缺血预处理对大鼠肥大心脏缺血再灌注损伤的影响

本实验用一氧化氮合成抑制剂－左旋硝基精氨酸复制大鼠高血压心脏肥大模型并作缺血再灌注处理，以观察缺血预处理对高血压肥大心脏Ｉ／Ｒ损伤的影响及ＮＯ在其中的作用。结果显示：ＩＰＣ能减轻大鼠高血压有肥大心脏Ｉ／Ｒ损伤，其程度与ＩＰＣ对正常心脏Ｉ／Ｒ损伤的保护相近，表明高血压肥大心脏同样具有ＩＰＣ保护现象，但ＮＯ在本模型中未起作用。     

缺血预处理抗缺血再灌注心肌间质损伤的实验研究

目的：观察缺血预处理（ＩＰＣ） 对大鼠缺血再灌注心肌间质胶原及心肌功能结构关系的影响,以进一步探讨ＩＰＣ 对心肌的保护作用。方法：实验采用体重（２５０ ±３０）ｇ 雄性ＳＤ 大鼠２４ 只,分３ 组,每组８ 只,即假手术对照（ＳＣ）组;缺血再灌注（Ｉ／Ｒ） 组和缺血预处理（ＩＰＣ） 组。用超微结构立体计量及羟脯氨酸浓度测定观察心肌间质胶原变化,多道记录仪测量心功能指标,透射电镜观察心肌超微结构。结果：Ｉ／Ｒ 时心肌间质胶原浓度显著低于ＳＣ 组（ Ｐ＜ ０－０１） ,心肌超微结构损伤严重,左室功能明显低于ＳＣ 组（ Ｐ＜ ０－０１） 。ＩＰＣ 组心肌超微结构破坏明显低于Ｉ／ Ｒ 组。同时,心肌间质胶原浓度、胶原纤维线密度及左室功能指标明显高于Ｉ／Ｒ 组（ Ｐ＜ ０－０５ ,Ｐ＜ ０－０１） 。结论：ＩＰＣ 的心肌保护作用不仅表现在对心肌细胞上,而且对心肌间质也有重要的保护作用。     

NO参与缺血预处理对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究缺血预处理(IPC)对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的保护作用及一氧化氮(NO)是否参与此保护作用。方法采用Wistar雌性大鼠,在左后肢跟部止血,同时使用血流监测仪测股四头肌的血流量,调整止血带的松紧程度,使血流量控制在上止血带前的30%。30只大鼠随机分成3组,分别为缺血再灌注组(n=10)、缺血预处理组(n=10)、缺血预处理+NAME组(n=10)。应用尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶2+2+(NADH)染色,检测股四头肌各型肌纤维横截面积,钙-腺苷三磷酸酶(Ca-ATPase)染色,观察细胞膜CaATPase分布。透射电镜观测肌细胞的超微结构变化。结果缺血再灌注组出现明显肌纤维破裂溶解,许多白细胞浸润,电镜下线粒体中含有大量空泡变性、肌纤维断裂、溶解和Z线排列整齐膜脂质过氧化物的增加。与缺血再灌注组相比,缺血预处理组显示了轻微的损害,正常的纤维和血管变形少,股四头肌各型肌纤维横2+截面积降低,细胞膜Ca-ATPase数量增加。缺血预处理+NAME组与缺血再灌注组相比没有明显改变。结论缺血预处理对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤有明显保护作用,NO参与这一保护作用。     

去甲肾上腺素和缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌的作用

缺血预处理 (Ｉｓｃｈｅｍｉｃｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ ,ＩＰ)的机理及其临床应用前景至今仍不清楚。目前肾上腺素能神经递质及其受体在ＩＰ的保护心脏作用中所起的作用日益受到重视。本试验通过大鼠缺血再灌注模型 ,并与ＩＰ保护作用相比较 ,探讨外源性去甲肾上腺素预     

去甲肾上腺素和缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:研究去甲肾上腺素预处理(NE-P)和缺血预处理(IP)对大鼠缺血再灌注(I/R)心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:复制缺血再灌注损伤(IRI),采用末端标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;应用免疫组化SABC法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:I/R组凋亡细胞较多,NE-P组及IP组凋亡细胞明显少于I/R组(P＜0.01)。在I/R组Bcl-2的表达少而Bax的表达较多,NE-P组及IP组Bcl-2的表达明显高于I/R组(P＜0.01),而Bax的表达明显低于I/R组(P＜0.01)。NE-P组与IP组各指标均无显著差异(P＞0.05)。结论:NE-P可抑制I/R诱发的心肌细胞凋亡,Bcl-2和Bax的蛋白表达在心肌凋亡的发生中起重要作用。NE-P与IP两者对心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响的作用相近。     

尾加压素预处理对大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨尾加压素(UII)预处理对于离体灌流大鼠心脏缺血再灌注(I/R)损伤的影响。方法:在离体灌流的SD大鼠心脏I/R模型上,以UII预灌注心脏,采用MFLLab200心功能软件监测心功能,以试剂盒测定心肌细胞ATP、总钙、丙二醛含量和乳酸脱氢酶(LDH)漏出,并观察其对于冠脉流出量(CPF)的影响。结果:UII预处理组与单纯I/R组比较,冠脉流出液中LDH低28%[(78.3±18.1)U/Lvs(10.93±23.9)U/L,P<0.05],心肌组织MDA和钙含量分别低24%和27%(P<0.05);ATP含量高73%(P<0.05)。与I/R组比较,UII预处理组CPF高42%[(5.4±0.7)mL/minvs(3.8±0.8)mL/min,P<0.05],LVEDP低20%(P<0.05),±dp/dtmax分别高25%和45%(P<0.05);冠脉流出液中NO₂^-/NO₃^-含量高63%(P<0.05)。结论:UII预处理可以减轻离体灌注大鼠心脏I/R所造成的损伤,其机制与NO介导的冠脉扩张效应有关。     

缺血预处理对糖尿病大鼠缺血/再灌注损伤性心肌超微结构的影响

目的:研究缺血预处理对糖尿病大鼠缺血再灌注损伤性心肌超微结构的影响。方法:建立糖尿病大鼠、缺血再灌注和缺血预处理模型,随机分成6组,即非糖尿病和糖尿病的假手术组、缺血再灌注组、缺血预处理组,观察心肌酶和心肌超微结构变化。结果:非糖尿病的缺血预处理组心肌酶CK、CK-MB、LDH较缺血再灌注组明显降低,心肌超微结构损伤减轻;糖尿病缺血预处理组与缺血再灌注组相比心肌酶无降低,心肌超微结构损伤进一步加重。结论:缺血预处理对非糖尿病大鼠心肌具有保护作用,而对糖尿病大鼠心肌不具有同样的保护作用。     

辛伐他汀预处理对脑缺血再灌注损伤Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨辛伐他汀预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:随机将48只雄性SD大鼠分为4组:空白对照组、假手术组、缺血再灌注组和辛伐他汀预处理组。辛伐他汀预处理组在模型制备前用辛伐他汀20mg/kg连续灌胃10d,1次/d;假手术组及缺血再灌注组用相同体积的等渗盐水连续灌胃10d。以线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于缺血2h再灌注24h后行5分制神经功能评分,并断头取脑分别测定脑梗死体积、凋亡细胞数及Bcl-2、Bax表达。结果:与空白对照组和假手术组比较,缺血再灌注组和辛伐他汀预处理组神经功能缺损较为严重,脑梗死体积增大,凋亡细胞数目增多,Bcl-2、Bax表达增加(均P0.01)。与缺血再灌注组相比,辛伐他汀预处理组神经功能有不同程度改善,脑梗死体积明显减小,凋亡细胞数及Bax表达降低,Bcl-2表达增高,比较差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:辛伐他汀预处理对大鼠脑缺血再灌注有神经保护作用,其作用机制可能与辛伐他汀上调脑组织中Bcl-2、下调Bax表达,抑制细胞凋亡有关。     

缺血预处理对大鼠压疮缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的比较不同缺血处理方法对大鼠皮肤及皮下组织的保护作用,为临床判断压疮损伤的程度及压疮干预效果提供理论依据。方法将60只SD大鼠随机分为对照组（S组）、缺血再灌注组（RI组）和缺血预处理组（IPC组）,每组20只．建立大鼠压疮缺血再灌注损伤处理模型,通过肉眼观察受压程度,检测血清氧自由基的水平,以判断压疮缺血再灌注损伤程度。结果RI组和IPC组大鼠出现I期压疮的发生率为100％。IPC组血清一氧化氮、丙二醛含量高于S组,明显低于RI组．超氧化物歧化酶活性低于S组,明显高于RI组。结论缺血预处理对压疮缺血再灌注损伤具有保护作用。     

高原地区缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注的影响

目的研究在高原地区缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注的影响。方法本组99只大鼠分为IPC1组、IPC2组及PTC组。观察并统计动物术后12、24、48、72 h存活率。术后12、24、48、72 h分别开腹,取心脏血、肝脏标本进行肝功能及病理检查。比较分析三组的病理改变、死亡率及肝功能指标变化。结果 IPC2组的ALT值及死亡率均明显高于PTC组与IPC1组,IPC1组的病理改变明显轻于IPC2组,而IPC2组与PTC组的病理改变相近。结论在高原地区反复短暂的组织器官缺血可致累加性损伤,最终导致组织坏死,器官功能衰竭。     

肢体缺血/再灌注后氧自由基与Bax蛋白、细胞凋亡的关系

目的　阐明氧自由基与Bax蛋白、细胞凋亡在大鼠肢体缺血 /再灌注不同时相中的变化规律及相互关系。方法　采用大鼠股动脉夹闭模型 ,阻断股动脉血流 5h后再灌注 ,设立缺血组、再灌注组 ,再灌注组设立 1,6 ,12 ,2 4h 4个检测时相 ,应用硫代巴比妥酸法测定肌肉组织中脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)水平 ,应用免疫组化方法测定Bax蛋白表达的变化 ,应用原位末端标记法及电镜方法观察细胞凋亡现象。结果　随着再灌注时间的延长 ,MDA水平、Bax蛋白表达强度、细胞凋亡指数 (AI)进行性升高 ,且三者呈显著正相关。结论　氧自由基与细胞凋亡同时参与肢体再灌注损伤 ,氧自由基可能通过调节Bax蛋白表达促进细胞凋亡的发生。     

粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的探讨粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）30min后松开,再灌注24h建立心肌缺血-再灌注损伤模型。将48只雄性SD大鼠随机分为：假手术组（Sham组）,缺血-再灌注损伤组（IRI组）,粉防己碱预处理组（Tet组）。再灌注结束后检测血清肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）和心肌梗死范围（IS/AAR,%）。应用原位末端标记法（TUNEL法）检测各组凋亡细胞,计算凋亡指数（AI）,应用免疫组化法检测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达,计算Bcl-2/Bax值,进行组间比较。结果与IRI组相比,Tet可明显降低CK-MB值（976.57±160.69）vs（1910.38±221.10）U/L,P〈0.01,减小心肌IS/AAR%,（23.28±4.38）%vs（43.76±6.30）%,P〈0.01。与IRI组比较,粉防己碱预处理可显著减少心肌细胞凋亡,AI显著降低（8.62±2.45%vs19.36±5.28%,P〈0.01）。粉防己碱预处理使Bcl-2表达增加,Bax表达下降,Bcl-2/Bax值显著升高（P〈0.01）。结论粉防己碱能明显抑制缺血-再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡,其作用机制可能与促进Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达、升高Bcl-2/Bax比值有关。     

Thioredoxin Gene Expression in Rat Knee Articular Cartilage After Full-Thickness Injury

To study the expression of the antioxidative protein thioredoxin (TRX) in intact and injured articular cartilage, we examined the presence of trxmRNA in rat knee joints by in situ hybridization. Our results showed that in the intact knee, most cells, including articular cartilage chondrocytes, expressed trx mRNA. We examined joints at 1, 7, 14, and 28 days after the infliction of full-thickness cartilage injuries on distal femoral condyles. At 1 day after injury, no significant changes were observed in the wound or in trx expression pattern. However, at 7 to 28 days after injury, the wound became filled with repair tissue. Also, trx expression was detected in differentiating mesenchymal cells in the deeper zones of the wound but not in fibroblast-like cells in the upper part of the repair tissue, toward the joint cavity. This lack of TRX expression in the fibroblast-like cells may underlie the susceptibility of the repair tissue fibrocartilage to oxidative stress.     

眼缺血再灌注损伤大鼠葡萄膜组织COX-2的表达及意义

目的:探讨实验大鼠眼缺血再灌注后葡萄膜组织中环氧合酶-2(COX-2)的表达及意义。方法:通过血管结扎法建立大鼠一侧眼缺血再灌注损伤模型,并以对侧眼作为假手术对照,检测实验眼分别缺血1h、2h、3h、4h、5h、6h情况下,脉络膜和虹膜组织中COX-2和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:在各组实验眼脉络膜和虹膜各层组织中都有不同程度COX-2和VEGF阳性表达,与假手术对照眼比较有显著性差异,P<0.01;且脉络膜或虹膜中COX-2和VEGF表达具有良好相关性,分别为r=0.943,r=0.886。结论:与炎症密切相关的COX-2可能作为潜在的血管增生刺激因子,在葡萄膜新生血管形成中起着重要作用。     

大鼠脊髓压迫损伤后COX-2基因和蛋白的表达

目的观察大鼠脊髓压迫损伤后COX-2mRNA和蛋白在脊髓组织内表达的时间特征,以及COX-2的空间分布特点。方法以压迫装置致脊髓损伤后,在伤后不同时间点(30min、3h、6h、24h、72h、1w)分别应用RT-PCR、Western blotting、免疫组化技术检测COX-2mRNA和蛋白表达和分布。结果RT-PCR和Western blotting显示,COX-2mRNA和蛋白伤后30min表达开始增加,于伤后6h达到峰值,伤后1w表达接近基础水平。免疫组化提示,COX-2蛋白在假手术组表达仅见于脊髓血管内皮细胞,伤后COX-2蛋白表达见于损伤区附近脊髓灰质内的神经元和血管内皮细胞,损伤中心部位COX-2免疫阳性细胞少见。结论脊髓压迫损伤早期可快速诱导COX-2基因的表达上调和蛋白的合成,伤后COX-2蛋白分布发生变化,主要位于脊髓神经元和血管内皮细胞。     

高脂血症对大鼠主动脉内皮细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨高脂血症SD大鼠主动脉内皮细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的变化及其诱导内皮细胞凋亡的可能机制。方法:清洁级大鼠17只,随机分为高脂血症模型组(8只)和对照组(9只),分别以高脂饲料和普通饲料喂养16周后,检测血脂水平,采用免疫组织化学方法检测两组大鼠主动脉内皮细胞Bax、Bcl-2的表达,同时用HE染色和电镜观察主动脉组织形态学改变。结果:与对照组相比,模型组大鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平升高(P<0.01),主动脉内皮细胞Bax蛋白表达明显增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.01),Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01);模型组主动脉内膜增厚和平滑肌细胞增殖,内皮组织部分脱落,内皮细胞胞膜破裂,胞质脱失,核膜不完整。结论:高脂血症可引起大鼠血管内皮细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2水平及比值改变,加重血管内皮损伤,促进细胞凋亡,加速动脉粥样硬化进程。     

Influence of Genetic Variation in the C-Reactive Protein Gene on the Inflammatory Response During and After Acute Coronary Ischemia

The aim of this research was to assess whether common genetic variants within the C-reactive protein gene ( CRP ) are related to the degree of acute rise in plasma C-reactive protein (CRP) levels following an acute coronary syndrome (ACS). While polymorphisms within CRP are associated with basal CRP levels in healthy men and women, less is known about the relationship of such genetic variants and the degree of CRP rise during and after acute ischemia. Plasma CRP is associated with increased rates of recurrent coronary events. We evaluated seven common genetic variants within CRP and assessed their relationship to the degree of rise in CRP levels immediately following an acute coronary syndrome in 1827 European American patients. Variants in the putative promoter region, −757T > C and −286C > T > A, were associated with the highest CRP elevations after ACS. Patients with two copies of the A allele of SNP −286C > T > A had median CRP values of 76.6 mg/L, compared to 11.1 mg/L in patients with no copies of the rare variant (p-value <0.0001), post ACS. The lowest CRP values were found for patients with minor alleles of the exonic 1059G > C and the 3'untranslated region 1846G > A SNPs. For example, patients homozygous for the minor allele of 1059G > C had 71% lower median CRP values than those homozygous for the major allele [3.5 vs 12.0 mg/L, p < 0.0001]. These trends persisted in the chronic stable phase after ischemia had resolved, and after adjustment for infarct size by peak creatinine kinase levels and clinical status by Killip class. Assessment of CRP genetic variants identified patients with higher and lower CRP elevation after acute coronary syndrome.     

Real-Time PCR检测Bcl-2和Bax基因在脊髓钝挫伤大鼠中的表达

目的使用Real-Time PCR检测脊髓钝挫伤后不同时间点Bcl-2和Bax基因表达变化。方法 SD成年雌性大鼠72只,随机分为假手术组、脊髓挫伤6h组、脊髓挫伤12h组、脊髓挫伤1d组、脊髓挫伤3d组、脊髓挫伤5d组、脊髓挫伤7d组、脊髓挫伤14d组和脊髓挫伤28d组。大鼠于术后相应各时间点取损伤段脊髓进行RealTime PCR,对基因Bcl-2和Bax表达进行定量分析。结果 Real-Time PCR发现假手术组Bax和Bcl-2基因mRNA水平较高,损伤后均明显下降。Bax基因mRNA在损伤后6h立即下降,12h时明显上升(P<0.01),在损伤后3d又呈现显著性下降(P<0.01),此后一直持续这个水平至28d。Bcl-2基因在损伤后6h也明显下降(P<0.01),12h时立即上升(P<0.01),1d时下降(P<0.01),至损伤后14d又显著性上升(P<0.01)。结论脊髓钝挫伤后大鼠Bax和Bcl-2基因mRNA表达水平于早期显著下降,之后明显上升随后又下降。Bax和Bcl-2基因在脊髓损伤后基因的表达变化为脊髓损伤机制研究提供理论依据。     

NGF和CGRP对局灶性脑缺血再灌注后大鼠皮质CHOP蛋白表达的影响

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注后大鼠顶叶皮质神经元CHOP蛋白表达的影响及其作用机制。方法用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,应用免疫组织化学方法,免疫印迹法(W estern B lotting)测定CHOP蛋白表达;M etamoph图像分析系统对结果进行分析。结果假手术组大鼠顶叶皮质未见CHOP蛋白表达;缺血组CHOP蛋白在缺血再灌注后12 h明显表达,24 h达高峰,72 h显著下降,缺血组较假手术组CHOP蛋白表达显著增加(P<0.01);NGF组和CGRP组CHOP蛋白表达分别弱于缺血组(P<0.01);NGF和CGRP合用组CHOP蛋白表达明显弱于缺血组(P<0.01),也分别弱于NGF组和CGRP组(P<0.01)。结论NGF和CGRP能分别下调局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CHOP蛋白表达,联合应用则作用更强,二者对保护脑缺血神经元可能有协同作用。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB表达的上调作用

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和磷酸化的CREB(p-CREB)表达的影响。方法用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学、W estern B loting和图像分析方法检测大鼠海马CA1区CREB和磷酸化CREB表达。结果假手术组海马CA1区CREB有明显表达,缺血再灌注组CA1区表达较假手术组减少,NGF组CA1区的CREB表达多于缺血再灌注组(P<0.05)。假手术组海马CA1区p-CREB表达很少,缺血再灌注组p-CREB表达多于假手术组,NGF组p-CREB表达多于缺血再灌注组(P<0.05)。结论NGF上调海马CREB和p-CREB的表达,对缺血神经元起保护作用,CREB和p-CREB参与NGF对缺血神经元的保护作用机制。