DTT诱导P38核转位与食管癌Eca109细胞凋亡的研究

目的探讨P38的核转位与DTT诱导的食管癌细胞凋亡的关系。方法采用DTT处理食管癌Eca109细胞，未加药组作为对照。流式细胞仪技术检测细胞凋亡率；免疫组化方法检测P38的磷酸化水平及磷酸化P38的核转位情况。结果与对照组相比，DTT处理组细胞凋亡率明显升高。免疫组化结果显示：处理组P38的磷酸化水平明显高于对照组（P〈0．01），且处理组P—P38大部分定位于核内。结论P—P38核转位参与了DTT诱导的食管癌Eca109细胞凋亡。     

DTT与顺铂诱导对食管癌Eca109细胞磷酸化P38表达的影响

目的:探讨磷酸化P38在顺铂和DTT诱导的食管癌Eca109细胞凋亡中的作用.方法:分别用DTT与顺铂诱导处理食管癌Eca109细胞,未加药组作为对照.采用流式细胞仪技术检测细胞凋亡率;用免疫组化方法检测磷酸化P38的表达情况.结果:与对照组相比,DTT处理组及顺铂处理组细胞凋亡率明显升高.免疫组化结果显示:2处理组磷酸化P38的水平均明显高于对照组(P＜0.05);DTT处理组磷酸化P38大部分位于细胞核内,而顺铂组磷酸化P38则主要弥散于细胞浆内.结论:磷酸化P38在DTT和顺铂诱导的食管癌Eca109细胞凋亡时细胞内分布不同,激活的P38可能通过不同途径参与细胞凋亡.     

仙鹤草水提液对食管癌Eca109细胞生长的抑制作用

目的:研究仙鹤草水提液对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用及其可能机制.方法:MTT法测定0g/L、2 g/L、4 g/L、8 g/L、16 g/L的仙鹤草水提液分别作用于Eca109细胞24 h、48 h、72 h,观察对Eca109细胞生长的抑制作用;采用免疫组织化学染色技术检测16 g/L仙鹤草水提液作用72 h对Eca109细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响.结果:MTT结果显示16 g/L仙鹤草水提液作用48 h和72 h后Eca109细胞生长明显受抑;免疫组化结果显示16 g/L仙鹤草水提液作用72 h后Eca109细胞内Bcl-2蛋白表达下调,P53蛋白表达上调.结论:仙鹤草水提液体外能诱导Eca109细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达及上调P53蛋白表达有关.     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞凋亡中P38和Caspase-3表达的影响

目的 探讨8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞凋亡中P38、Caspase-3表达的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分为3组①对照组只加DMEM(Sigma)培养液(含体积分数10%胎牛血清)培养48 h.②Br组终浓度为2×10-5 mol/L 8-Br-cAMP的培养液培养48 h.③Q组终浓度为43 μmol/L槲皮素的培养液培养48 h.对以上3组细胞以TUNEL法染色计数细胞凋亡率.以免疫组化方法观察3组细胞的P38 MAPK-IR和Caspase-3-IR反应性.结果Br组及Q组细胞凋亡率高于对照组;Br组及Q组细胞的P38 MAPK-IR高于对照组;Br组及Q组细胞的Caspase-3-IR亦高于对照组.P38 MAPK-IR与Caspase-3-IR呈正相关.P均<0.05.结论P38 MAPK及Caspase-3参与了8-Br-cAMP及槲皮素诱导的Eca-109细胞的凋亡.     

S1P5对食管癌细胞Eca109黏附能力的影响

目的研究S1P5对食管鳞癌Eca109细胞黏附能力的影响。方法从人正常食管黏膜上皮克隆S1P5基因,构建表达载体S1P5-EGFP,转染Eca109细胞,经G418筛选,获得S1P5-EGFP/Eca109稳定细胞株。以对照载体Control-EGFP转染的Eca109细胞作为对照,荧光显微镜下观察细胞的形态,用黏附试验评价其黏附能力。结果成功构建S1P5-EGFP和Control-EGFP载体并转染Eca109细胞获得稳定细胞株。S1P5表达于细胞膜并使细胞略呈梭形改变。S1P5过表达致Eca109细胞黏附能力明显低于对照（P〈0.05）,并且不受其配体1-磷酸鞘氨醇（S1P）的影响。结论 S1P5组成性抑制Eca109细胞的黏附能力,食管癌细胞可能通过下调S1P5的表达增强其黏附。     

P38MAPK通路在加热诱导肝癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨P38 MAPK在热诱导正常肝细胞株HL-7702、癌旁肝硬化细胞株QSG-7701和肝癌细胞株QGY-7703凋亡中的作用.方法 应用形态学观察、台盼兰染色、Western blot检测P38 MAPK在热诱导细胞凋亡中表达量的变化,并观察P38 MAPK特异性抑制剂SB203580对细胞凋亡的影响.结果 热诱导使三株细胞P38 MAPK表达量都增多,凋亡明显,使用SB203580可以减轻热诱导的细胞凋亡.结论 P38 MAPK参与热诱导的肝癌细胞凋亡.     

强的松龙对Eca 109细胞胎盘型碱性磷酸酶的诱导作用机制研究

人食管癌上皮细胞系Ｅｃａ１０９可以表达癌胚基因产物胎盘型碱性磷酸酶，并且ＰＬＡＰ活性在强的松龙诱导下升高，蛋白质合成抑制剂环己亚胺在强的松龙作用的初始阶段及强的松致ＰＬＡＰ活性快速升高阶段时加入，均表现对强的松龙效应的抑制。而ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ与强的松龙同时作用于细胞时，则抑制强的松龙的诱导效应，但在强的松龙作用后ＰＬＡＰ活性快速升高阶段加入放线菌素Ｄ时，至少在２４小时内不产生对强的松龙效     

ABCE1基因对人食管癌细胞Eca109的影响及作用机制

目的 明确ABCE1基因对食管癌Eca109细胞中的增殖、侵袭、迁移、凋亡生物学行为的影响并对其作用机制进行初步探讨.方法 将构建好的ABCE1的SiRNA绿色荧光载体转染入食管癌Eca109细胞中,于荧光显微镜下观测转染效率并应用Western blot法及RT-PCR法证实基因沉默的效果,通过Western blot法检测RNase L的改变,MTT法分析细胞增殖能力并绘制细胞生长曲线,Transwell法检测细胞侵袭力,Transwell法检测细胞侵袭力,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 转染ABCE1-SiRNA后的Eca109细胞内可见绿色荧光.Western blot法及RT-PCR法证实了基因沉默的效果(P＜0.05).MTT实验证实,转染ABCE 1-SiRNA载体的食管癌细胞与阴性对照组和空白对照组的细胞相比,增殖受到显著抑制(P＜0.05).Transwell结果显示转染ABCE1-SiRNA载体的食管癌细胞穿膜细胞数较阴性对照组和空白对照组的细胞明显减少(P＜0.05).转染ABCE1-SiRNA-1和转染ABCE1-SiRNA-2的细胞与空白对照组细胞和转染ABCE1-SiRNA-N的细胞相比较,细胞迁移发生明显减慢(P＜0.05),流式细胞仪检测细胞凋亡显示转染ABCE1-SiRNA载体的细胞的细胞凋亡率均显著高于阴性对照组和空白对照组细胞(P＜0.05).结论 抑制ABCE1基因表达后,食管癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力被抑制,细胞发生早期凋亡.这表明ABCE1基因的表达对食管癌细胞Eca109具有肿瘤生物学行为的影响.     

木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制

目的 研究木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制。方法 Eca109细胞经不同浓度木犀草苷处理后,MTT法检测Eca109细胞增殖;倒置显微镜观察Eca109细胞形态的变化;流式细胞术检测Eca109细胞周期变化及细胞凋亡情况;RT-PCR检测Eca109细胞cyclin D1、survivin和c-myc基因表达。结果 MTT实验表明,木犀草苷80、120、160、200、240 μmol/L对Eca109细胞均有抑制作用,且与浓度相关。木犀草苷可引起Eca109细胞形态改变、体积缩小,并与周围细胞脱离,浓度为240 μmol/L时使细胞呈出芽状,有的细胞伸出多个伪足样突起;浓度为160、240 μmol/L时,可将细胞阻滞于G₂/M期,诱导细胞凋亡;浓度为240 μmol/L并处理Eca109细胞48 h后,使Eca109细胞cyclin D1、survivin和c-myc基因表达低于对照组（P＜0.05）。结论 木犀草苷对食管鳞状癌Eca109细胞的生长有显著抑制作用,其通过改变细胞周期、诱导细胞凋亡及抑制相关基因的表达发挥抗肿瘤作用。     

8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞增殖与分化的效应

在人食管癌Ｅｃａ１０９细胞中加以终浓度为１０－５ｍｏｌ／Ｌ的８ＢｒｃＡＭＰ体外培育２４ｈ后，应用酸解ＤＮＡ及甲绿派洛宁染色技术在同一标本上鉴别增殖型细胞和分化型细胞。结果：８ＢｒｃＡＭＰ处理组增殖型细胞占６３％，分化型细胞占３７％；而对照组增殖型细胞占８３％，分化型细胞占１７％。结果提示：８ＢｒｃＡＭＰ对Ｅｃａ１０９细胞有抑制增殖和促进分化效应     

顺铂诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的观察

在体外采用光镜、电镜及ＤＮＡ断片检测方法对顺铂作用于人食管癌Ｅｃａ１０９细胞后的形态学及生化改变进行了观察。药物作用后细胞皱缩变小，呈圆形，细胞核固缩、破裂或消失，胞浆红染，有的细胞似出芽状，可见到凋亡小体及凋亡小体被吞噬的现象。顺铂低浓度时凋亡现象不明显，５ｍｇ／Ｌ以上时作用明显。药物作用２４ｈ时经ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳，可见到呈梯状的条带。结果提示：顺铂可引起Ｅｃａ１０９细胞凋亡，ＤＮＡ降解是细胞凋亡过程中的重要变化之一。     

冰片与顺铂联用对Eca109(DDPr)细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的:探讨冰片与顺铂(cisplatin,DDP)联用对耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)增殖?细胞周期和凋亡的影响?方法:采用递增药物浓度持续作用诱导法建立耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr),将冰片联合DDP作用于Eca109(DDPr)细胞,MTT法检测Eca109(DDPr)细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡?结果:递增药物浓度持续作用诱导6个月后,细胞可以在含1 μg/ml DDP的培养液中稳定生长,其对DDP的耐药指数为15.886;单用冰片浓度≤1.560 μg/ml时,对Eca109(DDPr)细胞无明显抑制作用(P > 0.05),但与1 μg/ml DDP合用能显著促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用(P < 0.05),并促进DDP诱导Eca109(DDPr)的细胞周期改变?细胞凋亡增加,细胞周期表现为G1期细胞明显增多(P < 0.05),S期细胞?G2期细胞明显减少(P < 0.05),细胞的凋亡率明显增加(P < 0.05)?结论:冰片促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用,可能与改变Eca109(DDPr)细胞周期?增加细胞凋亡有关?     

山奈酚诱导人食管鳞癌Eca-109细胞凋亡及其机制

目的研究山奈酚对人食管鳞癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法山奈酚体外作用于Eca-109细胞后,用MTT法检测细胞增殖抑制作用;TUNEL染色测定细胞凋亡率;RT-PCR检测Bax、Bcl-2基因表达变化情况;分光光度法测定Caspase-3和Caspase-9活性。结果山奈酚显著抑制Eca-109细胞增殖(P<0.01),呈剂量依赖关系。TUNEL染色结果表明山奈酚诱导Eca-109细胞发生凋亡,RT-PCR结果显示山奈酚作用后,肿瘤细胞Bax基因表达上调,Bcl-2基因表达下调,同时,Caspase-3和Caspase-9活性明显升高(P<0.01)。结论山奈酚能抑制Eca-109细胞增殖,诱导细胞凋亡。山奈酚可能通过线粒体途径诱导Eca-109细胞凋亡。