核因子E2相关因子2与细胞自噬对肝纤维化的影响

肝纤维化是慢性肝病发展到肝硬化的必经阶段,在全世界范围保持着较高的发病率。肝纤维化的发生机制复杂,其发生发展受到许多细胞因子及信号通路的影响,人们对肝纤维化的认识也越来越深入。简述了核因子E2相关因子2(Nrf2)介导的抗氧化应激系统在对抗各种类型肝纤维化中的作用和细胞自噬对肝纤维化的影响,以及Nrf2和自噬的相互影响在肝纤维化中可能的作用机制。认为将Nrf2和细胞自噬联合研究是未来肝纤维化发生机制的研究方向,为肝纤维化的治疗提供了新思路。     

还原型谷胱甘肽对大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖及核转录因子NF-E2相关因子2/血红素加氧酶-1信号通路的影响

目的 探讨还原型谷胱甘肽(GSH)对大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖及核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路的影响.方法 分别用浓度为0、1、2、5、10 mmol/L的GSH作用于经0.1 μg/ml脂多糖活化的大鼠HSC-T6细胞24h后,四甲基偶氮唑盐比色法检测HSC-T6增殖情况,放射免疫法检测细胞上清液中透明质酸(HA)及Ⅳ型胶原的含量,实时荧光定量PCR检测Nrf2和HO-1的mRNA表达水平,免疫细胞化学染色法检测HSC-T6中Nrf2和HO-1的蛋白质表达情况,分光光度计检测HO-1的活性变化.两两比较采用t检验,两变量间的关系采用曲线拟合方法. 结果 GSH能抑制HSC-T6增殖,1、2、5、10 mmol/L组的吸光度值分别为0.79±0.02、0.74±0.03、0.70±0.02、0.62±0.01,均低于0mmol/L组的0.88±0.03(t值分别为3.16、6.09、7.17、11.94,P值均＜0.05).GSH 1、2、5、10mmol/L组的HA表达量分别为(372.98±11.01)μg/L、(320.76±16.37) μg/L、(284.46±13.17)μg/L、(239.08±16.95)μg/L,明显低于0 mmol/L组的(415.74±14.52)μg/L(t值分别为4.07、7.52、11.59、13.71,P值均＜0.05);Ⅳ型胶原表达量分别为(191.27±17.49)μg/L、(163.85±16.26) μg/L、(133.03±13.14)μg/L、(103.31±12.52) μg/L,也低于0mmol/L组的(251.47±14.06) μg/L(t值分别为4.65、7.58、10.66、13.63,P值均＜0.05).0 mmol/L组HSC-T6中Nrf2 mRNA相对表达量(1.21±0.11)低于1、2、5、10 mmol/L组(分别为1.51±0.06、1.92±0.08、2.69±0.07、3.43±0.07),Nrf2蛋白表达的累积吸光度值(17.84±0.61)也低于1、2、5、10 mmol/L组(分别为23.85±0.20、27.90±0.32、33.69±0.75、38.64±0.38); HO-1 mRNA相对表达量(1.25±0.09)低于1、2、5、10 mmol/L组(分别为1.43±0.08、1.73±0.07、2.10±0.08、2.64±0.07),HO-1蛋白表达的累积吸光度值(16.77±0.31)也低于1、2、5、10 mmol/L组(20.75±0.30、24.84±0.24、28.89±0.19、33.88±0.19),差异均有统计学意义(P值均＜0.05).HO-1的活性也随GSH浓度增加而上升.结论 GSH可抑制HSC-T6增殖,减少其细胞外基质HA及Ⅳ型胶原分泌,其机制可能与GSH对HSC-T6的Nrf2/HO-1信号通路调控有关.     

无机砷对角质细胞红系相关因子及其下游抗氧化酶蛋白表达的影响

目的探讨无机砷暴露对皮肤角质细胞红系相关因子2(Nrf2)及其调控的下游抗氧化酶NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)蛋白表达的影响。方法 25μmol/L亚砷酸钠(NaAsO2)作用于人类皮肤角质细胞系HaCaT细胞株0.5、3、6、12、24 h,采用western blot法检测细胞内Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达情况。结果25μmol/L NaAsO2暴露0.5、3、6、12、24 h均能够显著诱导HaCaT细胞的Nrf2蛋白表达(P<0.01),Nrf2蛋白在NaAsO2暴露3、6、12 h表达量呈现高峰,24 h则呈下降趋势,但仍显著高于对照组;NQO1的蛋白表达仅在暴露后3 h显著高于对照组(P<0.01),暴露时间延长后则显著下降,6、12、24 h的NQO1蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05或P<0.01);HO-1蛋白则从暴露3 h开始呈现明显的诱导表达,且随染毒时间的延长(6、12、24 h)表达持续增强,具有明显的时间-效应关系(P<0.01)。结论无机砷暴露能够诱导人类皮肤角质细胞系HaCaT细胞的Nrf2及其调控的下游抗氧化酶NQO1和HO-1的蛋白表达。     

核因子E2相关因子2和kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1基因单倍型与颈动脉硬化的分析

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)和kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)基因单倍型与颈动脉粥样硬化(CAS)形成的易感关联。方法选取102例CAS患者作为病例组和105例无CAS人群作为对照组,应用基因芯片技术检测Nrf2 6个位点和Keap1基因3个位点的基因型和等位基因频率分布,采用SHEsis软件分析其单倍型与CAS发生风险的关联。结果病例组与对照组Nrf2rs6726395位点基因型GG、GA和AA比较,差异有统计学意义(21.6%vs 44.8%,58.8%vs 39.0%,19.6%vs 16.2%,P<0.01)。2组Nrf2rs6726395、rs1806649、rs13005431、rs2886161位点构建的ACCC、ACCT、ACTT、GTTC单倍型,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);2组Keap1基因单倍型差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Nrf2基因rs6726395多态性位点可能与促进CAS形成有关,由Nrf2基因构建的单倍型ACCT、GTTC可能与CAS发生的风险相关联。     

无机砷对红系相关因子-2及其抑制因子mRNA表达的影响

目的观察亚砷酸钠（NaAsO2,sodium arsenite）对Chang肝细胞株核转录因子红系相关因子（nuclear factor ery-throid 2-related factor 2,Nrf2）及其胞浆抑制因子Keap1（Kelch-like ECH-associated protein 1）的mRNA表达水平的影响。方法分别以不同浓度NaAsO2（0、50、200、400μmol/L）暴露人类Chang肝细胞株12 h,采用AlamarBlue法测定细胞增殖活性,采用RT-PCR法测定Nrf2和Keap1的mRNA表达水平。结果 50μmol/L NaAsO2暴露组的细胞增殖活性与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）,而200μmol/L和400μmol/L NaAsO2暴露组的细胞增殖活性均显著低于对照组（P〈0.05）;50、200、400μmol/L的NaAsO2暴露12 h,Nrf2和Keap1的mRNA表达水平与对照组比较均显著下降（P〈0.05）,且呈剂量-反应关系。结论高浓度无机砷暴露能抑制Chang肝细胞株Nrf2和Keap1的mRNA表达水平,并可能与无机砷造成机体的高氧化应激水平有关。     

核因子E2 相关因子 2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路在酒精性肝病中的作用

酒精性肝病(ALD)在我国的发病率逐年上升,国民的疾病负担日益增加。肝细胞的氧化应激反应是ALD的重要致病机制。核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路是人体重要的内源性抗氧化应激通路,在氧化应激作用下,Nrf2被激活并发挥其转录活性诱导HO-1高表达。HO-1是体内重要的氧化应激反应蛋白,与其血红素酶解产物(胆红素、CO、铁)共同发挥着抗炎、抗氧化及调控细胞凋亡的作用。本文将对近年来Nrf2/HO-1信号通路在ALD中的研究进展进行综述,力求为ALD的发生发展寻找理论依据及治疗切入点。     

核转录因子E2相关因子2启动子CpG岛甲基化对其蛋白表达及COPD的影响

核转录因子E2相关因子2 (nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)在人体氧化与抗氧化平衡过程中起了重要的作用.氧化与抗氧化失衡是COPD的重要发病机制之一.近来有研究发现 Nrf2启动子CpG岛甲基化能够影响 Nrf2蛋白的表达,从而影响抗氧化防御过程.明确 Nrf2启动子CpG岛甲基化与 Nrf2蛋白表达及COPD的关系,对今后临床上治疗 COPD寻找新途径具有重要意义.     

NF-E2对红系造血相关基因表达的影响

目的探讨红系特异性转录因子NF—E2对红系造血相关基因表达的影响。方法应用基因芯片方法检测转染p45NF—E2基因后红白血病细胞株HB22．2中基因表达的变化;通过改变培养条件诱导红白血病细胞株HB60—5向成熟细胞分化,检测诱导分化过程中NF—E2等红系造血相关基因表达变化。结果p45NF-E2缺陷细胞HB22．2转染外源p45NF-E2后,血红蛋白基因及Gata-1、EDRF基因表达上调,Fli基因表达下调;HB60-5向成熟细胞分化过程中,随着p45NF—E2的表达上调,同样出现Gata-1和EDRF表达增强,FIi表达减弱。结论NF—E2能对多种红系相关基因表达调控。从而促进红系分化。     

糖蛋白基因表达对人永生化角质形成细胞株活性的影响及机制

目的探讨糖蛋白(GP)基因表达对人永生化角质形成细胞株活性的影响及相关机制。方法体外培养HaCaT人永生化表皮细胞,设计并合成3组GP130 siRNA序列,转染HaCaT细胞,从mRNA和蛋白质水平筛选并验证最佳siRNA序列和浓度。分别于转染HaCaT细胞24 h、48 h时,使用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术检测细胞增殖和增殖周期;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、Western印迹检测白细胞介素(IL)-6 mRNA和蛋白表达。结果培养24 h时siRNA1组、siRNA-nc组、空白对照组HaCaT细胞增殖率之间差异无统计学意义(P0.05);培养48 h时siRNA1组HaCaT细胞增殖率明显低于siRNA-nc组、空白对照组(P0.05)。培养24 h时G1期、S期、G2期的HaCaT细胞水平在siRNA1组、siRNA-nc组、空白对照组之间差异无统计学意义(P0.05);培养48 h时siRNA1组G1期HaCaT细胞数量明显高于siRNA-nc组、空白对照组,S期和G2期细胞数量明显低于siRNA-nc组、空白对照组(P0.01);培养48 h时siRNA1组G1期细胞数量明显高于培养24 h时,G2期细胞数量明显低于培养24 h时(P0.01)。培养24 h时siRNA1组、siRNA-nc组、空白对照组IL-6 mRNA及蛋白表达水平之间差异无统计学意义(P0.05);培养48 h时siRNA1组IL-6 mRNA及蛋白表达水平明显低于siRNA-nc组、空白对照组(P0.01);培养48 h时siRNA1组IL-6 mRNA及蛋白表达水平明显低于培养24 h时(P0.01)。结论下调GP130基因表达可抑制HaCaT细胞增殖,影响细胞增殖周期;其机制可能通过抑制IL-6表达,经Janus激酶(JAK)-信号转导与转录激活子(STAT)3信号通路调控HaCaT细胞增殖。     

阿托伐他汀对HepG2细胞活性氧及转录因子Sp1mRNA表达的影响

目的探讨阿托伐他汀对HepG2细胞增殖、葡萄糖摄取、氧化应激和转录因子Sp1mRNA表达的影响及其分子机制。方法实验分为:对照组;阿伐他汀组。用MTT法检测对细胞增殖的影响;用微量化的葡萄糖氧化酶法检测细胞对葡萄糖的摄取作用;用流式细胞术检测细胞活性氧含量;用RT-PCR方法检测Sp1mRNA表达。结果阿托伐他汀作用48 h后对细胞增殖具有抑制作用(P<0.05);对细胞摄取利用葡萄糖具有促进作用(P<0.05);和对照组比较细胞活性氧含量显著减少(P<0.05);RT-PCR结果表明:转录因子Sp1mRNA表达和对照组比较明显增强(P<0.05)。结论阿托伐他汀对HepG2细胞增殖的抑制和改善葡萄糖利用作用可能与减轻氧化应激有关,可能与通过增强转录因子Sp1的表达导致相关基因的表达而产生的有利作用有关。     

氧化应激与核因子E2相关因子2在非酒精性脂肪性肝病中的作用

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是全球最流行的慢性肝病,发病率逐年上升。氧化应激是非酒精性脂肪肝病经典“二次打击”发病机制的第二次打击,是目前公认的NAFLD发病机制之一。核因子E2相关因子2(Nrf2)是保护肝细胞免受氧化应激的一组正向调节因子,是细胞抗氧化应激的关键因子,也是拮抗肝脏氧化应激的关键转录因子,在NAFLD发生发展中起重要作用,Nrf2可能是改善NAFLD的潜在治疗靶点。对氧化应激及Nrf2通路在NAFLD中的发病机制进行了综述。     

亚砷酸钠诱导人膀胱上皮细胞环氧化酶2和前列腺素E2表达的实验观察

目的 观察不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)对人膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)环氧化酶2(COX-2)和前列腺素E2(PGE2)表达的诱导作用.方法 不同浓度NaAsO2[0(对照)、1、2、4、8、10 μmol/L]作用于SV-HUC-1细胞24h后,应用实时定量(RT)-PCR法检测SV-HUC-1细胞内COX-2 mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞培养液中PGE2含量.结果 与对照组(1.00±0.00)比较,2、4、8、10μmol/L NaAsO2 组SV-HUC-1细胞内COX-2 mRNA表达(1.73±0.25、245±0.23、1.94±0.71、1.75±0.43)明显升高(P均＜0.05),并且4μmol/L NaAsO2组SV-HUC-1细胞内COX-2 mRNA表达达到最高;随NaAsO2浓度的增高,细胞培养液中PGE2含量呈升高趋势,表现为剂量反应关系,其中4、8、10 μmol/L NaAsO2组细胞培养液中PGE2含量[(9.59±1.27)、(10.40±2.19)、(12.93±1.33)ng/g]明显高于对照组[(6.64±1.46)ng/g,P均＜0.05].结论 NaAsO2能够诱导SV-HUC-1细胞COX-2 mRNA表达和PGE2分泌.     

Nuclear factor erythroid-2-related factor 2 (Nrf2) is a potential prognostic factor in patients with gastric adenocarcinoma

BackgroundGastric cancer is one of the leading causes of cancer-related death, and many researchers are focused on the discovery and use of different biomarkers in prognosis prediction. The use of Nrf2 as a prognostic marker in patients with gastric cancer remains controversial. In this study, we evaluated the expression of Nrf2 protein in gastric adenocarcinoma.Patients and methodsA total of 86 patients who underwent gastric resection and D2 lymph node dissection due to gastric adenocarcinoma were included. Clinicopathological characteristics, such as age, gender, gastrectomy type, pathologic T (pT) and N (pN) stages, tumor grade, tumor type per Lauren’s classification, presence of lymphovascular invasion, and Nrf2 expression were evaluated.ResultsWhile pT, pN, and Nrf-2 expression were found to be negative prognostic predictors for overall survival in one-way analysis of variance, Nrf-2 expression was the only significant negative prognostic predictor in multivariance analysis. pT, pN, diffuse type, high tumor grade, and Nrf-2 expression significantly affected overall survival in Kaplan-Meier survival analyses (p = 0.02, p = 0.03, p < 0.01, p = 0.027, and p = 0.001, respectively).ConclusionsOur findings support that Nrf2 is a prognostic marker in patients with gastric adenocarcinoma. Anti-Nrf2 therapy options should be investigated to improve prognosis in gastric cancer patients.     

Nuclear factor erythroid-2-related factor 2 (Nrf2) is a potential prognostic factor in patients with gastric adenocarcinoma

BackgroundGastric cancer is one of the leading causes of cancer-related death, and many researchers are focused on the discovery and use of different biomarkers in prognosis prediction. The use of Nrf2 as a prognostic marker in patients with gastric cancer remains controversial. In this study, we evaluated the expression of Nrf2 protein in gastric adenocarcinoma.Patients and methodsA total of 86 patients who underwent gastric resection and D2 lymph node dissection due to gastric adenocarcinoma were included. Clinicopathological characteristics, such as age, gender, gastrectomy type, pathologic T (pT) and N (pN) stages, tumor grade, tumor type per Lauren’s classification, presence of lymphovascular invasion, and Nrf2 expression were evaluated.ResultsWhile pT, pN, and Nrf-2 expression were found to be negative prognostic predictors for overall survival in one-way analysis of variance, Nrf-2 expression was the only significant negative prognostic predictor in multivariance analysis. pT, pN, diffuse type, high tumor grade, and Nrf-2 expression significantly affected overall survival in Kaplan-Meier survival analyses (p = 0.02, p = 0.03, p < 0.01, p = 0.027, and p = 0.001, respectively).ConclusionsOur findings support that Nrf2 is a prognostic marker in patients with gastric adenocarcinoma. Anti-Nrf2 therapy options should be investigated to improve prognosis in gastric cancer patients.     

激动网织红核因子相关因子2对大鼠氧化应激所致血管平滑肌细胞损伤的影响

目的探讨激动网织红核因子相关因子2（Nrf2）对氧化应激诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）损伤的影响。方法原代培养大鼠VSMCs,随机分为4组：对照组、氧化损伤组、Nrf2激动剂组、Nrf2干扰慢病毒组。Western免疫印迹法检NtJNrf2蛋白表达变化,MTT法检测各组细胞活力,Hoechst33342法及AnnexinV／FITC法检测各组细胞凋亡情况。结果荧光显微镜显示,Nrf2干扰慢病毒成功感染VSMCs;Western免疫印迹检测显示,Nrf2干扰慢病毒感染细胞后,Nrf2蛋白表达与对照组比较显著降低（P〈0．05）。与氧化损伤组比较,Nrf2激动剂组VSMCs活力显著增加（P〈0．05）,细胞凋亡显著降低（P〈0．05）;而Nrf2干扰慢病毒组VSMCs活力显著减弱（P〈0．05）,细胞凋亡明显增加（P〈0．05）。结论激动Nrf2能减轻氧化应激引起的VSMCs损伤,这可为VSMCs损伤的防治提出新的研究方向。     

Nrf2调控抗氧化酶与慢性阻塞性肺疾病

氧化/抗氧化失衡是慢性阻塞性肺疾病(COPD)的主要发病机制之一。γ-谷氨酰半胱氨酸合酶是肺内重要的抗氧化酶。核因子相关因子-2(Nrf2)是上调抗氧化基因表达的关键性转录因子,而BTB-CNC异体同源体1(Bachl)是与Nrf2竞争下调抗氧化基因表达的主要因子。本文综述了调控抗氧化酶转录因子的作用及机制,尤其是氧化应激时Nrf2、Bachl调节靶基因转录的分子机制,对认识COPD的发病和治疗有重要意义。