结核病的实验室快速诊断

1 引言 结核病是由结核分枝杆菌(结核杆菌)引起的慢性传染病,几乎全身各组织器官均可发生,以肺结核最为常见,占90%.WHO报告显示,近10年来,结核病以极为迅猛的势头再次肆虐全球,目前已跃升为人类健康的头号杀手,估计每年有800万～1 000万新发病例,约300万人死于结核病.2000年我国第4次结核病流行病学调查资料显示,我国每年新发病例约450万,死亡13万.疫情严峻的原因与临床诊断技术和新药研制滞后,防治不力,结核杆菌与人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)双重感染以及耐药结核病人数的急剧增加等有关.早期发现和早期诊断结核病病人,给予有效的治疗,是减少传播机会、控制结核病疫情的关键环节.     

高通量测序用于结核病诊断的研究进展

结核病是一类常见的感染性疾病,它具有传染性、隐匿性和慢性化的特点,早期诊断有利于阻断结核病传播,并减少耐药结核发生率.目前应用于临床的结核病检测方法在早期诊断方面有明显的局限性.高通量测序又称为二代测序或下一代测序(NGS),作为新兴的基因测序方法,有望提高结核病早期诊断率.NGS不仅能快速检出结核分枝杆菌复合群,也能...     

早期诊断技术的突破是当前控制结核病的关键

准确、快速及简便的早期诊断技术是目前结核病控制中的亟待解决的关键问题，本文介绍了两种具有较好应用前景的结核病早期诊断技术，并针对我国结核病早期诊断技术研发中存在的问题提出了我们的建议。     

结核分枝杆菌katG蛋白的表达和纯化及血清学诊断价值

本研究通过基因工程技术克隆、表达结核分枝杆菌 (结核菌 )katG蛋白 ,研究其免疫学特性及血清学诊断价值 ,为研制更有效的结核病免疫诊断试剂和新型的结核病疫苗奠定基础。一、材料和方法1.材料来源 :含结核菌katG编码基因的大肠埃希菌工程菌由我室构建 ;33例结核病人血清来自我院结核科已确诊为结核病的住院病人 ;33名正常人血清来自我院门诊健康体检者 ;辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG购自北京鼎国生物公司 ;结核菌PPD由中国药品生物制品鉴定所惠赠。2 .质粒DNA的提取 :参照《分子克隆实验指南》介绍的碱裂解法。3.katG基因的诱导表…     

结核分枝杆菌MPT64基因克隆与表达质粒构建

[目的] 克隆并构建编码结核分枝杆菌MPT64分泌蛋白的重组表达质粒。[方法] 采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出MPT64基因(687bp)，并克隆到T载体，然后用双内切酶消化后，与同样酶消化的pGEX-4T-2连接，转化大肠杆菌E．coil DH5α，阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。[结果] 酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符，测序结果与文献报道一致，证实符合表达框架。[结论] 成功地克隆并构建了MPT64基因的重组表达质粒pGEX-MPT64。     

结核病诊断技术方法的选择及实验室诊断路径

正结核病是由结核分枝杆菌感染引发的全身多系统疾病,是一种慢性传染病,严重危害人类健康[1]。目前,结核病仍是发展中国家的主要健康问题,被评为第一大感染性疾病。世界卫生组织(WHO)估计每年有960万例新发结核病病例,全球每年死亡人数超过150万人。控制和及时管理结核病的最大障碍是缺乏快速、准确和具有成本效益的检测方法。在偏远地区,结核病诊断依赖于临床样品中的抗酸杆菌(AFB)的微观观     

两种结核分枝杆菌抗原在结核病血清学诊断中应用价值的比较

目的研究结核分枝杆菌脂多糖抗原(LAM)和结核分枝杆菌重组38KD蛋白抗原(r38KD)在结核病血清学检测中的效果,探索更有价值的结核血清学诊断方法。方法应用酶联免疫吸附试验对100例结核病患者血清、100例健康人血清中的抗结核抗体进行检测,并对检测结果进行统计分析。结果结核组中抗LAM抗体和抗38KD抗体均显著高于非结核对照组(P0.05),且两种抗原对结核病检测具有互补性。结论将LAM和38KD两种不同的结核分枝抗原进行组合可提高检测的特异度,有利于结核病的血清学诊断。     

结核分支杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6研究新进展

结核分支杆菌的多种分泌蛋白已成为现今对该菌研究的热点,如Ag85复合物、MPT64、ESAT-6及Mtb8.4等,其中结核分支杆菌早期分泌性抗原靶(ESAT-6)是从结核杆菌短期培养滤波(ST-CF)中分离的一种低分子量分泌性蛋白,具有较强的细胞免疫活性,在卡介苗(BCG)各菌株中缺乏其编码基因,可望成为人和动物结核病的特异性诊断试剂、抗结核病亚单位疫苗的侯选抗原和结核病DNA疫苗的侯选目的基因。     

结核分枝杆菌蛋白抗原诊断试剂的临床价值研究

目的研究和评估基于结核分枝杆菌蛋白抗原(TB-SA)研制的结核诊断试剂盒在结核病诊断中的应用价值。方法运用胶体金法分别检测结核组、非结核其他呼吸系统疾病组、健康对照组血清TB-SA结核抗体。结果 TB-SA结核抗体检测结核的灵敏度为72.2%,特异度95.8%,检测结核病患者阳性率(72.2%)明显高于涂片法(44.9%)和培养法(37.1%),差异均有统计学意义(P0.05)。结论 TB-SA抗体检测具有较好的敏感性和特异性,对结核病诊断和鉴别诊断有较高的临床应用价值。     

体腔液中结核抗体检测对结核病的诊断价值

结核病,特别是肺外结核,仍然是常见且难于诊断的疾病之一。虽然从体腔液中查出结核菌可确定诊断,但由于检出率太低(<10％),远不能满足临床需要。我院自1996年2月至1998年5月用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法共检测42例脑脊液和166例胸腹水心包液的结核抗体(抗PPD-IgG),现报道如下。 1 材料和方法 1.1 对象 ①结核组:包括结核性脑膜炎(结脑)26例,结核性胸腹膜心包炎121例,均来自本院内科,系根据临床、生化或细     

结核分支杆菌ESAT6-MPT64融合蛋白的构建及应用性初步研究

目的:构建表达结核分支杆菌ESAT6和MPT64融合蛋白,并评价其在血清学诊断中的价值。方法:PCR法扩增esat6和mpt64基因,构建原核表达载体pProEX HTb-EM,表达、纯化ESAT6-MPT64融合蛋白,Western-blot分析其抗原性。用该重组蛋白ELISA法检测结核病患者血清。结果:原核表达的ESAT6-MPT64融合蛋白约40 000,Western-blot证实重组蛋白与ESAT6和MPT64多克隆抗体特异结合。重组蛋白用于检测结核病患者血清,敏感性为67.7%,特异性为82%。结论:重组的ESAT6-MPT64融合蛋白有可能用于结核病免疫诊断试剂的制备。     

实时荧光定量聚合酶链反应在肺结核诊断中的应用

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)在肺结核诊断中的应用价值。方法应用FQ-PCR对临床诊断肺结核及其他肺部疾病患者的临床标本进行结核分枝杆菌DNA定量检测,同时与涂片抗酸染色、BACTEC 960培养法作比对。结果 189例临床诊断肺结核患者FQ-PCR检测123例阳性,提示敏感度为65.1%(123/189),而涂片抗酸染色、BACTEC 960培养法分别为40.2%(76/189)、63.5%(120/189)。94例其他肺部疾病患者及20例健康对照者FQ-PCR检测均为阴性,特异度为100.0%。结论 FQ-PCR敏感度和特异度均高,检测过程简单、易标准化、全过程仅需4～5h,可用于结核病的快速诊断。     

噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌的临床应用

目的 探讨噬菌体生物扩增法（Phab）快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法 应用Phab、BACTEC-460检测仪及厚涂片法共同检测206例痰标本。结果 58例涂片阳性、BACTEC-460培养阳性的标本中．Phab检测阳性55例（94．8％）;47例涂片阴性、BACTEC-460、培养阳性的标本中,Phab检测阳性35例（74．4％）;101例涂片阴性、BACTEC-460培养阴性的标本中,Phab检测阳性25例（24．8％）。结论 Phab快速、简便、灵敏,有助于结核分枝杆茵的快速检测,可用于结核病的初步诊断,但测定条件的选择非常重要。     

快速诊断技术在活动性肺结核的临床应用价值

目的探讨联合应用痰抗酸涂片、γ-干扰素体外释放试验(TB-IGRA)、TB-DNA在活动性肺结核诊断的临床应用价值。方法选取苏州第五人民医院肺结核患者803例,以肺部非结核疾病患者216例作对照,采用以上3种快速诊断技术进行检测,研究其在活动性肺结核的诊断效能。结果单一检测指标曲线下面积(AUC)两两比较,痰抗酸涂片检测AUC(0.675)最小,诊断效能最差,其敏感性及特异性分别为35.87%、99.07%;TB-IGRA检测AUC(0.771)最大,诊断效能最好,其敏感性及特异性分别为88.54%、65.74%。二联或三联组合检测两两比较,痰抗酸涂片+TB-IGRA、TB-IGRA+TB-DNA及痰涂片+TB-IGRA+TB-DNA的AUC较大,均大于痰抗酸涂片+TB-DNA,差异有统计学意义(P0.05),而痰抗酸涂片+TB-IGRA、TB-IGRA+TB-DNA及痰涂片+TB-IGRA+TB-DNA间差异无统计学意义(P0.05)。结论与单一指标诊断比较,多项指标联合诊断可提高其肺结核诊断的敏感性,从成本效益学角度考虑,痰抗酸涂片+TB-IGRA、TB-IGRA+TB-DNA联合检测AUC较大,检验效能较好。     

结核分支杆菌对阿米卡星的耐药性研究

目的了解阿米卡星对耐药结核分支杆菌是否有效。方法5种不同浓度的抗结核药物培养基内加入结核分支杆菌浓度为0．1mg／mL的菌液0．1mL,4周后观察耐药情况。结果5种抗结核药物不同浓度,对结核分支杆菌有不同的敏感性和耐药性,其中以加入阿米卡星药物抗菌活性良好。结论阿米卡星为二线抗结核药物,对治疗耐药结核分支杆菌有效。     

噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌的临床应用

目的探讨噬菌体生物扩增法（料-aB）快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法对108例肺结核患者痰标本进行噬菌体裂解试验，并与集菌涂片，BacT／ALERT 3D检测仪法相比较。结果噬菌体裂解法阳性率59．3％（64／108），与集菌涂片法28．7％（31／108）、BacT／ALERT3D检测仪法43．5％（47／108）相比差别有显著意义。结论PhaB快速、简便、灵敏、特异，有助于结核分枝杆菌的检测，可用于结核病的快速诊断。     

分子诊断技术在耐多药结核分枝杆菌检测中的应用进展

在过去的十年间,多种分子诊断方法应用于耐多药结核分枝杆菌的检测,包括微阵列法、直接测序法、电泳或者杂交的方法等.本文拟对这些方法的优缺点、检测靶标基因与传统检测方法之间的比较及未来临床应用前景作简要综述.     

噬菌体裂解法检测结核杆菌药物敏感性的研究

目的利用结核分支杆菌噬菌体裂解法检测结核杆菌对利福平、异烟肼、链霉素敏感性。方法选用传统方法判定为利福平、异烟肼、链霉素的耐药或敏感菌株,采用噬菌体裂解法检测其对以上三种药物的敏感性,对比其特异性和敏感度。结果运用噬菌体裂解法检测结果显示,异烟肼药物浓度为1μg/ml时,其灵敏度为87.0%,特异度为93.3%,与传统方法的符合率为92.0%;链霉素药物浓度为4μg/ml时,其灵敏度为96.2%,特异度为92.0%,与传统方法的符合率为92.9%;利福平药物浓度为5μg/ml时,其灵敏度为91.4%,特异度为96.2%,与传统方法的符合率为94.7%。结论采用噬菌体裂解法检测结核杆菌药物敏感性简便易行,灵敏度、特异度高,与传统方法比较符合率较高,便于临床推广。     

结核蛋白芯片对肺结核及肺外结核的诊断价值

目的探讨结核蛋白芯片检测对诊断肺结核及肺外结核的价值。方法使用蛋白芯片系统检测血清结核抗体的病例共4765例,其中肺结核334例,肺外结核83例,肺结核并肺外结核69例,非结核病4279例。我们采用的蛋白芯片包含了结核分枝杆菌（MTB）中5种成分,即ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD。结果 334例肺结核中227例结核抗体阳性,83例肺外结核中50例阳性,69例肺结核并肺外结核中51例阳性,4279例非结核病797例阳性,结核蛋白芯片检测肺结核的阳性率为67.96%,肺外结核的阳性率为60.24%,肺结核并肺外结核的阳性率为73.91%,非结核病的阳性率为18.62%。结论结核蛋白芯片是对肺结核及肺外结核的辅助诊断有重要价值。但在淋巴结结核、结核性胸膜炎中阳性率偏低,敏感性稍差。