人类禽流感病毒实验室检测的几个问题

20 0 4年初 ,某些亚洲国家陆续报告了人禽流感病毒感染而发病的病例。核病病死率高 ,传播途径欠明确 ,临床实验室检测缺乏经验 ,应引起我们重视。感染人类的禽流感病毒属甲型流感病毒。 1 997年 5月从我国香港一例儿童流感患者身上分离到病毒 ,经美国疾病预防和控制中心 (CDC)、世界卫生组织、荷兰国家流感中心鉴定为禽流感病毒H5N1 型。之后相继又有H9N2 、H7N7型及H5N1 再次感染人类的报道。在 3个亚型中H5N1 型毒性最强。 2 0 0 4年在亚洲部分地区发生的禽流感暴发及人类被染的病例报告均属H5N1 型。轻症人禽流感患者发病与一般流…     

四重荧光定量RT PCR检测人感染新型甲型禽流感H7N9病毒

目的建立检测人感染新型甲型禽流感H7N9病毒的四重荧光定量RT-PCR方法。方法以人细胞RNA酶P(RNase P)基因为内参,用Primer Express3.0软件设计PCR特异性引物和探针。通过不同来源的呼吸道病毒进行特异性分析,构建质粒标准品用于分析该方法的灵敏度和重复性,并对1 896例临床标本进行回顾性检测。结果该方法检测甲型流感病毒(Flu A)、H7、N9与RNase P灵敏度均达102copies/m L,特异性达100%,每对引物和探针只检测出相应的病毒,无交叉反应,检测变异系数(CV)均低于1.55%。用该法检测1 896例临床标本,结果 Flu A 235例,H7N9 127例,与其他试剂报告结果完全一致。结论建立的四重荧光定量RT-PCR法可快速检测H7N9病毒,灵敏度与特异性好,可用于H7N9病毒感染患者的早期诊断。     

1例人感染H7N9高致病性禽流感患者的护理

H7 N9亚型禽流感病毒是甲型流感中的一种。2013年3月底,在上海和安徽两地率先发现3人感染H7 N9禽流感病例。H7 N9型禽流感是全球首次发现的新亚型流感病毒,故在临床上护理人感染H7 N9型高致病性禽流感患者仍缺乏一定的经验。2013年4月本院收治了1例人感染H7 N9高致病性禽流感患者,现将护理体会报道如下。     

景德镇市3例人感染H7N9禽流感外环境监测数据分析

目的为明确人感染H7N9禽流感病例的感染途径,对人感染H7N9禽流感病例可能接触活禽的环境开展检测,为人感染H7N9禽流感病例防控提供科学依据。方法根据3例人感染H7N9禽流感病人的不同感染途径,采集相关外环境样品送实验室进行A通用、H5、H7与H9三种禽流感亚型检测。结果共采集4个家庭散养标本8例,检出甲型流感阳性标本6例,其中H7亚型2例,H9亚型1例,H7+H9亚型混合型2例,还有一份未分型;7个菜市场销售禽类摊位采集29例,检出甲型流感阳性标本27例,其中H5亚型2例,H7亚型2例,H5+H7亚型混合型5例,H7+H9亚型混合型7例,H5+H7+H9亚型混合型11例。结论菜市场销售的禽类和家庭散养的禽类大部分都带有H7亚型流感病毒,人感染H7N9禽流感存在很大的风险,应及时采取休市或关闭活禽市场和宰杀家庭散养禽类以降低可能的感染风险。     

一例H7N9禽流感感染病例病毒载量、耐药性与抗体水平变化分析

目的通过对北京市1例人感染H7N9禽流感病例连续检测H7N9病毒及血清抗体,掌握H7N9病毒载量、抗体、耐药性在病程发展中的变化。方法以24 h为间隔,共收集病例的下呼吸道盥洗液样本25份,血清样本23份。采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)法监测病程发展中下呼吸道盥洗液样本中的H7N9病毒载量变化、神经氨酸酶(NA)基因上R294K耐药位点变化;采用血凝抑制实验监测病例病程发展中血清样本中H7N9抗体水平变化。结果随着病程进展和临床抗病毒治疗的进行,病例H7N9禽流感病毒载量逐渐降低,抗体水平逐渐升高。病程后期部分样本中发现少量NA基因R294K耐药突变。结论 real-time RT-PCR和血凝抑制试验可用于人感染H7N9禽流感患者的病毒载量、耐药性变化和抗体水平变化监测,为临床救治提供依据。     

尚无H7N9人际持续传播证据

<正>世界卫生组织网站日前发布人感染甲型H7N9禽流感病毒最新简报称,到目前为止,尚没有出现H7N9禽流感病毒人际间持续传播的证据。国家卫生计生委日前持续向世界卫生组织通报今年以来新增的人感染甲型H7N9禽流感病毒实验室确诊病例,这些病例的感染源调查仍在进行。同时,我国继续加强监测和疫情分析,强化病例管理和治疗,与公众进行风险沟通并发布信息,加强国际合作与交流,开展相关科学研究。     

CT影像诊断人感染H7N9禽流感和甲型H1N1流感重症肺炎的对比

目的对比人感染H7N9禽流感和甲型H1N1流感重症肺炎的CT影像特点。方法选取2013年5月至2015年3月收治的甲型H1N1流感合并重症肺炎患者20例。同时选取2013年11月至2015年3月确诊为人感染H7N9禽流感合并重症肺炎的15例患者。两组均行全面检查,对比两组检查结果。结果 H7N9患者ARDS发生率明显高于H1N1患者;H7N9患者可见的小叶间隔变厚、网格状密度影、胸腔积液表现明显高于H1N1患者;H7N9患者病死率明显高于对照组(P0.05)。结论人感染H7N9禽流感合并重症肺炎比甲型H1N1流感合并重症肺炎病情进展更快,病死率更高,CT影像诊断有助于医生评估患者病情,及早发现并发症。     

四重荧光定量RT-PCR检测人感染新型甲型禽流感H7N9病毒

将H7N9禽流感病毒HA和NA基因设为内部参考,并分别设计特异性探针和引物,分析不同来源呼吸道病毒的特异性,并对四重荧光定量RT-PCR检测方法的重复性和灵敏度进行评定。结果甲型H7N9禽流感病毒标本和RNase P检测灵敏度均为102copies/m L,特异性为99.7%,变异系数均低于2.20%,阳性符合率和阴性符合率均为100%。利用四重荧光定量RT-PCR检测H7N9病毒具有较高的灵敏度和特异性,且检测快速准确,对H7N9病毒感染者早期诊断有重要意义。     

人感染甲型H7N9禽流感病毒——最新简报（一）

2014年2月10日．中国国家卫生和计划生育委员会向世卫组织通报，新增15起人感染甲型H7N9禽流感病毒实验室确诊病例，包括一起死亡病例。     

苏州市人感染H7N9禽流感聚集性疫情调查分析

目的调查分析苏州市两起家庭聚集性人感染H7N9禽流感疫情流行病学及病原学特征,为该地区人感染H7N9病毒疫情防控提供科学依据。方法采集聚集性疫情中H7N9病例及其密切接触者咽拭子标本,同时收集流行病学及临床资料,应用实时荧光-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测流感病毒及H7N9亚型的特异性基因,对H7N9阳性标本进行病毒分离并测序,比对分析H7N9病毒血凝素基因变异状况。结果第一起聚集性疫情中2例H7N9病例被成功救治。而第二起聚集性疫情中的1例H7N9死亡,另1例存活。两起疫情中的其他密切接触者无发病报告。H7N9病毒的受体结合位点没有发生变异。引起这两起人感染H7N9禽流感聚集性疫情的病毒血凝素切割位点的氨基酸序列为PEIPKGR↓GLF。耐药位点E120G、R153K、H276Y及R294K未发生改变。结论 H7N9病毒在有血缘关系的近亲属之间可能更容易传播,对于H7N9患者应加强院感防控,防止密切接触者感染。目前,H7N9病毒仅具有有限的人传人能力,尚不能在人际间持续传播,第二起聚集性疫情中的H7N9病毒血凝素基因序列高度同源且仍对奥司他韦等神经氨酸酶抑制剂敏感。     

人感染H7N9禽流感流行期间洁净手术室的预防控制管理对策

2013年3月以来,上海市、安徽省、江苏省先后发生不明原因的重症肺炎病例,此次报道为人感染H7N9禽流感病毒,该病毒为新型重配病毒,其内部基因来自于H9N2禽流感病毒.禽流感病毒属正黏病毒科甲型流感病毒属,目前可分为16个H亚型(H1～H16)和9个N亚型(N1～N9),禽甲型流感病毒除感染禽外,还可感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物.可感染人的禽流感病毒亚型为H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3,患者一般表现为流感样症状,如发热、咳嗽、少痰,可伴有头痛、肌肉酸痛和全身不适.重症患者病情发展迅速,表现为重症肺炎,体温大多持续在39℃以上,出现呼吸困难,可伴有咳血痰;可快速进展出现急性呼吸窘迫综合征、纵隔气肿、脓毒症、休克、意识障碍及急性肾损伤等.     

浙江省丽水市人感染H7N9禽流感病毒监测结果分析

目的了解H7N9禽流感病毒在人、禽间的分布情况,指导人感染H7N9禽流感防制工作。方法对2013年4月至2014年2月浙江省丽水市医疗机构发热伴呼吸道症状病例及外环境标本采用实时荧光定量聚合酶链反应方法检测H7N9亚型禽流感病毒核酸,对监测结果进行分析。结果轻症流感样病例和严重呼吸道感染病例分别检测768份和605份,H7N9禽流感病毒全部阴性,不明原因肺炎病例检测92份,阳性1份,阳性率1.09%;家禽粪便标本、笼具表面涂抹物、鸡蛋外壳涂抹物及不明原因死亡家野禽咽拭子和肛拭子共检测1317份,H7N9禽流感病毒阳性22份,阳性率1.67%,阳性标本分布在4个县(区)的8个活禽交易市场。结论首次在丽水市检测到人感染H7N9禽流感病毒,并在多个县(区)的活禽交易市场外环境检测到H7N9禽流感病毒,提示H7N9禽流感病毒已在丽水市禽间传播,存在人感染H7N9禽流感病毒的风险。     

甲型禽流感H7N9病毒在中国暴发流行

2013年3月底,我们获悉在中国有3例患有危及生命的甲型（H7Ng）禽流感患者的出现,而此前H7N9禽流感从未在人类中发现。第1例在2013年2月底患病。截止4月21日,共102例被感染;绝大部分病情危重,已有20例死亡。以上数据与日俱增。相比之下,甲型禽流感H5N1主要感染有家禽暴露史的儿童,而H7N9禽流感病例多发生在年龄较大的患者（患者平均年龄64岁）。H7N9禽流感病例已在中国多个省份出现,多在华东地区。其中一些患者有明确的禽类暴露史,但很多病例并无禽类暴露史。还没有明确人传人的证据。在人患禽流感地区,H7N9病毒已从菜场内鸡、鸭和鸽子中分离到。     

双重荧光定量RT-PCR快速检测甲型和甲型H1N1流感病毒

目的建立双重荧光RT-PCR快速检测方法,用于甲型和甲型H1N1流感病毒的同时检测和鉴别诊断。方法针对甲型流感病毒M基因和甲型H1N1流感病毒NA基因的保守区序列分别设计特异性引物和Taqman探针,建立优化双重荧光RT-PCR反应体系,评价所建双重RT-PCR反应体系的特异性、敏感性和稳定性,并应用于疑似流感或甲型H1N1流感含漱液标本检测。结果该方法对甲型、甲型H1N1流感病毒检测具有高度特异性,检出限分别为0.01 TCID50和0.1 TCID50,具有较好的稳定性。可从疑似流感或甲型H1N1流感患者含漱液中直接检测到流感病毒核酸。结论本研究建立的双重荧光定量RT-PCR可以同时准确检测甲型和甲型H1N1流感病毒,灵敏度高,稳定性好,是一种快速检测流感病毒的新方法。     

1例应用体外膜肺氧合救治人感染H7N9禽流感重症肺炎患者的护理

正H7N9型禽流感是禽流感的一种亚型。人感染H7N9禽流感是由H7N9亚型禽流感病毒引起的急性呼吸道传染病。经呼吸道传播,也可通过密切接触感染的禽类分泌物或排泄物等被感染,直接接触病毒也可被感染。人感染H7N9潜伏期一般为7 d左右,临床表现一般为流感样症状,如发热、咳嗽、咳痰、伴有头痛、肌肉酸痛等。重症患者发展迅速,表现为     

甲型H1N1流感病毒临床实验室诊断策略

目的 探讨用于甲型H1N1流感患者临床实验室诊断的策略.方法 采用Dot-ELISA法检测流感患者中的甲型流感病毒的抗原,初步明确为甲型流感或排除非甲型流感;采用real-time RT-PCR法检测甲型流感病毒抗原阳性患者中的甲型H1N1流感病毒特异性核酸,进一步确定甲型H1N1流感病毒.结果 对44 448例在西安地区就诊的发热伴有流感样症状者的鼻咽腔取分泌物进行甲型流感病毒抗原筛查,其阳性筛检率为28.25%;对甲型流感病毒抗原筛查阳性的17 714例患者进行甲型H1N1流感病毒核酸检测,其阳性检出率为41.92%.结论 首先用甲型流感病毒抗原筛查,排除非甲型流感病毒;进而在甲型流感病毒的范围内进行甲型H1N1流感病毒的检测,即加快了甲型流感病毒的排查效率,又减轻了甲型H1N1流感病毒核酸检测的压力;进而又减轻了大部分非甲型H1N1流感患者核酸检测的经济负担.该文认为该检测策略为甲型H1N1流感病毒的临床实验室诊断提供了参考,可为甲型H1N1流感病毒感染的控制、诊断,以及合理用药和针对性治疗提供依据.     

同时首诊隐性感染甲型H1N1流感4例体会

目的:探讨隐性感染甲型H1N1流感病例的诊断方法.方法:回顾性分析4例外地患者在我科同时确诊为甲型H1N1流感的临床资料.结果:通过分析病例的流行病史、症状、体征及院外治疗效果,对疑似甲型H1N1流感患者经RT-PCR检测,可明确诊断其是否为甲型H1N1流感病例.结论:随着甲型H1N1流感的扩散,有"感冒"症状的隐性感染者与普通流感鉴别较难;通过慎密的流行病学调查、临床分析、RT-PCR检测,能明确诊断甲型H1N1流感病例.     

禽流感A(H5N1)和A(H7N9)的最新报道

正目前,甲型流感H5N1和H7N9是2种导致人类疾病的主要禽流感病毒。H5N1对家禽具有高致病性,可导致感染的家禽死亡,感染症状明显。H7N9并不使禽类致病,不易发现。中东、非洲和亚洲的一些国家中发现了人类感染H5N1的病例。目前,H5N1在亚洲、中东、欧洲和美国等许多国家的家禽和野生鸟类中分离     

2008-2010年广西边境地区流感和人禽流感监测结果分析

目的 对广西壮族自治区(广西)8个边境市(县)所属的综合性医院不明原因肺炎、病原待查重症肺炎和流感样病例开展病原学监测,了解广西边境地区流感病毒优势株及其变化,探索广西边境地区流感流行规律,为科学防控边境地区流感和人禽流感提供依据。 方法 在边境地区医院设置监测点,开展相关病例监测,提取监测病例咽拭子标本病毒核酸,反转录合成cDNA,多重 PCR扩增目的基因,电泳检测扩增产物;采用细胞培养法分离鉴定流感病毒;采集从事饲养、销售和屠宰家禽的职业人群的静脉血34份,通过血凝抑制实验进行禽流感H5亚型抗体检测。 结果 2008年广西边境地区分离到6株流感病毒,其中B型5株,H1N1亚型1株;2009年分离到33株流感病毒,其中B型17株,H3N2亚型8株,H1N1亚型2株,甲型H1N1 6株;2010年分离到流感毒株130株,其中B型55株,H3N2亚型49株,H1N1亚型1株,甲型H1N1 25株;2008-2010年检测不明原因肺炎、病原待查的重症肺炎标本9份,人禽流感核酸和多重呼吸道病毒核酸检测均为阴性;采集从事饲养、销售和屠宰家禽的职业人群血样本34份,未检出 H5N1亚型禽流感病毒抗体阳性的标本。 结论 2008年和2009年广西边境地区的流感优势株为B型流感毒株,2010年为B型和H3N2亚型流感毒株;从有限的不明原因肺炎和病原待排查的重症肺炎病例标本中未检出禽流感病毒;禽流感H5亚型在职业暴露人群中未发现隐性感染。进一步加强对广西边境地区的流感和人禽流感病原学监测工作,对广西的流感和人禽流感的防控工作有重要意义。     

广东省江门市H7N9禽流感外环境监测及人感染H7N9禽流感流行趋势研究

目的 了解广东省江门市活禽市场外环境中H7N9病毒污染情况及人感染H7N9禽流感流行情况,指导H7N9禽流感防控工作。方法 于2014年1月26日至2015年2月23日,在江门市选取5个禽类批发市场和33个居民肉菜市场,以擦拭涂抹法采集活禽档口外环境粪便、地面以及各种用具表面拭子,采用荧光定量RT-PCR方法检测甲型流感病毒核酸,并对人感染H7N9禽流感疫情进行流行病学分析。结果 监测14个月中,采集样品989份,检出H7亚型阳性74份,阳性率为7.48%。鸡相关标本的阳性率最高（8.88%）,鸡与其他禽种相关标本的阳性率差异有统计学意义（2=10.02,P0.05）。砧板与刀具涂抹物阳性率高于笼框内面与笼子地面涂抹物等,差异有统计学意义（2=74.39,P0.01）。冬春季（12月至次年5月）阳性率稍高,为8.44%（70/829）,夏秋季（6-11月）阳性率稍低,为2.50%（4/160）,二者差异有统计学意义（2=6.01,P0.05）。期间报告了9例人感染H7N9禽流感病例,1-2月发病8例。结论 江门市冬春季活禽市场外环境普遍存在H7亚型禽流感病毒污染,人感染H7N9禽流感疫情流行具有明显的季节性,冬春季为发病高峰期。