阿萨希丝孢酵母五种培养基培养观察

目的：观察阿萨希丝孢酵母在五种不同培养基中的形态。方法：分别接种在沙堡弱培养基（SDA）、马铃薯培养基（PDA）、麦芽浸膏琼脂培养基（MEA）、玉米粉琼脂培养基（CMA）、察氏培养基（CDA），25℃培养。结果：SDA和PDA培养基菌落土黄色、颗粒状、表面明显皱折。镜下见分支隔透明菌丝，矩形、圆形、椭圆形或不规则形节孢子。孢子一边或多边出芽，可形成多个芽管，并有间生或顶生厚壁孢子。其他培养基则生长较差。结论：SDA及PDA较适合阿萨希丝孢酵母生长。     

阿萨希丝孢酵母的几种特殊结构

目的进一步了解阿萨希丝孢酵母(T.asahii)的形态结构特征。方法对T.asahii在沙氏培养基试管培养和小培养,30℃,7天后,取菌落常规制片后进行光镜、透射电镜、扫描电镜观察。结果发现除关节菌丝和节孢子外,T.asahii具有棒状分生孢子、分隔孢子、巨细胞(giantcell)和八叠球菌(sarcinate)样结构和丝样芽管结构。结论阿萨希丝孢酵母菌孢子表面有高度扩张的孔口,孢子链状排列。认为活跃的分隔和出芽能力是该菌的显著特点之一,并提出一些亟待进一步研究的问题。     

阿萨希丝孢酵母引起播散性毛孢子菌病国内首例报告

目的报道国内首见阿萨希丝孢酵母（T.Asahii）所致播散性毛孢子菌病1例。方法全面临床检查排除其他疾病;多部位皮损组织及肝穿组织活检,组织病理检查;皮损组织、口腔假膜、阴道及鼻腔分泌物、尿、粪、肝穿组织及皮损表面痂皮多次真菌培养、直接镜检证实为系统性真菌病;菌种与标准菌株对照进行培养、生化试验、菌种鉴定及DNA序列分析;临床系统抗真菌治疗观察。结果发现皮肤、肝、肾、肠道、口腔、阴道粘膜等广泛受累,组织病理发现在感染性肉芽肿损害中有大量真菌孢子。真菌学培养均为同一菌落生长。菌落呈乳白色至淡黄色,表面褶皱,暗淡,边缘有菌丝长出。镜下见大小不一的矩形关节孢子及大量圆形或卵圆形孢子,出芽或不出芽,并见分支分隔菌丝。菌种经生化试验、糖发酵试验、同化硝酸盐试验、温度试验及碳源同化试验等最终鉴定为阿萨希丝孢酵母(No.AS2.2174),DNA序列分析证实该菌与阿萨希丝孢酵母的模式菌株在核糖体D1/D2区域碱基序列完全相同。经脂质体两性霉素B联合氟康唑治疗5个月后病情显著好转,各种真菌学检查阴性。结论阿萨希丝孢酵母所致播散性毛孢子菌病为国内首见;阿萨希丝孢酵母所致皮肤、粘膜、肝、脾、肾、肠道等系统损害,范围广、病程长,且基础病变不明,实为罕见。脂质体两性霉素B联合氟康唑治疗本病疗效显著。     

应用PCR技术检测人乳头瘤病毒DNA

从ＨＰＶ基因组Ｌ１区段选择了大多数亚型均具有的保守序列，借助计算机检索验证，设计出一对适用 于检测１７种ＨＰＶ亚型的引物。并应用该引物对５１例病理诊断为尖锐湿（ＣＡ）的标本进行了ＰＣＲ扩增检测。结果表明，其枵次性完成对多种ＨＰＶ亚型感染的检测，检测覆盖而宽，漏检率低，对ＣＡ的论断确有较好的应用价值。     

巢式-实时PCR检测梅毒初诊患者不同样本中梅毒螺旋体靶DNA

目的 探讨巢式-实时PCR(NR-PCR)检测初诊梅毒患者不同样本中梅毒螺旋体(Tp)靶DNA的可行性及应用前景.方法 以Tp polA为靶基因,用NR-PCR检测梅毒患者初诊时皮损拭子、血清、全血、脑脊液、末梢耳垂血等样本中的靶DNA,用统计软件SPSS.13分析结果.结果 NR-PCR检测Tp polA靶DNA的极限为2个Tp/ml,总体阳性率为71.7%,检测不同类样本的阳性率从高到低依次为:耳垂血92.0%>脑脊液90.2%>拭子74.3%>血清66.9%>全血64.2%.NR-PCR结果与血清学检查结果的一致性为76.0%(152/200).进一步分析显示:一期、二期梅毒拭子DNA阳性率(63.2%比87.5%)差异无统计学意义(χ2=2.62,P>0.05);血清样本中,二期梅毒DNA阳性率高于一期梅毒(χ2=3.6,P=0.06);全血样本中,二期梅毒DNA阳性率高于其他各类型梅毒;神经梅毒耳垂末梢血阳性率与脑脊液比较,P=0.06.隐性梅毒血清(RPR)滴度≥1:8组的Tp DNA阳性率高于RPR≤1:4组.结论 NR-PCR方法检测梅毒患者不同样本中Tp DNA是可行的,不同类型梅毒、不同类型样本以及其血清RPR滴度水平都影响Tp DNA阳性率.     

新疆Kaposi肉瘤组织内人类8型疱疹病毒DNA的PCR检测

近年来人们在Kaposi肉瘤(KS)组织内发现一种新的疱疹病毒——人类8型疱疹病毒(HHV-8), 但国内目前尚未见到有关KSHHV-8的研究报道, 因此我们对新疆KS组织进行了HHV-8DNA的PCR检测, 特报道如下.     

用聚合酶链反应检测生殖器疱疹中单纯疱疹病毒DNA

用聚合酶链反应检测生殖器疱疹中单纯疱疹病毒ＤＮＡ袁钟岱胡春梅易来龙袁星颜小武周耀湘王康生（广东省东莞市慢性病防治院５１１７００）朱文元（指导）骆丹李晓捷（南京医科大学一附院皮肤科２１００２９）应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测单纯疱疹病毒ＤＮＡ，从分子水...     

巢式PCR扩增梅毒螺旋体polA及其临床应用的研究

目的　建立一种检测临床标本中微量梅毒螺旋体 (Tp)的敏感、特异的方法。方法　运用常规及巢式PCR扩增了Tp的DNA多聚酶I基因 (polA)的特异性片段 ,检测了两方法的特异性和敏感性 ;与血清学方法比较 ,评价了两方法在诊断梅毒中的意义。结果　常规及巢式 polAPCR只在扩增Tp时有特异性产物 ,灵敏度分别约为 40个 /10 0 μl及 1个 /10 0 μl。检测 13 1份拟诊为梅毒的血清标本 ,血清学方法与巢式 polAPCR结果无显著性差异 ;巢式和常规 polAPCR结果有显著性差异 ,巢式PCR敏感性高于常规PCR。结论　巢式 polAPCR具有高度敏感、特异、标本处理简便等优点 ,适用于检测血清等标本中微量Tp ,可作为血清学方法的补充用于梅毒诊断。     

聚合酶链反应检测银屑病患者皮损组织中乙型肝炎病毒DNA

银屑病病因不明，有免疫学说、感染学说等，国内曾有人应用免疫组化、免疫荧光和ＤＮＡ原位杂交技术分别从寻常型银屑病鳞屑和皮损组织中检出乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）成分［１，２］。并认为ＨＢＶ在银屑病发病中可能起重要作用，或者就是部分患者的发病原因。为了进一步探...     

疣状皮肤结核患者皮损中结核杆菌DNA的检测

本文采用PCR技术，对10例病史2年以上的疣状皮肤结核患者皮损进行了结核杆菌DNA检测，结果显示10例患者1例阳性，而作为阳性对照的4例淋巴结结核组织3例阳性，2例正常组织均为阴性。从而说明疣状皮肤结核后期组织结核菌极少或无有。     

应用PCR技术快速诊断马尔尼菲青霉

采用特异性引物和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术,检测６株临床分离的马尔尼菲青霉、２株竹鼠体内分主了的马尔尼菲青霉,及其它致病真菌、细菌、人白细胞系ＤＮＡ。结果（１）８株马尔尼菲青霉的２５℃菌丝相、３７℃酵母相ＤＮＡ均可扩增３４７ｂｐ的特性片段,而其它致病真菌、细菌、人白细胞ＤＮＡ无特性片段扩增。（２）５株马尔尼菲青霉２５℃连续传１０代,其中一株发生变异,５０株马尔尼青霉均可扩增出特性片段。（３）敏感性     

麻风杆菌PCR检测方法的优化及应用

目的:研建一种适用于临床中检测麻风杆菌(ML)的分子生物学方法,并优化检测条件以提高检测方法的灵敏度。方法:用麻风杆菌纯DNA作模板,对PCR反应体系中模板浓度、引物浓度等反应条件进行优化,以建立高敏感性的PCR反应体系,并与实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法比较,对麻风病人标本进行检测,确定优化后两法的反应体系及两法的临床检测意义。结果:经过大量的实验比对表明,反应体系引物含量为0.2μL×100μmol时,模板浓度10-1条ML/m L可以作为稳定的可检测到条带的模板浓度的下限。对52例各型麻风患者标本的检测结果显示常规PCR检测阳性数(49/52)略高于Real-time PCR(47/52),但Real-time PCR操作程序简单和需时短,且成本低。结论:通过对PCR反应条件中DNA模板浓度和引物浓度的优选,提高了PCR检测麻风杆菌DNA的灵敏度;对于不同PCR方法的选择方面,Real-time PCR比常规PCR简捷快速,而常规PCR灵敏度略高于Realtime PCR。     

检测艾滋病患者外周血HIV—1 DNA水平的竞争性PCR方法的…

定量检测艾滋病患者体内荷毒水平对于评价治疗效果和研究发病机理至关重要我们建立了一种检测ＨＩＶ－１ ＤＮＡ水平的竞争性ＰＣＲ方法。选择ＨＩＶ－１的高度保守区域ｇａｇ基因作靶序列，以重组ＰＣＲ方法和基因克隆技术的构建两种重组质粒，分别插入有ｇａｇ和Δｇａｇ片段，其中后者比前者内部缺失５０ｂｐ，用作定量检测中的竞争模板。     

随机扩增多态性DNA在医学真菌鉴定与分子流行病学研究中的应用

随机扩增多态性ＤＮＡＪ 新近建立的一种以单个随机寡核苷酸为引物、聚合酶链反应为基础的扩增技术，特别适用于分子生物学研究甚少、未知基因组ＤＮＡ序列的靶细胞的扩增。文中介绍了随机扩增多态性ＤＮＡ用于医学真菌分类鉴定的优点和实例、用于真菌病流行病学学调查的研究概况，并对该技术在医学直菌领域中的应用前景作了初步介绍。     

PCR方法快速检测一些常见医学真菌

目的 为选择一种快速、敏感和特异的方法来检测临床感染的真菌。方法 选取真菌１８ＳｒＤＮＡ序列中两个片段设计引物,对１２种菌株进行ＰＣＲ扩增,均扩增出长约３１０ｂｐ产物。对一些临床常见细菌扩增均无反应。对酶母相真菌白念珠菌、新生隐球菌进行敏感性实验检测。结果 发现二者ＰＣＲ最小检出量均为菌体数达每个反应体系１０＾３。本实验过程总耗时３６ｈ以内。结论 本实验方法可快速特异性检测一些常见医学真菌。     

检测艾滋病患者外周血HIV-1 DNA水平的竞争性PCR方法的建立

定量检测艾滋病患者体内荷毒水平对于评价治疗效果和研究发病机理至关重要 ,我们建立了一种检测 HIV- 1DNA水平的竞争性 PCR方法 ( QC- PCR)。选择 HIV- 1的高度保守区域 gag基因作为靶序列 ,以重组 PCR方法和基因克隆技术构建两种重组质粒 ,分别插入有 gag和 Δ gag片段 ,其中后者比前者内部缺失 50 bp,用作定量检测中的竞争模板。将梯度稀释的竞争模板加入到反应体系中与待测的野生型模板共同扩增 ,PCR产物经 8%聚丙烯凝胶电泳后进行密度扫描测定 ,结果表明该方法稳定可靠 ;8份艾滋病患者的 PBMC DNA标本经该方法的检测也得到较好的结果。我们认为 QC- PCR是一种较为理想的 HIV- 1DNA水平的定量方法 ,非常适合于临床标本的检测和治疗研究的应用。     

应用PCR技术检测解脲支原体

应用ＰＣＲ技术检测解脲支原体孔繁荣，朱学骏，张耕耘，周骏马，陈受宜解脲支原体（ｕｒｅａｐｌａｓｍａｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）是非淋菌性尿道炎的病原体之一［１］。目前的检测方法主要为培养法和免疫学方法［２］。我们建立了聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃ...     

用聚合酶链反应检测多形红斑皮损中单纯疱疹病毒的DNA

用聚合酶链反应检测２３例多形红斑石蜡组织切块中ＨＳＶ－ＤＮＡ，１６例为阳性（６９．５６％），其中ＨＳＶ－Ⅰ型１３例（８１．２５％），ＨＳＶ－Ⅱ型３例（１８．７５％）。对照组为银屑病３例，大疱性类天疱疮５例，扁平苔藓３例均为阴性。对于探讨ＨＳＶ在多形红斑发病机理中的作用有重要意义。     

PCR直接检测皮肤分枝杆菌感染的研究

目的 探讨PCR直接检测皮肤分枝杆菌感染作为诊断的可能性.方法 PCR检测方法及培养方法(Löwenstein-Jensen培养基)比较分枝杆菌纯菌悬液、模拟皮肤分枝杆菌感染标本前处理前后、疑似皮肤分枝杆菌感染的临床标本前处理前后的检测结果.结果 分枝杆菌纯菌悬液的PCR法和培养法敏感性皆为1×10²个菌细胞/mL.模拟临床标本在经过前处理后在浓度为1×10²个菌细胞/mL的数量级上PCR检测阳性率为60%,而未经过前处理的模拟临床标本在此数量级上PCR检测阳性率为0,培养方法的阳性率为100%,但在浓度为1×10³个菌细胞/mL数量级上PCR检测阳性率为100%.37例临床疑似皮肤分枝杆菌感染标本经前处理后,PCR检测7例阳性,而未经前处理的标本同法检测2例阳性,但培养方法可检出9例阳性.结论 临床皮肤标本经前处理后,PCR检测的敏感性已接近80%,但能明显缩短检测时间.     

新疆经典型Kaposi肉瘤29例血清HHV-8 DNA的套式PCR检测

目的了解新疆经典型Kaposi肉瘤(Kaposi’ssarcoma,KS)患者血清中人类8型疱疹病毒(humanherpesivirus8,HHV8)感染的情况,以探讨HHV8感染与经典型KS发病之间的关系。方法采用套式PCR技术检测29例新疆经典型KS及68例正常对照的血清中HHV8感染的情况。结果25例KS(86.2%)检测到HHV8的DNA片断;正常对照中14例(20.6%)检测到HHV8的DNA序列,差异有显著性(χ2=36.412,P<0.001)。结论HHV8在新疆经典型KS的发病中发挥着非常重要的作用,但可能不是发病的唯一原因。