qPCR 法检测miR-380-5p 在癌及癌旁组织、4 种宫颈癌细胞及H8 细胞中的表达。用脂质体转染技术将miR-380-5p mimic（实验组）和miR-NC（阴性对照组）瞬时转染C33A细胞,用qPCR法检测转染后细胞中miR-380-5p 表达,CCK-8 法和Transwell 小室法分别检测转染细胞的增殖和迁移能力。用生物信息学软件TargetScan 预测miR-380-5p 的下游基因,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-380-5p 对下游基因Ras 同源基因家族成员A（Ras homolog gene family member A,RHOA）的结合作用,qPCR 法和Western blotting 检测miR-380-5p 下游基因RHOA的表达。结果：宫颈癌组织中miR-380-5p 表达水平明显低于癌旁组织（P<0.01）,宫颈癌细胞系中miR-380-5p 表达水平均明显低于H8 细胞（P<0.05）,以C33A细胞中的表达水平最低（P<0.01）。与阴性对照组比较,转染miR-380-5pmimic 能显著抑制C33A细胞的增殖（P<0.05）和迁移能力（P<0.01）,且下调RHOA、ROCK1、ROCK2、CDK2和N-cadherin蛋白的表达（均P<0.01）。生物信息学软件预测RHOA可能为miR-380-5p 的调控基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-380-5p 可与RHOA 3’-非编码区（UTR）特异性结合,miR-380-5p 可明显下调RHOA基因的表达（P<0.01）。结论：miR-380-5p 在宫颈癌组织及细胞系中低表达,过表达miR-380-5p 可能通过下调RHOA及其下游蛋白的表达抑制宫颈癌C33A细胞的增殖和迁移。