奥曲肽诱导肝癌细胞凋亡和Fas/FasL的表达

目的 探讨奥曲肽对人肝癌细胞抑制作用的机制,为奥曲肽临床应用提供实验依据.方法 用奥曲肽4、7、10 μ g/ml作用人肝癌细胞株(SMMC-7721)24、48、72 h,以空白作为对照组;采用原位末端标记(TUNEL)法流式细胞仪检测SMMC-7721凋亡;直接标记单克隆(CD95/CDl78)抗体法流式细胞仪检测SMMC-7721 Fas/FasL表达的变化.结果 奥曲肽在4、7、10 μg/ml d作用 SMMC-7721 24 h后,SMMC-7721凋亡率从8%升高为40%(P＜0.05),Fas表达率从57%升高为76%(P＜0.05),FasL表达率从54%升高为63%(P＜0.05).结论 奥曲肽能诱导肝癌细胞(Hep SMMC-7721)凋亡的发生,而且能促进肝癌细胞Fas/Fasl基因的表达.     

微囊藻毒素LR诱导L-02细胞发生凋亡

目的了解微囊藻毒素（MC）LR对L-02细胞的毒性机制。方法以L-02细胞为材料,用不同浓度的MCLR处理该细胞,观察了细胞增殖能力、细胞形态改变、乳酸脱氢酶（LDH）泄漏、细胞凋亡率及凋亡相关基因等一系列指标的变化。结果MTT细胞增殖实验可知,MCLR在24h内对L-02细胞有轻微的抑制作用,随后却促进细胞增殖。48h处理对LDH泄漏没有显著影响．延时处理导致LDH泄漏发生,且MCLR浓度越高,LDH泄漏越严重,此结果显示发生了细胞氧化损伤。光镜下50μg／ml的毒素浓度在60h处理后可造成明显的细胞形态改变,如细胞变圆、不贴壁、萎缩、膜发泡,这些都是典型的细胞凋亡形态变化。36h不同浓度MCLR处理的细胞凋亡率较低,约为22％-9％,延长处理时间至60h,高浓度（50μg／ml）处理的L-02细胞的凋亡率可达80％。经高浓度MCLR处理60h的L-02细胞中．p53和Bcl-2基因产物大量表达。结论微囊藻毒素LR可诱导L-02发生凋亡并上调凋亡相关基因p53和bcl-2的表达。     

奥曲肽诱导人肝癌细胞HepG2凋亡

目的探讨奥曲肽诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用及机理.方法采用DNA末端原位标记染色法(TUNEL)、Annexin Ⅴ荧光标记法分别检测肝癌细胞早期和晚期凋亡,细胞免疫化学法检测p53表达.结果 1×10-5mol/L奥曲肽使HepG2细胞早期凋亡阳性率和凋亡指数(AI)增加至(14.2±2.6)%和(18.8±3.3)%,与对照组(1.2±0.1)%(P＜0.05)和(3.6士0.9)%(P＜0.01)比较差异显著;该浓度奥曲肽能明显增加HepG2细胞野生型wp53表达(P＜0.05).结论奥曲肽能诱导肝癌细胞早期及晚期凋亡,这和奥曲肽能使HepG2肝癌细胞wp53表达增加有关.     

精氨酸、尼莫地平和细胞生长肽对环孢霉素A诱导肝细胞凋亡的影响

目的：D精氨酸、经莫地平和细胞生长肽（bFGF)对环孢霉素A（CsA）血和药物浓度的影响以及对CsA诱导的肝细胞凋亡的影响。,方法：将100只大鼠分为5组进行实验：N组,政党对照组：A组,CsA;B组,CsA＋氨氨酸;C组,CsA＋尼莫地平;D组,CsA＋bFGF,每组20只,每天腹腔注射给药。连续3周后取血及肝组织测定CsA浓度,分离血清测定CsA和ALT水平,用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法（TUNEL）测定肝的凋亡细胞数量并作病理学观察,结果：CsA在血中的浓度B组明显高于A、C、D三组（P＜0．05）,C组和D组则低于A组（P＜0．05）,CsA在肝组织的浓度A、C、D三组间无差异（P＞0．05）;A、B、C、D四组的肝细胞凋亡指数高于正常对照组（P＜0．01）,A组凋亡指数比B、C、D三 高,B组比组低,C组和D组间判别无显著意义（P＞0．05）。血清ALT水平是A组明显高于其余4组（P＜0．01）,而其余4组间无差异（P＞0．05）。结论：CsA可诱导肝细胞凋亡并使肝功能降低,而精氨酸,尼莫地平和细胞生长肽使凋亡减少;精氨酸明显提高血中CsA的浓度,而尼莫地平和细胞生长肽降低CsA血中浓度。     

乳源免疫调节肽诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的研究

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人食管癌Eca-109细胞生长和凋亡的影响。方法采用MTT法测定PGPIPN对人食管癌Eca-109细胞的作用,用流式细胞仪(FCM)、琼脂糖凝胶电泳检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡,用免疫组化SP法检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡过程中survivin、caspase-3蛋白的表达变化情况。结果 PG-PIPN对人食管癌Eca-109细胞有明显的生长抑制作用并有剂量依赖性,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关,Eca-109细胞经PGPIPN作用后,其survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强。结论 PGPIPN能诱导人食道癌Eca-109细胞凋亡,这可能与survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强有关。     

紫菀酮通过抑制肠上皮细胞凋亡改善TNBS诱导的克罗恩病样结肠炎

目的 研究紫菀酮(SHI)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠克罗恩病(CD)样结肠炎的作用及潜在机制。方法 18只野生型小鼠随机分为3组：对照组(WT组)、模型组(TNBS组)和SHI干预组(SHI组),每组6只。TNBS组小鼠肛门推注5%TNBS诱导CD样结肠炎;SHI组在TNBS造模的同时给予SHI灌胃干预[40 mg/(kg·d)],WT组和TNBS组每日给予等量的生理盐水灌胃。1周后处死小鼠,采用疾病活动度(DAI)评分、体质量改变、结肠长度、组织学炎症评分和小鼠结肠黏膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平评估肠炎程度。采用荧光素异硫氰酸酯-右旋糖酐(FITC)渗透性测定、肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)测定、细菌移位率评估肠屏障功能。通过TUNEL染色检测小鼠肠上皮细胞凋亡情况;通过Western blot检测小鼠凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)的表达量。采用网络药理学以及生信富集分析预测SHI干预对小鼠CD样结肠炎保护作用的可能途径。结果 与WT组比较,TNBS组DAI评分、体质量降低幅度、组织学炎...     

NADH对辐射诱导正常肝细胞株L02损伤时细胞凋亡的影响

目的 研究抗氧化剂NADH对5．0GyX射线照射正常细胞的防护作用。方法 处理组于5．0GyX射线照射后立即加入NADH,一次给药,剂量为100－600μg/ml,分别观察培养6、12、24h后凋亡细胞率及p53和Bcl-2蛋白表达,并且与照射后加入RPMI1640组和假照射组比较。结果 NADH抑制细胞凋亡率呈剂量依赖性,在浓度为400－600μg/ml时达平台,并且能够上调Bcl-2蛋白表达,下调p53蛋白表达,差异非常显著（P＜0．01）。结论 NADH对受照L02肝细胞有明显的防护作用,但其作用机制还需进一步研究。     

辛伐他汀通过氧化应激诱导K562细胞凋亡

目的:观察辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响,探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的分子机制.方法:不同浓度辛伐他汀处理K562细胞,Annexin V-FITC/PI双染法检测辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响.辛伐他汀处理K562细胞48 h,流式细胞仪检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)浓度,免疫组织化学法测定突变P53蛋白表达.RT-PCR测定c-junmRNA表达.结果:Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示,5、10、20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞48-72h能诱导其凋亡.辛伐他汀作用K562细胞后,与对照组比较,处理组细胞内ROS明显升高.辛伐他汀处理K562细胞后突变P53蛋白表达明显下调,c-jun mRNA 表达上调.结论:辛伐他汀改变K562细胞内氧化还原状态,细胞氧化应激,下调突变P53蛋白表达,上调c-jun 表达诱导K562细胞凋亡.     

紫杉醇诱导成骨肉瘤细胞凋亡

目的：探讨紫杉醇对成骨肉瘤细胞的杀伤作用及机制。方法：应用形态学观察，MTT分析法，DNA梯状电泳，流式细胞术检测术，研究紫杉醇对成骨肉瘤细胞系SOSP-9607的细胞毒效应。结果：紫杉醇作用后成骨肉瘤细胞形态改变明显，存活率明显下降。形态学观察，DNA梯状电泳，流式细胞术检测术证实紫杉醇可诱导成骨肉瘤凋亡。结论：紫杉醇在体外对成骨肉瘤细胞株SOSP-9607有较强的杀伤作用，并且这种作用主要是通过诱导凋亡实现的。     

细胞黏附肽抑制人胃癌细胞BGC823生长及诱导其凋亡作用

目的:　研究细胞黏附肽（RGD）对人胃癌BGC823细胞生长增殖的影响,探讨RGD诱导BGC823细胞凋亡的作用。方法:　将体外培养的 BGC823细胞分为12.5、25.0、50.0、100.0 mg·L^-1RGD处理组和对照组,RGD处理BGC823细胞24、48、和72 h后,MTT法检测不同浓度RGD作用不同时间对BGC823细胞生长增殖的抑制作用,分别利用光镜、透射电镜、免疫组织化学法、流式细胞术和凋亡细胞的DNA片段方法观察凋亡细胞的形态学变化以及定性、定量检测细胞凋亡。结果:　MTT检测,RGD各剂量组在作用24、48和72 h时, BGC823细胞的抑制率均高于对照组（P<0.01）,且随着RGD浓度增加BGC823细胞的抑制率增加;50.0 mg·L^-1　RGD处理BGC823细胞48 h后,光镜下显示,细胞体积变小,胞核深染,胞浆发红,出现很多的凋亡细胞;透射电镜显示,细胞表面微绒毛消失,异染色质趋边凝聚、聚集在核膜上,形成新月形帽状结构,甚至核膜消失,细胞核碎裂,可见凋亡小体。流式细胞术检测,BGC823细胞发生凋亡,且凋亡峰随着浓度的增加而增高;电泳结果显示,BGC823细胞内的DNA片段断裂为大小不等的小片段,呈现出很清晰的梯状降解条带;免疫组织化学染色结果显示,50.0 mg·L^-1RGD处理BGC823细胞48 h后 Survivin的表达量较对照组明显减少,经图像分析检测,实验组平均灰度值
高于对照组(P< 0.01）,提示实验组细胞发生凋亡。结论: RGD通过诱导BGC823细胞凋亡抑制肿瘤细胞的增殖,其RGD诱导BGC823细胞凋亡的作用机制可能通过线粒体引发这一途径。     

肉豆蔻-8散提取物对过氧化氢诱导心肌细胞损伤的影响

研究肉豆蔻-8散提取物对过氧化氢(H₂O₂)诱导乳鼠心肌细胞损伤的影响,并探讨其作用机制。分离并培养大鼠乳鼠心肌细胞,建立H₂O₂诱导心肌细胞损伤模型。倒置显微镜下观察肉豆蔻-8散提取物对心肌细胞形态学的影响;采用MTT法检测心肌细胞活力;使用全自动生化分析仪检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;采用试剂盒法检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)的含量;采用Hoechst荧光细胞核染色观察心肌细胞凋亡形态;使用流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率。100 μmol/L H₂O₂作用2 h能明显造成约50%心肌细胞损伤。H₂O₂模型组出现细胞间隙增大、细胞数减少、细胞胞浆空泡等明显损伤现象。与H₂O₂模型组比较,肉豆蔻-8散提取物各剂量组,心肌细胞形态不同程度好转;能明显降低H₂O₂损伤心肌细胞培养液中LDH、CK、AST含量;显著降低H₂O₂损伤心肌细胞内MDA和NO含量,并提高SOD活力,能明显抑制H₂O₂损伤心肌细胞凋亡。通过改善细胞生存状态、提高细胞活力、降低氧化应激损伤、抑制炎症反应、抑制细胞凋亡,肉豆蔻-8散提取物可改善H₂O₂诱导心肌细胞损伤状态,从而对H₂O₂损伤的心肌细胞起到保护作用。     

畲药山里黄根水提液对CCl4体外诱导L-02肝损伤作用有效部位筛选

正畲药山里黄根为茜草科植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥根,具有清热、凉血、解毒作用~([1]),在浙江、福建、广东、广西、湖南等地应用极广,主要用于乙型、丙型病毒性肝炎、肝炎等病症的治疗,有较好的开发利用前景~([2-3])。四氯化碳(CCl_4)是一种强烈的能够引起肝细胞坏死的化合物,一直被研究者用来诱发各种肝损伤模型,利用肝损伤以后药     

人参-附子配伍比例对人参皂苷成分溶出影响研究

目的 利用超高效液相色谱-飞行时间质谱（UPLC-TOF-MS）联用技术研究不同配伍比例的人参-附子的物质基础,并分析配伍比例对人参皂苷溶出变化的影响。方法 采用Acquity HSS T3（100 mm×2.1 mm,1.8 μm）色谱柱,乙腈-水系统（含0.1%甲酸）梯度洗脱,质谱仪检测,分析人参皂苷。以液相色谱图峰面积表示人参皂苷溶出量。结果 人参与附子配伍后,大部分人参皂苷的溶出量随着人参比例下降呈线性下降;三醇型人参皂苷Re和齐墩果酸型人参皂苷Ro的溶出量比理论值增加;二醇型人参皂苷Rb₂、Rb₃和Rd及其丙二酸甲酰基衍生物的溶出量比理论值减少。结论 人参-附子配伍后,各种人参皂苷的溶出现象不同;这些人参皂苷的溶出量变化可能与人参-附子配伍的药效有关。     

蜣螂有效部位毛细管电泳指纹图谱的建立及其总量统计矩分析

目的 建立蜣螂有效部位的毛细管电泳（CE）指纹图谱,探讨利用总量统计矩法分析指纹图谱的可行性。方法 采用毛细管区带电泳法（CZE）,以弹性石英毛细管柱（60 cm×75 μm）为分离通道,75 mmol/L硼砂溶液（pH 9.8）作缓冲液,运行电压＋20 kV,检测波长200 nm,指纹图谱的评价采用药典委员会相似度分析软件与总量统计矩法。结果 建立了蜣螂有效部位的CE指纹图谱,药典委员会的相似度软件与总量统计矩法计算的相似度基本一致,显示蜣螂有效部位批间差异小。结论 建立的CE指纹图谱准确简便、重现性好,可作为蜣螂提取物的质量控制方法,而总量统计矩法可以作为指纹图谱的分析方法。     

青枯菌诱导广藿香防御相关酶同工酶分析

目的 研究青枯菌诱导广藿香的致病过程及防御相关酶同工酶的动态变化。方法 利用青枯菌粗毒素诱导广藿香试管苗,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,对诱导植株中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）同工酶谱带的变化进行分析。结果 青枯菌诱导1～7 d后的广藿香植株,表现渐进的发病过程,开始时,植株失绿、少数叶片萎垂;逐渐植株茎杆弯曲、整株叶片萎蔫。同工酶电泳分析表明,SOD同工酶在第1、3天时分别出现了新谱带,与对照共有的谱带,强度先增后减;CAT同工酶在第3、5天时分别出现新谱带,第6天时强度达到最大;POD同工酶在第1、4天时分别出现了新谱带,强度先增后减,第7天时所有谱带消失。结论 青枯病的发生呈现渐进的过程。青枯菌诱导1～7 d,广藿香SOD、CAT和POD同工酶谱带在数目和强度上均有所不同,呈动态变化,表明SOD、CAT和POD在广藿香抵抗青枯菌入侵时可能起到较为重要的作用。     

葛根芩连汤中葛根和甘草对黄芩有效成分在大鼠肝代谢的影响

目的 研究葛根芩连汤中葛根和甘草对黄芩有效成分黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素在大鼠肝微粒体代谢的影响,探讨该复方配伍机制。方法 采用在体诱导-体外肝微粒体温孵方法,分别考察葛根芩连汤中葛根、甘草对黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素在大鼠肝微粒体中代谢的影响,利用超高效液相色谱（UPLC）法测定大鼠肝微粒体中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的量。结果 温孵时间黄芩苷在0～90 min,汉黄芩苷在0～60 min,黄芩素在0～10 min,汉黄芩素在0～40 min呈线性消除。对照组各成分代谢速率大小顺序为：黄芩素＞汉黄芩素＞汉黄芩苷＞黄芩苷。与对照组相比,葛根对汉黄芩苷、黄芩素的代谢具有抑制作用,对黄芩苷及汉黄芩素的代谢具有诱导作用;甘草对汉黄芩素的代谢具抑制作用,对黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素的代谢则呈现诱导作用。结论 黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素可以被大鼠肝微粒体代谢,葛根芩连汤中葛根、甘草对黄芩有效成分的代谢过程有影响。     

热毒宁注射液家兔鼻腔给药的药代动力学研究

将热毒宁注射剂制备成鼻腔喷雾剂,进行家兔鼻腔黏膜给药药代动力学研究。以健康家兔为模型,建立空白组、鼻腔给药组和注射给药组。给药后使用乙腈沉淀蛋白法处理家兔血浆样品,HPLC检测血浆中药物有效成分绿原酸的浓度。HPLC结果显示,鼻腔给药组中可检测到绿原酸,且在给药后2~5 min时浓度最高,说明自制热毒宁鼻腔喷雾剂可成功透过鼻腔黏膜吸收进入血液中快速代谢。相比于注射给药组,鼻腔给药组血液中的药物有效物质含量较低,提示热毒宁鼻腔喷雾剂药物透黏膜吸收效率有待提高。     

附子-甘草药对配伍研究进展

中药配伍是中医用药的一大特色,合理的中药配伍可以达到减毒增效的效果。附子-甘草作为经典药对,已广泛应用于临床。文章通过综述近些年来中药药对附子-甘草的研究概况,并参考现代研究文献,从化学成分的相互作用(包括影响附子毒性成分的溶出)、与毒性成分形成沉淀或复合物、影响毒性成分在体内的吸收、分布、代谢、排泄等药代动力学过程以及配伍后对附子原有药效的影响几个方面阐释了附子-甘草配伍减毒存效的作用机制,并用中医药传统药性理论“四气五味”解释了附子-甘草配伍的科学内涵,以期以这一经典药对为切入点探讨中药配伍的意义。     

赤芍药理作用的研究进展

赤芍为毛茛科植物芍药或川赤芍的干燥根,具有清热凉血、通经及清肝消痈的功效。本文通过调研国内杂志及近十年的国外杂志,对赤芍的药理作用及其在中药复方中的应用进行了总结,为其研究开发治疗心脑血管疾病及其他疾病的药物提供有价值的参考。     

Effects of Panax notoginseng saponins on apoptosis induced by hydrogen peroxide in cultured rabbit bone marrow stromal cells via altering the oxidative stress level and down-regulating caspase-3

Objective

To investigate the effects of Panax notoginseng saponins (PNS) on hydrogen peroxide (H₂O₂)-induced apoptosis in cultured rabbit bone marrow stromal cells (BMSCs).

Methods

The effects of different concentrations of PNS on proliferation and early osteoblast differentiation of BMSCs were determined by the MTT assay and an alkaline phosphatase (ALP) assay. An optimal effective concentration of PNS was determined and used in subsequent experiments. The cultured BMSCs were divided into three groups: untreated control, H₂O₂ treated, and PNS pretreatment of H₂O₂ treated. The oxidative stress level was assessed by superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) assays. Flow cytometry was used to determine BMSC apoptosis by staining with annexinV-FITC/propidium iodide (PI). The activity of caspase-3 enzyme was measured by spectrofluorometry.

Results

PNS (0.1g/L) significantly increased both BMSC proliferation rate and ALP activity, while it decreased the indicators of oxidative stress, caspase-3 activity, and the apoptosis rate of BMSCs induced by H₂O_2..

Conclusion

PNS, acting as a biological antioxidant, had a protective effect on H₂O₂-induced apoptosis in cultured rabbit BMSCs by decreasing oxidative stress and down-regulating caspase-3.