原因不明复发性流产患者蜕膜NK细胞亚群特征研究

目的通过分析原因不明复发性自然流产(URSA)患者流产蜕膜组织中NK细胞亚群表型特征,探讨蜕膜NK细胞在URSA发病中的作用。方法选取URSA患者26例为URSA组,20例同期正常妊娠行人工流产者作为正常早孕组,采用流式细胞术分析蜕膜组织NK细胞亚群表型、比例及其抑制性受体CD94/NKG2A表达情况。结果蜕膜中CD3-CD56+NK细胞约占淋巴细胞的70%,是妊娠子宫蜕膜中淋巴细胞的主要类型,URSA组蜕膜NK细胞比例与正常早孕组无明显差异;正常早孕组蜕膜NK细胞主要为CD56brightCD16-亚群,约占80%;而URSA组CD56brightCD16-亚群比例为(72.2±15.2)%,明显低于正常早孕组,而CD56dimCD16+亚群比例(15.3±6.7)%,明显高于正常早孕组,均有统计学差异(P<0.05)。URSA组蜕膜CD56brightCD16-细胞亚群CD94/NKG2A表达显著低于正常早孕对照组(P<0.01)。结论 URSA的发生可能与其蜕膜NK细胞CD56brightCD16-和CD56dimCD16+亚群比例失衡有关,而且蜕膜CD56brightCD16-细胞亚群抑制性受体CD94/NKG2A表达明显降低,可能引起NK细胞异常激活,参与URSA妊娠母胎免疫耐受的破坏。     

不明原因反复流产者T细胞中PD-1的表达及其临床意义

目的探讨不明原因反复流产(URSA)者T细胞中程序性细胞死亡分子-1(PD-1)的表达及其临床意义。方法选择2018年5月至2019年5月收治的URSA患者20例(URSA组),选择同期行人工流产的正常健康早孕妇女20例作为对照组。检测2组外周血和蜕膜组织中T细胞中PD-1的表达,及外周血白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果与对照组比较,URSA组外周血及蜕膜组织CD3~+PD-1~+T细胞的表达水平、IL-4、IL-10水平更低,IFN-γ、TNF-α水平更高,(P<0.05);经Pearson相关性检验,URSA与外周血PD-1、蜕膜PD-1、IL-4、IL-10呈负相关(r=-0.869～-0.619,P<0.05),与IFN-γ、TNF-α呈正相关(r=0.864、r=0.435,P<0.05)。结论 PD-1通过调节多种细胞因子而影响免疫平衡,参与URSA的发病,可为治疗URSA潜在靶点提供理论依据。     

不明原因反复自然流产患者免疫治疗前后外周血CD4~+CD25~+CD127~(low)T细胞百分率的分析

目的探讨不明原因反复自然流产(URSA)患者外周血调节性T细胞(Treg)中CD4~+CD25~+CD127~(low)T细胞的表达情况及经配偶淋巴细胞免疫治疗后的妊娠结局改变,判断其作为流产指标的可能性。方法用流式细胞术检测73例URSA患者治疗前、76例正常早孕者(正常早孕组)及69名正常未孕体检者(正常未孕组)外周血中CD4~+CD25~+CD127~(low)T细胞百分率,分析经配偶淋巴细胞免疫方法治疗2~3个疗程后的51例URSA患者外周血CD4~+CD25~+CD127~(low)T细胞百分率的变化情况。结果 URSA组治疗前外周血CD4~+CD25~+CD127~(low)T细胞百分率(2.73%±0.56%)明显低于正常未孕组(2.93%±0.60%)和正常早孕组(4.36%±1.07%)(P0.05)。51例URSA患者治疗后外周血CD4~+CD25~+CD127~(low)T细胞百分率(3.72%±1.15%)明显高于治疗前(P0.05),其中42例患者治疗后妊娠结局较好,有9例失败。结论 URSA患者外周血CD4~+CD25~+CD127~(low)T细胞表达明显降低,其有可能作为判断URSA的指标之一。体外配偶淋巴细胞免疫治疗与妊娠结局改善有关。     

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞CD28/CTLA-4分子表达的研究

目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血淋巴细胞CD28/CTLA-4分子和CD28/CTLA-4mRNA的表达。方法研究对象为SLE患者49例(活跃期30例、缓解期19例)及对照组23例。外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMCs)经梯度密度离心法分离后分佛波醇乙酯(PMA)(10ng/ml)及伊屋诺霉素(500ng/ml)刺激组和不加刺激剂组两组培养。将PBMCs分别培养24、48、72及96小时。应用流式细胞计量术(flow cytometry,FCM)检测外周血淋巴细胞培养前后CD28及CTLA-4分子的表达。采用RT-PCR方法检测CD28mRNA和CTLA-4mRNA的表达。结果刺激前后SLE患者CD3+及CD8+T细胞上CD28分子表达量与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。刺激前活跃期SLE患者CD3+T细胞上CTLA-4分子表达量较对照组明显降低[(0.78±0.51)%vs(1.34±0.76)%,P<0.05]。刺激后72小时SLE患者CD3+T细胞及CD8+T细胞上CTLA-4分子表达量仍低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。刺激前后PBMCs中CD28mRNA及CTLA-4mRNA表达情况与刺激前后CD3+T细胞上CD28及CTLA-4分子变化情况相似。刺激前SLE患者CD3+T细胞上CTLA-4分子表达量与SLE活动指数(SLEDAI)呈显著的直线负相关关系(P<0.001)。结论 SLE患者T细胞CTLA-4分子存在表达及上调机制障碍,提示CD28分子及CTLA-4分子存在功能失衡,这种失衡可能通过一定的机制参与SLE的发病过程。     

腹腔感染致脓毒症患者外周血血浆CTLA-4、sCD28水平及其在淋巴细胞、粒细胞的表达

目的:探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)、人可溶性CD28(sCD28)在腹腔感染致脓毒症患者血浆中的浓度水平,及其在CD4+、CD8+T和粒细胞上的表达情况。方法:收集2016-02-2017-09期间连云港市某人民医院普外科及重症监护病房收治的37例腹腔感染致脓毒症患者为研究对象,分为脓毒症组20例和感染性休克组17例;另选取20例健康体验者为对照组。患者在入院时抽取外周血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测52例样本血浆中CTLA-4和sCD28的浓度水平,采用流式细胞仪检测CTLA-4和sCD28在CD4+、CD8+T及粒细胞上的表达情况。结果:与健康对照组比,脓毒症组、感染性休克组外周血血浆中CTLA-4和sCD28浓度均降低,感染性休克组更低,差异均有统计学意义(P0.05)。与健康对照组比,脓毒症组、感染性休克组CTLA-4在CD4+、CD8+T淋巴细胞及粒细胞上的表达上调,而sCD28的表达下调,差异均有统计学意义(P0.05);脓毒症组与感染性休克组相比,sCD28在CD8+T上的表达下调,CTLA-4在CD8+T上的表达上调,差异均有统计学意义(P0.05),而sCD28和CTLA-4在CD4+T的表达差异无有统计学意义。结论:外周血血浆CTLA-4和sCD28水平及其在CD4+、CD8+T淋巴细胞及粒细胞上表达的改变可能反应早期腹腔感染致脓毒症患者的免疫紊乱状态。     

rs7574865位点多态性与不明原因复发性自然流产相关的机制研究

目的:探讨信号转导与转录激活因子4(STAT4)基因rs7574865位点多态性与不明原因复发性自然流产(URSA)的易感相关性及其不同基因型对STAT4表达的影响。方法:分别采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测246例URSA患者和183名正常女性STAT4基因rs7574865位点的基因型分布;采用免疫组织化学技术测定86例URSA患者和77名正常女性蜕膜组织STAT4基因的蛋白表达。结果:rs7574865G/T基因型频率在URSA组和对照组中分别为G/G基因型36.2%、46.5%,G/T基因型47.2%、45.4%,T/T基因型16.2%、8.2%,两组基因型频率分布比较差异具有统计学意义(P<0.05),其中T等位基因明显增加URSA的发病风险(OR=1.51,P<0.05)。URSA组和对照组的蜕膜组织中STAT4基因蛋白表达量比较差异具有统计学意义(P<0.05)。URSA组内和对照组中,3种基因型的蜕膜组织STAT4蛋白存在明显的表达差异(P均<0.05),携带T/T基因型的蜕膜组织中STAT4蛋白高表达于G/G基因型(P均<0.05)。URSA组和对照组对应G/G、G/T和T/T三种基因型的STAT4蛋白的表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论:rs7574865位点多态性可能通过其危险基因型T/T增加STAT4基因在母体蜕膜组织的表达增加URSA患者的发病风险。     

系统性红斑狼疮患者程序性死亡因子-1和细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4水平

目的分析程序性死亡因子-1(PD-1)和细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)在系统性红斑狼疮(SLE)患者中的水平。方法收集2015年6月至2016年3月在我院初诊为SLE的56例患者作为观察组,根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)标准将所有患者分为两组,稳定期组(28例)和活动期组(28例)。另选取同期在我院接受体检的28名健康志愿者作为对照组。采用流式细胞仪检测空腹静脉血的CD4+T及CD8+T淋巴细胞上的PD-1及CTLA-4表达。结果与对照组比较,稳定期和活动期SLE的CD4+PD-1+T淋巴细胞(4.46%±0.95%vs.2.93%±0.84%,t=6.38,P<0.001;5.92%±0.86%vs.2.93%±0.84%,t=13.16,P<0.001)和CD8+PD-1+T淋巴细胞(6.57%±0.89%vs.3.31%±0.84%,t=14.10,P<0.001;7.37%±0.97%vs.3.31%±0.84%,t=16.74,P<0.001)明显增高;稳定期和活动期SLE的CD4+CTLA-4+T淋巴细胞(1.03%±0.38%vs.1.34%±0.47%,t=2.68,P=0.01;0.73%±0.36%vs.1.34%±0.47%,t=5.38,P<0.001)及CD8+CTLA-4+T淋巴细胞百分比(0.35%±0.32%vs.0.69%±0.31%,t=4.04,P<0.001;0.13%±0.12%vs.0.69%±0.31%,t=8.91,P<0.001)明显降低。与稳定期SLE比,活动期SLE的CD4+PD-1+T淋巴细胞(t=6.03,P<0.001)及CD8+PD-1+T淋巴细胞百分比(t=3.22,P=0.003)明显增高,CD4+CTLA-4+T淋巴细胞(t=3.03,P=0.01)及CD8+CTLA-4+T淋巴细胞百分比(t=3.41,P=0.002)明显降低。CD4+PD-1+的表达与CD4+CTLA-4+(r=-0.85,P<0.001)、CD8+PD-1+的表达与CD8+CTLA-4+呈负相关性(r=-0.78,P<0.001)。结论 PD-1和CTLA-4参与SLE的发生发展过程,可能通过一定途径抑制PD-1或增高CTLA-4的表达有望成为SLE的新治疗靶点。     

原因不明反复自然流产患者外周血TLR2、TLR4表达及CD4+ CD25+ Treg细胞的变化

目的探讨原因不明反复自然流产(URSA)患者外周血TLR2、TLR4的表达及CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞变化的关系。方法用实时荧光定量PCR及流式细胞术检测35例URSA患者、24例妊娠孕妇外周血单个核细胞(PBMC)中TLR2、TLR4mRNA及其蛋白质的表达;流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞的比例,并分析表达TLR2、TLR4蛋白与CD4+CD25+Treg细胞的相关性。结果 URSA组PBMC中TLR2、TLR4 mRNA分别为0.52±0.04、3.26±1.37;表达TLR2、TLR4蛋白的PBMC比例分别为(32.36±4.18)%、(41.29±3.67)%;与妊娠对照组相比,URSA组外周血TLR4 mRNA及表达TLR4蛋白的PBMC比例差异显著(t分别为19.84和21.85,P均<0.05);URSA组CD4+CD25+Treg细胞的比例为(2.75±0.62)%,显著低于妊娠对照组的(5.17±0.65)%,差异有统计学意义(t=48.40,P<0.01);URSA患者表达TLR4蛋白的PBMC与CD4+CD25+Treg细胞的比例降低呈显著相关(r=0.724,P<0.05)。结论 URSA患者外周血中低表达的CD4+CD25+Treg细胞、高表达的TLR4可能参与了URSA的发生。     

原因不明复发性流产病理妊娠患者外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3mRNA的表达

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)病理妊娠患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA的表达。方法采用流式细胞术测外周血CD4+CD25+Treg,半定量、实时荧光定量PCR分析外周血单个核细胞Foxp3转录水平;检测70例原因不明复发性流产史妇女(URSA未孕组)、20例病理妊娠妇女(URSA病理妊娠组)、22例正常妊娠妇女组(正常妊娠组)、20例正常非孕妇女组(对照组)外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA的表达情况。采用酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-10(IL-10)水平。结果 URSA未孕组外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA、IL-10比例明显低于正常非孕妇女组,两组比较,差异均有统计学意义(t分别=3.61、4.18、2.71,P均<0.05);URSA病理妊娠组外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA、IL-10低于正常妊娠妇女组,两组比较,差异均有统计学意义(t分别=3.79、12.56、4.42,P均<0.05)。结论外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA和IL-10表达水平降低可能与URSA病理妊娠患者的发病有关。     

铁过载对小鼠脾脏CD8~+ T淋巴细胞凋亡及分泌功能的影响

目的:探讨铁过载对小鼠脾脏CD8~+T细胞凋亡及分泌功能的影响。方法:将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、铁剂组、去铁组、抗氧化组,每组10只。腹腔注射右旋糖酐铁建立小鼠铁过载模型,观察小鼠铁负荷情况及脾脏CD8~+T淋巴细胞内可变铁池(LIP)水平,活性氧(ROS)水平;用流式细胞术检测脾脏CD8~+T细胞比例以及IFN-γ、TNF-α、Granzyme-B和perforin细胞因子的分泌情况,Annexin/PI标记流式细胞术检测CD8~+T细胞凋亡。免疫磁珠分选小鼠脾细胞获得CD8~+T细胞,RT-PCR检测CD8~+T细胞的IFN-γ、TNF-α、G ranzyme-B、perforin、BCL-2和BAX表达。结果:脾组织铁染色及流式细胞术检测均显示脾发生铁过载。与对照组相比外周血中CD8~+T细胞中ROS明显上升(108.45±9.22 vs 187.48±5.36,P0.01)。与对照组相比,铁过载组小鼠脾脏CD8~+T细胞比例明显降低(7.41±1.23)%vs(14.05±0.79)%,(P0.01)。流式细胞术检测显示,与对照组相比,铁过载组小鼠脾CD8~+T细胞IFN-γ显著降低(11.62±1.99)%vs(3.77±0.84)%,(P0.05),GranzymeB表达显著降低(11.36±1.48)%vs(5.29±1.74)%,(P0.05);小鼠脾CD8~+T细胞中IFN-γ(×10-4)表达(10.94±0.13 vs 2.19±0.78,P0.05)明显下降,Granzyme-B(×10-3)表达(7.70±0.75 vs 4.88±0.08,P0.05)明显下降。与对照组相比,小鼠脾CD8~+T细胞凋亡率明显增高(11.33±0.48)%vs(2.27±0.33)%,(P0.05);小鼠脾CD8~+T细胞中BCL-2表达(×10-3)明显下降(48.29±5.81 vs 1.17±0.21,P0.05),BAX表达(×10-2)明显上升(13.90±2.67 vs 446.93±76.64,P0.05)。上述铁过载对小鼠脾CD8~+T细胞的作用经去铁以及抗氧化治疗后可部分逆转。结论:铁过载可通过上调脾CD8~+T细胞内ROS进而上调BAX并下调BCL-2,增加CD8~+T细胞凋亡率,抑制CD8~+T细胞IFN-γ、Granzyme-B和蛋白的表达。经去铁以及抗氧化治疗后可部分逆转此作用。     

原因不明习惯性流产患者外周血CD3~+CD16~+CD56~+自然杀伤T细胞的表达及意义

目的探讨自然杀伤T细胞(natural killer T cell,NKT)在原因不明习惯性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)发生机制中的作用。方法有URSA史患者50例,其中未孕者20例为URSA非孕组,难免流产者30例为UESA难免流产组,52例正常体检者中正常未生育者20例为正常未育组,正常妊娠孕妇20例为正常妊娠组,有正常生育史12例为正常生育组,采用流式细胞术检测各组外周血中CD3+CD16+CD56+NKT细胞的表达水平。结果外周血CD3+CD16+CD56+NKT细胞百分率正常未生育组[(4.62±1.38)%]与正常生育组[(4.90±3.00)%]比较差异无统计学意义(P0.05);URSA非孕组外周血CD3+CD16+CD56+NKT细胞百分率[(2.42±1.52)%]低于正常生育组(P0.05),URSA难免流产组[(4.18±2.77)%]低于正常妊娠组[(14.40±2.27)%](P0.05);正常妊娠组外周血中NKT细胞百分率是正常生育组的3倍,而URSA难免流产组是URSA非孕组的2倍。结论 URSA患者外周血NKT细胞表达水平降低,NKT细胞可能参与了URSA的发生。     

原发免疫性血小板减少症患者外周血Tr1细胞表达

目的探讨原发免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia, ITP)患者外周血1型调节性T(type 1 regulatory T, Tr1)细胞表达及与血小板计数的关系。方法 ITP患者15例为ITP组,同期体检健康者13例为对照组。2组均行血常规检查,记录血小板计数、淋巴细胞计数;采用流式细胞仪检测2组外周血CD4~+T淋巴细胞、Tr1细胞计数,计算Tr1细胞占淋巴细胞百分比(Tr1/Lym)、CD4~+T淋巴细胞占淋巴细胞百分比(CD4~+T/Lym)、Tr1占CD4~+T淋巴细胞百分比(Tr1/CD4~+T);Pearson法分析ITP组Tr1细胞计数与血小板计数的相关性。结果 ITP组Tr1细胞计数[(0.940 9±0.672 2)×10~6/L]、血小板计数[(25.152 6±16.159 0)×10~9/L]、Tr1/Lym[(0.058 3±0.047 7)%]均较对照组[(1.644 0±0.992 6)×10~6/L、(282.738 5±95.414 4)×10~9/L、(0.130 8±0.122 1)%]降低(P0.05),Tr1/CD4~+T[(0.167 5±0.164 0)%]、CD4~+T/Lym[(39.559 4±9.918 4)%]与对照组[(0.383 5±0.382 4)%、(38.810 5±10.152 8)%]比较差异无统计学意义(P0.05)。Pearson相关分析结果显示,ITP组Tr1细胞计数与血小板计数无线性相关(r=0.530,P=0.063)。结论 ITP患者外周血Tr1细胞计数减少,免疫抑制作用减弱,Tr1细胞计数与血小板计数无明显相关。     

调节性T细胞对脓毒症中T淋巴细胞凋亡的影响

目的:探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)对脓毒症过程中效应性T细胞(Teff)凋亡的影响。方法:应用SPF级健康雄性BALB/C小鼠制备盲肠结扎穿孔术(CLP)脓毒症模型。小鼠随机分为正常对照组、假伤组、CLP组、CLP+PC61(Treg特异性抑制剂)组、CLP+HRPN(PC61的同型对照蛋白IgG)组。免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg。采用流式细胞术观察T淋巴细胞毒性相关抗原(CTLA)-4及转录因子叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)表达以及CD25比例的变化,并检测各组小鼠CD4+CD25-T细胞的凋亡率。ELISA法检测外周血中白细胞介素(IL)-10、IL-2、IL-4和干扰素(IFN)-γ的含量变化。结果:CLP+PC61组术后48h小鼠生存率(90%)较CLP组(60%)明显升高;CLP+PC61组CD4~+CD25~+Treg中Foxp3及CTLA-4表达恢复至正常对照组水平,与CLP组差异有统计学意义(P0.05),并且CLP+PC61组CD25表达水平最低。CLP+PC61组IL-2、IFN-γ水平显著升高,与CLP组差异明显(P0.05),但IL-4、IL-10水平较CLP组出现不同程度地下降(P0.05)。此外,CLP+PC61组效应性T细胞凋亡率明显低于CLP组(P0.05)。结论:拮抗小鼠体内调节性T细胞活性可有效地减轻脓毒症状态下效应性T细胞凋亡,提高小鼠生存率。     

CTLA-4抗体抑制小鼠Lewis肺癌生长的实验研究

目的研究抗CTLA-4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4,CTLA-4)抗体(9H10)对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用及其机制。方法选取健康适龄C57小鼠,皮下接种小鼠Lewis肺癌细胞系,建立皮下移植瘤模型。12只荷瘤小鼠分为2组,分别为空白对照组和实验组,分别腹腔注射给予生理盐水和CTLA-4抗体(9H10),通过肿瘤体积、重量及肿瘤生长抑制率评估9H10的抑瘤作用;免疫组织化学染色检测脾组织T细胞亚型(CD4及CD8阳性T细胞)及肿瘤微血管密度(MVD),通过组间对照分析抗CTLA-4对肿瘤微环境免疫细胞及血管生成的影响。结果 CTLA-4抗体可延缓荷瘤小鼠的肿瘤生长速度,延长其生存时间。免疫组织化学染色检测荷瘤小鼠脾脏中CD4及CD8阳性T细胞。结果显示,实验组与对照组CD4阳性T细胞的数量分别为(49.05±7.31)%和(23.45±8.06)%,与对照组比较,应用抗CTLA-4处理后CD4表达阳性率明显增高,具有统计学意义(P0.01)。实验组和对照组中CD8表达的阳性率分别为17.25±2.86和11.32±0.71,与对照组比较,应用抗CTLA-4处理后CD8表达的阳性率明显增高,具有统计学意义(P0.05)。用抗CD34单克隆抗体标记肿瘤微血管内皮细胞,计数肿瘤间质MVD。实验组和对照组的MVD值分别为37.20±2.84和75.72±14.49,CTLA-4使肿瘤MVD明显减少,具有统计学意义(P0.001)。结论CTLA-4抗体对荷瘤小鼠Lewis肺癌具有抑制作用,荷瘤小鼠脾组织中CD4及CD8表达均增高,肿瘤间质的MVD值显著降低。CTLA-4在提供机体抗肿瘤免疫及抑制肿瘤血管生成中均发挥重要作用。     

食管癌患者外周血CD3+T细胞分泌细胞因子的水平变化及其临床意义

目的探讨食管癌患者外周血CD3~+T细胞分泌细胞因子的水平变化及其临床意义。方法选取2016年1月至2018年1月在西安交通大学第二附属医院接受治疗的28例食管癌患者为研究组,28例健康体检者为健康对照组。比较两组患者的外周血T细胞、外周血CD3~+T细胞分泌因子白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10、IL-12表达水平、外周血CD3~+T细胞分泌因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和干扰素(IFN)-γ表达水平。结果研究组CD3~+/CD4~+、CD4~+/CD8~+表达水平低于对照组,研究组CD3~+/CD8~+、CD3~+表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。研究组IL-2、IL-10、IL-12表达水平低于对照组,研究组IL-4表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。研究组TNF-α表达水平高于对照组,研究组IFN-γ表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论对于食管癌患者,食管癌患者外周血CD3~+T细胞分泌细胞因子CD4~+/CD8~+、CD3~+/CD4~+表达水平显著增高,说明患者的免疫耐受力与免疫逃逸存在较明显的关系。     

不同剂量血必净对内毒素诱导调节性T细胞凋亡的影响

目的 探讨血必净注射液对内毒素诱导CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)凋亡影响的剂量-效应关系.方法 体外培养免疫磁珠法分选大鼠脾脏CD4+CD25+Treg,分为对照组、抗CD3/CD28组、抗CD3/CD28+脂多糖(LPS)组、抗CD3/CD28+血必净组(1、5、25 mg/ml)和抗CD3/CD28+LPS+血必净组(1、5、25 mg/ml).以刺激第3日为观察时间点,采用流式细胞术分析Treg凋亡率、叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-10(IL-10)分泌情况.结果 抗CD3/CD28+血必净各组CD4+CD25+Treg凋亡率高于对照组和抗CD3/CD28组,抗CD3/CD28+LPS+血必净各组凋亡率较对照组和抗CD3/CD28+LPS组明显升高(P<0.05或P<0.01);且凋亡率随血必净刺激剂量增加而升高,其中5 mg/ml血必净组凋亡率接近50%.Foxp3和CTLA-4的表达及IL-10分泌随凋亡率增加而逐渐降低,不同剂量血必净组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 血必净注射液能显著促进内毒素介导Treg的凋亡,并呈一定程度的剂量-效应关系.     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在CIK细胞诱导中的表达及其功能

目的探讨肿瘤患者自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)诱导过程中CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化及其功能。方法应用血细胞分离机采集22例肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC),诱导培养CIK细胞,用流式细胞仪动态监测其CD4~+CD25~+Foxp3~+表型,并分析Tregs细胞负性调控分子转化生长因子-β1(TGF-β1)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)和IL-10的表达水平,采用细胞增殖抑制试验测定Tregs细胞免疫学功能。结果诱导的CIK细胞中存在CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs,其表达量分别为第1天(0.30±0.15)%、第3天(4.48±1.72)%、第5天(3.83±2.12)%、第9天(2.37±1.17)%、第11天(1.65±0.99)%、第14天(1.04±0.76)%。诱导第14天时的Tregs细胞免疫调控负性分子TGF-β1的表达水平为(97.2±2.1)%、CTLA-4为(96.2±3.5)%、IL-10为(4.2±2.3)%。细胞增殖抑制试验中空白对照组、条件对照组以及实验组的增殖细胞表达量分别为(8.55±2.38)%、(42.66±7.32)%、(57.04±7.49)%。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs细胞可作为潜在的CIK细胞质量评价指标。     

肺结核患者外周血中Treg细胞和Th17细胞等4种T细胞亚群与其发病的关系

目的通过检测肺结核患者和健康人群外周血中Treg细胞、Th17细胞以及CD8~+CD28~+T细胞和CD8~+CD28-T细胞的数量,探讨各细胞亚群的数量与肺结核发病的关系,为结核的诊断、治疗及预后提供新思路。方法应用流式细胞技术检测Treg细胞、Th17细胞以及CD8~+CD28~+T细胞和CD8~+CD28-T细胞,分别比较肺结核组、初治组、复治组与健康对照组之间的上述指标是否存在差异。结果 (1)肺结核组、初治组及复治组外周血中Th17细胞的数量分别为(0.74±0.33)%、(0.76±0.34)%、(0.73±0.32)%,CD8~+CD28~+T细胞的数量分别为(39.5±11.4)%、(39.5±10.9)%、(38.7±12.2)%,均分别低于健康对照组(1.17±0.38)%、(62.5±12.0)%,差异有统计学意义(P0.01);(2)肺结核组、初治组及复治组外周血中Treg细胞的数量分别为(10.1±2.7)%、(11.4±3.8)%、(9.4±2.5)%,CD8~+CD28-T的数量分别为(60.5±11.4)%、(60.5±10.9)%、(61.3±12.2)%,均分别高于健康对照组的(7.2±2.2)%、(37.5±12.0)%,差异有统计学意义(P0.01);(3)初治组患者与复治组患者外周血中Th17细胞、Treg细胞、CD8~+CD28~+T细胞、CD8~+CD28-T细胞数量之间的差异无统计学意义(P0.05)。结论肺结核患者外周血中的效应性T细胞亚群Th17细胞和CD8~+CD28~+T细胞下降,具有抑制功能的CD4~+CD25~+CD127low/-Treg细胞和CD8~+CD28-T细胞升高,以上4个T细胞亚群可能与肺结核的发病过程相关。     

基于微小RNA-142-3p与细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4的相互作用探讨细胞因子在原因不明反复性流产的作用

目的 探讨原因不明反复性流产(URSA)过程中微小RNA-142-3p(miR-142-3p)与细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)的相互作用对细胞因子影响的可能机制。方法 选取2016年9月至2017年12月中国科学院大学深圳医院(光明)收治的45例URSA患者纳入流产组,选取同期于中国科学院大学深圳医院(光明)进行检查的40例健康早孕者作为对照组进行回顾性研究。采用流式细胞仪检测两组研究对象外周血中CD4⁺CD25⁺Treg细胞百分比,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Th1型细胞因子与Th2型细胞因子的表达水平。结果 流产组研究对象CD4⁺CD25⁺Treg细胞百分比低于对照组(P <0.05);流产组研究对象外周血中白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-4(IL-4)的表达水平低于对照组(P <0.05),而白细胞介素-2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的表达水平均高于对照组(P<0.05);流产组研究对象的IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4比值...     

可溶性人类白细胞抗原G5在CD8~+和CD4~+T淋巴细胞亚群的分布状况与重度子痫前期的相关性

目的探讨可溶性人类白细胞抗原G5(HLA-G5)在CD8+和CD4+T淋巴细胞亚群的分布状况与妊娠期高血压疾病发生的相关性。方法选取北京军区总医院2010年3月至10月行剖宫产分娩产妇40例,其中重度子痫前期组20例,正常产妇组20例(对照组)。采用流式细胞术检测经双色荧光抗体染色的正常组和对照组产妇胎盘组织及外周血中HLA-G5的表达情况,比较两组之间的差异。结果重度子痫前期组患者胎盘组织中CD8+-HLA-G5+T淋巴细胞的表达率[(59.91±19.6)%]显著低于正常产妇组[(81.91±4.07)%],差异有统计学意义(P<0.05);CD4+-HLA-G5+T淋巴细胞的表达率[(2.64±2.64)%]与正常产妇组[(1.91±1.14)%]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。重度子痫前期组患者外周血中CD8+-HLA-G5+T淋巴细胞的表达率[(59.12±12.11)%]与正常产妇组[(64.94±7.46)%]比较,差异无统计学意义;CD4+-HLA-G5+T淋巴细胞的表达率[(27.39±8.34)%]与正常产妇组[(22.60±6.32)%]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结...