眼镜蛇神经毒素的镇痛作用

眼镜蛇神经毒素(NT)在小鼠热板及大鼠电尾嘶叫测痛模型,都显示出明显的镇痛作用,并有剂量-效应关系。注射NT 0.022mg/kg,2h后,大鼠痛阈出现显著上升,3h后达到较佳效果,并能保持其效应强度达24h。连续给小鼠注射NT 0.023mg/kg,持续9d,小鼠并不产生耐受现象。结果提示,NT的镇痛机理可能与吗啡不同。     

眼镜蛇神经毒素的规模化制备及其镇痛作用的研究

目的 建立一种快速、规模化制备眼镜蛇毒神经毒素的方法.方法 采用CM-sephadex C-25和CM-sepharose fast flow离子交换柱层析纯化经初步处理的眼镜蛇毒;SDS-PAGE和HPLC检测产物的纯度;离体蛙心和红细胞溶血试验检查产物的心脏毒性和溶血性;小白鼠热板模型、醋酸扭体模型和大白鼠电刺激嘶叫模型评价产物的镇痛作用.结果 制备的产物可达到电泳纯和HPLC单一峰,无心脏毒性和溶血活性,镇痛作用强,但起效慢.结论 所用工艺适合眼镜蛇毒神经毒素工业化制备的需要.     

中华眼镜蛇神经毒素的活性研究

目的研究中华眼镜蛇神经毒素(NT)的镇痛活性和对离体蛙腹直肌N2-AChR的拮抗作用。方法采用三种模型(电刺激-嘶叫法,热板法,醋酸扭体法)观察NT的镇痛活性,并观察NT对ACh所致蛙离体腹直肌收缩的影响。结果 NT能提高电刺激-嘶叫法,热板法的痛阈,抑制醋酸引起的扭体次数。NT镇痛具有剂量-效应关系,给药后2 h起效,5 h达峰。NT能使ACh引起的蛙腹直肌收缩的量效曲线平行右移。结论 NT对三种致痛模型均有确切的镇痛活性,NT对N2-AChR的拮抗作用为竞争性拮抗。     

眼镜蛇短链神经毒素镇痛和抗吗啡依赖作用实验研究

目的：眼镜蛇短链神经毒素（Cobratoxin，CTX）是从眼镜蛇蛇毒中提纯的短链α-神经毒素，是nACHR拮抗剂，特别是α7-受体亚型拮抗剂。本研究考察CTX是否有抗炎性疼痛和吗啡依赖的作用，并初步探讨其可能的作用机制。方法：采用5％福尔马林足皮下注射造成大鼠急性炎性疼痛和完全弗氏佐剂致大鼠慢性炎症模型，考察CTX是否具有抗炎性疼痛的作用；采用递增给药方式建立吗啡依赖小鼠和大鼠模型以及行为敏化模型探讨CTX的抑制吗啡依赖作用。     

舟山眼镜蛇毒神经毒素的分离纯化及镇痛作用研究

目的从舟山眼镜蛇毒中分离纯化神经毒素,并测定其部分理化性质及镇痛活性。方法应用SP-Sephadex C-50离子交换色谱法分离眼镜蛇毒粗毒,用Sephadex G-50凝胶过滤色谱、CM-Sephadex C-25离子交换色谱纯化神经毒素;SDS-PAGE(Tris-Tricine系统)鉴定纯度;用Meier方法测定毒性;用热板法观察神经毒素的镇痛作用。结果应用SP-Sephadex C-50离子交换柱层析,从舟山眼镜蛇毒中分离得到14个蛋白峰,其中6个组分(NNAV-Ⅶ ~Ⅻ)经鉴定为含有神经毒素组分,将神经毒活性最强的组分XI经Sephadex G-50、CM-Sephadex C-25纯化得神经毒素纯品NTⅪ。该纯品分子量12.3kD,小白鼠静脉注射和腹腔注射的LD50分别为1.9875、2.2217 mg·kg-1。NTXI能显著提高小鼠对热板刺激的痛阈。腹腔注射0.2mg·kg-1NTXI可使小鼠的热板痛阈提高84.35%。NTXI的镇痛作用具有时效性,给药后2h起效,4h作用达峰值。结论舟山眼镜蛇毒中分离得到一个神经毒素纯品NTⅪ,具有镇痛作用。     

中华眼镜蛇神经毒素微球的制备及镇痛作用研究

目的研究中华眼镜蛇神经毒素PLGA微球制备及通过鼻黏膜给药的镇痛作用。方法采用复乳溶剂挥发法制备眼镜蛇神经毒素PLGA微球,采用大鼠甩尾法测定其镇痛效果。结果采用W/O/O方法,成功制备出中华眼镜蛇神经毒素鼻腔给药PLGA微球,微球平均粒径25μm左右,药物包埋率达80%以上。通过大鼠甩尾法显示明显的镇痛效果。结论将中华眼镜蛇神经毒素制成微球制剂鼻腔给药,镇痛作用明显增强。     

眼镜蛇神经毒素大鼠不同脑区给药的镇痛作用研究

目的研究眼镜蛇神经毒素不同脑区给药的镇痛作用。方法大鼠30只分为对照组、中脑导水管组、第三脑室组、下丘脑组和尾状核组,对照组注射生理盐水组,第三脑室组注射10μL神经毒素,其他组注射0.5μL神经毒素,采用热水浴甩尾法测定痛阈。结果与对照组相比,其他组大鼠痛阈显著提高(P<0.01)。结论眼镜蛇神经毒素具有很强的中枢性镇痛作用,下丘脑部位注射效果最强。     

转铁蛋白受体单克隆抗体OX26修饰的眼镜蛇神经毒素脂质体的制备及其对小鼠的镇痛作用研究

目的:制备转铁蛋白受体单克隆抗体OX26修饰的眼镜蛇神经毒素(αCT)脂质体(OX26-αCT-LP),考察其理化性质、体外释放行为,并研究其镇痛作用。方法:采用薄膜分散-挤出法制备αCT-LP,巯基化后的OX26再与脂质体相连制得OX26-αCT-LP。考察所制脂质体的形态、粒径、Zeta电位;采用透析袋法考察OX26-αCT-LP和αCT-LP在p H 7.4的磷酸盐缓冲液中60 h内的释放特性;采用小鼠热板法考察鼻黏膜滴注生理盐水、αCT原料药、αCT-LP和OX26-αCT-LP对小鼠舔后足反应潜伏期的影响。结果:所制OX26-αCT-LP形态呈球形,均匀圆整,平均粒径为(106.3±5.36)nm,Zeta电位为(-23.17±1.14)m V,药物包封率为(56.82±1.18)%;OX26-αCT-LP和αCT-LP的体外释药行为均符合Weibull方程(r=0.986 7、0.981 0);与生理盐水比较,αCT-LP和OX26-αCT-LP给药后60~480 min内能明显延长小鼠舔后足反应的潜伏期(P<0.01或P<0.05),且OX26-αCT-LP效果强于αCT-LP(P<0.01)。结论:成功制得对小鼠有一定镇痛作用的OX26-αCT-LP。     

眼镜蛇神经毒素分离纯化及其经大鼠直肠给药吸收的实验研究

目的 利用色谱技术从眼镜蛇粗毒中分离纯化神经毒素,探索神经毒素经大鼠直肠途径给药后的吸收情况和镇痛活性。方法 通过CM Sepharose Fast Flow阳离子交换色谱和Sephadex G-50凝胶过滤色谱两步法分离纯化神经毒素。采用免疫组织化学技术观察神经毒素在大鼠直肠组织中的分布。利用Shotgun质谱技术和数据库检测大鼠血浆神经毒素片段。利用HE染色观察神经毒素对大鼠直肠组织结构的影响。利用醋酸扭体法测定神经毒素直肠给药后镇痛活性。结果 通过色谱分离纯化得到电泳纯的神经毒素。神经毒素直肠给药3 h后直肠黏膜组织内神经毒素分布明显,阳性面积比率、平均光密度值、H-SCORE值与对照组相比差异明显(P<0.01)。质谱检测到大鼠血浆中神经毒素有关片段。HE染色表明神经毒素对大鼠直肠组织没有损伤,组织结构无明显病理变化。醋酸扭体法测定小鼠直肠给药神经毒素3 h后扭体抑制率达50%,提示具有镇痛活性。结论 眼镜蛇神经毒素可以通过直肠吸收入血并且发挥镇痛作用,为后续研究眼镜蛇神经毒素直肠给药制剂提供实验依据。     

眼镜蛇神经毒素对大鼠脑内脑啡肽含量及豚鼠回肠和小鼠输精管收缩的影响

连续注射1wk眼镜蛇神经毒素后,用放射免疫测定法测定对照组及神经毒素组大鼠5个脑区亮啡肽样免疫反应物质及甲硫啡肽样免疫反应物质的含量。神经毒素组两种脑啡肽样物质在下丘脑、中脑+丘脑两个脑区的含量变化均出现明显升高(p<0.05),海马及后脑的含量均无显著变化。吗啡在很低浓度对低频电刺激豚鼠回肠及小鼠输精管收缩有明显抑制作用。神经毒素的存在与否并不影响吗啡的效应。结果提示,神经毒素可能并不直接与吗啡受体产生相互作用,但其镇痛机理可能涉及中枢内源性阿片肽能系统。     

眼镜蛇毒素抗关节炎作用实验研究

祖国传统医学认为眼镜蛇及其毒性成分可通经络 ,祛风湿 ,并具有强身健体之功效[1] 。为了研究眼镜蛇毒素的抗类风湿性关节炎 (ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＲＡ)作用及其合适的给药途径与剂量 ,对眼镜蛇毒素进行不同方式和程度的修饰减毒 ,观察比较其抗炎效果。1　材料眼镜蛇毒素、银环蛇毒素 ,均购自江西景德镇经公桥蛇场 ,经卫生部上海生物制品研究所检定处检验合格 ;卡介苗冻干粉 ,卫生部上海生物制品研究所产品 ,批号 990 10 1,60℃灭活 1ｈ ,用高压灭菌石蜡油配成 10ｇ·Ｌ-1佐剂备用 ;布洛芬片 ,上海法玛赛制药有限公司。…     

抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其对眼镜王蛇毒的中和作用

目的：探讨抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其在体内外对眼镜王蛇毒的中和作用。方法：采用嗜硫色谱法一步分离纯化抗眼镜王蛇毒卵黄抗体,通过间接ELISA法对制备的抗眼镜王蛇毒卵黄抗体进行免疫活性检测,采用小鼠体内外保护实验评估抗眼镜王蛇毒卵黄抗体对眼镜王蛇毒的中和作用。结果：嗜硫色谱法制备的卵黄抗体具有良好的免疫活性,并且对眼镜王蛇毒素显示较好的中和效应,在体外6mg/kg抗眼镜王蛇毒卵黄抗体可有效地中和约4LD50（约1.6mg/kg）的眼镜王蛇毒素,而在体内可有效地中和约3LD50（约1.2mg/kg）的眼镜王蛇毒素。结论：抗眼镜王蛇毒卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有良好的中和作用,本项目为抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的进一步研究开发提供实验依据。     

眼镜蛇毒素抗类风湿性关节炎实验研究

目的 :观察眼镜蛇 (Najanaja)毒素的抗炎作用。方法 :采用大鼠佐剂性关节炎和大鼠棉球肉芽肿模型。结果 :眼镜蛇毒素对佐剂性关节炎模型大鼠的踝关节肿胀程度无明显影响 ,但使大鼠棉球肉芽肿重量显著减轻 (P <0 0 5 )。结论 :眼镜蛇毒素对关节滑膜增生可能有一定保护或逆转功能。     

眼镜蛇毒因子激活补体对大鼠外周血白细胞数目和功能的影响

目的：观察眼镜蛇毒因子（ＣＶＦ）激活补体对大鼠外周血白细胞数目和功能的影响。方法：采用吞噬金葡菌法、玻璃血球计数板法分析测定白细胞的吞噬和粘附功能。结果：ＣＶＦ１．０ｍｇ·ｋｇ－１ｉｐ，能使外周血白细胞吞噬和粘附功能显著升高，白细胞的吞噬率从２０．７％±４．９％上升至４２．５％±５．５％，粘附率从７３．４％±８．３％上升至９３．６％±９．８％；同时外周血白细胞数目短暂下降后显著增多。结论：ＣＶＦ激活补体可使外周血白细胞数明显改变并显著增强其功能，提示补体可能参与白细胞功能的调节。     

眼镜蛇毒因子的研究进展

目的：介绍眼镜蛇毒因子的性质,应用现状及发展前景,方法：参考国内外的文献,介绍眼镜蛇毒因子的理化性质,分子生物学特性,免疫学作用机制及其临床应用。结果与结论：眼镜毒因子的一种强效的补体抑制剂,具有突出的优点和特异的临床应用范围,有广阔的开发前景。     

中华眼镜蛇毒活性组分选择性抑制内皮细胞增殖

目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(Ch ina cobra venomactive factor,CCVAF)对内皮细胞增殖的选择性抑制作用。方法实验分对照组和不同浓度的CCVAF组,应用MTT法分析CCVAF对牛肺主动脉内皮细胞(bovine arteria pu lmona-lis vascu lar endothelial cells,BAVEC)、SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞(smooth musc le cells,SMC)、人胚肺成纤维细胞HLF以及人支气管上皮细胞HBE生长增殖的影响;并运用直线回归分析统计对比CCVAF在不同时间点对BAVEC的IC50及上述各细胞的24 h IC50。结果CCVAF呈剂量及时间依赖性抑制内皮细胞的增殖:6、12、24、48、72 h其IC50分别为4.955、4.932、2.443、3.048、3.133 mg.L-1,24 h抑制作用最强;观察此时浓度与抑制作用的关系,0.625、1.25、2.5、5、10、20 mg.L-1,抑制率分别是4.41%、30.94%、61.81%、86.17%、96.05%、98.68%,10 mg.L-1抑制率即达高峰,且各浓度组抑制作用与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。CCVAF抑制内皮细胞增殖具有一定的选择性,作用24 h后,抑制BAVEC生长的作用明显高于其它3种细胞,对BAVEC、HLF、HBE、SMC的24 h IC50分别为2.443、22.233、35.318、32.810 mg.L-1。结论CCVAF能够选择性抑制内皮细胞增殖,这在抗血管生成及其靶向治疗研究中可能具有重要意义。     

眼镜蛇毒因子对大鼠油酸型肺损伤的保护作用

采用大鼠油酸型呼吸窘迫综合征的病理模型（ｉｖ油酸０．１ｍＬｋｇ－１）．实验前２４ｈｉｐ眼镜蛇毒因子（ＣＶＦ）１．０ｍｇｋｇ－１耗竭体内补体，能显著对抗油酸引起的肺损伤：使支气管肺泡灌洗液中的细胞计数从（１５±１１）×１０１０Ｌ－１下降至（６±４）×１０１０Ｌ－１，蛋白质含量从５．２±１．９ｇＬ－１降至２．４±１．３ｇＬ－１；减少氧自由基的产生，血清超氧化物歧化酶活性下降和丙二醛含量升高明显受到抑制；降低溶酶体酶的释放，表现为血清β－葡萄糖醛酸酶活性降低；肺病理形态学的改变减轻，其中肺水肿程度，透明膜和肺动脉血栓形成均明显减轻．结果表明补体可能在油酸性肺损伤中起着重要作用，ＣＶＦ耗竭补体能显著减轻肺损伤．     

中华眼镜蛇毒活性组分抑制微血管形成研究

目的探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)抗血管生成的作用。方法采用原代培养牛肺主动脉内皮细胞克隆形成实验、Transwell小室趋化实验及大鼠胸主动脉环体外无血清培养微血管样结构形成实验,分别观察CCVAF对内皮细胞克隆形成、细胞迁移及大鼠动脉环微血管生成的影响。结果 CCVAF浓度为1.25,2.5,5.0μg/mL时,其对内皮细胞克隆形成抑制率分别为17.7%,40.3%,62.9%,呈浓度依赖性(r=0.982,P<0.05),而对内皮细胞迁移抑制率分别为20.5%,59.0%,73.5%,呈浓度依赖性(r=0.902,P<0.05);大鼠动脉环培养至第13天,CCVAF组较溶剂对照组微血管生成率下降了86.5%,CCVAF+VEGF组较VEGF对照组微血管生成率下降了88.1%。结论 CCVAF能够抑制内皮细胞克隆的形成、Hela细胞诱导的内皮细胞迁移和大鼠动脉环微血管的生成。     

眼镜蛇毒活性组分抑制内皮细胞生长及其生化机制初探

目的探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)抑制新生牛肺主动脉血管内皮细胞(BAVEC)生长的作用及其生化机制。方法用MTT法测定CCVAF抑制BAVEC的增殖活性,用伊红-考马斯亮蓝法观察细胞骨架,罗丹明-鬼笔环肽荧光探针F-actin骨架蛋白定位,荧光标记流式细胞法测荧光强度表胞内钙离子浓度[Ca2+]i及分光光度法测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮(NO)的含量。结果CCVAF(0.625~20μg/mL)剂量依赖性地抑制内皮细胞的生长,IC50=2.45μg/mL。CCVAF与BAVEC共同孵育后,引起细胞间连接减少,细胞F-actin分布混乱;细胞上清液中LDH活力及NO的含量及胞内[Ca2+]i分别增加。结论CCVAF抑制BAVEC增殖,可能与CCVAF导致细胞骨架改变,LDH及NO分泌量及胞内Ca2+浓度增加等生化机制有关。