转化生长因子β_1对纤维母细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原及胶原酶mRNA表达的影响

目的纤维母细胞是重要的胶原合成细胞，观察转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）对纤维母细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原及胶原酶ｍＲＮＡ表达的影响，以了解ＴＧＦ－β１在肝纤维化中的作用机制。方法首先对含有Ⅰ、Ⅲ型前胶原及胶原酶ｃＤＮＡ片段的质粒进行扩增、提纯及酶切，然后用自由引物延伸法进行地戈辛标记，并对探针进行检测；其次对纤维母细胞进行培养，加用ＴＧＦ－β１孵育后收集细胞并提取细胞总ＲＮＡ，最后将ＲＮＡ点样于尼龙膜上，并与上述探针进行斑点杂交。结果杂交结果显示ＴＧＦ－β能明显促进纤维母细胞Ⅰ型前胶原ｍＲＮＡ的表达（Ｐ＜０．０５），也能促进其Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达（Ｐ＝０．０９）；而对其胶原酶ｍＲＮＡ的表达则起抑制作用（Ｐ＜０．０５）。结论ＴＧＦ－β可以从细胞及分子水平发挥其抗纤维化作用。     

甘草酸减少鼠肝纤维化Ito细胞IⅢ型前胶原mRNA表达和胶原沉积

目的:观察甘草酸对鼠肝纤维化时Ito。细胞增殖和IⅢ型前胶原mRNA表达和肝脏胶原沉积的影响。方法:以CCl_4复制肝纤维化模型,动物分组为止常对照组,模型对照组及甘草酸治疗组三个大组,各组又包括早(2周),中(6周)。晚(9周)期组,分别于用药后第2、6、9周处死动物,分离提取肝Ito细胞,培养两周后提取总RNA,以DIG High-Prlmer去标记IⅢ型前胶析和间质胶原酶cDNA探针,Northern杂交分析IⅢ型前胶原和间质胶原酶mRNA表达.鼠肝IⅢ型胶原沉积用Dot blot测定,用~3H-TDR~3H-脯氨酸观察甘草酸对培养的Ito细胞增殖和胶原合成的影响 结果,甘草酸对Ito细胞H-TDR和H-脯氨酸的掺入在4h、24h、48h与空白对照比呈明显抑制作用(P<0.05),其抑制率分别为15％、21％、31％,在甘草酸浓度≤0.125μg/ml时,对Ito细胞~3H-TDR掺入抑制不明显,而≥0.25μg/ml时呈现明显抑制作用(P<0.05),对H脯氨酸掺入,在甘草酸浓度≥0.125μg/ml时,则出现明显抑制作用(P<0.05),且随浓度增加而抑制作用加强。在鼠肝纤维化早、中、晚各期,模型对照组Ito细胞IⅢ型前胶原mRNA表达均高于正常对照组(P<0.05),甘草酸组各期Ito细胞IⅢ型前胶原mRNA表达与模型对照组比均显著降低(P<0.05).Ito细胞间质胶原酶mRNA表达.在早、中期模型对照组均高于正常对照组(P<0.05     

激动素对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及转化生长因子β1表达的影响

激动素（kinetin）本源于植物，目前广泛应用于植物细胞的组织培养。近年来的研究发现激动素能抑制细胞的分化过程，对人的成纤维细胞具有选择性杀伤作用。我们在大鼠肝纤维化模型上，结合Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及转化生长因子β1（TGFβ1）免疫组织化学探讨了激动素的抗肝纤维化作用。     

肝纤维化大鼠转化生长因子β1及I,Ⅲ型胶原表达的动态研究

目的 探讨肝纤维化形成不同阶段ＴＧＦβ１和Ｉ,Ⅲ型胶原表达的变化规律及相互关系,方法 建立肝纤维化动物模型,分别用免疫组化法和斑点杂交法检测肝纤维化不同阶段ＴＧＦβ,Ｉ,Ⅲ型胶原蛋白及其ｍＲＮＡ表达。结果 随着肝纤维化程度的加重,ＴＧＦβ１,Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白及其ｍＲＮＡ表达量都逐渐增高,各实验组与对照组相比,其差异均有显著性（Ｐ〈０．０５）。结论 肝纤维化时,肝内ＴＧＦβ１和Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白的表达     

中药861合剂对免疫损伤性肝纤维化大鼠肝脏I,Ⅲ,Ⅳ型胶原及T …

目的 深入研究活血化瘀中药８６１合剂的抗纤维化机理。方法 将２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为正常对照组，人血白蛋白免疫损伤性肝纤维化病理模拟组及中药８６１合剂预防组，在用药２．５及５个月时取肝脏组织做病理学，免疫组化及斑点杂交。结果 与病理模型组相比，８６１预防组大鼠肝脏纤维化分级明显减轻，肝脏Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ型胶原及ＴＧＦ－βｍＲＮＡ水平明显降低（Ｐ值〈０．０５），结论 中药８６１合剂的抗人血白蛋白     

大鼠肝星状细胞转化生长因子β3/β1 mRNA比值与Ⅰ型胶原合成的关系

转化生长因子β1(TGF β 1)是激活肝星状细胞(HSC)并促进其胶原合成的最重要因子.TGF β 3被认为具有抗组织纤维化的功能.Carrington等[1]研究提示:TGF β 1与TGF β 3的比值是纤维化发生程度的关键因素.本实验研究大鼠HSC中TGF β 3/TGF β 1 mRNA比值的变化及与Ⅰ型胶原合成的关系,阐明TGF β 3是拮抗TGF β 1的重要因子,为TGF β 3对肝纤维化的防治作用提供实验依据.     

TGFβ1和IFN—α2b对Ito细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达影响的研究

用胆总管结扎的方法制备狗肝纤维化模型，12周后取肝分离Ito细胞，并进行鉴定和培养。经用TGFβ1和IFN—α2b孵育后用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法分离细胞总RNA。对含有Ⅰ、Ⅱ型前胶原cDNA片段的质粒分别进行扩增和提纯，酶切后用自由引物延伸法进行地高辛标记，以制备Ⅰ、Ⅱ型前胶原探针。用此探针与Ito细胞总RNA进行斑点杂交，杂交斑点行灰度数字转换和半定量分析。结果显示，TGFβ1能够促进Ito细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达，而IFN—α2b则能明显抑制Ito细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。据此认为TGFβ1具有致纤维化作用，而IFN-α2b具有抗纤维化作用。     

脂质对肝呈状细胞表达前胶原Ⅰ,ⅢmRNA的影响

目的 探讨脂质（三酯酰甘油和极低密度脂蛋白）对ＨＳＣ前胶原Ⅰ、ⅢｍＲＮＡ表达的影响。方法 链霉蛋白酶和胶原酶的位灌注,Ｎｙｃｏｄｅｎｚ雷度梯度离心分离大鼠ＨＳＣ,分别用三酯酰甘油（２５ｍｇ／Ｌ）和极低密度胆蛋白（２５ｍｇ／Ｌ）共孵育１０ｄ后,提取ＨＳＣ的ＲＮＡ,用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交观察一酯酰甘油和极低密度脂蛋白对ＨＳＣ前胶原Ⅰ、Ⅲ ｍＲＮＡ表达。 三酯酰甘油和极低密度脂蛋白刺激后其胶胶     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠转化生长因子β_1及I型胶原蛋白的影响

[目的]研究银杏叶提取物(EGb)对肝纤维化大鼠的保护作用及其可能机制。[方法]36只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、EGb预防4、8周组。用CCl4腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型,采用免疫组化半定量法观察EGb干预4、8周后肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)I、型胶原(Col I)蛋白的表达,苏木精-伊红及苦味酸-酸性品红胶原染色法观察肝组织病理形态学的改变,并检测肝功能、脂质过氧化指标等。[结果]与模型组相比,EGb干预治疗4、8周后,大鼠肝组织TGF-β1、Col I蛋白的表达显著降低(P<0.05),并显著改善肝纤维化分级(P<0.05),使血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸转氨酶降低,清蛋白升高(P<0.01),并使肝组织丙二醛明显降低(P<0.01),8周较4周更明显。[结论]EGb具有抗脂质过氧化,降低TGF-β1的表达、抑制Col I合成的作用。     

类风湿关节炎滑膜组织转化生长因子β1 转化生长因子β受体Ⅰ及转化生长因子β1 mRNA的表达

类风湿关节炎 (ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＲＡ)的基本病理改变为关节滑膜慢性炎症形成侵袭性血管翳 ,破坏软骨、骨与周围组织。在参与免疫炎症反应的各种因子中 ,转化生长因子 (ＴＧＦ) β1为一种重要的有双向作用的细胞因子 ,可促进炎症细胞活化、浸润 ,又可促进血管增生、组织修复。本研究应用免疫组织化学ＳＡＢＣ法与地高辛标记原位杂交法对ＲＡ滑膜组织中ＴＧＦ β1、转化生长因子 β受体Ⅰ (ＴＧＦ βＲⅠ )、ＴＧＦ β1ｍＲＮＡ的表达分布情况进行分析 ,以探讨它们与ＲＡ发病机制和治疗的关系。1　材料与方法1 1　标…     

丹酚酸B对转化生长因子β1促肝星状细胞分泌胶原的影响

目的 观察丹酚酸B(SA—B)对肝星状细胞(HSC)分泌转化生长因子β1(TGFβ1)与TGFβ1促HSC分泌胶原的影响。方法 用ELISA法测定培养4d的原代与传代HSC的TGFβ1分泌量；添加TGFβ1于原代HSC中温育24h后，[^3H]脯氨酸掺人与胶原酶消化法观察TGFβ1促进HSC分泌胶原的作用；Western印迹法检测：HSCⅠ型胶原的表达；添加SA—B，观察对上述实验的干预。结果 传代HSC分泌TGFβ1的量明显高于原代HSC；添加SA—B后，对原代HSC的TGFβ1分泌量无明显影响，而传代HSC的TGFβ1分泌量显著减少。TGFβ1可显著促进HSC胶原的分泌和I型胶原的表达，而SA—B可拮抗TGFβ1的效应。结论 SA—B可抑制传代HSC的TGFβ1分泌与减弱TGFβ1促HSC胶原的合成，这两个环节可能是SA—B抗肝纤维化的主要作用机制。     

实验性肝纤维化大鼠Ⅰ型,Ⅲ型前胶原mRNA的分布定位

用地高辛标记的cRNA作为探针,对CCl_4实验性肝纤维化肝组织切片进行分子原位杂交,观察Ⅰ型、Ⅱ型前胶原mRNA的分布。结果显示:不仅在间质细胞,在肝细胞胞质中也有Ⅰ型、Ⅱ型前胶原mRNA分布,表明肝细胞和间质细胞均具有合成胶原的能力,对肝纤维化的产生具有重要作用。     

复方益气活血化瘀中药对大鼠肝纤维化组织中胶原和转化生长因子β1表达的影响

目的应用二甲基亚硝胺（DMN）建立肝纤维化大鼠模型,研究以黄芪、丹参、三七为主的益气活血化瘀复方中药抗肝纤维化的作用机制。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药干预组。采用DMN腹腔内注射的方法建立肝纤维化大鼠模型;根据病理学检查评价各组动物肝纤维化程度;应用RT-PCR检测各组肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA水平;应用免疫组化检测各组肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1的表达。结果中药干预组大鼠肝纤维化程度、肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA水平,以及肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原和TGF-β1的阳性表达均分别较模型组显著减轻与下降。结论益气活血化瘀复方中药能明显减轻肝组织病理改变和肝纤维化程度,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1表达是其抗肝纤维化的部分机制。     

柔肝冲剂对大鼠肝星状细胞表达转化生长因子β1和胶原的影响

[目的]观察柔肝冲剂对大鼠肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGF-β1)和胶原的影响.[方法]采用血清药理学方法处理HSC,以貂肺上皮细胞(Mv1Lu)生长抑制MTT法检测培养上清液中TGF-β1活性,免疫细胞化学染色检测HSC TGF-β1和胶原的表达.[结果]经柔肝冲剂处理的HSC培养上清液中TGF-β1的生物活性和细胞内TGF-β1的表达受到显著抑制,其中对纤维肝HSC的作用更明显,抑制作用优于秋水仙碱.柔肝冲剂能显著抑制纤维肝HSC表达胶原,对Ⅳ型和Ⅰ型胶原具有较高的抑制率.[结论]柔肝冲剂能抑制HSC产生TGF-β1和胶原,阻断肝纤维化时HSC合成胶原等细胞外基质的自分泌放大过程.     

血清Ⅲ型前胶原对肝纤维化的诊断价值

用放免法测定102例慢性肝炎、肝硬化患者血清Ⅲ型前胶原(PcⅢ)和Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)含量。结果表明血清PCⅢ和PⅢP定量明显相关(r=0.5101),血清PCⅢ与胆红素、ALT、白蛋白和HBVDNA等指标不相关。提示血清PCⅢ检测作为诊断肝纤维化的血清学指标,可能较血清PⅢP测定更为可靠。     

血清Ⅲ型前胶原水平诊断肝纤维化

近年来肝纤维化的血清学诊断发展迅速,据国内外报道 血清Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)是诊断肝纤维化的良好的血清学指标。但因进口药盒价格昂贵,不易推广应用。我们采用国产血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)药盒检测各种慢性肝病147例,以探讨其对肝纤维化的临床诊断价值。 1 对象和方法 1.1 对象 ①正常组:健康献血员50例,男36例,女14例,平均年龄32.8岁。②肝病组:所检147例肝病患者均系我院住院患者,男126例,女21例,平均年龄38.4岁。其中     

TGF—β单抗对NIH／3T3细胞增殖及前胶原Ⅲ表达的影响

ＴＧＦ－β在肝纤维化的形成中起着重要作用。以ＭＴＴ法及原位杂交检测法研究ＴＧＦ－β单抗对ＮＩＨ／３Ｔ３细胞增殖及Ⅲ型前胶原表达的影响。结果表明，ＴＧＦ－β单抗抑制３Ｔ３细胞增殖，并显著抑制细胞Ⅲ型前腺原ｍＲＮＡ的表达，提示离体培养的成纤维细胞可能存在ＴＧＦ－β自分泌，ＴＧＦ－β单抗能显著阻断其效应，阻止细胞增殖及胶原表达。     

肝纤维化大鼠转化生长因子β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的动态研究

目的　探讨肝纤维化形成不同阶段ＴＧＦβ１和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的变化规律及其相互关系。方法　建立肝纤维化动物模型;分别用免疫组化法和斑点杂交法检测肝纤维化不同阶段ＴＧＦβ１、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及其ｍＲＮＡ表达。结果随着肝纤维化程度的加重,ＴＧＦβ１、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及其ｍＲＮＡ表达量都逐渐增高,各实验组与对照组相比,其差异均有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论肝纤维化时,肝内ＴＧＦβ１、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达呈正相关,提示ＴＧＦβ１是重要的肝纤维化介质。     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠转化生长因子β1及Ⅰ型胶原蛋白的影响

[目的]研究银杏叶提取物(EGb)对肝纤维化大鼠的保护作用及其可能机制.[方法]36只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、EGb预防4、8周组.用CCl4腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型,采用免疫组化半定量法观察EGb干预4、8周后肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)蛋白的表达,苏木精-伊红及苦味酸酸性品红胶原染色法观察肝组织病理形态学的改变,并检测肝功能、脂质过氧化指标等.[结果]与模型组相比,EGb干预治疗4、8周后,大鼠肝组织TGFβ1、Col Ⅰ蛋白的表达显著降低(P＜0.05),并显著改善肝纤维化分级(P＜0.05),使血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸转氨酶降低,清蛋白升高(P＜0.01),并使肝组织丙二醛明显降低(P＜0.01),8周较4周更明显.[结论]EGb具有抗脂质过氧化,降低TGF-β1的表达、抑制Col Ⅰ合成的作用.     

中药861合剂对免疫损伤性肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF－βmRNA的影响

深入研究活血化瘀中药８６１合剂的抗纤雏化机理。方法将２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为正常对照组，人血白蛋白免疫损伤性肝纤雏化病理模型组及中药８６１合剂预防组。在用药２．５及５个月时取肝脏组织做病理学、免疫组化及斑点杂交。结果与病理模型组相比，８６１预防组大鼠肝脏纤维化分级明显减轻，肝脏Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型脐原面积比减小，Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及ＴＧＦ－βｍＲＮＡ水平明显降低（Ｐ值＜０．０５）。结论中药８６１合剂的抗人血白蛋白免疫损伤性大鼠肝纤维化机理之一可能是抑制了肝脏Ⅰ、Ⅲ．Ⅳ型胶原和ＴＧＦ－β的基因表达。