亮氨酸氨基肽酶在肝病诊断中的应用

亮氨酸氨基肽酶（ＬＡＰ）是一种广泛存在于人体各组织中的蛋白水解酶［１］，特别是肝、胆、胰等，当这些部位产生病变时，ＬＡＰ活性会升高［２］，我室测定了５０例正常人和２７０例肝病患者血清中ＬＡＰ活性，以了解和探讨ＬＡＰ在辅助诊断肝病中的意义。１对象与方法...     

健康成人亮氨酸氨基肽酶参考值的调查

目的 了解并逐步建立本地区健康成人血清亮氨酸氨基肽酶(LAP)的参考值.方法 对体检健康者904例采用罗氏P800全自动生化分析仪测定血清LAP水平.结果 经统计学分析,各年龄组间LAP水平比较差异有统计学意义(P＜0.01),18～岁人群LAP检测结果最高为(43.67±8.17) U/L,而≥60岁人群最低为(35.75±7.41) U/L.男性LAP水平为(44.39±9.31) U/L,高于女性的(38.42±7.92)U/L,差异有统计学意义(P＜0.01);取中间分布的95％可信限((-x)±1.96s)作为参考范围计算结果为:成人男性血清LAP参考值为(26～63) U/L,成人女性参考值为( 23～54) U/L.结论 建议不同性别使用不同的正常参考值,男性(26～63) U/L,女性(23～54) U/L.     

血清亮氨酸氨基肽酶检测在肝病中的临床价值

目的探讨肝病患者血清亮氨酸氨基肽酶（LAP）检测的临床价值。方法肝病患者按病情分组,检测血清LAP及其他常规肝功能指标。结果各类肝病患者血清LAP活性均升高,以原发性肝癌组（HCC）增高最为显著,不同疾病组间差异有统计学意义（〈0.01）。血清LAP水平随肝炎程度加深而升高。LAP对HCC诊断意义较大,ROC曲线下面积为0.712。LAP与多项肝功能指标呈明显正相关。结论血清LAP检测对各类肝病的诊断及病情估计均有一定价值,特别是HCC,可作为肝癌鉴别诊断的一项初步指标。     

胃切除术后骨质疏松患者亮氨酸氨基肽酶临床价值评价

目的:探讨亮氨酸氨基肽酶(LAP)在胃切除术后骨质疏松患者中的临床价值。方法:选取84例胃切除术后继发骨质疏松患者为研究组,将其中行胃大部分切除术者40例设为大部切除组,行胃全切术者44例设为全切组。回顾性分析84例因胃切除手术继发骨质疏松患者的资料,收集患者初诊时血清钙(Ca2+)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、亮氨酸氨基肽酶(LAP)检测结果,并选择同期100例正常人群作为对照组,进行统计分析。结果:研究组BGP、ALP、LAP含量明显高于对照组,Ca2+含量明显低于对照组(均为P <0. 001)。大部切除组与全切组患者比较,差异无统计学意义(均为P> 0. 05)。研究组LAP的含量与Ca2+呈显著负相关(r=-0. 783,P <0. 05)。研究组LAP、BGP的含量与ALP呈显著正相关(r=0. 682,r=0. 802,均为P <0. 05)。结论:对于胃切除术后的患者,在排除肝病等原因引起的LAP升高外,要警惕骨质疏松以及其他骨病的发生。     

血清腺苷脱氨酶和亮氨酸氨基肽酶对肝病的诊断价值

目的：探讨血清腺苷脱氨酶（ADA）、亮氨酸氨基肽酶（LAP）的检测在肝病诊断中的意义。方法：采用OlympusAu640全自动生化分析仪检测116例各种肝病患者和30例健康人血清中ADA、LAP的水平,并对检测结果进行统计学分析。结果：两项指标在各种肝病中均有升高,其中ADA在肝硬 化时升高幅度最大,而且阳性率最高。LAP在肝癌时升高幅度最大,阳性率也最高。结论：ADA对肝硬化有较好的诊断价值,LAP对肝癌有较好的诊断价值。     

亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒抗干扰性能的临床研究

目的 探讨亮氨酸氨基肽酶（LAP）检测试剂盒的抗干扰性能.方法 根据CLSI EP7-A2文件,对LAP检测试剂盒进行干扰评价试验.结果 配对差异实验显示：0.03 g/L维生素C、1450 FTU乳糜对LAP测定无干扰,342 mol/L游离胆红素、342 mol/L结合胆红素、5g/L血红蛋白对低、高浓度LAP测定均有干扰.5个浓度系列的剂量效应实验结果显示,游离胆红素、结合胆红素、血红蛋白对LAP测定可产生线性干扰.结论 临床医师可根据干扰效应曲线,初步判断不同浓度的干扰物质对LAP检测的干扰,以助于临床诊断分析.     

血清亮氨酸氨基肽酶同工酶Ⅱ对原发性肝癌的诊断价值

目的探讨血清亮氨酸氨基肽酶(leucineam inopeptidase,LAP)同工酶Ⅱ(LAP-Ⅱ)对肝癌的诊断价值。方法使用不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清LAP-Ⅱ。对95例肝癌和90例良性肝病患者血清LAP-Ⅱ进行检测,并与60例正常人及20例孕妇行对照研究;同步对比分析LAP总活性、AFP、GGT-Ⅱ(γ-谷氨酰转肽酶同工酶Ⅱ)。结果LAP-Ⅱ在正常人及孕妇中均为阴性。LAP-Ⅱ在肝癌及良性肝病患者中的阳性率分别为68.4%(65/95)和27.8%(25/90),差异有显著性(P<0.01),而LAP总活性在肝癌组与良性肝病组无差异(P>0.05);AFP≥50μg/L及AFP<50μg/L肝癌患者LAP-Ⅱ阳性率分别为70%(49/70)和64%(16/25);GGT-Ⅱ阳性及GGT-Ⅱ阴性肝癌患者LAP-Ⅱ阳性率分别为75.8%(47/62)和54.5%(18/33);单项LAP-Ⅱ、AFP、GGT-Ⅱ诊断肝癌的敏感性分别为68.4%、73.7%、65.3%;LAP-Ⅱ、AFP及GGT-Ⅱ联合检测诊断敏感性分别增至89.5%和84.2%;三项指标同步检测诊断敏感性达95.8%。结论LAP-Ⅱ为肝癌相对特异性标志物,有助于肝癌的诊断。LAP-Ⅱ、AFP和GGT-Ⅱ对肝癌有互补诊断价值,联合检测可提高肝癌的诊断敏感性。     

亮氨酸氨基肽酶在各类肝病诊断中的意义

目的：检测各类肝病患血清中的亮氨酸氨基肽酶(leucine aminopeptidase,LAP)活性变化，探讨其临床意义．方法：采用酶法速率法检测各类肝病患血清LAP的话性，选择25例健康献血员做对照，对63例肝病患(原发性肝癌25例、肝硬化10例、胆汁淤积8例、急性肝炎10例、慢性肝炎10例)血清中LAP活性进行了测定．结果：在肝病组中肝癌患血清中LAP活性升高最明显，与对照组和其他肝病组比较差异显（P＜0．01)．结论：LAP活性在肝病中普遍升高，但肝癌患最高，差异显，此可作为肝癌鉴别诊断的一项初步指标。     

妊娠妇女血清亮氨酸氨基肽酶的水平变化及其临床意义

目的 探讨妊娠妇女血清亮氨酸氨基肽酶(LAP)的水平变化及其临床意义.方法 选取120例正常妊娠正常分娩的妇女作为正常妊娠组,根据其怀孕周数将其分为正常早期组、正常中期组与正常晚期组各40例;以28例患有妊娠期高血压的妇女作为妊高征组、26例出现早产的妇女为早产组、30例健康未妊娠妇女作为未妊娠组,检测各组妇女血清中的LAP水平.结果 未妊娠组、早产组、正常妊娠组、妊高征组的血清LAP水平依次升高(P<0.05).正常晚期组、正常中期组、正常早期组妇女的血清LAP水平依次降低(P<0.05),正常妊娠妇女的血清LAP水平与孕周呈正相关性(P<0.05).结论 妊娠妇女体内血清中LAP水平的变化存在着一定的规律,监测LAP水平对于评估妊娠期高血压疾病及早产的发生具有重要价值.     

氢醌对 K562细胞着色性干皮病基因 D转录及表达的影响

目的：探讨苯代谢物氢醌（ HQ）对人白血病细胞株K562细胞中着色性干皮病基因D（ XPD）mRNA转录及蛋白表达的影响。方法：分别用终浓度为0、15、30、60μmol/L HQ溶液处理K562细胞48 h后,单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤效应,Taqman探针实时荧光定量PCR法检测XPD基因mRNA转录水平,蛋白印迹法分析XPD基因蛋白表达水平,观察荧光显微镜下细胞的尾矩,计算mRNA及蛋白的相对表达量。结果：不同浓度HQ处理后,各组细胞尾矩与0μmol/L HQ组比较,差异有统计学意义（ P＜0.05）;不同浓度HQ处理后, K562细胞中XPD基因mRNA和蛋白相对表达量与0μmol/L HQ组比较,差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论：HQ处理K562细胞48 h后,细胞中DNA有明显的损伤效应,但XPD基因mRNA及蛋白无变化。     

维生素K2对K562细胞生长抑制作用的实验研究

目的:研究维生素K2(VK2)对慢性粒细胞白血病急性变细胞株K562细胞的生长抑制作用及其机制。方法:采用形态学检测VK2作用后的细胞形态改变,MTT方法检测VK2对K562细胞的生长抑制作用,流式细胞仪Annexin-VFITC/PI分析细胞凋亡,PI染色分析细胞周期变化,RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、促凋亡基因bax的表达。结果:经VK2作用后细胞出现明显的形态学改变:细胞变小,核固缩,核染色质聚集边挤于核膜内侧呈新月形以及典型凋亡小体形成等;MTT结果显示VK2对K562细胞有明显的抑制作用,作用72 h半数抑制浓度为25.1μmol.L-1;流式细胞仪检测结果显示随着VK2浓度的增加凋亡率逐渐增高(P<0.05),随着作用时间的延长凋亡率也逐渐增高(P<0.05);VK2作用72 h,S期细胞逐渐减少(r=-0.99,P<0.05),G0/G1期细胞逐渐增加(r=1.00),细胞被阻滞在G0/G1期;随着VK2浓度的增高抗凋亡基因bcl-2表达明显下调,而促凋亡基因bax表达无明显差异。结论:VK2通过诱导K562细胞凋亡抑制其增殖,并呈浓度和时间依赖性;抗凋亡基因bcl-2下调可能是VK2诱导K562细胞发生凋亡的机制之一。     

苦参碱诱导K562细胞合成γ珠蛋白

目的 体外研究苦参碱对K562细胞γ珠蛋白合成的影响.方法 以K562细胞为体外模型,采用联苯胺染色方法确定苦参碱诱导K562细胞血红蛋白表达增加的剂量效应和时间效应,进一步应用Western blotting技术检测血红蛋白F(αγ2)水平.结果 0.1mg/ml苦参碱作用于K562细胞,在96h联苯胺染色阳性细胞率达到15.67%;Western blotting检测到血红蛋白F表达增加.结论 苦参碱在体外可诱导K562细胞γ珠蛋白合成增加,从而使血红蛋白F增加.苦参碱具有与阳性对照丁酸钠相似的诱导γ珠蛋白合成增加的作用.     

微RNA对K562细胞基因表达谱的影响

目的 应用基因芯片技术,研究微RNA（miR-18la）对人白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法 针对miR-18la成熟序列设计并合成miR-181a RNA duplexes,采用OligofectamineTM脂质体法转染K562细胞。应用Agilent HumanlA寡核苷酸基因芯片,检测和分析对照组与微RNA转染组间的基因表达谱差异。结果 从20173个候选基因中,筛选出228个差异表达基因。与对照组K562细胞比较,表达上调的基因有59个,主要有代谢相关基因、抑癌基因、信号转导相关基因、免疫防御相关基因等;表达下调的有169个,主要有原癌基因、DNA结合与转录因子、代谢相关基因、信号转导相关基因、细胞周期及发育相关基因等。RT-PCR技术验证了CTCF、ZAP70、SEMA4C和RALA4个基因表达的变化。结论 微RNA转染K562细胞48h后,影响了细胞内一系列基因的表达。这些基因可能与微RNA的功能相关,同时也是转录后水平上抑制基因表达的调控方式实现的基础。这为进一步深入研究微RNA的功能及其具体的作用机制提供了重要的线索和依据。     

红白血病K562细胞基因表达谱芯片制作研究

以人红白血病K562细胞为材料，应用限制性显示PCR（RD-PCR）技术分离到K562细胞在诱导分化药物羟基脲诱导分化前后不同时期的cDNA片段3256条，并用DNA芯片仪制作了K562细胞基因表达谱芯片。对芯片制作中不同点样液及处理条件对玻片上DNA固定效率的影响，样品DNA最优浓度等进行了初步研究，结果认为用DMSO作点样液、样品DNA浓度为0.3μg/μL、点样后经紫外交联（150mJ）、80℃干烤2h,DNA探针在玻片上的固定效率可达95%。用此法制作的K562基因表达谱芯片得到较好的杂交效果。     

人参多糖对K562细胞基因表达谱的影响

目的 利用基因表达谱芯片研究人参多糖对体外培养的人红白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法 人参多糖处理K562细胞48 h后,分别提取给药组和对照组K562细胞总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用2种不同的荧光染料Cy3和Cy5进行线性扩增标记,与Illumina全基因组表达谱基因芯片杂交,采用生物信息学方法分析人参多糖处理后K562细胞基因表达谱的改变。结果 共发现差异基因306个,其中上调基因220个,下调基因86个,并对其进行生物学功能分类。结论 诱导肿瘤细胞分化是多基因作用的综合结果,筛选的基因对研究肿瘤发生、发展与逆转分化,以及寻找潜在的抗肿瘤药物作用靶点可能有意义。     

乙醇诱导人体外培养K562细胞系凋亡的研究

目的：探讨乙醇对人K562细胞的细胞毒作用机制。方法：采用不同浓度乙醇加入体外培养的K562细胞中,用荧光显微镜和倒置光显微镜观察细胞形态学变化,用琼脂糖凝胶电泳的方法检测细胞DNA裂解。结果：1％乙醇能有效诱导K562细胞凋亡,且随剂量增大凋亡时间缩短。5％乙醇作用30h则可引起细胞坏死。结论：长期饮酒者血液中有核细胞数量减少,可能与其促凋亡作用有关。     

未知基因KH与公共生物信息资源的比较与分析

目的 快速分析K562细胞中未知基因KH的结构与功能。方法 以mRNA差异显示技术筛选的K562细胞在0．2mg／ml苦参碱诱导前、后3小时的差异基因为研究对象，采用基因片段的碱基序列与Internet网上多种公共生物信息数据库进行比较，分析未知基因KH的结构与功能。结果 对其中的4个片段进行序列分析和同源性比较，有3个基因片段与已知蛋白或蛋白酶的碱基序列完全或高度同源；有1个基因片段除与16号染色体高度同源外，与其它数据库均无显著同源性，暂命名KH基因。结论 KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的候选新基因。     

槲皮素诱导人白血病细胞K562的凋亡

目的:研究槲皮素对人白血病细胞株K562增殖抑制和诱导凋亡作用. 方法:四氮甲唑蓝(MTT)观察细胞的生长状况,应用彗星分析法、TUNEL技术和流式细胞仪检测细胞凋亡. 结果:槲皮素在(1～8)×10-5 mol/L浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性,8×10-5 mol/L槲皮素作用72 h的K562细胞株A值最低;彗星分析法显示经槲皮素作用的K562细胞出现长的彗尾条带;原位细胞凋亡可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块;流式细胞仪检测细胞凋亡主要发生在G1/S期. 结论:槲皮素在体外一定浓度范围内能抑制K562细胞增殖,诱导凋亡.     

K562细胞未知基因KH的开放阅读框架在大肠杆菌中的表达

目的:构建K562细胞未知基因KH的开放阅读框架(open reading flame,ORF)的原核表达体系.方法:采用DNA重组技术构建KH基因片段的开放阅读框架(KH-ORF)的表达载体pCI-neo-KH-ORF,热休克法转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导后,SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达.结果:经IPTG诱导0.5h后KH-ORF在BL21(DE3)plysS中获得表达,表达产物以包涵体形式存在,分子产量约24kD.结论:成功构建了KH-ORF的原核表达体系,为进一步研究其功能奠定了基础.