核因子-κB在体外循环后肺损伤发病机制中的作用

目的 探讨核因子-kB（NF-kB）在体外循环后肺损伤发病机制中的作用和甲基强的松龙预处理对肺损伤的防治作用。方法 健康雄性家犬12条，随机均分为两组：甲基强的松龙组（M组）和对照组（C组）。持续检测ECG、MAP和平均肺动脉压（MPAP），体外循环前（T0）、主动脉开放30min（T2）、90min（T3）分别测定CVP、肺动脉楔压（PCWP）、心排出量（CO）、肺顺应性和动脉血气并计算肺血管阻力（PVR）、心脏指数（CI）和肺泡-动脉氧分压差（PA-aDO2）。T0、主动脉开放前（T1）、T2、T3分别：（1）采取动脉血测定肿瘤坏死引子α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）；（2）取适量右上肺组织测定肺组织湿干重比（W／D）、髓过氧化物酶活性（MPO）变化、细胞核内NF—KBp65亚单位的活性变化及肺病理学改变。结果 （1）两组T1、T2、T3和T0相比，NF-KB活性、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、MPO和W／D均显著增加（P〈0．01），T1、T2、T3 M组和C组相比NF—KB活性、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、MPO和W／D均显著降低（P＜0．01）；（2）病理学改变：T1、T2、T3和T0相比两组均出现肺间质中性粒细胞浸润，肺间隔增宽，肺泡腔有渗出并且C组较M组改变明显；（3）血液动力学改变：MAP、CI在组内及两组之间各时点均无显著变化，T2、T3C组PVR较T0明显升高（P＜0．05），而M组无显著变化；（4）肺功能：两组T2、T3较T0PA-aDO2显著增加（P＜0．01），M组T2、T3较C组PA-aDO2明显降低（P＜0．05）；C组T2、T3肺顺应性较T0明显降低（P〈0．05），而M组无明显变化，PaCO2无明显变化。结论 体外循环可引起肺组织NF-kB的活化和细胞因子的显著增加，发生肺损伤；甲基强的松龙可抑制NF-kB的活性，减轻肺损伤。     

戊乙奎醚预先给药对大鼠急性肺损伤时NF-κB的影响

目的 探讨戊乙奎醚预先给药对大鼠急性肺损伤(ALI)时NF-κB的影响.方法 雄性SD大鼠35只,体重210～280 g,随机分为5组(n=7):对照组(C组)、ALI组和低、中、高剂量戊乙奎醚组(P1-3组).采用经尾静脉注射内毒素5 mg/kg的方法建立大鼠ALI模型.C组和ALI组经腹腔注射生理盐水0.5 ml,P1～3组分别经腹腔注射戊乙奎醚0.03、0.1和3 mg/kg,30 min后ALI组、P1～3组制备AU模型,C组不制备模型.于静脉注射LPS后4 h时,行血气分析,计算氧合指数;称量肺组织湿重(W)、干重(D),计算W/D;采用比色法测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;采用RT-PCR法测定肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA的表达水平;采用ELISA法测定肺组织TNF-α和IL-1β的含量;采用非放射性EMSA法测定肺组织NF-κB活性;采用免疫组织化学法测定肺组织NF-κB的表达水平.结果 与C组比较,其余各组氧合指数降低,肺组织W/D和MPO活性、TNF-α,IL-1β含量及其相应mRNA表达水平、NF-κB活性和表达水平均升高(P<0.05或0.01);与ALI组比较,P1～3组氧合指数升高,肺组织W/D和MPO活性降低,TNF-α、IL-1β含量及其相应mRNA表达水平降低,NF-κB活性和表达水平降低(P<0.05);P1～3组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 戊乙奎醚预先给药减轻大鼠急性肺损伤的机制可能与抑制NF-κB的活化,下调NF-κB的表达,降低肺组织炎性反应有关.     

肝素化膜肺和甲基强的松龙预处理对心肺转流后肺损伤的防治作用

目的观察肝素化膜肺和甲基强的松龙预处理对炎性细胞因子的影响和对心肺转流(CPB)后肺损伤的防治作用。方法30例择期行双瓣膜置换的病人,随机均分为三组:肝素化膜肺组(H组)、甲基强的松龙组(M组)和对照组(C组)。术中持续监测ECG、HR、SpO2、MAP、CVP、心输出量(CO);术前、CPB前、主动脉开放前、开放后0·5、1、2、6h采取动脉血测定细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的变化;术前、CPB前、主动脉开放后1·5、2、6h采血测定动脉血气,氧合指数(PaO2/FiO2),同期监测气道压并计算肺的顺应性。结果三组病人在主动脉开放前、开放后0·5、1、2、6h时TNF-α、IL-1β、IL-6均较术前显著升高(P<0·05,P<0·01)。主动脉开放前、开放后0·5、1、2、6h时M组TNF-α、IL-1β、IL-6均较C组显著降低(P<0·05,P<0·01);主动脉开放后0·5、1hH组TNF-α、IL-1β、IL-6较C组明显降低(P<0·05),且M组在开放后各时点TNF-α、IL-1β、IL-6较H组降低更明显(P<0·01)。三组开放后各时点较CPB前气道阻力轻度升高,但三组间差异无显著意义。主动脉开放后1·5、2、6h三组病人和术前相比PaO2/FiO2显著降低(P<0·05,P<0·01);与H组、C组相比,M组在主动脉开放后1·5、2、6h时PaO2/FiO2显著增加(P<0·01)。结论CPB可引起以炎性细胞因子升高为特征的全身性炎症反应,产生肺损伤;单纯肝素涂抹膜肺轻度降低细胞因子变化,但对肺功能无明显保护作用;小剂量甲基强的松龙(5mg/kg)可有效抑制细胞因子的升高,促进肺功能的恢复。     

曲马多对致痛小鼠血清核因子-κB及白细胞介素-2的影响

目的 研究曲马多对致痛小鼠血清核因子-κB(NF-κB)和白细胞介素-2(IL-2)的影响.方法 112只BALB/c雄性小鼠.体重25～30 g,随机均分为网组:曲马多组(T组,50 mg/kg曲马多)、吗啡组(M组,5 mg/kg吗啡)和假给药组(S组,生理盐水)、空白对照组(C组).各组在给药后1 h(T_1)、3 h(T_2)、12 h(T_3)、24 h(T_4)时眶静脉采血,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清NF-κB及IL-2的含量,热板法测痛阈.结果 与S组比较,T组和M组的各时点痛阈增高(P<0.05).NF-κB:与C组比较,T_4时T组升高(P<0.05),T_3、T_4时M组和S组降低(P<0.05);与S组比较,T_2～T_4时T组升高;与M组比较,T_2～T_4时T组升高(P<0.05).T_1～T_3时T组IL-2含量高于M组(P<0.05).结论 吗啡对福尔马林致痛小鼠血清NF-κB和IL-2有抑制作用.曲马多对其具有增强作用,提示曲马多可能对疼痛所致的免疫抑制有改善作用.     

肺组织NF-κB和PUMA与SAP-ALI的关系及PDTC的干扰作用

目的探讨NF-κB(核因子-κB)和PUMA(p53正向凋亡调节因子)在大鼠重症急性胰腺炎致急性肺损伤(SAP-ALI)发病中的作用及脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对此过程的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组(A组),SAP-ALI组(B组),SAP+PDTC干预组(C组),每组24只。各组再按6,12,24 h时点分为3个亚组,每亚组8只。A组开腹后翻动胰腺数次;B组采用胰胆管逆行注入5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)诱导SAP-ALI模型;C组在B组的基础上于术前1 h给予PDTC(15 mg/kg),各组按各时点处死大鼠。观察胰腺和肺脏病理变化。检测不同组肺脏组织中NF-κBp65,PUMA和Caspase-3的表达及Caspase-3活性;检测组织TNF-α,MIP-2和ICAM-1 mRNA的表达、髓过氧化物酶(MPO)的活性和肺泡上皮细胞凋亡指数。结果成功建立大鼠SAP-ALI模型。Western-blotting和RT-PCR结果显示,B组肺上皮细胞NF-κB p65,PUMA和Caspase-3蛋白表达在12 h后显著增加(P0.05),NF-κB p65与PUMA呈高度正相关(r=0.987,P0.01)。TNF-α,MIP-2,ICAM-1mRNA表达及MPO和Caspase-3活性明显增加(P0.01)。C组肺损伤病理组织学评分在术后各时点较B组显著下降(P0.05),C组12 h后的肺组织NF-κB p65,PUMA和Caspase-3蛋白表达及MPO和Caspase-3活性明显降低(P0.05);TNF-α,MIP-2,ICAM-1 mRNA表达明显下降(P0.05),C组细胞凋亡指数较B组明显降低(P0.01)。结论大鼠SAP-ALI既与NF-κB活化引起的炎症因子释放有关又与NF-κB活化引起的PUMA上调促进细胞凋亡有关。PDTC通过抑制NF-κB活化,下调炎症因子释放及NF-κB活化引起的PUMA表达可抑制肺组织的细胞凋亡,从而减轻SAP-ALI的程度。     

氯化钆预处理对ANP肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞中CYLD及NF-κB的影响

目的:观察氯化钆(GdCl3)预处理对性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肺泡巨噬细胞(AMs)肿瘤抑制因子CYLD及NF-κB的影响,探讨CYLD在ANP肺损伤中所起的作用。方法:36只SD大鼠随机分成正常对照组,ANP组,GdCl3预处理组。采用5%牛磺胆酸钠逆行性胰胆管注射制备ANP动物模型,GdCl3预处理组在造模前30 min经尾静脉注射GdCl3(10 mg/kg)。术后6 h处死各组动物,经支气管肺泡灌洗获取肺泡AMs,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α和IL-1β含量,Western blot检测AMs中NF-κB及CYLD活性水平。检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)的水平变化,并行肺组织病理学检查。结果:假手术组肺组织未见病理改变,ANP组和GdCl3预处理组肺组织均出现充血、水肿、炎性渗出等病理改变,但GdCl3预处理组病变程度轻与ANP组;ANP组肺组织的MPO活性,以及BALF的TNF-α,IL-1β含量较正常对照组明显升高(均P<0.05);正常对照组,ANP组,GdCl3预处理组AMs核蛋白NF-κB的表达量分别为0.08±0.03,0.18±0.06及0.11±0.04,3组AMs的CYLD的表达量分别为0.32±0.09,0.15±0.05和0.27±0.07。ANP组,GdCl3预处理组AMs中NF-κB与CYLD的表达活性均呈负相关(r=-0.708,r=-0.571,均P<0.05)。结论:ANP肺损伤中存在CYLD低表达和NF-κB活化,GdCl3预处理能通过增加CYLD表达,减少NF-κB活化,进而减轻肺损伤。     

不同剂量瘦素对大鼠机械通气肺损伤的影响

目的评价不同剂量瘦素对大鼠机械通气肺损伤的影响。方法健康清洁级SD雄性大鼠48只,6～8周龄,采用随机数字表法分为四组:气管切开保留自主呼吸的假手术组(A组)、机械通气模型组(B组)、瘦素10μg/kg组(C组)和瘦素50μg/kg组(D组),每组12只。采用10%水合氯醛3.5 ml/kg麻醉大鼠,疼痛反射消失后C组腹腔注射瘦素10μg/kg,D组腹腔注射瘦素50μg/kg,A、B组腹腔注射等容量生理盐水,注射后即刻进行气管切开,插管机械通气。A组气管插管后保留自主呼吸,B、C、D组机械通气建立VILI模型,参数设置:V_T 20 ml/kg,RR 80次/分,I∶E 1∶1,FiO_2 21%,PEEP 0 mmHg,通气时间4 h。分别于基础状态、通气结束时抽取股动脉血进行血气分析。通气结束后放血处死大鼠,在4℃下取肺组织并收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF),光镜下进行中性粒细胞计数,采用ELISA法测定TNF-α、IL-6、IL-1β浓度;取肺组织称重,计算肺湿干重比(W/D);观察肺组织病理改变并进行病理评分;采用Western blot检测肺组织研磨液中NF-κB p65含量。结果与A组比较,B、C、D组W/D、肺损伤评分、BALF中性粒细胞计数、TNF-α、IL-6、IL-1β浓度及肺组织NF-κB p65含量明显升高(P0.01)。与B组比较,C、D组BALF中性粒细胞计数、TNF-α、IL-6、IL-1β浓度及肺组织肺损伤评分、NF-κB p65含量明显降低(P0.05)。与C组比较,D组BALF中性粒细胞计数、TNF-α、IL-6、IL-1β浓度及肺组织肺损伤评分、NF-κB p65含量明显降低(P0.05)。结论瘦素可降低大鼠机械通气肺损伤中炎性因子的表达水平,减轻肺损伤,50μg/kg较10μg/kg作用明显。     

肠内免疫微生态营养对大鼠重症急性胰腺炎急性肺损伤保护作用的研究

目的探讨肠内免疫微生态营养对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠急性肺损伤(ALI)的影响。方法将大鼠分为空白组、SAP-ALI组,肠内营养组(EN组)和肠内免疫微生态营养组(EIN组),大鼠SAP采用牛磺胆酸钠造模,EN及EIN组于造模成功后行相应肠内营养支持。72 h后处死大鼠后取肺脏,观察肺组织形态学变化、计算肺损伤评分和湿/干重比;免疫组化检测肺组织TLR 4、NF-κB p65的表达;ELISA法测定血清TNF-α、IL-1β含量。结果与空白组相比,SAP-ALI组肺损伤评分、肺湿/干重比、TNF-α、IL-1β均明显升高(P0.05);免疫组化结果发现,与空白组相比,SAP-ALI组TLR 4、NF-κB p65表达显著增强(P0.05);与SAP-ALI组、EN组相比,EIN组TLR 4、NF-κB p65表达显著降低(P0.05);并且EIN组血清肺损伤评分、肺湿/干重比、TNF-α、IL-1β与SAP-ALI组、EN组比较均显著降低(P0.05)。结论肠内免疫微生态营养有助于降低肠源性内毒素(LPS)的产生,进而降低TLR 4/NF-κB信号通路的激活,从而减轻SAP-ALI的病情。     

利多卡因对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1mRNA表达的影响

目的 探讨利多卡因对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1( HMGB1) mRNA表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠50只,体重200 ～ 250 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n＝10):假手术组(S组)、脓毒症组(L组)、低、中和高剂量利多卡因组(LL1组、LL2组和LL3组).除S组外,其他4组采用盲肠结扎穿孔术制备大鼠脓毒症诱发急性肺损伤模型.LL1组、LL2组和LL3组分别于术毕、术后1、2h时腹腔注射利多卡因5、10、20 mg/kg,S组和L组给予等容量生理盐水.分别于术后24、48 h时处死5只大鼠,取肺组织,测定HMGB1 mRNA表达、髓过氧化物酶(MPO)活性和NF-κB活性,光镜下观察肺组织病理学结果.结果 与S组比较,其他4组肺组织HMGB1 mRNA表达上调,MPO活性升高(P<0.05);与L组比较,LL1组、LL2组和LL3组肺组织HMGB1 mRNA表达下调,MPO活性降低(P<0.01);LL1组、LL2组和LL3组肺组织HMGB1 mRNA表达依次下调,MPO活性依次降低(P<0.05).LL1组、屿LL2和LL3组肺组织NF-κB活性逐渐降低,肺组织损伤程度逐渐减轻.结论 利多卡因减轻脓毒症大鼠急性肺损伤的机制与下调肺组织HMGB1基因表达有关,其下调HMGB1基因表达的机制与抑制NF-κB活化有关.     

甘利欣对体外循环患者急性肺损伤的保护作用

目的 研究甘利欣对体外循环(CPB)所致急性肺损伤的影响及其机制。方法24例风心病心内直视瓣膜置换术患者,随机分为两组,每组12例。甘利欣组(G),麻醉诱导后用10％葡萄糖注射液50ml加甘利欣2.5 mg·kg-1泵入,对照组(C)10％葡萄糖50 ml泵入。于麻醉诱导后10min(T0)、转流后30 min(T1)、开放主动脉后30 min(T2)、术毕(T3)、术后4 h(T4),术后24 h(T5)测血浆TNF-α、IL-1β、IL-11和丙二醛(MDA)的浓度及锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的活性。测定麻醉诱导后10 min(t0)、体外循环后10min(t1)、30min(t2)、术毕(t3)的呼吸指数(RI)。结果 两组 TNF-α、IL-1β、IL-10、MDA和Mn-SOD在体外循环后均有不同程度的增高。G组TNF-α在T1和T2低于C组(P<0.05),在T1-L3、T5,C组IL-1β高于G组,IL-10低于G组(P<0.05);C组MDA在T2-T4高于G组(P<0.05);C组Mn—SOD的活性在T1、T2低于G组(P<0.05或0.01)。C组的RI在转流后升高,且在t1、t3高于G组。结论甘利欣可抑制心脏瓣膜置换术患者CPB引起的炎性反应,减少氧自由基产生,从而减轻体外循环所致的急性肺损伤。     

髓系触发受体-1在脆弱类杆菌诱导小鼠脓毒血症中的作用

目的 探讨小鼠TREM-1基因重组慢病毒干扰载体(Lentivector,LV)TREM-1 vshRNA对脆弱杆菌脓毒血症小鼠脾脏中促炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6表达及NF-κB通路的影响.方法 将清洁级BALB/c雄性小鼠分成4组,即正常对照组(C组),脆弱类杆菌脓毒症模型生理盐水组(S组),TREM-1 vshRNA干扰实验组(T组)和GFPvshRNA干扰实验组(G组).观察各组中小鼠脾内TREM-1,TNF-α,IL-1β,IL-6的蛋白表达以及IkBa,pDAP12,NF-κB p65的表达情况的变化.结果 与C组比,T组TREM-1 mRNA及蛋白表达均有显著增加(P＜0.01);T,G,S组脾细胞中TNF-α,IL-1β,IL-6的含量均较C组显著增加(P＜0.01);T组脾细胞中TNF-α,IL-1β,IL-6的含量均较S,G组明显降低(P＜0.01).S组脾细胞中的pDAPl2和核内NF-κB p65蛋白表达水平明显增强,IκBa蛋白表达水平降低;而T组与S组比较,pDAP12和NF-κB p65蛋白的表达水平显著下调.结论 小鼠TREM-1基因重组慢病毒干扰载体可选择性抑制TREM-1表达,下调脆弱类杆菌诱导的促炎症因子的分泌,而转染可能是通过下调DAPl2的表达,稳定IkBa/NF-κB复合物,抑制TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8基因的转录,而对脆弱类杆菌脂多糖炎症反应产生抑制作用.     

核因子-κB介导脂多糖诱导急性肺损伤大鼠高迁移率族蛋白B1的表达

目的探讨核因子(NF)-κB在脂多糖诱导大鼠急性肺损伤过程中对肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响。方法采用腹腔注射脂多糖(LPS)致大鼠脓毒症急性肺损伤模型。取健康SPF级雄性SD大鼠72只,体重180~220g,采用随机数字表法,分为对照组(C组,n=6)、急性肺损伤组(L组,n=30)、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)溶剂对照组(P组,n=6),PDTC治疗组(LP组,n=30)。各组分别给予腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)(C和P组)或LPS(L和LP组);P组和LP组在PBS或LPS注射前15min,给予腹腔注射PDTC 100mg/kg。C组和P组腹腔注射PBS后的16h,L组和LP组注射LPS后的16h后各取6只大鼠检测其肺湿/干重比(W/D);C组和P组腹腔注射PBS后的16h,L组和LP组注射LPS后的4h(T1)、8h(T2)、16h(T3)、24h(T4)和48h(T5)时各取6只大鼠经处理后采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中髓过氧化物酶(MPO)和白细胞介素6(IL-6)水平,Western blot法检测肺组织HMGB1的表达水平,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织的病理变化。结果与C组比较,L组肺组织W/D、BALF中MPO和IL-6水平明显升高(P0.01),病理切片显示严重肺组织损伤,T2~T4时肺组织中HMGB1的表达水平明显升高(P0.05);使用PDTC治疗后,与L组比较,肺组织W/D、BALF中MPO和IL-6水平明显降低(P0.01),病理示肺损伤程度明显减轻;T2~T4时肺组织HMGB1表达水平明显降低(P0.05)。结论在脂多糖诱导急性肺损伤中,被激活的NF-κB通过介导晚期炎症因子HMGB1的表达来参与急性肺损伤的发生与发展过程。     

硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶体系在脂多糖诱导大鼠急性肺损伤中的作用

目的探讨硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶(H_2S/CSE)体系在脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)中的作用。方法健康雄性SD大鼠48只,随机分为4组:空白对照组(Ⅰ组,n=16)、LPS诱导ALI组(Ⅱ组,n=16)、LPS CSE抑制剂炔丙基甘氨酸(PPG)组(Ⅲ组,n=8)和LPS NaHS组(Ⅳ组,n=8)。分别于给药后(生理盐水或LPS)3h和6h,Ⅰ组和Ⅱ组各处死8只大鼠;于LPS给药后3h,Ⅲ组腹腔注射PPG 30mg/kg(2ml/kg),Ⅳ组腹腔注射NaHS 28μmol/kg,观察3h后处死。观察肺组织病理学结果,计算肺系数、肺湿/干重比(W/D),测定血浆H_2S浓度、肺组织CSE活性、血清IL-1β浓度、肺组织IL-1βmRNA表达和NF-κB p65活性。结果Ⅰ组肺泡结构完整,Ⅱ组出现病理损伤,Ⅲ组病理损伤程度加重,Ⅳ组病理损伤程度较Ⅱ组减轻。与Ⅰ组比较,Ⅱ组和Ⅲ组H_2S浓度和CSE活性降低,IL-1β浓度、IL-1βmRNA表达和NF-κB p65活性升高;Ⅳ组IL-1βmRNA表达和NF-κB p65活性升高,CSE活性降低;Ⅱ组～Ⅳ组肺系数和肺W/D升高。与Ⅱ组比较,Ⅲ组肺系数、肺W/D、IL-1β浓度、IL-1βmRNA表达和NF-κB p65活性升高,H_2S浓度和CSE活性降低;Ⅳ组肺系数、肺W/D降低、H_2S浓度和CSE活性升高,IL-1β浓度、IL-1βmRNA表达和NF-κB p65活性降低(P<0.05或0.01)。结论内源性H_2S/ CSE体系功能下调可能参与了LPS诱导ALI的病理生理过程,外源性NaHS治疗后可在一定程度上减轻大鼠ALI。     

含IκB基因的腺病毒转染对大鼠油酸和内毒素诱发多器官功能障碍综合征的影响

目的 评价含IκB基因的腺病毒转染对大鼠油酸和内毒素(LPS)诱发多器官功能障碍综合征(MODS)的影响.方法 成年SD大鼠50只,雌雄不拘,体重100～120 g,随机分为3组:对照组(C组,n=10)、MODS组(M组,n=20)和IκB基因转染组(T组,n=20).C组尾静脉注射生理盐水0.25 ml/kg,M组和T组尾静脉分别注射油酸0.25 ml/kg;4 h后,C组颈内静脉注射生理盐水1 ml,M组和T组分别注射LPS 3.5 mg/ks(1 ml);同时T组注射含boB基因1 ml的腺病毒(滴度1 × 109 pfu)进行转染.C组于给予生理盐水后7 d、M组和T组于注射LPS或基因转染后1、7 d时,腹主动脉采血样,测定血浆肌酸磷酸肌酶、谷丙转氨酶、总胆红素和肌酐的水平,并进行血气分析;然后处死大鼠,取肝、肺组织,根据阳性细胞百分比和阳性细胞染色程度进行免疫组化染色评分,并测定NF-κB p65蛋白表达水平,以反映NF-κB活性.结果 与C组比较,M组血浆肌酐、谷丙转氨酶、总胆红素和肌酸磷酸肌酶的水平升高,PH值降低,M组和T组PaO2降低,肺、肝组织免疫组化染色评分和NF-κB活性升高(P<0.05);与M组注射LPS后1 d时比较,M组注射LPS后7 d时pH值降低,T组基因转染后1 d时血浆谷丙转氨酶、总胆红素和肌酸磷酸肌酶的水平降低,肝组织NF-κB活性降低(P<0.05);与M组注射LPS后7 d时比较,T组基因转染后7 d时血浆肌酐、谷丙转氨酶、总胆红素和肌酸磷酸肌酶的水平降低,PaO2升高,肺、肝组织免疫组化染色评分降低,NF-κB活性降低(P<0.05).结论 含IκB基因的腺病毒转染可抑制大鼠NF-κB活化,阻断其调控炎性因子的合成,从而减轻油酸和内毒素诱发的MODS.     

硫喷妥钠对内毒素诱导小鼠肺组织NF-κB表达的影响

目的研究硫喷妥钠对内毒素（LPS）诱导小鼠肺组织NF-κB的表达的影响。方法雄性昆明小鼠24只，随机分为4组（n=6）：对照组（C组）、LPS组（L组）、硫喷妥钠处理组（L＋T组）、单纯硫喷妥钠处理组（T组）。C组腹腔注射生理盐水1ml／ks；L组腹腔注射LPS5mg／kg；L＋T组腹腔注射LPS5mg／kg 20min时再注射1％硫喷妥钠注射液60mg/kg；T组单纯腹腔注射1％硫喷妥钠注射液60mg／kg。在注射LPS后3h放血处死小鼠，立即开胸取肺。免疫蛋白印迹法测定肺组织NF-κB p65的表达；酶联免疫吸附法测定肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）含量。结果与C组相比，L、L＋T组肺组织NF-κB p65表达增加，L、L＋T、T组肺组织，TNF-α、IL-1β含量上升（P〈0．05）；与L组相比，L＋T、T组肺组织NF-κB p65表达降低，肺组织TNF-α，IL-1β含量降低（P〈0．05）。结论硫喷妥钠通过下调小鼠LPS诱导的肺组织NF．KB065表达，降低了TNF-α及IL-1β的释放。     

钙调神经磷酸酶在弗氏佐剂致大鼠炎性痛中的作用

目的探讨钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在弗氏佐剂致大鼠炎性痛痛觉过敏中的作用。方法选择雄性SD大鼠75只,体重200~300g,将其随机均分为对照组(C组)、完全弗氏佐剂(CFA)组(F组)和CaN+CFA组(NF组)。C组大鼠右侧后爪趾底注射生理盐水100μl,F组和NF组大鼠右侧后爪趾底注射CFA 100μl制备炎性痛模型,NF组大鼠于右侧后爪趾底注射CFA前1d鞘内注射CaN 10 U。三组大鼠于右侧后爪趾底注射前30 min(T0)、注射后0.5h(T_1)、1h(T_2)、2h(T_3)及4h(T_4)测定大鼠热刺激缩足潜伏期(PWTL);同时各取5只大鼠脊髓组织,Western blot法测定各组大鼠脊髓中CaN、核因子κB(NF-κB)p65蛋白含量;RT-PCR法测定大鼠脊髓中CaN及NF-κB基因的表达。ELISA法测定大鼠脊髓组织中IL-1β、TNF-α和IL-10浓度。结果T_2~T_4时F组,T_3、T_4时NF组PWTL明显短于T0时和C组(P0.05);T_2~T_4时NF组PWTL明显长于F组(P0.05)。T_1~T_4时F组,T_2~T_4时NF组脊髓组织CaN蛋白含量明显低于,NF-κB p65蛋白明显高于T0时和C组(P0.05);T_2~T_4时F组、NF组脊髓组织CaN基因表达、IL-10浓度明显低于,NF-κB基因表达及IL-1β、TNF-α浓度明显高于T0时和C组(P0.05);T_1~T_4时NF组脊髓组织CaN蛋白含量和基因表达明显高于,NF-κB p65蛋白含量和基因表达及IL-1β、TNF-α明显低于,IL-10浓度明显高于F组(P0.05)。结论 CaN通过抑制NF-κB,调节抗炎细胞因子和促炎细胞因子的平衡,抑制大鼠炎性痛的发生发展。     

二硫代氨基吡咯烷预先给药对内毒素诱发大鼠急性肺损伤的影响

目的 评价二硫代氨基吡咯烷预先给药对LPS诱发大鼠急性肺损伤的影响.方法 健康成年Wistar大鼠54只,雌雄各半,体重180～220 g,随机分为3组:对照组(C组,n=6)、LPS组(n=24)和二硫代氨基毗咯烷预先给药组(PDTC组,n=24).LPS组腹腔注射LPS 8 mg/kg;PDTC组经尾静脉注射二硫代氨基吡咯烷120 mg/kg,30 min后腹腔注射LPS 8 mg/kg;C组注射等容量生理盐水.LPS 组和PDTC组分别于给予LPS后1、3、6和12 h时,C组于给予生理盐水后即刻,经下腔静脉取血后,各处死6只大鼠,取肺组织,采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清IL-6浓度,计算肺组织湿重与干重的比值(W/D比),采用免疫组化法测定肺组织HSP70的表达和NF-κB 的活性,电镜下观察肺组织超微结构.结果 与C组比较,LPS组和PDTC组肺组织W/D比和NF-κB活性升高,HSPT0表达上调,血清IL6浓度升高(P<0.01);与LPS组比较,PDTC组肺组织W/D比和NF-κB活性降低,HSP70表达上调,血清IL-6浓度降低(P<0.01),肺组织病理损伤减轻.结论 二硫代氨基吡咯烷预先给药可减轻LPS诱发大鼠急性肺损伤,其机制可能与抑制肺组织NF-κB的活性和上调HSPT0的表达有关.     

异丙酚对内毒素性急性肺损伤大鼠中性粒细胞NF-κB活化的影响

目的 探讨异丙酚对内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠中性粒细胞NF-κB活化的影响.方法 健康清洁级SD大鼠60只,3月龄,体重250～350 g,雌雄不拘,随机分为5组(n=12):对照组(C组)、ALI组和不同剂量异丙酚组(Pl组、P2组、P3组).ALI组经股静脉注射LPS 5 mg/kg;Pl组、P2组和P3组经股静脉注射LPS 5 mg/kg后立即分别静脉输注异丙酚5、10和15 mg·kg-1·h-1,输注时间2 h;C组经股静脉注射10 ml生理盐水.异丙酚输注结束时,行肺组织病理学评分,采集颈动脉血样,测定中性粒细胞总NF-κB和活化的NF-κB的表达水平.结果 与C组比较,ALI组、P1组和P2组肺组织病理学评分和中性粒细胞活化的NF-κB表达水平升高,P3组肺组织病理学评分升高(P＜0.05);与ALI组比较,P2组和P3组肺组织病理学评分降低,P1组～P3组中性粒细胞活化的NF-κB表达水平降低(P＜0.05);P1组～P3组肺组织病理学评分和中性粒细胞活化的NF-κB表达水平依次降低(P＜0.05);各组中性粒细胞总NF-κB表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚减轻大鼠内毒素性急性肺损伤的机制可能与抑制外周血中性粒细胞NF-κB的活化有关.     

洛沙坦对糖尿病小鼠机械通气相关肺损伤的影响

目的 评价洛沙坦对糖尿病小鼠机械通气相关肺损伤的影响.方法 SPF级雌性C57/BL6小鼠48只,10 ～ 12周龄,体重20 ～ 25 g,采用随机数字表法,将小鼠随机分为3组(n=16)∶对照组(C组)、糖尿病机械通气组(DM组)和洛沙坦组(L组).DM组和L组采用腹腔注射链脲佐菌素150mg/kg的方法制备糖尿病模型.取糖尿病模型制备成功的小鼠进行机械通气4h,吸入氧浓度50％,通气频率70次/min,潮气量15 ml/kg,PEEP 2 cm H2O.L组于机械通气前30 min腹腔注射洛沙坦30mg/kg.机械通气4h时采集颈动脉血样,测定PaO2,随后处死,取肺组织,测定湿/干重比(W/D比)、髓过氧化物酶(MPO)活性和肺微血管通透性;采用实时荧光定量RT-PCR法测定血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体AT1 mRNA的表达水平;ELISA法测定AngⅡ的含量;Western blot法测定细胞核内NF-κB p65的表达水平.结果 与C组比较,DM组和L组PaO2降低,肺组织W/D比、MPO活性、肺微血管通透性和AngⅡ含量升高,AT1 mRNA和NF-κB p65表达上调(P＜0.05);与DM组比较,L组PaO2升高,肺组织W/D比、MPO活性、肺微血管通透性和Ang Ⅱ含量降低,AT1 mRNA和NF-κB p65表达下调(P＜0.05).结论 洛沙坦通过抑制AT1受体和Ang Ⅱ水平,从而改善肺微血管通透性和抑制NF-κB活化,减轻糖尿病小鼠机械通气相关肺损伤.     

右美托咪定对撞击性肺损伤大鼠的肺保护作用

目的探讨右美托咪定对撞击性肺损伤大鼠肺部的保护机制。方法清洁级成年雄性SD大鼠40只,随机均分为五组:正常对照组(C组)、右美托咪定组(D组)、胸部创伤模型组(T组)、胸部创伤模型~+右美托咪定处理组(TD组)和胸部创伤模型~+右美托咪定~+育亨宾(α2肾上腺素能受体阻断剂)组(TDY组)。C和D组只麻醉不创伤,T、TD、TDY组复制大鼠胸部撞击模型。持续监测五组大鼠创伤后0.5、1、2、4和6h的有创平均动脉血压(MIAP),处死前抽取动脉血0.5ml行动脉血气分析;采用免疫组织法检测肺组织NF-κBp65的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中TNF-α和IL~(-1)β浓度;检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞占白细胞百分比(PMN),计算肺湿/干比(W/D);HE染色光镜下观察肺组织病理改变。结果创伤后0.5、1、2h时D组MIAP明显高于T组,创伤后4和6h时D组MIAP明显低于C和T组(P0.05);创伤后1hTDY组MIAP明显高于,创伤后4和6hTDY组MIAP明显低于C和TD组(P0.05)。T、TD和TDY组PaO_2、PaCO_2明显低于,pH、TNF-α和IL~(-1)β浓度明显高于C组(P0.01)。D、TD和TDY组PaO_2、PaCO_2明显高于,血清TNF-α和IL~(-1)β浓度明显低于T组(P0.01),T组pH明显高于D组,但明显低于TD、TDY组(P0.01)。D组肺组织NF-κBp65,T、TD和TDY组肺组织NF-κBp65、W/D和PMN明显高于C组(P0.05);D、TD、TDY组肺组织NF-κBp65、M/D和PMN明显低于T组(P0.01);TDY组肺组织NF-κBp65、M/D和PMN明显高于TD组(P0.01)。结论盐酸右美托咪定可通过抑制肺组织和血清中炎症因子的表达减轻创伤性肺损伤的程度。