桂芍子喘颗粒对卵蛋白所致支气管哮喘小鼠的药效学研究

摘要：目的:研究桂芍子喘颗粒对卵蛋白（OVA）所致支气管哮喘小鼠药效学的影响。方法:84只SPF级BALB/c小鼠随机分为7组:正常对照组、模型组、桂芍子喘颗粒低(0.93 g·kg-1)、中(1.86 g·kg-1)、高(3.72 g·kg-1)剂量组、醋酸地塞米松组(0.63 mg·kg-1)、六君子丸+玉屏风颗粒组(2.5 g·kg-1+2.1 g·kg-1),每组12只。除正常对照组外,其余各组小鼠采用OVA建立支气管哮喘模型。建模第22天各组灌胃给药,正常对照组和模型组给予等量蒸馏水,1次/d,连续给药7 d,同时给予OVA溶液雾化刺激。第28天雾化刺激后,采用肺功能仪检测气道反应性; ELISA法检测血清免疫球蛋白E（IgE）、肺组织白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-5（IL-5）、白细胞介素-17（IL-17）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）水平;并进行肺泡灌洗液（BALF）中白细胞（WBC）和嗜酸性粒细胞（EOS）计数及肺组织病理学观察。结果:与正常对照组相比,模型组气道阻力升高,顺应性降低,IgE、IL-4、IL-17、TNF-α、ECP水平升高,病理损害明显,病理评分升高（P<0.05或P<0.01）。桂芍子喘颗粒可降低OVA所致支气管哮喘小鼠的气道阻力,提高气道顺应性;降低IgE、IL-4、IL-5、IL-17、TNF-α、ECP水平;减少肺泡灌洗液WBC和EOS的数量,减轻肺组织病理损伤（P<0.05或P<0.01）。结论:桂芍子喘颗粒对OVA所致支气管哮喘小鼠气道反应性、炎症反应及肺组织病理学损害具有改善作用。     

甘草酸对哮喘小鼠肺组织Eotaxin表达的影响

目的:观察甘草酸对哮喘小鼠肺组织嗜酸细胞活化趋化因子(Eotaxin)表达的影响,探讨甘草酸抗支气管哮喘的可能机制。方法:小鼠分为(哮喘)模型组、激素(强的松)组、甘草酸组和正常对照组,建立卵蛋白哮喘模型后给予相应药物,4周后处死小鼠,计数各组支气管肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞及通过免疫组化检测各组肺组织中Eotaxin的表达,并与正常对照组比较。结果:与模型组比较,甘草酸能显著降低嗜酸粒细胞计数(P<0.01)及抑制肺组织Eotaxin的表达(P<0.05)。结论:甘草酸可能通过下调Eotaxin的表达而发挥抗嗜酸粒细胞性气道炎症的作用。     

天贝止喘汤对支气管哮喘小鼠Th1/Th2影响的研究

目的观察天贝止喘汤对支气管哮喘小鼠肺组织、血清Ig E、支气管肺泡灌洗液IL-4、IL-10、IL-12和TNF-α影响,研究天贝止喘汤保护哮喘小鼠可能的机制。方法 70只健康SPF级雌性BALB/c小鼠适应性饲养后,分为7组(空白对照组、哮喘模型组、天贝止喘汤低剂量组、天贝止喘汤中剂量组、天贝止喘汤高剂量组、小青龙组、地塞米松组),10只/组。卵清白蛋白建立小鼠支气管哮喘气道炎症模型,取材后观察肺组织变化、测定血清Ig E、支气管肺泡灌洗液IL-4、IL-10、IL-12和TNF-α水平变化。结果空白组肺组织无明显炎症细胞浸润、肺组织及气道壁形态结构完整;模型组肺组织有大量炎症细胞浸润、肺组织及气道壁增厚明显,结构受损,其余各药物治疗组较模型组均有不同程度改善。与空白组相比,模型组和各药物治疗组血清Ig E水平、支气管肺泡灌洗液IL-4、TNF-α水平显著升高(P<0.05),IL-10、IL-12水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,各药物治疗组血清Ig E水平、支气管肺泡灌洗液IL-4、TNF-α水平显著降低(P<0.05),IL-10、IL-12水平显著升高(P<0.05)。结论天贝止喘汤可能通过调节Th1/Th2平衡,调节炎性细胞因子水平保护哮喘小鼠,高剂量效果更明显。     

泡桐花挥发油抗支气管哮喘变应性炎症的实验研究

目的通过豚鼠哮喘模型研究泡桐花挥发油抗哮喘气道变应性炎症的作用。方法以卵蛋白致敏豚鼠为动物模型,灌胃途径予以泡桐花挥发油大、小剂量,观察各组豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞和嗜酸性粒细胞(EOS)、嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)的改变。结果泡桐花挥发油大剂量[1.2g/(kg.d)]及小剂量[0.6g/(kg.d)]均可不同程度地抑制BALF中的EOS和炎性细胞总数及气道Eotaxin的过度表达。结论泡桐花挥发油可能通过抑制哮喘动物气道中EOS的趋化、聚集而具有一定的抗哮喘气道变应性炎症的作用。     

血液中嗜酸性粒细胞与气道高反应性关系分析

目的探讨支气管哮喘家系气道高反应性(BHR)与其血液中嗜酸性粒细胞(EOS)的关系。方法通过对支气管哮喘(bronchialAsthma)家系4228人气道高反应性者中取血样进行EOS计数,并对结果进行分析。结果BHR( )组血液中EOS数在不同年龄组都明显高于BHR(-)组,差异具有非常显著性(P<0.01)。结论EOS计数应列为支气管哮喘家系的临床诊断特征性指标之一,可为临床提供有力的诊断依据及诊断的准确性。     

中药循经敷贴对哮喘豚鼠肺组织Eotaxin mRNA和IL-5 mRNA表达的影响

目的探讨中药循经敷贴治疗哮喘的作用机制。方法采用Hutson法豚鼠模型,治疗组隔日诱喘后用中药敷贴30min;对照组隔日诱喘后采用生理盐水浸润纱布敷贴,时间同治疗组。记录各组诱喘潜伏期时间。2周后处死豚鼠,取肺组织,用半定量RT-PCR法比较Eotaxin mRNA、IL-5 mRNA的表达。结果中药循经敷贴能显著延长豚鼠诱喘潜伏期,下调哮喘豚鼠肺组织Eotaxin mRNA、IL-5 mRNA的表达。结论抑制变异性炎症可能是中药循经敷贴治疗哮喘的重要机制之一。     

异丁司特对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞凋亡的作用及其机制

研究异丁司特 (ibudilast) 对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞 (eosinophil, EOS) 凋亡的作用及其机制。采用卵白蛋白致敏法制备豚鼠哮喘模型。收集支气管肺泡灌洗液 (BALF) 并进行白细胞计数及分类计数, TUNEL技术原位检测EOS凋亡, RT-PCR技术检测EOS的Fas mRNA表达, 酶联免疫吸附 (ELISA) 法测定BALF中粒细胞-巨噬细胞刺激因子 (GM-CSF) 及白介素-5 (IL-5) 的含量。结果表明, 异丁司特可明显减少哮喘豚鼠的白细胞总数和EOS数目; 在异丁司特剂量组, EOS凋亡细胞明显增多, Fas mRNA的表达显著增强, BALF中GM-CSF、IL-5含量显著降低, 与模型组比较有显著性差异。因此, 异丁司特抑制哮喘豚鼠气道EOS数目的增加、诱导EOS凋亡、增强Fas mRNA的表达、降低GM-CSF、IL-5含量可能是其拮抗哮喘的重要机制。     

TH细胞亚群在哮喘发病中的作用及临床意义

支气管哮喘是一种气道的慢性炎症性疾病,嗜酸细胞(EOS),T淋巴细胞等炎症细胞起着关键作用。T细胞亚群及其产物(细胞因子)除了调控B细胞的IgE生成外,还吸引和活化其它效应细胞,在哮喘气道炎症反应和气道高反应性(BHR)的发生和发展中     

太子健煎剂抗小儿哮喘复发作用机制的实验研究

目的　观察太子健 煎剂对反复诱喘的哮喘豚鼠血和气道内嗜酸性粒细胞 (EOS)浸润的影响 ,及血中嗜酸性粒细胞阳离子蛋白 (ECP)含量的影响。方法　将豚鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、太子健 高剂量和低剂量组 5组 ,后 4组分别用卵蛋白致敏 15 d后 ,再用卵蛋白反复诱喘 ,正常组用生理盐水代替 ,同时 ,正常组和模型组灌服生理盐水 ,其余 3组分别灌服地塞米松、太子健 高剂量和低剂量 ,予以治疗 ,连续 15 d。结果　太子健 煎剂可减少血及气道内 EOS浸润并降低 EOS的活性 ,抑制其脱颗粒释放 ECP等炎症介质 ,减轻 EOS对气道上皮的毒性作用。结论　太子健 煎剂可以减轻气道慢性变应性炎症 ,具有一定的抗哮喘复发的作用。     

甘草酸对实验性哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨甘草酸(GA)对实验性哮喘小鼠气道炎症的影响及其可能机制。方法 40只BALB/c小鼠采用随机数字表法分为对照组、哮喘组和低、中、高浓度GA干预组,每组8只。哮喘组和GA干预组小鼠分别给予卵清白蛋白(OVA)致敏和激发。每次雾化前30min,干预组分别给予GA(25、50、100mg/kg)腹腔注射。末次激发后,摘眼球取血,收集肺泡灌洗液(BALF),离心后计数细胞总数及白细胞分类。ELISA法测定血浆免疫球蛋白E(IgE)和BALF上清液中IL-4和IL-5的水平。肺组织免疫组化染色,Image Pro Plus图像分析系统分析Eotaxin、MCP-1和CINC-1的平均吸光度值。结果哮喘组BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞计数均大于对照组(P<0.05)。中、高浓度GA干预组BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞和淋巴细胞计数均少于哮喘组(P<0.05)。哮喘组小鼠血浆IgE和BALF中IL-4、IL-5的水平高于对照组(P<0.05);GA干预组血浆IgE和BALF中IL-4、IL-5水平低于哮喘组;且随着GA干预浓度的增加,此种作用愈加明显(P<0.05)。哮喘组、GA干预组小鼠Eotaxin、MCP-1和CINC-1蛋白的表达均高于对照组(P<0.05),GA干预组小鼠Eotaxin、MCP-1和CINC-1蛋白的表达均低于哮喘组(P<0.05)。结论 GA可能通过下调趋化因子Eotaxin、MCP-1和CINC-1的表达,从而发挥减轻气道炎症的作用。     

太子健Ⅱ煎剂抗小儿哮喘复发作用机制的实验研究

目的观察太子健Ⅱ煎剂对反复诱喘的哮喘豚鼠血和气道内嗜酸性粒细胞(EOS)浸润的影响。硬血中嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)含量的影响。方法将豚鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、太子继Ⅱ高剂量和低剂量组5组，后4组分别用卵蛋白致敏15d后，再用卵蛋白反复诱喘，正常组用生理盐水代替，同时，正常组和模型组灌服生理盐水，其余3组分别灌服地塞米松、太子健Ⅱ高剂量和低剂量，予以治疗，连续15d。结果太子健Ⅱ煎剂可减少血及气道内EOS浸润并降低EOS的活性，抑制其脱颗粒释放ECP等炎症介质，减轻EOS对气道上皮的毒性作用。结论太子健Ⅱ煎剂可以减轻气道慢性变应性炎症，具有一定的抗哮喘复发的作用。     

玉簪花提取物对RAW264.7细胞炎症及哮喘小鼠气道炎症的影响

目的 研究玉簪花提取物对RAW264.7巨噬细胞炎症模型和BALB/c小鼠支气管哮喘模型的影响。方法 建立脂多糖与人干扰素-γ诱导的RAW264.7细胞炎症模型，用玉簪花提取物预处理模型细胞，测定细胞上清液中一氧化氮(NO)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。将BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、玉簪花提取物高、低剂量组。采用卵清蛋白致敏和激发哮喘，末次给药24 h后，分析小鼠全血中淋巴细胞、单核细胞、粒细胞的数量，吉姆萨染色观察嗜酸性粒细胞的数目；ELISA法检测小鼠血清中总免疫球蛋白E(IgE)的水平、NO的含量、支气管肺泡灌洗液中IL-6与TNF-α的水平以及肺组织细胞黏附因子-1(ICAM-1)的水平；HE染色观察小鼠肺组织炎症及病理变化。结果 玉簪花提取物可显著抑制炎症细胞因子的表达；显著降低卵清蛋白模小鼠炎症细胞和嗜酸粒的数量，减少NO生成，降低IgE的含量，显著降低肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α的水平以及肺组织中ICAM-1的表达。结论 玉簪花提取物对细胞炎症模型和哮喘气道炎症模型有较好的抑制作用，可为其治疗哮喘的研究提供参考。     

吸入布地奈德对哮喘大鼠肺组织嗜酸粒细胞趋化因子及受体表达水平的影响

目的观察吸入布地奈德对哮喘大鼠肺组织嗜酸粒细胞趋化因子及受体表达水平的影响。方法将30只Wistar大鼠随机分组(n=10):模型组(A组)采用OVA致敏与激发;空白对照组(C组),以生理盐水代替OVA;布地奈德组(B组),第6次诱发哮喘结束后30 min采用BUD混悬液雾化吸入2周。模型组和空白对照组以等量生理盐水代替。肺组织嗜酸性粒细胞(EOS)计数,测定肺组织Eotaxin蛋白、CCR3蛋白表达水平。结果布地奈德组大鼠肺组织EOS计数明显低于模型组[(8.87±3.21)vs(11.53±4.50),P0.05]。哮喘大鼠肺组织中有大量的Eotaxin蛋白、CCR3蛋白表达,布地奈德组大鼠肺组织Eotaxin蛋白、CCR3蛋白表达明显减少。空白对照组在上述部位仅少量表达或不表达。结论 Eotaxin及其受体CCR3参与哮喘的发病机制,布地奈德雾化吸入治疗哮喘与其抑制Eotaxin及其受体CCR3表达有关。     

射干麻黄药对对支气管哮喘小鼠模型气道炎症及外周血Th1/Th2的影响

目的:观察不同比例射干麻黄药对对支气管哮喘小鼠模型气道中炎症细胞及外周血Th1/Th2平衡的影响.方法:将80只BALB/c小鼠随机分为A正常对照组、B哮喘模型组、C地塞米松组、D麻黄单药组、E射干单药组及不同比例射干麻黄药对组F、G、H),每组10只.采用鸡卵蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型,给予不同药物对小鼠进行干预.干预完成后取支气管肺泡灌洗液(BALF)测定白细胞总数及嗜酸性粒细胞计数,采用ELISA检测小鼠血清中IL-4、IL-5、IL-13及IFNγ的水平,HE染色观察小鼠肺组织病理炎症等改变.结果:射干麻黄药对组可以显著减轻哮喘小鼠的哮喘症状,降低外周血中IL-4、IL-5、IL-13水平、升高IFN-γ水平,并能降低BALF中白细胞总数及嗜酸粒细胞水平.结论:射干麻黄药对可以显著减轻哮喘小鼠气道炎症,抑制炎症介质的释放,纠正Th1/Th2失衡,从而达到治疗哮喘的作用.     

天山堇菜提取物基于NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路改善哮喘小鼠气道炎症的作用及机制

目的 探究天山堇菜提取物(Viola tianshanica Maximextract, VTME)改善哮喘小鼠气道炎症的作用及机制。方法 BALB/c雌性小鼠,随机分为正常对照组、卵清白蛋白(OVA)模型组、VTME低、中、高剂量(80、160、320 mg·kg^-1)组、阳性对照药地塞米松组(Dex, 80 mg·kg^-1)组。采用OVA致敏、激发的方法诱导哮喘模型。收集小鼠肺泡灌洗液(BALF)并对炎症细胞进行分类计数;采用ELISA法检测BALF中调节活化的正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、IFN-γ及TNF-α含量,肺组织中TNF-α、MCP-1、IFN-γ、IL-17含量以及血清中IgE、嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)水平;采用HE染色观察肺组织病理改变;采用qRT-PCR法和Western blot法分别检测肺组织NLRP3 mRNA表达水平及GSDMD、caspase-1、IL-1β、NLRP3蛋白表达水平。结果 VTME能明显降低哮喘小鼠BALF中各类炎症细胞数量及TNF-α、IFN-γ、Rantes的含量,...     

地塞米松对哮喘豚鼠气道白介素-5、白介素-10mRNA表达及嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的：检测地塞米松对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中白介素-5（IL-5）mRNA及IL-10 mRNA表达水平及嗜酸性粒细胞（EOS）凋亡率。方法：健康雄性Hartley系豚鼠随机分为地塞米松组、哮喘组和正常对照组。采用原位细胞凋亡（TUNEL）、RTPCR技术检测BALF中EOS凋亡、IL-5 mRNA及IL-10 mRNA表达水平。结果：地塞米松组BALF中的EOS较哮喘组明显下降，EOS凋亡明显上升（P〈0．01）；IL-5 mRNA水平较哮喘组明显下降，IL-10 mRNA水平较哮喘组明显升高（P〈0.05）。结论：地塞米松可以通过减少IL-5 mRNA的表达，增加IL-10 mRNA的表达有效抑制哮喘豚鼠气道EOS的上升，增加EOS的凋亡。     

阿奇霉素对哮喘致敏大鼠气道炎症及Th1/Th2失衡的调节作用

目的:探讨阿奇霉素对哮喘(OVA)致敏大鼠气道炎症及Th1/Th2失衡的调节作用。方法:SD大鼠40只,随机分为生理盐水组、哮喘模型组、地塞米松组以及阿奇霉素组,每组10只。利用卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)/Al(OH)3致敏与OVA雾化吸入激发建立大鼠过敏性气道炎症模型,收集肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞分类计数。采用ELISA法测定肺泡灌洗液中IL-2、IL-4、TNF-α与ET-1的表达情况。光镜观察肺组织病理结构变化。结果:OVA模型大鼠肺泡灌洗液中的中性粒细胞、淋巴细胞以及嗜酸性粒细胞含量明显增加;HE染色观察肺组织病理结构出现明显的支气管上皮脱落、杯状细胞增生,支气管周围嗜酸性粒细胞明显浸润现象;BALF中IL-2、IL-4、TNF-α与ET-1的表达均明显高于生理盐水对照组(P<0.05)。阿奇霉素则显著降低肺泡灌洗液中中性粒细胞、淋巴细胞以及嗜酸性粒细胞含量;明显改善支气管上皮脱落、杯状细胞增生,支气管周围嗜酸性粒细胞浸润现象;BALF中IL-2、IL-4、TNF-α与ET-1的表达也明显低于OVA模型大鼠(P<0.05)。结论:阿奇霉素通过调节Th1/Th2失衡对过敏性哮喘的气道炎症具有明显的治疗作用。     

胸腺肽β_4对哮喘小鼠气道炎症的作用

目的观察胸腺肽β_4对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 60只健康C57BL/6小鼠,随机分为正常对照组,哮喘模型组,地塞米松(25 mg·kg~(-1))组,胸腺肽β_4高剂量(5 mg·kg~(-1))组、中剂量(2.5 mg·kg~(-1))组和低剂量(1.25 mg·kg~(-1))组,每组10只。用卵白蛋白致敏法建立小鼠哮喘模型。正常对照组及哮喘模型组腹腔注射生理盐水,其他组注射相应药物,每日1次,共7 d。Medlab生理信号采集系统测定各组小鼠的肺功能,收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞分类计数并检测小鼠血清中白细胞介素5(IL-5)的含量。结果哮喘模型组呼吸频率高于正常对照组,潮气量和肺每分钟通气量低于正常对照组,血清中IL-5浓度和BALF中嗜酸粒细胞百分比高于正常对照组(P<0.05)。胸腺肽β_4高剂量组和地塞米松组潮气量和肺每分钟通气量高于哮喘模型组,血清IL-5浓度低于哮喘模型组(P<0.05)。胸腺肽β_4各剂量组和地塞米松组呼吸频率均低于哮喘模型组,BALF中嗜酸粒细胞百分比也均低于哮喘模型组(P<0.05)。结论胸腺肽β_4能抑制哮喘小鼠嗜酸粒细胞、调节IL-5的水平,改善小鼠的肺通气功能。     

柠檬醛对致敏大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒和气道嗜酸粒细胞凋亡的作用

目的:研究柠檬醛对致敏大鼠肥大细胞脱颗粒的影响以及对大鼠气道嗜酸粒细胞凋亡的作用。方法:以卵蛋白致敏制备大鼠哮喘模型。通过大鼠被动肥大细胞脱颗粒,放免法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素8(IL-8)的含量;密度梯度离心法分离支气管肺泡灌洗液中的嗜酸粒细胞,采用膜联蛋白和碘化丙啶联合标记法测定细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:柠檬醛高、中剂量组肥大细胞脱颗粒数量以及TNF-α和IL-8的含量与模型组相比差异有非常显著意义(P<0.01);柠檬醛高、低剂量组都能明显提高嗜酸粒细胞的凋亡量,与空白对照组相比差异有非常显著意义(P<0.01)。结论:柠檬醛具有抑制肥大细胞脱颗粒作用并且促进嗜酸粒细胞凋亡。     

舒利迭雾化吸入对哮喘小鼠气道炎症及气道重构的影响

目的 研究舒利迭雾化吸入对哮喘小鼠炎症及气道重构的影响.方法 将30只雄性小鼠随机分成卵白蛋自(OVA)致敏致哮喘组(A组)、舒利迭干预组(B组)、正常对照组(C组).用OVA进行致敏和激发,建立哮喘模型.收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)行白细胞和嗜酸粒细胞(EOS)计数,采用医学图像分析软件测定支气管各项指标;HE染色观察组织形态学变化.结果 正常对照组、哮喘组、舒利迭干预组的EOS分别是(0.54±0.16)、(6.82±0.5 7)、(3.19±0.66)×10<'5>/m1,A组气道壁炎性细胞计数、气道平滑肌面积、气道内壁面积均明显高于C组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),B组各项指标均明显低于A组,差异有统计学意义(P<0.01),B组与C组比较各项均有升高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05).结论 舒利迭雾化吸入不仅可明显抑制哮喘小鼠的气道炎症反应,还可明显减轻气道重构的程度.