肉苁蓉对1-甲基-4-苯基吡啶离子致多巴胺能神经元凋亡的影响

目的:建立1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导的原代培养新生鼠中脑多巴胺能神经细胞凋亡模型,并探讨肉苁蓉对中脑多巴胺能神经细胞的保护作用和机制。方法:采用血清药理学的方法,肉苁蓉含药血清孵育多巴胺能神经细胞,经MPP+处理后,用TUNEL染色、流式细胞仪检测。结果:浓度为200μmol/L的MPP+使多巴胺能神经细胞发生典型的凋亡,流式细胞仪结果显示等效剂量肉苁蓉含药血清(动物灌胃浓度1.6g原药材/kg)培养液组多巴胺神经细胞凋亡率为6.3%,空白模型组的凋亡率为30.2%,光镜下计数每视野凋亡阳性细胞数显示:含等效剂量肉苁蓉含药血清及2倍等效剂量肉苁蓉含药血清培养液组明显低于模型组(P<0.05)。结论:肉苁蓉含药血清对神经毒素MPP+诱发的多巴胺能神经细胞凋亡具有一定的保护作用。     

原儿茶酸对1-甲基-4-苯基吡啶离子损伤中脑多巴胺能神经元保护作用研究

目的探讨原儿茶酸对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)干预后的小鼠胚胎中脑多巴胺能神经元损伤的保护作用。方法分离培养孕14 d小鼠胚胎中脑神经元细胞,连续培养7 d,以MPP+体外损伤小鼠胚胎中脑多巴胺能神经元诱导帕金森病(PD)模型,实验分为对照组,模型组,原儿茶酸低(0.05 mmol/L)、中(0.1 mmol/L)、高(0.5 mmol/L)剂量组。采用MTT比色法测定神经元活力,测定细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧物质(ROS)的量,检测线粒体复合物I活性及膜电位。结果原儿茶酸可增强MPP+损伤的中脑多巴胺能神经元活力,减少LDH释放,降低ROS产生,抑制线粒体复合物I活力下降,阻止线粒体膜电位降低。结论原儿茶酸对MPP+诱导的中脑多巴胺能神经元损伤具有保护作用。     

1-甲基-4-苯基吡啶离子诱发大鼠小脑颗粒细胞凋亡

目的 建立1－甲基－4－苯基吡啶离子（1－methy1-4-phenyl pyridinium ion,MPP^ )诱导的大鼠小脑颗粒细胞凋亡模型。方法 MPP^ 处理大鼠小脑颗粒细胞,分别用甲基绿－派诺宁染色,DNA凝胶电泳,流式细胞术进行检测。结果 浓度为50μmol/L MPP^ 使小脑颗粒细胞发生凋亡。结论 以MPP^ 为诱导剂建立的大鼠小脑颗粒细胞凋亡模型,可用于研究和帕金森病（PD）有关的细胞凋亡的调控机制和筛选抗PD药物。     

止颤颗粒联合美多芭对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶引起亚急性帕金森病模型小鼠的药效学研究

目的 联合应用止颤颗粒和美多芭,观察止颤颗粒是否具有增强美多芭治疗帕金森病(PD)的作用。方法 采用经典的1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱发小鼠亚急性PD模型,105只小鼠,随机分为7组,每组15只,分别为对照组、模型组、止颤颗粒低剂量(3.5 g/kg)+美多芭(50 mg/kg)组、止颤颗粒中剂量(9.0 g/kg)+美多芭(50 mg/kg)组、止颤颗粒高剂量(22 g/kg)+美多芭(50 mg/kg)组、止颤颗粒(22 g/kg)组、美多芭(50 mg/kg)组。采用转棍法和爬杆法检测各组小鼠的行为学指标,采用HPLC法测定纹状体中多巴胺(DA)水平、免疫组化法检测黑质多巴胺神经元数量。结果 止颤颗粒低剂量+美多芭组与美多芭组相比,纹状体内DA的水平、TH阳性神经元数目均明显提高,而且PD模型小鼠行为学障碍改善作用较明显。与模型组相比,止颤颗粒组小鼠的行为学障碍改善作用较明显。结论 止颤颗粒可增强美多芭的疗效,具有一定的神经保护作用,止颤颗粒低剂量与美多芭合用可适当减少美多芭的用量。     

士的宁对多巴胺能神经元的保护作用

目的:选择2种神经毒物1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)和谷氨酸在体外诱导多巴胺能神经元退行性损伤,并检测士的宁对此细胞的药理毒理作用,及对其退行性损伤的协同作用或拮抗作用。方法:采用孕14 d小鼠,取出胎鼠中脑,分离出多巴胺能神经元,调整细胞密度7.5×105/mL,于5%CO2,37℃,100%湿度条件培养,于体外培养的第10天分别加入士的宁0.1,1,5,10μmol.L-1,MPP+10μmol.L-1,谷氨酸500μmol.L-1作用48 h,第12天染色。选取细胞数,神经元树突长度和数量作为观察指标,并做出分析。结果:士的宁对未损伤的多巴胺能神经元在48 h培养过程中无毒性影响。在10μmol.L-1士的宁作用下,多巴胺能神经元数量明显高于对照组(P<0.05);在5～10μmol.L-1士的宁作用下,树突数量与对照组相比也有明显提高(P<0.05)。士的宁(10μmol.L-1)和MPP+共同培养48 h后,细胞计数明显高于MPP+单独培养组(P<0.05);这种保护作用更为明显的表现在细胞形态学变化方面,在10μmol.L-1的士的宁剂量下,神经树突长度明显高于MPP+单独培养组(P<0.05);神经树突的数量在5μmol.L-1士的宁作用下与MPP+单独培养组相比有明显增加(P<0.05)。在对谷氨酸(500μmol.L-1)诱导的神经元损伤模型中,与谷氨酸组相比,10μmol.L-1的士的宁对所有的观察指标的数值都有递增影响(P<0.05)。结论:首次证实士的宁具有可在体外刺激中脑分离出的多巴胺能神经元的生长,并且对此神经元退行性损伤有保护作用。     

灯盏花素对1-甲基-4-苯基吡啶诱导的PC-12细胞周期阻滞的影响

目的考察灯盏花素对1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞株PC-12细胞周期阻滞的影响并探讨其机制。方法 MTT法检测PC-12细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期,Western blot技术检测ERK1/2磷酸化水平。结果灯盏花素预处理明显抑制MPP+诱导的PC-12细胞周期G2/M期阻滞,升高细胞存活率,增加ERK1/2磷酸化水平。ERK1/2抑制剂U0126预处理后,灯盏花素对细胞存活率和ERK1/2磷酸化水平无明显作用。结论灯盏花素的作用机制与增加ERK1/2磷酸化水平有关。     

培补肝肾复方中药对PC12细胞损伤模型的保护作用

目的探讨培补肝肾复方对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP )所致PC12细胞损伤模型的保护作用.方法采用血清药理学方法,制备中药含药血清,以肾上腺嗜铬细胞瘤克隆化细胞株PC12细胞为材料,利用MPP 建立经神经生长因子(NGF)诱导前后的PC12细胞的损伤模型,观察不同给药剂量的培补肝肾中药血清对PC12细胞的作用.结果形态学检查发现等效剂量培补肝肾中药复方血清可显著提高PC12细胞的存活数,减低细胞损伤程度.结论培补肝肾复方中药血清可对抗MPP 引起的细胞损伤,对体外培养的PC12细胞具有保护作用.     

银杏提取物对细胞毒素MPP~+致小脑颗粒细胞损伤的保护作用

目的 探讨银杏提取物(Ginkgo biloba L．extract，GBE)对1-甲基-4苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridiniumion，MPP^ )所致大鼠小脑颗粒细胞损伤的保护作用。方法 用GBE预先孵育大鼠小脑颗粒细胞，然后用MPP^ 处理细胞，分别用MTT法和神经丝蛋白的免疫组织化学方法进行检测。结果 50μmol／L的MPP^ 使小脑颗粒细胞损伤，20μg／mL的GBE具有保护作用。结论 GBE对神经毒素MPP^ 致细胞损伤有保护作用，提示GBE可能具有抗帕金森病(Parkinson’s Disease，PD)的潜在功效。     

川芎茶调散对帕金森病小鼠多巴胺神经元损伤的保护作用及机制研究

目的:研究川芎茶调散对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致小鼠多巴胺(DA)神经元损伤的保护作用,并从抗氧化角度探讨其神经保护作用的可能机制.方法:将3～5月龄的雄性C57/BL小鼠随机分为6组:正常组、川芎茶调散高、中、低(75,50,25 g·kg~(-1)生药量)3个剂量组、模型组.每组8只动物.观察爬杆实验测试行为学改变,HPLC检测小鼠纹状体中DA及其代谢产物含量,免疫组化检测小鼠黑质中TH阳性细胞数,荧光比色检测黑质中超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果:高、中、低剂量川芎茶调散对帕金森氏病(PD)小鼠的行为损害均有一定的保护作用(P<0.01);川芎茶凋散高剂量组小鼠纹状体中DA含量及TH阳性神经元数量明显高于模型组(均P<0.05);川芎茶调散中、高剂量组相对于模型组,SOD活力显著增高(P<0.05).结论:川芎茶调散可明显改善MPTP所致的小鼠PD模型的运动障碍,同时能对MPTP引起的DA神经元损伤起到保护作用,川芎茶调散对DA神经元的保护作用可能与其较强的抗氧化能力有关.     

川芎嗪对MPTP诱导的多巴胺能神经元毒性的影响

目的 观察川芎嗪体外、体内对MPTP)导致的多巴胺能(dopaminergic,DA)神经元毒性的影响.方法 体外实验,提取孕14 d的Sprague-dawley大鼠胎鼠黑质区多巴胺神经元,MPP<'+>诱导其损伤,运用免疫荧光法测定黑质酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经元数量及状态变化;体内实验,以C57BL/6J小鼠为研究对象,采用腹腔注射MPTP方法制作小鼠慢性帕金森(Parkinson's disease,PD)模型,运用免疫组化法测定TH阳性神经元数量变化.结果 体外实验:TMP组多巴胺神经元形态数目均有所改善,其中500μmol/L组与模型组相比具显著性差异.体内实验:与模型组相比,注射TMP后,多巴胺神经元密度有所增加.结论 TMP能不同程度地改善MPTP诱导的多巴胺神经元的损伤.     

菟丝子提取物对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的:建立1-甲基-4-苯基吡啶(1-m ethyl-4-phenylpyrid in ium ion,MPP )诱导的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(Pheochromocytom a,PC12)凋亡模型,探讨菟丝子提取物对MPP 诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法:用四唑盐(MTT)方法检测细胞活力,用Hoechst 33258染色法观察细胞形态变化,用流式细胞技术检测细胞凋亡比例。结果:浓度为0.15 mM MPP 作用于PC12细胞48 h诱导其产生典型的凋亡特征,50 mg/L菟丝子提取物具有抗凋亡作用。结论:菟丝子提取物对MPP 诱导的PC12细胞凋亡有明显的保护作用。     

丹皮酚对大鼠离体海马神经元NMDA受体的影响

目的:研究丹皮酚对大鼠海马神经元缺糖缺氧的保护作用。方法:以原代培养的新生大鼠海马神经元作为研究对象,建立缺糖缺氧损伤模型,倒置相差显微镜下进行一般形态学的动态观察,用MTT法测定神经元存活率。通过放射配基结合实验测定海马NMDA受体结合力变化。结果:丹皮酚可显著降低神经元缺糖缺氧时细胞死亡率,减弱NMDA受体结合力。结论:丹皮酚对离体培养的大鼠海马神经元缺糖缺氧具有保护作用,其作用机制与减弱NMDA受体结合力有关。     

天麻素对大鼠皮层缺氧神经细胞NR1亚基mRNA表达的影响

目的:观察天麻素对体外培养大鼠皮层缺氧神经细胞N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NR1亚基mRNA表达的影响,探讨天麻素在神经保护方面的可能作用机制。方法:体外培养大鼠胚胎皮层神经细胞,以缺氧无糖培养建立神经细胞损伤模型,采用不同质量浓度的天麻素(13,26,52 mg.L^-1)处理细胞,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测神经细胞NR1 mRNA的表达。结果:神经细胞缺氧损伤后,NR1 mRNA的表达显著增高;加入不同质量浓度的天麻素后均能显著降低神经细胞NR1 mRNA的表达。其中以26,52 mg.L^-1的抑制作用最佳。结论:天麻素可能通过拮抗由缺氧引起的神经细胞NMDA受体NR1亚基mRNA表达的增加,发挥其神经保护作用。     

2-乙基-3-羟基-6-苯硫基-4(1H)-吡啶酮对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的影响

目的 研究2－乙基－3－羟基－6－苯硫基－4（1H）－吡啶酮（HPP）对四氯化碳（CCl4）损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用。方法 原位灌流法分离大鼠肝细胞培养24h后加入HPP，同时造成CC4损伤，于损伤后24h和48h测培养液中丙二醛（MDA）含量、谷丙转酶氨酶（ALT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）的活性，48h后用MTT法测肝细胞存活率。结果 HPP对GPT在力的升高有抑制作用，同时抑制MDA的产生及肝细胞损伤造成的GSH－Px活力的降低。结论 HPP能有效抑制CCl4造成的原代培养在鼠肝细胞损伤。     

Korean red ginseng decreases 1-methyl-4-phenylpyridinium-induced mitophagy in SH-SY5Y cells

ObjectiveMitophagy is known to contribute towards progression of Parkinson’s disease. Korean red ginseng (KRG) is a widely used medicinal herb in East Asia, and recent studies have reported that KRG prevents 1-methyl-4-phenylpyridinium ion (MPP⁺)-induced cell death. This study was undertaken to investigate whether KRG suppresses MPP⁺-induced apoptosis and mitophagy.MethodsSH-SY5Y cells were incubated with KRG for 24 h, and subsequently exposed to MPP⁺. The MPP⁺-induced cell death was confirmed with the 3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide assay, and the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labeling assay. Changes in the structure and function of mitochondria were confirmed using mitotracker, MitoSOX red mitochondrial superoxide indicator, parkin, and phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten-induced putative kinase 1 (PINK1) immunofluorescent staining. Western blotting was performed to evaluate the expression of apoptosis-related factors in whole cells, including Bax, Bcl-2 and cleaved caspase-3, and mitophagy-related factors in the mitochondrial fraction, including cytochrome c, parkin, PINK1, translocase of the outer membrane 20 (TOM20), p62 and Beclin 1.ResultsMPP⁺ induced cell death by cytochrome c release and caspase-3 activation; however, this effect was suppressed by KRG’s regulation of the expressions of Bcl-2 and Bax. Moreover, MPP⁺ exposure increased the mitochondrial expressions of parkin, PINK1, Beclin 1 and p62, and decreased TOM20, cytochrome c and Bcl-2 expressions. These MPP⁺-induced changes in the mitochondrial fraction were attenuated by treatment with KRG.ConclusionKRG effectively prevents MPP⁺-induced SH-SY5Y cell death by regulating cytochrome c release from mitochondria and PINK1/parkin-mediated mitophagy, through regulation of the Bcl-2 family.     

金丝桃苷对原代培养的大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的影响

目的探讨金丝桃苷对原代培养的大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用。方法采用显微镜和M TT法观察缺氧-再给氧导致培养的大鼠原代心肌细胞的损伤和金丝桃苷的保护作用;流式细胞术观察金丝桃苷对心肌细胞凋亡的影响;并观察乳酸脱氢酶(LDH)水平的变化和细胞内C a2 浓度的变化。结果金丝桃苷对缺氧-再给氧导致的心肌细胞损伤有一定的保护作用,可以抑制心肌细胞凋亡的发生;0.5~50μm o l/L金丝桃苷可以剂量依赖性地抑制心肌细胞中LDH的形成和细胞内C a2 超载。结论金丝桃苷具有对抗缺氧-再给氧导致心肌细胞损伤的作用,其机制可能与抑制心肌细胞凋亡、钙超载和抗自由基形成有关。     

天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导PC12细胞凋亡JNK通路的影响

目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP~+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其是否通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路发挥神经保护作用。方法:将32只SD大鼠随机分为空白组、天麻钩藤饮低、中、高剂量组,每组8只。天麻钩藤饮按照5.7,11.4,22.8 g·kg-1灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,采血制备空白和含药血清。PC12细胞常规培养并分为空白组、模型组、天麻钩藤饮含药血清低、中、高剂量组,空白组和模型组加空白血清,其他3组加10%的天麻钩藤饮含药血清,孵育30 min后,模型组和含药血清组再加500μmol·L~(-1)MPP~+共孵育48 h后收集细胞,采用Cell Titer 96Aoueous MTS Reagent powder(MTS法)检测细胞存活率。后续实验分为5组,即:空白组,MPP~+组,MPP~++含药血清高剂量组,MPP~++SP600125组,MPP~++含药血清高剂量+SP600125组,采用Annexin VFITC/PI双染色法检测细胞凋亡,分光光度法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JNK,p-JNK,c-Jun,p-c-Jun蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低(P0.05);与模型组比较,10%的天麻钩藤饮低、中、高剂量含药血清组细胞活力显著增加(P0.05)。后续试验中,与空白组比较,MPP~+组细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显升高(P0.05)。与MPP~+组比较,MPP~++含药血清高剂量组,MPP~++SP600125组均能够使细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显降低(P0.05),而MPP~++含药血清高剂量+SP600125组的作用明显高于MPP~++含药血清高剂量组(P0.05),但不高于MPP~++SP600125组。JNK和c-Jun蛋白表达无明显变化。结论:天麻钩藤饮含药血清对MPP~+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与JNK信号通路密切相关。     

Panaxatriol saponins extracted from Panax notoginseng induces thioredoxin-1 and prevents 1-methyl-4-phenylpyridinium ion-induced neurotoxicity

Aim of the study

Thioredoxin-1 has various biologic activities, including the control of redox balance and the inhibition of apoptosis. The current study was designed to examine the effects of panaxatriol saponins (PTS) extracted from Panax notoginseng on thioredoxin-1 expression and 1-methyl-4-phenylpyridinium ion-induced injury.

Materials and methods

Using PC12 cells and Kunming mice, we test thioredoxin-1 expression after PTS treatment by Western blot. The protective effect of PTS against 1-methyl-4-phenylpyridinium ion-induced injury was assessed by MTT assay and LDH release assay.

Results

PTS induced thioredoxin-1 expression in vitro and in vivo, and attenuated 1-methyl-4-phenylpyridinium ion-induced cell death of PC12 cells.

Conclusions

PTS is a new inducer of thioredoxin-1 and has a possible potential as a therapeutic agent for neurodegenerative diseases including Parkinson's disease.