猪红细胞血型抗原修饰异种输血的研究进展

异种器官移植所取得的突破性进展为异种输血的研究带来了曙光。人与猪的红细胞的血清学和生物化学特性有许多相似之处，因此猪就成为实现异种输血最具有可能性的红细胞供体，猪红细胞上存在异种抗原，包括αGal抗原和non-αGal抗原。αGal抗原和人血清中天然存在的抗αGal抗体结合后引起的免疫排斥反应在抗体介导的凝集反应中起主要作用。但是non-αGal抗原和人血清中天然存在的抗non-αGal抗体结合引起的免疫排斥反应作用也不能低估，经特定修饰，改造以及的猪红细胞，是来源丰富的异种血源。     

异种输血--猕猴受输猪红细胞的初步研究

本研究的目的是改造猪红细胞（pRBC）表面抗原，使之与灵长类动物相容，以探讨异种输血的可能性。结合使用α半乳糖苷酶（AGL）酶解和甲氧基聚乙二醇（mPEG）修饰改造猪红细胞表面异种抗原，并输注给猕猴，观察pRBC在猕猴体内活存时间及安全性；使用免疫抑制剂（蛇毒因子CVF和地塞米松）延长pRBC在猕猴体内的存活时间；建立失血性贫血猕猴模型，观察输注pRBC治疗失血性贫血猕猴的可能性。结果表明：AGL酶解能够去除猪红细胞表面主要异种抗原（α—Gal抗原），减弱其与猕猴血清的凝集反应，酶解技术与mPEG修饰技术结合可以使猪红细胞与猕猴血清更为相容。异种输血试验表明，双修饰的pRBC在猕猴体内存活时间为12小时，使用免疫抑制剂后，可延长至40小时；pRBC在猕猴体内8小时的存活率为38％，在输注pRBC的8小时内，失血猕猴的血红蛋白和红细胞压积可维持在失血前的正常水平。结论：改造后的pRBC可安全地输注给猕猴，改善失血猕猴的贫血症状．提示用猪红细胞进行异种输血是可能的。     

去除αGal抗原的猪红细胞输入猕猴体内的初步研究

目的探讨经α-半乳糖苷酶(AGL)去除了αGal抗原的猪红细胞输注给灵长类动物的可能性。方法使用AGL体外去除猪红细胞表面的αGal抗原,应用流式细胞术和配血试验检测修饰效果:用FITC标记此红细胞,将AGL酶解的pRBCs与未酶解的pRBCs分别输注给使用免疫抑制剂(眼镜蛇毒因子及地塞米松)预注射的猕猴;流式细胞仪检测计算输注红细胞在猕猴体内的存活率,同时检测受试猕猴的血生化及尿液指标。结果AGL有效清除了猪红细胞表面的αGal抗原,使其与猕猴血清的凝集反应减弱。未酶解的pRBCs在猕猴体内存活<0.5h。AGL酶解后的猪红细胞输注后2h在猕猴体内有29%存活,8h猕猴体内仍可检测到荧光标记的pRBCs。结论AGL能有效清除猪细胞表面的αGal抗原,减弱HAR,延长异种移植物的存活时间。     

红细胞血型抗原和抗体与疾病的关联

１　血型抗原红细胞血型抗原是多态的，遗传的，由位于ＲＢＣ膜外层的蛋白质，糖蛋白或糖脂类结构所组成。红细胞抗原的多态性用于监控输入ＲＢＣ在体内的存活力，以及在遗传学，法医学及人类学的研究［１］。经国际输血协会（ＩＳＢＴ）批准，红细胞表面抗原命名委员会将红细胞抗原分为４类：即系统，集合，低频率抗原系列及高频率抗原系列。血型系统是由１个或几个十分紧密联锁的同源基因控制的抗原组成。集合由血清学，生物化学或遗传学相关的抗原组成，这种抗原并不符合系统的标准。低频率和高频率系列，分别包括少见的和常见的抗原。这…     

新型α-半乳糖苷酶清除动物红细胞表面αGal抗原的研究

异种抗原αGal是引起异种移植免疫排斥反应的重要原因之一。脆弱类杆菌来源的α-半乳糖苷酶是一种新型的糖苷酶,能够切除支链多糖和直链多糖末端的αGal残基。本研究探讨新型α半乳糖苷酶清除红细胞表面αGal抗原的作用。利用新型的基因重组α-半乳糖苷酶酶解牛、猪、狗、兔红细胞上的异种抗原,并用流式细胞术分析细胞表面的αGal抗原。结果表明,动物红细胞表面的异种抗原αGal被完全或部分清除。结论:新型α-半乳糖苷酶可以用来清除异种红细胞上的αGal抗原,对降低异种移植引起的超急性排斥反应具有潜在意义。     

mPEG-SPA对红细胞A、B抗原的遮蔽及稳定性初步研究

目的探讨mPEG-SPA修饰对A、B、AB三种血型红细胞上A、B抗原的遮蔽效果及稳定性。方法采用合适浓度的mPEG-SPA修饰不同血型红细胞,并分别保存在O型血浆中以观察红细胞凝集情况、保存在原血浆和MAP液中以测定游离血红蛋白。结果连续保存45d,显微镜下观察mPEG-SPA修饰的红细胞在O型血浆中未见凝集,在原血浆中保存21d时血浆游离血红蛋白≤0.29g/L;在MAP液中保存35d时游离血红蛋白≤1g/L。结论在保存期内,经mPEG-SPA化学修饰的A、B、AB三种血型红细胞的抗原遮蔽效果稳定、游离血红蛋白指标均符合临床输血要求。     

红细胞血型抗原功能的研究进展

迄今为止已命名的红细胞血型系统有256个[1,2],生化和分子遗传学的研究结果显示大部分的血型抗原都是红细胞膜上完整的蛋白和糖蛋白,并呈现广泛的多样性,其中包括有些血型抗原仅是作为含多个膜结构成分的复合体内的一部分。另外,有些血型抗原不仅存在于红细胞上,还存在于一些非红细胞组织中。红细胞血型抗原结构的多样性,决定了其功能的多样性,从目前对红细胞血型抗原功能的认识水平来看,可以将其功能分为5个方面,①充当红细胞膜上的分子的转运体和运输通道;②作为配体、病毒、细菌和寄生虫等病原体的受体;③黏附分子;④酶;⑤红细胞的结构蛋…     

红细胞抗原的功能研究

目前已发现２５０多种血型表位,且多数为整合于红细胞上的蛋白和糖蛋白。其中有些血型表位的功能已经明确：Ｄｉｅｇｏ（区带３）是红细胞阴离子交换通道：Ｋｉｄｄ是尿素转运通道：Ｃｏｌｔｏｎ（水通道１）是水通道;Ｃｒｏｍｅｒ（ＤＡＦ）和Ｋｎｏｐｓ（ＣＲＩ）是补体调节因子;Ｄｉｅｇｏ（区带３）和Ｇｅｒｂｉｃｈ（血型糖蛋白Ｃ／Ｄ）连接红细胞膜和膜骨架。Ｄｕｆｆｙ糖蛋白是化学因子受体,用来清除外周血中的炎性介质,     

mPEG修饰红细胞Rh抗原稳定性的研究

本研究旨在探究mPEG修饰的红细胞Rh抗原的稳定性。利用红细胞膜蛋白SDS—PAGE电泳技术分析mPEG修饰后红细胞膜蛋白与mPEG结合情况，用红细胞血影凝集实验及40cCPD保养液保存的修饰红细胞与匹配血液体外混血实验，观察mPEG修饰后红细胞Rh抗原被遮蔽的稳定性。结果发现：不同保存时间的mPEG修饰的红细胞在模拟输血（即混血前后）的血型保持不变，同时mPEG修饰的红细胞在保存过程中游离血红蛋白水平正常，并且混血后经37℃孵育的mPEG修饰的红细胞游离血红蛋白水平低于不混合的修饰的红细胞。比较分析PEG特异的碘染和考马斯亮蓝染的显色图谱发现，特殊的碘染显示出mPEG与红细胞膜蛋白结合的条带，mPEG—SPA与红细胞膜蛋白结合后导致蛋白分子迁移速度发生改变。mPEG修饰的红细胞血影凝集实验证实，修饰红细胞在质膜裂损后mPEG仍有效地遮蔽抗原。结论：mPEG—SPA不论在红细胞膜蛋白被单独提取后，还是膜破损后以及存活状态下，均能与红细胞膜蛋白稳固结合。     

Blood group antigens defined by the amino acid sequences of red cell surface proteins

SUMMARY. The antigens of 18 blood group systems are expressed on proteins that are intrinsic to the red cell. The proteins which carry the antigens of these systems have been identified and primary sequence information is available for all but two (SC, DO). Several different functional groups are evident. Antigens of the DI, CO, RH, XK and JK systems are located on proteins which have the structure of membrane transport proteins. The FY antigens mark a cytokine receptor. The IN, LW, XG antigens are associated with molecules which have adhesion functions and the LU glycoprotein also has a structure which suggests a role in adhesion. YT and KEL antigens are located on cell surface enzymes and the CR and KN antigens on molecules involved in complement regulation. Finally, the MN and GE antigens are located on sialic acid-rich glycoproteins (glycophorins A, B and C/D respectively), a group of molecules which do not, as yet, have a clearly defined function. The molecular basis of antigens in several blood group systems have been defined and shown to depend upon the amino acid sequence.     

Comparison of two double red cell collection settings on Fenwal Alyx apheresis instrument

The Fenwal Alyx for collecting double red cell products has two red cell volume collection settings: fixed collection target of 360 ml (180 ml/unit) and a variable target of collecting either 400 or 360 ml (200 or 180 ml/unit), where the machine aims for the higher possible collection target. We retrospectively compared the two collection targets for the RBC content, donor time, technician time, and collection efficiency. We compared 18 fixed (F) target collections to 40 variable (V) target collections. All collections were performed as per the manufacturer's recommendations on Alyx and donors met the manufacturer's eligibility criteria. There was no significant difference in average whole blood processed (F: 963 ml, V: 1,000 ml); donor time (F: 43 min, V: 45 min) or technician time (F: 64 min, V: 64 min). There was a significant difference in unit volume (F: 283 ml, V: 300 ml); grams Hb/unit (F: 53 g, V: 57 g); ml RBC/unit (F: 157 ml, V: 167 ml); and RBC recovery (F: 87.8%, V: 88.9%). The fixed target had a significantly lower frequency of products with ≥51 g Hb (80.6%) than variable target (96.3%) and ≥153 ml RBC/unit (F: 55.6%, V: 96.3%). In conclusion, the variable target efficiently allows collections of products with higher red cell volume and hemoglobin without a significant increase in collection and processing time.     

Molecular basis of glycophorin C variants and their associated blood group antigens

SUMMARY. The normal and variant forms of GPC and GPD molecules carry antigens of the Gerbich blood group system. This blood group system comprises three high-incidence antigens (Ge2, Ge3 and Ge4) and four low-incidence antigens (Wb, Ls^a, Dh^a and An^a). Erythrocytes of the Ge and Yus phenotypes lack normal GPC and GPD molecules but express variant molecules (denoted GPC.Ge, GPC.Yus, respectively) that functionally substitute for normal GPC and GPD in the membrane. Leach phenotype cells lack GPC and GPD molecules and are elliptocytic in shape with a membrane that is less deformable than that of normal cells. The Ls^a antigen is expressed on higher molecular-weight variants of GPC (GPC.Ls^a) and GPD (GPD.L3^a). Wb, Dh^a and An^a antigens arise from point mutations in the GYPC gene and are expressed on GPC.Wb, GPC.Dh^a and GPD.An^a, respectively. The structure of each of the variant GPC and GPD molecules and the location of the Gerbich blood group system antigens is discussed. The GYPC gene, located on chromosome 2q¹⁴-q²¹, is 13.5 kb long and comprises four exons. Exons 1,2 and most of exon 3 encode the N -terminal extracellular domain while the remainder of exon 3 and exon 4 encode transmembrane and cytoplasmic domains of GPC. Exons 2 and 3 are highly homologous, with less than 5% nucleotide divergence. The molecular basis of generation of variation GPC and GPD molecules, and the structure of the GYPC gene from different Leach phenotype individuals, is discussed.     

甘油浓度对红细胞冻干保存效果的影响

目的探讨甘油浓度浓度对红细胞冷冻干燥保存的回收率、溶血率及残余水含量的关系。方法以甘油浓度分别为3%、6%、9%、12%、15%、18%、21%(w/v)的冻干保护剂处理红细胞,冻干,用显微镜观察细胞形态、血细胞计数仪检测细胞数、分光光度计测定游离血红蛋白量,分析细胞复水后红细胞计数、溶血情况。用热重法测定冻干红细胞水分含量,分析不同保护剂组红细胞的水分含量变化情况。结果复水后红细胞形态正常,甘油浓度为9%、12%、15%时,红细胞回收率分别为(77.08±9.41)%、(84.37±3.42)%、(80.21±9.20)%,红细胞溶血率分别为(19.82±2.23)%、(17.66±1.17)%、(15.86±2.23)%,相应的冻干红细胞残余水分含量为(19.43±1.36)%、(22.89±1.57)%、(26.17±1.09)%。结论保护剂中甘油浓度影响红细胞冻干保存的效果;甘油浓度为(9-15)%时对冻干保存的红细胞损伤较小;冻干红细胞残余水分含量随保护剂中甘油浓度的增高而增高。     

XE-5000血细胞分析仪计数有核红细胞的性能评价

目的探讨SysmexXE．5000血细胞分析仪自动计数外周血有核红细胞（NRBC）的方法学特点,评价其临床应用价值。方法评析其重复性、线性范围、携带污染率,并对697份静脉血标本作常规测定,评价其对NRBC的报警、定量测定,并与手工涂片法进行对照。结果XE．5000血液分析仪测定NRBC的重复性较好,线性范围较广,携带污染率较小。以显微镜复检为金标准,XE．5000与显微镜计数法计数外周血中NRBC数量有极好的相关性（r=0．997）,其有核红细胞报警的灵敏度为100％,特异度为85．1％。结论SysmexXE．5000血细胞分析仪可灵敏、准确、精密地自动计数外周血中NRBC,适合临床检测NRBC。