新鲜血浆病毒的灭活

献血者筛选,血清学试验及现有PCR试验的进步,相当大地增强了血液和血液制品的安全。事实上血液及血液制品从来没有象今天这么安全。但是目前的实验方法不能检测出可能造成血液污染的所有病毒。这就要求一有效方法进一步加强治疗用血液成分和新鲜血浆的安全性,那就是把各种制品的病毒灭活与制备过程综合在一起。 目前治疗用新鲜血浆的病毒灭活有两种选择:通过溶剂/去污剂(S/D)方法处理,广泛地用于血浆蛋白制品的提纯,或用吩噻嗪染料亚甲基蓝与可见光结合。巴氏消毒法仍在开发。(S/D)和亚甲基蓝/光法(MB/LIGHT)均在90年代初引入德国,迄今许多欧洲国家在使用。S/D法处理的是来自献血者或机采的数百单位血浆。至于亚甲蓝/光法则用于单个单位血浆的加工。     

国产输血过滤器对新鲜冰冻血浆回收率的影响

近年来对输血的安全性越来越重视，血液成分的病毒灭活方法在不断改进和推广，其中亚甲蓝光化学单袋血浆病毒灭活技术已在全国的部分血站投入使用。据文献报道，在血浆中加入终浓度为1μmol／L的亚甲蓝后，经30000～38000 LUX荧光照射30min，可使滴度大于7TcID50的指示病毒灭活，达到去除病毒的目的。但人们已认识到亚甲蓝灭活处理对血浆中主要凝血因子、生化指标、酶活性的影响，但在《病毒灭活装置配套用输血过滤器》使用说明书中，元新鲜冰冻血浆容量回收率的数据。     

亚甲蓝/光化学病毒灭活法对血浆蛋白浓度及凝血因子活性的影响

对血液进行病毒灭活是保障安全输血的措施之一,亚甲蓝/光化学法灭活人血浆中病毒的效果已被证实,其病毒滴度减少程度与所用的紫外光照强度和亚甲蓝浓度直接相关[1,2]。我们观察亚甲蓝/光化学法灭活病毒前后血浆蛋白浓度和凝血因子活性的变化,以及照射后过滤吸咐亚甲蓝的血浆经速冻并最终制备成冷沉淀制品中凝血因子的变化。1材料与方法1.1试剂与仪器Dade Behring Marbury GmbH凝血因子检测试剂(德国Marburg,批号436515),总蛋白液体检测试剂(北京中生北控生物科技,批号040261);四联采血袋(长春泰尔茂,批号20040612),一次性使用病毒灭活输…     

白细胞过滤对亚甲蓝光敏化血浆质量的影响

亚甲蓝光敏法灭活血浆中病毒是近年来才发展起来的新技术 ,但是一些亲白细胞病毒和非脂包膜病毒能抵抗此灭活过程[1] ,而且 ,残留血浆中的亚甲蓝还有毒副作用[2 ] 。我们对光敏法灭活病毒后的血浆 ,再用白细胞滤器过滤 ,不仅可减少血浆中残留白细胞引起的输血副反应 ,减少亚甲蓝残留量 ,而且对血浆质量也无大的影响。1　材料与方法1 1　标本来源　血浆均为全血采集后 6ｈ内分离的新鲜血浆。共 10份 ,每份留取 30ｍｌ备用。1 2　亚甲蓝处理　在每份血浆中加入亚甲蓝 (2 0ｍｇ/ｍｌ,北京永康制药厂 ) ,使其终浓度为 1μｍｏｌ/Ｌ ,置于血浆病…     

亚甲蓝光化学法灭活寨卡病毒的研究

目的探讨亚甲蓝光化学反应对血浆中寨卡病毒的灭活效果。方法血浆中加入寨卡病毒后,使用一次性病毒灭活输血过滤器材在病毒灭活照射仪内进行亚甲蓝光化学法病毒灭活(亚甲蓝浓度为1μM、照射强度为35 000 Lx、灭活时间为30 min)。分别在灭活处理前以及灭活处理的第5、15、30 min留样。所取样品用免疫荧光法检测病毒滴度,并用RT-qPCR检测病毒RNA载量。结果灭活前,血浆中寨卡病毒的滴度和核酸载量分别为(5.55±0.18)log TCID_(50)/0.1mL和(9.08±0.75)log copies/mL。灭活后以及经过Vero细胞连续3代培养后,均未检测到病毒感染性,滴度下降(5.05±0.19)log TCID_(50)/0.1mL。病毒RNA载量在灭活后仍有(8.07±0.68)log copies/mL,传代培养从第1代到3代,都没有检测到病毒RNA。结论亚甲蓝光化学法能有效灭活血浆中的寨卡病毒。     

亚甲蓝残留量在病毒灭活血浆中的限量检测方法

目的探讨亚甲蓝残留量在病毒灭活血浆中的限量检测方法。方法留取病毒灭活血浆亚甲蓝滤过前和滤过后的样本各30份,每10份为一组,共分为三组:对照组,使用批号为2013001-A的病毒灭活过滤器;试验一组和试验二组,均使用批号为2013002-B的病毒灭活过滤器。采用固相萃取小柱对血浆样品和标准品中的亚甲蓝进行萃取分离,结合分光光度法进行测定;通过已知浓度的标准品计算得到3组试验中每袋血浆的亚甲蓝释放量、残留量/率。用双缩脲法测定总蛋白,计算总蛋白测定回收率;使用血凝仪测定VIII因子含量,计算VIII因子回收率。结果三组亚甲蓝释放量指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比,试验一组和试验二组亚甲蓝残留量及亚甲蓝残留率增大,但差异无统计意义(P>0.05)。与试验一组比较,试验二组亚甲蓝残留量及亚甲蓝残留率降低,差异显著(P<0.05)。结论采用新型过滤器对血浆中亚甲蓝过滤两次,既能缩短过滤时间,提高工作效率,又能降低血浆中亚甲蓝残留率,保证血液产品质量,效果良好。     

亚甲蓝血浆病毒灭活对其主要质控指标的影响及残留亚甲蓝检测

亚甲蓝光化学法用于血浆病毒灭活在我国血站系统已得到广泛采用,该方法可使病毒模型的滴度下降61g,达到良好的灭活效果[1]。为了考查亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活对其质量的影响,笔者对新鲜冰冻血浆和用亚甲蓝光化学法制备的病毒灭活血浆分别随机抽取60袋,对其主要质量控制指标:血浆蛋白浓度、凝血因子Ⅷ含量、纤维蛋白原含量进行了检测比较,并采用高效液相法检测病毒灭活血浆的亚甲蓝残留量。现将试验结果报告如下。1材料与方法1.1标本新鲜冰冻血浆和用亚甲蓝光化学法制备的病毒灭活血浆各60份,来源于本血液中心街头无偿献血者的血液制得。1…     

病毒灭活新鲜血浆在不同时间段质量分析

目的分析亚甲蓝光化学法(MB-P)灭活处理新鲜血浆(简称病毒灭活新鲜血浆)与未经灭活处理的新鲜血浆(简称新鲜血浆)在保存期内不同时间段有效成分的变化,为临床输注提供参考依据。方法取20人份全血(每份400mL),按照标准操作规程制备成新鲜血浆(每份200mL)后,将其一分为二,制备病毒灭活新鲜血浆和新鲜血浆,两种血浆每份无菌分装为5等份,立即放入速冻冰箱速冻,在0(制备后小于72h)、3、6、9、12个月分别检测Ⅴ因子、Ⅷ因子、纤维蛋白原(Fib)、亚甲蓝残留量、总蛋白、pH值、K~+、Na~+、Cl~-水平。结果两种血浆随着保存期的延长,Ⅴ因子、Ⅷ因子、Fib、总蛋白、K~+、Na~+、Cl~-水平呈下降趋势,pH值呈上升趋势,差异有统计学意义(P0.05)。结论经过病毒灭活过程对血浆Ⅴ因子、Ⅷ因子、Fib、总蛋白、pH值、K~+、Na~+、Cl~-水平均有所影响,但能够达到国家规定的临床用血标准,采用病毒灭活可以在保留血浆基本成分的情况下提高临床用血的安全性。     

热力与亚甲蓝光化学法联合应用灭活辛德毕斯病毒效果的研究

目的研究热力与亚甲蓝光化学法联合应用灭活辛德毕斯病毒的效果。方法采用细胞培养法和基因检测技术,对热力与亚甲蓝光化学法联合应用灭活辛德毕斯病毒的效果进行了评价。结果经56℃水浴中热力预灭活处理1.5 h,辛德毕斯病毒滴度≤0.5 TCID50/ml,灭活对数值达到6.33 TCID50/ml;未经预灭活的辛德毕斯病毒在1μmol/L亚甲蓝+光照(MB+L)处理中随光照时间的延长,病毒残余滴度逐渐下降至检测限(TCID50/ml=0.5)。经热力灭活预处理的辛德毕斯病毒与未经预处理的病毒核酸载量之间具有相关性(R20.98,显著性F0.01)。结论热力灭活预处理的辛德毕斯病毒能够反映活病毒的亚甲蓝病毒灭活效果,有望成为安全而有效的病毒灭活效果评价制品。     

苏州地区临床用血浆中亚甲蓝残留量及安全性调查分析

目的通过对血浆病毒灭活后亚甲蓝残留量检测,探讨临床用血浆安全性。方法随机抽取213份病毒灭活血浆,采用高灵敏荧光光度法检测不同规格的病毒灭活血浆中亚甲蓝残留量,并对亚甲蓝残留量检测结果进行分析。结果病毒灭活血浆亚甲蓝残留量均符合国家标准。结论通过对病毒灭活耗材的原料监测,采用高质量的过滤器材,并加强制备过程中关键控制点的监测,可以避免亚甲蓝残留量超标现象,保证输血安全。     

南昌血站病毒灭活血浆制品主要质量控制指标的分析

目的：了解本血站经亚甲蓝/光化学法病毒灭活后,新鲜冰冻血浆、冷沉淀、冷上清中总蛋白、纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ的含量是否符合《全血及成份血质量要求》（GB18649-2012）的质量要求。方法随机采集100袋新鲜冰冻血浆,经亚甲蓝/光化学法病毒灭活过滤后留取1份标本（病毒灭活新鲜冰冻血浆实验组）,解冻后制备冷沉淀前各留取1份标本（病毒灭活新鲜冰冻血浆实验组）,采用改良快速融化离心法制备冷沉淀后各留取1份标本（冷沉淀实验组）,留取冷上清标本各1份（冷上清实验组）,三个实验组分别检测总蛋白、纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ含量。结果病毒灭活新鲜冰冻血浆总蛋白和凝血因子Ⅷ含量分别为57.7g/L、0.66IU/ml,冷沉淀的纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ含量分别为154.4mg/袋、87.8IU/袋,冷上清的总蛋白含量为46.3g/L。结论本站制备的病毒灭活新鲜冰冻血浆、冷沉淀符合《全血及成份血质量要求》（GB18649-2012）的质量要求,冷上清的血浆蛋白含量不足,不能标注为病毒灭活冰冻血浆在临床上使用。     

维生素C对病毒灭活中血浆蛋白活性的保护效应

本研究探测在亚甲蓝（methyrlene blue，MB）光化学法处理单份血浆过程中，加入维生素C（vitamine C，Vitc）是否影响病毒的灭活效果，是否对血浆蛋白活性成分具有保护作用。用水泡性口炎病毒（vesicular stomatitis virus，VSV）作为指示病毒，在人血浆中加入不同浓度Vit C和终浓度为1μmol／L的亚甲蓝，应用40000lx荧光强度照射并于不同时间取样检测。以细胞病变效应评价对VSV的灭活效果，用RT-PCR检测病毒核酸的变化，并采用Clauss法、一期法和微量免疫电泳等方法对亚甲蓝光化学法处理前后的血浆蛋白含量和活性进行分析。结果发现，VSV血浆在加入240μmol／LVitC并经MB-光照60分钟后，病毒滴度下降〉8 lg TCID50／ml；RT-PCR法也检测不到病毒核酸；血浆中的纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ的回收率分别为83.55％和81、67％，与不加Vit C进行亚甲蓝光化学法处理结果相比有显著提高（P〈0.05）；微量免疫电泳显示，血浆中的大部分蛋白成分含量没有明显改变，免疫原性也未受到明显影响。结论：血浆中加入一定量的Vit C不仅不影响亚甲蓝光化学法对病毒的灭活效果，而且有效地保护了血浆蛋白活性成分，因此Vit C可作为亚甲蓝光化学法处理血浆时的保护剂，能有效地提高单份新鲜冷冻血浆的质量。     

亚甲基蓝光化学法灭活血浆中病毒研究的新进展

亚甲基蓝(Methylene Blue)与可见光结合可高效灭活脂包膜病毒,如输血传播的HIV、HCV、HBV等、血浆成分没有免疫学特征改变和新抗原产生,大多数血浆蛋白成分活性均末降低。亚甲基蓝作为光敏染料不可逆地插入病毒核酸,诱导断裂缺口产生,导致病毒功能和遗传结构基础破坏。MB的毒理学性质渐已阐明。静脉注射用MB可随血浆输入人体,未发现输血后副反应。MB/光化学法灭活单袋血浆中的病毒为成分输血的血液制品提供了更为安全、简便的病毒灭活工艺。     

病毒灭活血浆中亚甲蓝残留量超标原因的研究

目的探讨亚甲蓝光化学法病毒灭活后亚甲蓝残留量结果范围及其原因。方法采用固相萃取法,检测不同规格的病毒灭活血浆中亚甲蓝残留量,并分析亚甲蓝残留量超标的原因。结果统计分析不同规格病毒灭活血浆中亚甲蓝残留量,结果有差异。结论根据亚甲蓝残留量超标存在的原因采取相应措施,加强制备过程中关键控制点的监测,减少亚甲蓝残留量超标现象,保证输血安全。     

病毒灭活血浆中亚甲蓝残留量的质量控制

目的 探讨如何在提高病毒灭活血浆制备效率的基础上,尽可能减少血浆中的亚甲蓝残留量/率.方法 将30份200 ml新鲜血浆,平均分为3组,对照组使用旧型病毒灭活过滤器,实验1组和2组使用新型过滤器,对照组和实验1组对血浆中的亚甲蓝只进行1次滤除,实验2组对亚甲蓝进行2次滤除,留样测定每组滤过前、后的亚甲蓝含量,以及总蛋白...     

四种病毒灭活方法用于登革病毒灭活效果的比较

目的评价常用病毒灭活方法对血液制品中登革病毒(DENV)的灭活效果。方法将单采新鲜冰冻血浆(FFP),人凝血因子Ⅷ(FⅧ)和静脉注射免疫球蛋白(IVIG)3种血浆及其制品中加入高滴度(8.00-9.25)的登革病毒液,分别采用亚甲蓝(MB)光化学法灭活FFP、有机溶剂/去污剂(S/D)法灭活FⅧ、低pH常温孵化法和巴氏消毒法灭活IVIG;以1×10~6/mL A549细胞接种于T25的培养瓶中作为病毒传代及滴度滴定指示细胞,将灭活前后的血浆及制品接种于A549细胞并检测其DENV滴度,并通过qRT-PCR对DENV RNA做定量检测;评估不同的灭活方法对DENV的灭活效果。结果 DENV滴度下降:MB光化学法灭活FFP下降滴度≥5.92 log,S/D法灭活FⅧ下降滴度≥5.17 log、巴氏法和低pH法灭活IVIG均下降滴度≥5.92 log,其中MB光化学法灭活FFP、SD灭活FⅧ及巴氏法灭活IVIG后DENV RNA(cp/mL)降低1.25 log-2.25 log,低pH法灭活IVIG后DENV RNA(cp/mL)降低0.17 log。所有血浆和血液制品样品经灭活后,在DENV宿主细胞上3代盲传后均未检测到DENV RNA。结论 4种常用病毒灭活方法均能有效灭活血浆及血液制品中的DENV。     

亚甲蓝光化学法病毒灭活前后血浆凝血因子等的质量分析

目的探讨亚甲蓝光化学法(methylene blue photochemistry,MB-P)病毒灭活前后血浆成分的活性与含量,为国家制定病毒灭活血浆的质量标准提供参考依据。方法随机抽取40人份全血按照标准操作规程制备新鲜血浆和病毒灭活新鲜血浆,同1人份制备的新鲜血浆分2组留样,1组为不灭活的新鲜血浆(记为灭活前组),另1组为病毒灭活后新鲜血浆(记为灭活后组),检测灭活前后样本的FⅡ∶C、FⅤ∶C、FⅦ∶C、FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅩ∶C、Fg和总蛋白含量的变化。结果病毒灭活前后FⅡ∶C、FⅤ∶C、FⅦ∶C、FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅩ∶C、Fg的含量比较:t值分别为7.335 2、6.169 3、6.091 3、6.808 1、10.397 2、7.448 3、13.806 1,均为P0.05;总蛋白含量:灭活前61.5±6.98、灭活后62.00±5.93,t为0.422 9,P0.05。结论血浆经亚甲蓝灭活处理后6种凝血因子活性及纤维蛋白原含量均降低,总蛋白含量无明显差异,说明病毒灭活对血浆成分的活性损伤是存在的,但在可接受的范围内。     

美蓝光处理对单一献血者新鲜冰冻血浆的凝血能力和血浆蛋白的影响

单一献血者的新鲜冰冻血浆(FFP)经过光处理灭活病毒,可降低由血浆传播传染性疾病的危险。作者将单一献血者的血浆加入光敏药物美蓝(MB),在室温可见光下暴露1小时。因为经过融化、冰冻和对血浆的化学处理,可能引起血浆蛋白质的变性,使不耐热的凝血因子受到严重破坏。为此作者对用MB处理和未经处理的同一献血者血浆的凝血因子活性进行了比较研究。     

荧光与亚甲蓝联用对血浆中病毒灭活的研究

以细胞感染试验、凝血法、交叉免疫电泳等技术 ,观察荧光与亚甲蓝联用对血浆中水泡性口炎病毒 (VSV)和辛德比斯病毒 (SV)的灭活效果及血浆蛋白的变化。结果 ,向盛装在聚氯乙烯袋内的血浆中加 1μmol/L亚甲蓝并经荧光 (30 0 0 0Lux)照射 30min ,可将血浆中滴度 >7TCID50 (lg)的VSV和SV灭活。消毒后 ,血浆中的Ⅷ :C、Ⅸ :C、纤维蛋白原的回收率 >75% ,白蛋白、球蛋白的回收率 >85% ,蛋白免疫原性无变化     

病毒灭活血浆亚甲蓝含量的检测及质量控制

<正>目前亚甲蓝光化学照射技术(methylene blue plus light,MBP)照射血浆以灭活病毒,已在采供血机构广泛应用。资料表明血浆病毒滴度降低程度与所用亚甲蓝浓度有直接关系,但进入人体的亚甲蓝过多,会对机体产生毒性作用,且血