RT—PCR分析探测人胚胎卵巢中的褪黑素受体

目的：研究入胚胎卵巢中是否存在褪黑素受体。方法：取人胚胎卵巢,用逆转录一多聚酶链反应方法鉴别褪黑素受体。结果：人胚胎卵巢总RNA以MT1及MT2两种受体引物进行的RT-PCR产物电泳呈现阳性条带,测序显示扩增产物与人类脑组织褪黑素受体cDNA相吻合,结论：人胚胎卵巢组织中存在有MT1、MT2两种褪黑素受体。证明卵巢是褪黑素作用的靶器官,褪黑素可能直接作用于卵巢,参与胚胎卵巢的发育或调节胚胎卵巢的功能。     

RT-PCR分析探测人胚胎卵巢中的褪黑素受体

目的 :研究人胚胎卵巢中是否存在褪黑素受体。方法 :取人胚胎卵巢 ,用逆转录 -多聚酶链反应方法鉴别褪黑素受体。结果 :人胚胎卵巢总RNA以MT1及MT2两种受体引物进行的RT PCR产物电泳呈现阳性条带 ,测序显示扩增产物与人类脑组织褪黑素受体cDNA相吻合。结论 :人胚胎卵巢组织中存     

褪黑素受体mRNA检测方法的建立

1　方法介绍1.1　组织标本制备　待检新鲜组织标本立即用 4%多聚甲醇 DEPC液固定 ,梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋组织 ,置4℃冰箱贮存待检测。1.2　原位杂交检测方法1.2 .1　载玻片的预处理　载玻片盐酸浸泡 2 4h,流水洗净 ,蒸馏水洗后晾干 ,用 95 %乙醇浸泡 30 min,180℃烘干过夜 ,室温冷却 ,涂切片粘合剂。1.2 .2　探针制备　 L B培养基各 5 0 ml,分别加入 mt1 、和 MT2 受体探针大肠杆菌菌株甘油保存液各 15 μl,37℃ ,2 0 0 r/ m in培养过夜。 10 0 0 0× g离心 5 min回收大肠杆菌 ,按照华舜公司质粒抽提纯化试剂盒说明抽提纯…     

用原位杂交及免疫组化方法显示人胚胎甲状腺褪黑素受体

目的：在前期工作的基础上进一步观察人胚胎甲状腺组织中腿黑素（Ｍel)受体的存在及其分布。方法：取人胚胎（胎龄６个月）甲状腺,石蜡包埋,切片,以免疫组化ＡＢＣ法及原位杂交方法进行染色。结果：免疫组化方法显示,人胚胎甲状腺细胞的细胞膜、细胞质和细胞核中Ｍel受体mt1和ＭＴ２亚型均呈棕褐色阳性染色;原位杂交方法显示mt１和ＭＴ２分布于甲状腺细胞的细胞质及细胞核内,呈蓝紫色阳性染色。结论：人胚胎甲状腺组织中存在褪黑素受体mt1和ＭＴ２亚型,分布于甲状腺细胞的细胞膜、细胞质、细胞核内。     

人甲状腺肿瘤组织褪黑素受体改变及意义

目的:探讨成人甲状腺肿瘤及瘤旁正常组织褪黑素受体表达的改变及意义。方法:取成人甲状腺肿瘤(腺瘤及腺癌)组织及瘤旁正常组织,抽提总RNA,合成mt1、MT2受体引物,用RT—PCR半定量分析褪黑素受体亚型mRNA表达的改变。结果:人甲状腺腺瘤、腺癌及瘤旁正常甲状腺组织均有mt1、MT2受体表达。甲状腺腺瘤组织mt1、MT2受体亚型表达量与正常甲状腺组织无差异     

甲状腺乳头状癌中C-met mRNA和C-src mRNA的表达及其相关性研究

[摘要]　目的　检测C-met mRNA和C-src mRNA在甲状腺乳头状癌（thyroid papillary cancer,TPC）中的表达并探讨其与临床病理特征的关系。　方法　采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测46例甲状腺乳头状癌和18例良性病变中C-met mRNA和C-src mRNA的表达,并分析二者表达的相关性及其与临床病理特征的关系。　结果　C-met mRNA和C-src mRNA在TPC中的表达量分别为1.140±0.163和0.984±0.187,在甲状腺良性病变的表达量分别为0.467±0.237和0.484±0.254,二者在TPC与甲状腺良性病变的表达差异均有显著性意义（P<0.001,P<0.001）。TPC组织C-met mRNA的表达量与患者年龄有关（P<0.05）;TPC组织C-src mRNA的表达量与肿瘤大小及淋巴结转移有关（均P＜0.05）。 TPC中C-src mRNA和C-met mRNA的表达量呈正相关（r=0.764,P<0.001）。　结论　TPC存在C-src mRNA和C-met mRNA的异常表达且C-src mRNA可能能为TPC的淋巴结转移提供依据。     

人胚胎外周组织褪黑素受体的鉴定

目的：探讨人胚胎外周组织褪黑素（Mel）受体（MR）体内分布的蛋白结合活性及信号转导途径。方法：应用放射配体结合法检测人胚胎外周组织MR,并以GTPγS观察其对Mel特异结合的影响。结果：经饮和分析、动力学分析及特异性分析证明人胚胎心、肝、肾及甲状腺等16种组织均存在Mel特异结合位点,亚细胞分布研究表明这些组织中以细胞核及线粒体MR含量最高;GTPγS能够抑制Mel与其受体的结合,使MR的结合容量或亲和力降低。结论：MR在人胚胎组织存在广泛,为解释Mel作用的广泛性提供了实验依据,实验结果支持MR是由抑制性G蛋白系统介导的观点。     

老年大鼠海马组织中神经生长因子及其受体基因表达的变化

目的：观察老年大鼠海马组织中NGF及其受体基因表达的变化。方法：采用RT－PCR法，半定量分析2年龄大鼠海马组织中NGF及其受体p75mRNA含量的变化。结果：与正常成年（3月龄）大鼠相比，2年龄大鼠海马组织NGF mRNA含量显著下降，而NGF受体p75mRNA的表达无明显改变。结论：老年鼠海马NGF基因表达明显下降，而其受体p75的表达变化不明显。提示衰老可能与NGF基因表达量减少有关。     

用免疫组化及原位杂交方法探测人胚胎卵巢褪黑素受体

目的：在前期工作基础上进一步观察人胚胎卵巢组织中褪黑素（Mel)受体的存在及分布。方法：取人胚胎卵巢，石蜡包埋、切片，用原位杂交及免疫组化方法进行检测。结果：免疫组化方法显示卵巢细胞的细胞膜、胞浆、细胞核中Mel1a、Mel1b均呈棕褐色；原位杂交方法显示褪黑素受体Mel1a、Mel1b位于卵巢细胞的细胞浆及细胞核内，呈蓝紫色颗粒。结论：人胚胎卵巢组织中存在有Mel1a及Mel1b两种褪黑素受体，位于卵巢细胞的细胞膜、胞浆、细胞核中，证明卵巢是褪黑素作用的靶器官，褪黑素可能直接作用于卵巢。     

人外周血白细胞褪黑素受体的检测及鉴定

目的：证实人外周血白细胞存在褪黑素受体（MR）及建立检测方法。方法：采用放射配体结合法检测MR，应用饱和分析、动力学分析及特异性分析鉴定MR。结果：通过3个实验，证实人外周血白细胞存在MR，其特点为低结合容量、高亲和力、结合呈可饱和性及可逆性、对MR激动剂高度特异性，符合特异结合位点的基本条件。对不同的方法及各种条件进行比较，建立检测MR的方法。结论：实验证实人外周血白细胞存在MR，并确定检测方法的最佳条件，为临床广泛开展MR检测奠定基础。     

血管内皮生长因子同源体mRNA在原发性肺癌中的表达

目的：探讨血客内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)在原发性肺癌发生、发展、侵袭和转移等生物学行为中的作用。方法：应用反转录聚合酶链反应技术对34例原发性肺癌患者的癌组织及21例患者的正常肺组织的VEGF mRNA进行检测,统计分析VEGF mRNA的表达与肺癌的淋巴结转移,TNM分期等的关系。结果：VEGF－189mRNA在肺癌组织中的表达（61．8％）显著高于正常肺组织（4．8％,P＜0．01）。VEGF－189 mRNA在有淋巴结转移组的表达（88．2％）显著高于无淋巴结转移组（35．3％）（P＜0．01）。VEGF－189 mRNA的表达在TNMⅠ期与Ⅱ期及Ⅰ期与Ⅲ期之间有显著差异（P＜0．05）。结论：VEGF的结合型同源体VEGF－189 mRNA与原发性肺癌的发生、侵袭和转移等密切相关。     

HIV调节蛋白tat mRNA在中枢神经系统的检测

目的：测定HIV调节蛋白Tat在HIV脑病发生中的作用。 方法：应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测9例伴有HIV脑病和7例不伴有HIV脑病的爱滋病患者脑组织中tat、env及vif mRNA含量。结果：尽管标本取自患者死后较长时间尸检,提取的脑组织RNA已有明显降解,但在伴有HIV脑病病例中,tat mRNA和env mRNA检出率分别为4/9和5/9,而在7例非伴有HIV脑病的病例中,二项指标均为零;vif mRNA在两组病例的检出率分别为5/9和2/7。 结论：Tat对HIV脑病的神经病理改变起着重要作用     

癌胚胎纤维连接蛋白mRNA在甲状腺乳头状癌中的表达

目的 探讨癌胚胎纤维连接蛋白mRNA在甲状腺乳头状癌中的表达及其意义。方法 采用RT—PCR技术检测了10例甲状腺乳头状癌，12例腺瘤和9例正常甲状腺组织中的癌胚胎纤维连接蛋白mRNA表达。结果 10例乳头状癌中8例癌胚胎纤维连接蛋白mRNA表达阳性，其他12例腺瘤、9例正常甲状腺表达均为阴性。结论 癌胚胎纤维连接蛋白mRNA在乳头状癌中特异性表达，提示癌胚胎纤维连接蛋白mRNA有可能成为甲状腺乳头状癌的一种分子生物指标，具有一定的潜在性临床应用价值。     

大鼠海马和额叶皮层褪黑素限速酶N-乙酰基转移酶表达与年龄的关系

目的 观察从胚胎期到老年期大鼠海马和额叶皮层中褪黑素（Melatonin,MT）合成限速酶N－乙酰基转移酶（Arylalkylamine N-acetyltransferase,AANAT）表达的变化特点。方法 ①引物设计，②RT－PCR方法，③酶联法。结果 ①大鼠额叶皮层和海马中AANAT在胚胎和幼年期表达较高，成年后有一定下降。②在老年大鼠，海马中AANAT mRNA明显降低甚至消失。③大鼠额叶皮层和海马中褪黑素水平在胚胎和幼年期较高，老年大鼠海马中褪黑素水平降至最低。结论 胚胎期额叶皮层AANAT有较高的表达，生后3周－18月组降低，而老年大鼠海马中AANAT表达的降低和消失，可能是老化时中枢神经系统褪黑素水平下降的原因之一。     

COX-2基因在人脑星形细胞肿瘤组织中表达及其与Fas基因表达的相关性

目的：探讨COX-2 mRNA在星形细胞肿瘤组织中的表达及与Fas mRNA表达的相关性。方法： 应用RT-PCR技术检测不同级别星形细胞肿瘤组织及非肿瘤组织中COX-2 mRNA和Fas mRNA的表达水平。结果：COX-2 mRNA表达阳性率分别为：非肿瘤组织33.3%,肿瘤组织78.4%;Fas mRNA阳性表达率分别为：非肿瘤组织8.3%,肿瘤组织74.5%;二者在肿瘤组织中的表达显著高于其在非肿瘤组织中的表达（P<0.05）,且有良好的相关性（r=0.525,P=0.008）。结论：COX-2 mRNA表达与星形细胞肿瘤的发生、发展有关,是评估星形细胞肿瘤恶性生物学行为的可靠指标;COX-2 mRNA表达与Fas mRNA密切相关,两者可能存在共同的激活机制,构成抑制肿瘤细胞凋亡的多种途径。     

VEGF及其受体在门静脉高压性胃病中的作用

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体1(fms-like tyrosine kinase-1,FLT-1)和受体2(fetal liver kinese-1,FLK-1)mRNA在门静脉高压性胃病(PHG)动态变化中的作用.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对44例肝硬化门静脉高压症患者PHG动态变化过程中病变部位VEGF,FLT-1及FLK-1 mRNA的表达进行检测.结果 44例病人首次胃镜检查轻度PHG23例,重度PHG 11例.轻度PHG组VEGF,FLT-1,FLK-1 mRNA(2.28±0.33,0.59±0.17,0.56±0.14)与无PHG组及正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);重度PHG组VEGF,FLT-1,FLK-1 mRNA(3.48±1.02,0.68±0.20,0.71±0.18)与轻度PHG组、无PHG组及正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).44例病人经6-12个月胃镜随访发现在无PHG组有4例发生PHG,轻度PHG组有7例发展为重度PHG,重度胃病组有3例转为轻度PHG.在PHG动态变化过程中VEGF,FLT-1,FLK-1 mRNA的表达与PHG病变程度有明显相关性(P＜0.01).结论 VEGF及其受体FLT-1,FLK-1过度表达是PHG胃黏膜损害的重要因素.     

T3核受体各亚型mRNA在糖尿病患者外周血白细胞中的表达

目的 了解T3核受体介导的T3反应在糖尿病患者外周血白细胞中的表达。方法 应用半定量RT－PCR法，将30例糖尿病患者分为无并发症组（A组）、急性并发症组（B组）及慢性并发症组（C组），观察各组T3核受体（T3R）各亚型mRNA变化。结果 糖尿病患者外周血白细胞中T3Rα1，T3Rα2mRNA表达增强（P＜0．05），T3Rβ1，T3Rβ2mRNA变化不大。B，C两组这种变化显著（P＜0．05）。结论 在外周血白细胞中，T3RmRNA各亚型表达与糖尿病患者低T3综合征密切相关。     

人膀胱组织中P2X受体亚型表达的实验研究

目的:检测正常儿膀胱颈部和顶部的P2X受体亚型mRNA的表达情况,并探讨其临床意义。方法:提取正常儿膀胱颈部和顶部的总mRNA,以β-actin为内参照,采用RT-PCR方法检测P2X受体各亚型mRNA在膀胱中的表达情况。结果:膀胱颈部和顶部均发现了P2X受体的7种亚型mRNA表达。颈部及顶部受体亚型的表达水平顺序分别为:P2X7>P2X1>P2X4>P2X3>P2X2>P2X5>P2X6和P2X4>P2X2>P2X1>P2X3>P2X7>P2X5>P2X6。结论:正常儿膀胱内有P2X受体的7种亚型mRNA表达,提示P2X受体亚型对膀胱感觉和运动功能的调节作用具有深入研究的价值。