超声联合微泡介导基因转染对内皮细胞骨架的影响

目的 探讨白蛋白微泡在治疗性超声条件下对介导基因转染以及对细胞骨架的影响,同时探讨超声联合微泡介导基因转染的最佳声学参数.方法 六孔板培养大鼠微血管内皮细胞,一组每孔加入eGFP质粒10μg,加或不加微泡,超声条件为连续波,频率2 MHz,机械指数是0.50～1.80.照射时间是30～180 S,24～48 h后观察细胞转染情况.一组超声照射后免疫荧光染色细胞骨架,荧光显微镜观察并测定荧光强度.结果 机械指数为0.50～1.00范围内,基因转染率与机械指数呈正相关(P<0.001),再增加机械指数基因转染率差别无统计学意义.超声照射时间30～90 S范围内,基因转染率以及微管荧光强度改变与超声照射时间呈正相关(P<0.001).再延长照射时间基因转染率差别无统计学意义.同种条件下,微丝蛋白荧光强度改变无统计学意义(P>0.05).结论 超声联合微泡能够显著增加报告基因的转染率并且对细胞骨架无明显的损伤.微泡可以作为临床冠心病基因治疗的安全有效的载体.     

超声靶向微泡破碎介导EGFP质粒转染肝癌细胞的研究

目的 探讨超声靶向微泡破碎(ultrasound targeted microbubble destruction,UTMD)介导EGFP质粒转染肝癌细胞株HepG2的有效性、安全性并优化超声辐照参数.方法 体外培养HepG2细胞,在治疗超声的不同声强、占空比和辐照时间作用下,观察pEGFP-N3质粒在HepG2细胞中...     

超声靶向微泡破坏技术介导基因转染的研究进展

随着肿瘤分子机制研究的不断深入,利用肿瘤与正常组织基因及调控区域的结构差异,从分子水平特异性杀伤肿瘤细胞的基因治疗成为肿瘤治疗中极具应用潜力的新策略。超声靶向微泡破坏技术介导的靶向基因治疗方法既可增强裸质粒DNA在癌细胞内的转染和表达,又能提高基因治疗的靶向性,减少全身不良反应,是一种很有前途的临床肿瘤治疗技术。作者就有关超声结合纳/微泡介导的输送系统的作用机制及其在基因转染的应用进展和影响因素作一综述。     

超声微泡联合核定位信号促进SDF1α基因转染治疗兔心肌梗死

【摘要】 目的 探讨超声辐照下携基质衍生因子1（SDF 1α）基因的胞膜核膜双靶向阳离子微泡载体系统促进内源性干细胞归巢的机制。方法 构建双靶向阳离子微泡载体系统及携SDF 1α阳离子微泡载体系统,分别于体外转染人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）并检测SDF 1α质粒入胞率、入核率及SDF 1α基因表达;进而构建心梗兔模型,造模成功后随机分为三组进行SDF 1α基因转染：A组：携SDF 1α双靶向阳离子微泡载体组;B组：携SDF 1α阳离子微泡载体组;C组：对照组。分别于基因转染后3天和4周后检测SDF 1α基因表达、干细胞标志物和血管新生效应。结果 体外实验中,超声辐照下,与携SDF 1α阳离子微泡载体系统比较,携SDF 1α双靶向阳离子微泡载体系统SDF 1α质粒入胞率与其无显著差异(P＞005),但入核率和SDF 1α蛋白表达显著增高(P＜001);体内实验显示,与阳离子微泡载体组及对照组比较,双靶向阳离子微泡载体组家兔心肌组织中SDF 1α蛋白显著增高、干细胞标志物阳性染色显著增强、毛细血管密度显著增加(P＜001)。结论 超声辐照下携SDF 1α的胞膜核膜双靶向阳离子微泡载体系统能有效提高SDF 1α基因载体转染效率,表达足量的SDF 1α蛋白并发挥其干细胞诱导剂作用,从而促进内源性干细胞归巢并促进局部血管新生。     

携自杀基因微泡转染卵巢癌细胞株SKOV_3的超声参数及转染效率

目的:探究超声介导携Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶(hsv1tk)自杀基因微泡转染SKOV3细胞的超声参数及转染效率.方法:超声在不同微泡浓度与辐照时间(8,15,30,60s间隔1s)组合下辐照SKOV3细胞,MTT法筛选最适辐照时间和微泡浓度.将实验分成6组分别进行以下处理:超声辐照组,脂质体+超声辐照组,脂质体+微泡+超声辐照组,微泡+超声辐照组,裸质粒组(阴性对照),脂质体组(阳性对照).用裸质粒及脂质体处理后分别转染pcDNA3.1-EGFP/hsv1tk质粒;采用荧光显微镜、流式细胞技术分别定性和定量检测各组转染效率;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测hsv1tk基因的表达.结果:MTT检测在超声强度0.5W/cm2,频率1MHz,微泡浓度0.56×1011个/L,辐照时间8s间隔1s条件下,超声辐照微泡转染对细胞活性无明显抑制.经此条件转染后荧光显微镜下可观察到脂质体+微泡+超声辐照组的绿色荧光强度最强;流式细胞技术检测表明,微泡+超声辐照组转染效率为(11.74±0.19)%,比超声辐照组(2.19±0.22)%高,而脂质体+微泡+超声辐照组(25.62±0.08)%均高于其他各组(P<...     

靶向超声微泡介导VEGF基因转染对薄型子宫ER的影响研究

目的：研究靶向超声微泡介导血管内皮生长因子（VEGF）基因转染对薄型子宫内膜容受性（ER）的影响。方法：选择40只性成熟但未交配的具有动情周期的雌性SD大鼠进行研究。将其随机分为四组,包括正常组10只,模型组10只,阴性对照组10只,治疗组10只。其中模型组、阴性对照组及治疗组大鼠均自宫角处注入95%无水乙醇贮留5 min制备薄型子宫模型,正常组自宫角处注入生理盐水,贮留5 min。模型组予以生理盐水注射治疗,阴性对照组予以超声微泡+抗体（不含基因）治疗,治疗组则以靶向超声微泡介导VEGF基因转染治疗。比较四组大鼠子宫内膜厚度及腺体数量,子宫内膜血流灌注,子宫内膜VEGF及白血病抑制因子（LIF）水平。结果：正常组子宫内膜厚度及腺体数量均高于模型组、阴性对照组及治疗组,治疗组子宫内膜厚度及腺体数量均高于模型组、阴性对照组（P<0.05）。正常组阻力指数（RI）、搏动指数（PI）、脐动脉收缩压与舒张压比值（S/D）均低于模型组、阴性对照组及治疗组,治疗组RI、PI、S/D均低于模型组、阴性对照组（P<0.05）。正常组子宫内膜VEGF、LIF水平均高于模型组、阴性对照组及治疗...     

超声微泡促腺病毒载体转染MDR1基因效率的体外实验研究

目的 探讨超声微泡造影剂在体外促进腺病毒载体介导的MDRl基因转染兔骨髓单个核细胞的效率,并初步探讨其安全性.方法 根据是否加入超声微泡造影剂和超声辐照将分选的兔骨髓单个核细胞分为常规培养组(A)、腺病毒MDRl基因转染组(B)、腺病毒MDRl基因转染+超声辐照组(C)、微泡造影剂+腺病毒MDRl基因转染组(D)、微泡造影剂+腺病毒MDRl基因转染+超声辐照组(E).收集各组细胞,应用RT-PCR法、流式细胞技术等分别从基因、功能及细胞生物学特性等方面检测外源性MDR1基因在骨髓单个核细胞内的功能性表达及安全性.结果 收获高滴度的Ad5-MDR1腺病毒载体并成功制备腺病毒微泡造影剂;RT-PCR结果 显示,除A组外其余4组在194 bp处均观察到特异性MDR1电泳条带,证实外源性MDR1基因通过腺病毒载体整合到细胞基因组中,且E组MDR1电泳条带的光密度比值明显高于B、C、D组(P<0.05);柔红霉素排出实验证实外源性MDR1基因表达产物P-gP有药物外排泵功能,且E组P-gp阳性率最高(P<0.05),而柔红霉素阳性率显著降低;一定强度的超声辐照及微泡造影剂对骨髓单个核细胞的细胞周期无明显影响.结论 低频超声波击碎微泡造影剂,能促进以腺病毒为载体介导的外源性MDR1基因转染兔骨髓单个核细胞的效率,且安全可行.     

超声微泡造影剂介导LMP-1基因转染树突状细胞的实验研究

目的 探讨超声微泡造影剂介导LMP-1基因转染外周血来源的树突状细胞的有效性及最佳的超声辐照参数.方法 体外培养树突状细胞,在不同的超声波强度、机械指数、照射时间及不同的超声微泡造影剂浓度作用下,观察LMP-1基因与绿色荧光蛋白共表达的融合重组质粒pEGFP-C3-LMP1在树突状细胞的定向转染.在荧光显微镜下观察荧光蛋白质粒在树突状细胞中的表达,流式细胞仪评价重组质粒的转染效率,台盼蓝染色检测细胞活性.结果 超声辐照机械指数1.0、照射时间60 s、微泡造影剂浓度为20%,达到最佳的基因转染效率(14.37±2.12)%,且细胞生存率>90%.结论 微泡造影剂在超声辐射下可以有效地介导基因转染树突状细胞.     

携抗细胞间黏附分子-1微泡对心肌梗死受损内皮靶向识别的实验研究

目的:探讨携抗细胞间黏附分子-1(ICAM-1)靶向微泡对兔心肌梗死后受损内皮的靶向识别能力。方法:分别制备携抗ICAM-1的阳离子靶向微泡及携抗ICAM-1的Sono Vue靶向微泡,以不带ICAM-1的单纯阳离子微泡和Sono Vue微泡作为对照;显微镜下观察4种微泡与白细胞介素-1β刺激后的人脐静脉内皮细胞HUVEC的结合情况;用FITC荧光分别标记各组微泡;制备兔心肌梗死模型,于造模后3d经耳缘静脉分别注射各组微泡,经胸超声检测4组兔心肌造影情况,之后处死兔获取心脏标本,冰冻切片检测靶组织中荧光情况。结果:显微镜检测显示HUVEC周围可见较多携抗ICAM-1阳离子或Sono Vue微泡聚集黏附,而单纯阳离子微泡和单纯Sono Vue微泡无明显黏附现象;兔心肌造影显示抗ICAM-1阳离子靶向微泡组和携抗ICAM-1的Sono Vue微泡组显影持续时间高于单纯阳离子微泡组和Sono Vue微泡组;冰冻切片荧光显微镜结果显示携抗ICAM-1阳离子微泡组和携抗ICAM-1的Sono Vue微泡组梗死区中受损血管内膜面可见明亮的绿色荧光,而单纯阳离子组和Sono Vue微泡组血管内膜面仅见少量暗淡的绿色荧光。结论:携抗ICAM-1的靶向微泡可特异识别受损的血管内皮,有助于目的基因的靶向释放。     

靶向微泡超声造影剂的研究进展

近年来随着超声技术的不断发展,超声造影在临床诊断和治疗方面都展现出了巨大的潜力,尤其在肿瘤诊疗方面,以超声靶向微泡造影剂为基础的超声靶向转运系统显露出显著的优势。常规的给药途径使化疗药物杀死肿瘤细胞的同时,     

KAI1基因在7例肝癌组织中的表达

应用Ｎｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交方法对ＫＡＩ１基因在肝癌组织中的表达进行了分析。结果表明，ＫＡＩ１在癌组织的表达比在没有癌细胞部位和正常肝组织中降低达５０％以上，因而肝癌易发生早期转移的特点可能同ＫＡＩ１基因表达降低有一定关系