甘南藏族自治州动物棘球绦虫感染状况调查

目的：了解甘南藏族自治州动物棘球绦虫及棘球蚴的感染状况,为该地区制定防制策略提供依据。方法：2004年8月耀2007年9月在甘南藏族自治州选择玛曲县和碌曲县的8乡21个自然村为调查点,采用鼠夹、粘鼠板捕捉啮齿类动物进行剖检,收集当地屠宰场绵羊、牦牛的肝、肺和心脏等剖检,进行棘球蚴病原学和病理学检查。对家犬、牧羊犬采用15%槟榔碱溶液驱虫,随机捕杀无主野犬剖检十二指肠成虫感染情况。结果：共捕获啮齿类动物331只,经剖检进行病理学检查和鉴定,4只感染多房棘球蚴,即达乌尔鼠兔（Ochotona daurica）和中华鼢鼠（Myospalax fontanieri）,感染率分别为1.2%（1/87）和2.3%（3/132）;6只喜马拉雅旱獭（Marmota himalayana）、34只西藏鼠兔（Ochotona tibetana）和72只小家鼠（Mus musculus）未感染棘球蚴。剖检绵羊1 021头,其中细粒棘球蚴和多房棘球蚴的感染率分别为11.1% （113/1 021）和0.3% （3/1 021）。剖检牦牛634头,其细粒棘球蚴和多房棘球蚴的感染率为19.9% （126/634）和0.3%（2/634）。犬的细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的感染率分别为23.0%（17/74）和5.4%（4/74）。牧羊犬、家犬棘球绦虫的检出率为24.6%（15/61）,无主野犬检出率为6/13,未发现两型绦虫的混合感染。结论：甘南藏族自治州动物以细粒棘球绦虫感染为主,有少量多房棘球绦虫感染。     

两种致病人体棘球绦虫动物宿主感染及影响因素研究进展

棘球蚴病是由棘球绦虫幼虫感染所致的一种危害严重的人兽共患寄生虫病。棘球绦虫生活史可涉及多种动物宿主,如有蹄类动物、啮齿类动物等中间宿主和食肉类动物终末宿主。自然界动物宿主间细粒棘球绦虫及多房棘球绦虫生活史循环与人体棘球蚴病传播密切相关。本文综述了近年来国内外有关细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫主要动物宿主分布及感染的影响因素研究进展,旨在为开展棘球蚴病精准防治提供参考。     

甘南藏族自治州终末宿主犬感染棘球绦虫状况调查

目的掌握甘南藏族自治州终末宿主犬细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫感染状况,为该地区包虫病的传播动力学研究及开展大规模包虫病防治做好前期工作。方法选择碌曲县和玛曲县当地家犬、牧羊犬,采用15%槟榔碱溶液（21mg/kg体重）导泻后检查成虫,随机捕杀当地无主野犬,解剖十二指肠检查成虫。结果终末宿主犬细粒棘球绦虫感染率为22.97%（17/74）,多房棘球绦虫感染率5.41%（4/74）,合计感染率为28.38%,感染犬的感染度为43.29条/只。未发现两种绦虫混合感染。结论甘南藏族自治州犬细粒棘球绦虫感染率较高,并有多房棘球绦虫感染。     

甘南藏族自治州中间宿主牦牛、绵羊棘球蚴感染状况调查

目的掌握甘南藏族自治州中间宿主棘球蚴感染状况,为本地区包虫病的传播动力学研究及开展大规模包虫病防治做好前期工作。方法对碌曲县和玛曲县当地牦牛、绵羊作包虫病病原学检查,记录囊肿大小、数量、寄生部位及性质等,并用10%甲醛溶液固定,做病理切片检查。结果剖检绵羊4309头,细粒棘球蚴感染率为10.61%（457/4309）,多房棘球蚴感染率为0.14%（6/4309）;剖检牦牛3645头,细粒棘球蚴感染率为9.16%（334/3645）,多房棘球蚴感染率为0.14%（5/3645）。结论该地区牦牛及绵羊细粒棘球蚴感染率较高,并有多房棘球蚴感染。     

宁夏棘球属绦虫感染的调查研究

经过调查,在宁夏,家犬为细粒棘球绦虫自然感染的终末宿主,累计平均感染率为1.04％。羊、猪、马属动物,骆驼、牛等以及人是自然感染的中间宿主。在南部山区绵羊感染率为40～85.63％,山羊为21.0％,引黄灌区较低。红狐是多房型棘球绦虫自然感染的终末宿主,累计平均感染率为15％。家犬、家猫不是多房型棘球绦虫自然感染动物(0/385)。人工接种家犬较易感染,接种家猫较难成功(0/2)。达乌里黄鼠的累计平均感染率0.34％。中华鼢鼠(0.2％)和人是自然感染的中间宿主。     

两种棘球绦虫的水通道蛋白基因克隆及功能特性的比较

目的 探索棘球绦虫水通道蛋白(aquaporin, AQP)在棘球蚴、泡球蚴囊液形成中的作用,为阐明棘球蚴、泡球蚴囊液的形成过程以及筛选棘球蚴病新的药物治疗靶点提供理论依据。方法 利用RT-PCR扩增棘球蚴、泡球蚴AQPs基因,构建AQPs体外转录载体,并在非洲爪蟾(Xenopus laevis)卵母细胞中进行异源表达,以验证其水通道功能。利用生物信息学方法分析两种棘球绦虫水通道蛋白跨膜结构域特点及差异,并对棘球绦虫和人AQPs进行多序列比对,分析棘球绦虫AQPs序列结构与人AQPs的差异。结果 通过RT-PCR成功克隆了棘球蚴EgAQP4和EgAQP9、泡球蚴EmAQP4和EmAQP9四个基因,注射了这些基因cRNA的卵母细胞与注射DEPC水的对照组卵母细胞的体积变化率(V/V0)差别无统计学意义(F=1.143,P＞0.05),透水系数差别亦无统计学意义(F=1.416,P>0.05),这四个AQPs基因在非洲爪蟾卵母细胞中未表现出水通道的功能。跨膜结构域预测及多序列比对结果表明,与经典的水通道蛋白相比,EgAQP4和EmAQP4虽然N和C末端均位于胞质侧,但跨膜结构域数目为4个,NPA基序替换为NPM和NPT;而EgAQP9和EmAQP9虽然具有2个保守的NPA基序,但跨膜结构域数目为5个,N末端位于胞外侧、C末端位于胞质侧。棘球绦虫AQPs蛋白结构存在的这些差异,可能与其在卵母细胞中未表现水通道蛋白的功能有关。结论 两种棘球绦虫基因组中都存在编码AQPs的基因,但这些AQPs基因的功能验证试验未见到水通道功能。该结果可能正好说明了囊液的水分子既不能通过AQPs进入生发层细胞而致使细胞肿胀坏死,也不能以AQPs为通道从生发层细胞转移出囊壁,致使囊液累积、棘球蚴包囊或泡球蚴囊泡体积长大。     

原发性脾棘球蚴病1例报道

棘球蚴病由细粒棘球绦虫或多房棘球绦虫引起。人是其中间宿主。当误食虫卵后，六钩蚴经肠壁随血循环侵入组织，主要是肺和肝。孤立的原发性脾棘球蚴病很罕见。继发性的脾棘球蚴病主要是自发的或者手术引起的肝棘球蚴囊的破裂导致原头节向脾播散。这里介绍第一例用超声介导的细针诊断技术诊断的原发性脾棘球蚴病。     

青南高原细粒棘球绦虫mtDNA基因多态性分析

目的与方法为了全面掌握青南高原细粒棘球绦虫的种内变异,我们首次应用mtDNA的coxI基因,nadI基因和atp6基因检测了55个细粒棘球绦虫分离株（37个人体分离株,18个动物分离株）的基因多态性。结果研究结果显示,所检测的55个细粒棘球绦虫分离株与GenBank中检索到的普通羊株（G1型）基因同源性达到90%以上,均为普通羊株（G1型）。将mtDNA相加（共1 327bp）后得到了13个基因型,均被GenBank收录。结论1）55个细粒棘球绦虫分离株均为普通羊株（G1型）;2）结果所得的13个基因型中,既有世界上广泛分布的,也有本研究首次报道的,充分说明青南地区细粒棘球绦虫具有广泛性和普遍性的流行病学特征,青南高原特殊地理环境和气候条件导致细粒棘球绦虫的特殊的核苷酸变异。     

犬体内细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的混合感染

目的 证实家犬体内是否存在细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫混合感染。方法 从新疆和静县巴音布鲁克草原现场收购的30条牧羊犬,经麻醉后处死解剖,在1只雌性牧羊犬小肠内发现棘球绦虫成虫1万条以上,经显微镜观察,疑为细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫混合感染。用Eg1f/r和EM-15/17EM引物分别对两种棘球绦虫的线粒体DNA特异目的片段进行序列分析鉴定。结果 形态学观察:细粒棘球绦虫孕节长大,生殖孔偏后,位于节片一侧中部。子宫有不规则的分支和侧突(侧囊),内含虫卵200~800个。多房棘球绦虫较短小,4~5体节。孕节中子宫呈简单的囊状,无侧囊。生殖孔开口于侧缘的前半部。线粒体12S RNA序列鉴定,扩增样本DNA经同源序列比较发现,与细粒棘球绦虫G1型具有相同的序列;扩增样本与多房棘球绦虫具有相同的序列。分别确定为细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫两种虫种。结论 首次证实家犬体内存在细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的混合感染。     

巢式PCR在鉴别多房棘球绦虫及细粒棘球绦虫基因亚型中的应用

目的 探索巢式PCR在鉴别多房棘球绦虫及细粒棘球绦虫基因亚型中的应用价值.方法 将水泡带绦虫、犬弓首蛔虫、多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫羊株和骆驼株等样本的DNA用巢式PCR扩增.结果 巢式PCR可以扩增出多房棘球绦虫和水泡带绦虫,而对细粒棘球绦虫羊株和骆驼株及其他寄生虫均不能扩增出.结论 在鉴别细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫方面,巢式PCR有一定的诊断意义,但不能用于鉴别细粒棘球绦虫基因亚型.     

青藏高原地区犬棘球绦虫感染的流行病学特征

青藏高原地区是世界上已知的两型棘球蚴病的高流行区,但其犬细粒棘球绦虫的感染率却与世界其他高流行区无明显区别,大部分地区的感染率低于40%。调查资料显示,与其他流行区犬多房棘球绦虫感染呈零星的点状分布特征不同,位于青藏高原的四川省甘孜州和青海省的犬多房棘球感染普遍存在,且感染率较高。甘孜州的犬棘球绦虫总感染率在1983-2009年基本保持稳定,青海省的棘球绦虫属总感染率2000-2014年间变化也不大。2006年以来,我国棘球蚴病流行区启动了一系列综合防治措施,取得了一定成效。2009-2013年,四川省棘球蚴病流行区犬棘球绦虫感染率分别为28.10%、15.87%、19.22%、3.28%和1.11%,甘肃省甘南州、青海省部分区域的犬棘球绦虫感染率也出现了下降。本文对青藏高原地区的犬棘球蚴感染规律和特征进行了文献回顾与分析,以期为棘球蚴病的防控提供可借鉴的信息。     

微囊法棘球蚴继发感染小鼠动物模型的建立

目的 通过体外培养原头蚴发育成微囊,经腹腔注射建立稳定的细粒棘球蚴和多房棘球蚴继发感染小鼠动物模型。方法 无菌条件下采集羊源细粒棘球绦虫原头蚴和鼠源多房棘球绦虫原头蚴,经胃蛋白酶消化后检测虫体活力并计数,于37℃、5%CO₂条件下进行体外培养至发育成微囊,以每鼠50个微囊的剂量经腹腔注射的途径分别接种BALB/c小鼠。接种6个月后,通过腹部解剖大体观察和病理检测分析各组小鼠的感染情况及包虫囊的生长情况。结果 原头蚴在体外培养60d时发育成微囊,显微镜下观察Eg具有明显的透明角质层结构,而Em微囊角质层较薄。小鼠细粒棘球蚴和多房棘球蚴的感染率均为100%,Eg包虫囊为游离单囊,成囊率达70%,囊内无原头蚴;Em包虫囊为类似肿瘤的团块状组织,病灶内有生发囊及原头蚴。结论 采用微囊法可建立稳定的棘球蚴继发感染小鼠动物模型,为疫苗研制、药物筛选和疗效判定提供研究动物模型。     

青海不同株细粒棘球绦虫成虫的超微结构研究

运用透射电镜和扫描电镜分别观察了青岛海高原牦牛和藏羊源原头蚴感染犬后细粒棘球绦虫成虫的超微结构。结果表明两源细粒棘球绦虫成虫的表面结构和皮层结构相似。这些形态结构特点与文献报道明显不同，提示青海高原存在不同株的细粒棘球绦虫。     

青藏高原牦牛原发性细粒棘球蚴的超微结构观察

运用电镜技术对青藏高原牦牛体内原发性细粒棘球蚴的超微结构进行了观察。扫描电镜显示角质层呈板层状结构,基质疏松,可见密集的小颗粒物质或微孔;生发展内表面呈乳突状突起,间隔一定的距离有边缘不整的陷窝,并见大小不等的圆形小赘生物或囊泡镶嵌其上。原头蚴多为内陷型,可见凹陷孔和排泄孔,体表凹凸不平并有长短不一的小柱状微毛不规则排列其上,近排泄孔体表更为密集。鉴于本文结果与文献报道的绵羊及人体棘球蚴超微结构存在明显差异,作者认为青藏高原牦牛体内原发性细粒棘球蚴有可能是我国的一个独立株系。     

棘球蚴AgB抗原家族基因的克隆及抗原表位的预测分析

目的对棘球蚴AgB抗原家族的不同亚单位基因进行克隆,并对序列进行生物信息学分析和抗原表位预测分析。方法根据GenBank中的参考序列设计特异性引物,以我国新疆、甘肃和四川来源的细粒棘球蚴(Eg)和多房棘球蚴(Em)虫体DNA为模板扩增目的基因,将PCR产物克隆到TA载体中测序。用Bioedit分析软件和Blastn、NPS@和IEDB等在线分析系统对序列进行分析。结果分别从细粒棘球蚴和多房棘球蚴中克隆获得AgB抗原的全部5个亚单位基因,经测序确定为正确的目的序列;序列比对分析表明,EmAgB的5个亚单位基因序列高度保守,而EgAgB的亚单位基因变异性较大。细粒棘球蚴和多房棘球蚴种间差异分析显示,相同亚单位基因的序列一致性为87.69%～100%。AgB各亚单位抗原主要的二级结构包括α-螺旋、β-折叠和无规卷曲等3个类型。其中,AgB1、AgB2和AgB4等3个亚单位抗原中无规卷曲所占比例较高。AgB各亚单位抗原预测表位区共10个,分别是AgB1:1～7和21～27,AgB2:1～7和29～36,AgB3:1～11和18～28,AgB4:1～13、27～37和39～60,AgB5:1～11。结论 EgAgB和EmAgB亚单位抗原表位区的大部分序列一致或相似,预测的10个表位区主要位于序列N端。在5个亚单位抗原中,AgB1、AgB2和AgB4的抗原性较高。