半胱氨酸蛋白酶-8和P53在慢性砷中毒大鼠肾近端小管表达的研究

目的 探讨慢性砷中毒大鼠肾近端小管细胞半胱氨酸蛋白酶-8(caspase-8)和P53表达致肾脏损伤的分子机制.方法 60只SD大鼠分为对照组,低、高剂量组,每组20只,高、低剂量组分别给予三氧化二砷(As2O3) 10.0、0.4 mg/kg水溶液自由饮用,对照组自由饮用蒸馏水.分笼4个月,测定血砷、尿砷,取肾脏标本,组织学技术HE染色,免疫组织化学(SABC)法检测大鼠肾小管上皮细胞caspase-8、P53免疫阳性细胞,并进行计数和图像分析研究.结果 对照组,低、高剂量组肾近端小管上皮caspase-8阳性细胞计数[(3.33±1.32)、(31.14±8.02)、(46.50±7.20)个/视野]依次增加(P均＜0.05),平均灰度值(151.34±6.40、133.58±4.63、128.34±16.28)依次降低(P均＜0.05),P53阳性细胞计数[(3.17±1.59)、(26.29±4.23)、(47.00±6.22)个/视野]依次增加(P均＜ 0.05),平均灰度值(142.54±8.06、121.48±5.68、101.89±6.35)依次降低(P均＜0.05).结论 caspase-8、P53阳性细胞增多是砷中毒致肾脏损伤的分子机制之一.     

蛋白激酶C-α、蛋白激酶C-βⅠ和蛋白激酶C-βⅡ在糖尿病肾病患者肾小球中的表达及其意义

目的探讨蛋白激酶C（PKC）-α、PKC-βⅠPKC-βⅡ在人正常肾组织以及糖尿病肾病患者（DN）肾小球中的表达及其与肾小球内转化生长因子（TGF-βⅠ和血管内皮细胞生长因子（VEGF）的关系。方法以正常肾组织为对照，取糖尿病肾病患者活检肾组织，采用PAS染色判定肾小球细胞外基质（ECM）扩张程度，半定量免疫组织化学法检测PKC-α、PKC-βⅠPKC-βⅡ、TGF-βⅠVEGF在肾小球中的表达。结果（1）PKC-α、PKC-βⅠPKC-βⅡ在正常肾小球中均有表达；（2）糖尿病肾病患者肾小球中PKC-α、PKC-βⅠTGF-β1和VEGF的表达明显增强而PKC-βⅡ的表达明显减弱，且肾小球ECM明显增加。其中PKC-α与VEGF的表达变化呈正相关（r，=0．600，P=0．039），PKC-βⅠTGF-βⅠ表达呈正相关（r=0．521,P=0．043）。结论PKC-α、PKC-βⅠPKC-βⅡ在正常人以及DN患者肾小球中的表达不同；PKC-α可能通过增强肾小球内VEGF的表达，而PKC-βⅠ能通过增强肾小球内TGF-βⅠ表达参与DN的发病过程。     

蛋白激酶C-δ ：防治糖尿病血管并发症的新靶点

糖尿病并发症是糖尿病患者致死致残的主要原因,其病理生理机制中涉及蛋白激酶C（PKC）信号途径的激活。PKC-δ亚型的激活及其产生的后续效应参与了糖尿病大血管及微血管病变的发生发展。在细胞凋亡、增殖迁移及调节血管功能相关的细胞因子及细胞外基质方面,PKC-8起到关键作用。故开发针对PKc-δ的特异性药物具有很大的前景。     

丹参对高血压大鼠心肌蛋白激酶C表达的影响

20 0 2年 9月至 2 0 0 3年 2月 ,我们采用自发性高血压大鼠 (SHR)为模型 ,以传统中药丹参进行干预 ,检测心肌蛋白激酶 C(PKC)在心肌中的表达 ,观察丹参对 PKC的影响 ,探讨丹参在预防高血压左室肥厚中的作用及可能机制。1　材料与方法1 .1　动物模型、分组及丹参用法　选用 SHR及正常血压大鼠 (WKY)由中国医学科学院动物中心提供 ,均为雄性 ,体重 2 75～ 3 3 0 g。 SHR大鼠随机分为两组 :高血压阳性对照组 (SHR组 ) 7只和丹参治疗组(SMB组 ) 7只。用年龄、数量配对的 WKY大鼠作为阴性对照组 (WKY组 ) 6只。丹参治疗组自第 8周龄…     

慢性砷中毒患者的护理

砷在潮湿的空气中易被氧化生成三氧化二砷。三氧化二砷又名亚砷酐,俗称砒霜、砒石、信石、白砒,为白色粉末,微溶于水。三氧化二砷作为外用中药、灭鼠药、杀虫剂、消毒防腐剂[1]。在自然界中,砷主要以硫化物的形式存在,如雄黄、雌黄等。民间治疗疮疡皮肤病及便秘时,有使用含砷中     

蛋白激酶CK2α和同源框基因NKX3.1在前列腺癌组织中表达的相关性研究

目的 通过对蛋白激酶CK2α和同源框基因NKX3.1在前列腺癌组织中的表达的研究,探讨二者在前列腺癌中的相关性.方法 通过逆转录PCR技术检测40例前列腺癌及40例前列腺增生组织中的蛋白激酶CK2及NKX3.1的表达变化.结果 前列腺增生组织中CK2α呈明显低表达,而NKX3.1呈明显高表达(P＜0.01);在前列腺恶性肿瘤组织中CK2α呈明显高表达,而NKX3.1呈低表达(P＜0.01).结论 蛋白激酶CK2α及同源框基因NKX3.1在前列腺增生组织和前列腺癌的中的表达呈负相关.     

蛋白激酶C-βⅡ在糖尿病肾病中的研究进展

蛋白激酶C-βⅡ(PKC-βⅡ)是单个多肽链,包含由5个可变区(V1～V5)间隔的4个保守结构域(C1～C4).高糖环境可导致组织中二酰甘油水平普遍升高,进而激活PKC-βⅡ.而PKC-βⅡ能够激活一系列下游信号通路,引发多组织器官发生病变,导致糖尿病并发症发生,如糖尿病肾病等.PKC-βⅡ抑制剂LY333531可以通...     

α-硫辛酸对糖尿病大鼠下丘脑和骨骼肌组织腺苷酸活化蛋白激酶表达及活性影响的研究

目的 观察α-辛酸对糖尿病大鼠腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的影响,探讨其改善糖尿病代谢异常的作用.方法 将大鼠分为正常对照(NC)组、T2DM (T2DM)组、糖尿病α-硫辛酸干预(LA)组.Western blot检测下丘脑及骨骼肌组织AMPKα及ph-AMPKα蛋白的表达,RT-PCR测AMPKα mRNA表达.结果 与NC组比较,T2DM组骨骼肌、下丘脑内AMPK表达水平(21％和22％)及活性(37％和21％)降低(P＜0.05),血糖、血脂水平升高;与T2DM组比较,LA组骨骼肌内AMPK表达水平(20％)及活性(49％)升高(P＜0.05),而下丘脑内AMPK表达水平(17％)及活性(36％)降低(P＜0.05),血糖、血脂水平降低.结论 α-硫辛酸可激活骨骼肌AMPK,抑制下丘脑AMPK活性,可能是其改善糖脂代谢异常的部分机制.     

慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺动脉内蛋白激酶Cα的膜转位和蛋白表达量的影响

目的 通过观察慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺动脉内蛋白激酶Cα(PKCα)的膜转位和蛋白表达量的影响,初步探讨PKCα在慢性低氧诱导大鼠肺动脉高压的发生和发展过程中所起的作用.方法 采用慢性常压低氧[氧浓度(10±0.1)％]大鼠肺动脉高压模型,将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14 d和21d组,检测大鼠右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),肺组织苏木精-伊红(HE)染色,应用蛋白免疫印迹和免疫组织化学的方法检测PKCα膜转位和蛋白表达水平的变化.结果 ①低氧1d、3d、7d、14 d和21d组与正常对照组相比,RVSP和RV/(LV+S)比值均明显增加(P＜0.05),低氧暴露3d、7d、14 d和21 d后大鼠肺动脉壁明显增厚;②PKCα的蛋白表达量在慢性低氧1d、3d、7d和14 d后比正常对照组明显下降(P＜0.05).结论 PKCα蛋白表达量的下调可能参与了慢性低氧诱导的大鼠肺动脉高压的发生和发展过程.     

慢性砷中毒大鼠模型肾小球细胞凋亡及Fas表达的影响分析

<正>慢性砷中毒为砷中毒的一种,主要由砷化合物引起,其中以三氧化二砷即砒霜引起的中毒。该疾病表现为神经衰弱症状,除此之外多表现为多样性皮肤损害,长期接触砷的人其肺癌、胃癌等发病率大大增加。1材料与方法1.1材料冰冻切片机(德国Leica);石蜡切片机(德国Leica)IPWIN图像分析软件,LEICADME计算机图像分析系统(上海徕卡公司)。三氧化二砷,分析纯(北     

高糖对血管内皮细胞蛋白激酶Cα和δ表达及功能的影响

以高糖培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）研究显示,高糖可诱导血管内皮细胞（EC）功能紊乱,凋亡增加,NO浓度降低,可溶性细胞间黏附分子1水平增加;高糖可诱导HUVECs的蛋白激酶C（PKC）α及PKCδ表达位置转移,PKCδ表达增强,但对PKCα表达影响不明显。高糖所致EC功能异常,可能部分是通过PKCα及PKCδ途径来实现的。     

蛋白激酶CK2α基因在肝癌中的表达及其意义

为了克隆肝癌中CK2α基因并研究其功能。通过逆转录PCR从肝癌组织及癌旁肝组织中获得CK2α亚基因编码区cDNA。利用表达载体pT7—7进行定向克隆。IPTG诱导表达，Western blot鉴定。CK2α在肝癌中表达强于癌旁肝组织。转化子的阳性筛选率为100％。重组质粒转化表达菌经IVTG诱导后出现一个分子量42kDa蛋白过度表达，Western blot结果证明，过度表达产物能与抗人CK2α亚基抗体发生特异性免疫反应。结论 蛋白激酶CK2α亚基在肝癌中表达，并产生一定的功能。     

砷中毒大鼠肝脏亚细胞组分中砷的分布

目的　研究砷中毒大鼠肝脏亚细胞组分 (细胞核、线粒体、溶酶体、微粒体及胞液 )中砷的分布 ,为地方性砷中毒的治疗提供科学依据。方法　用亚砷酸钠 (Na As O2 )诱导出大鼠亚急性砷中毒模型 ,采用差速离心生化分离技术与超热中子活化分析相结合 ,测定大鼠肝脏亚细胞组分中砷的含量。结果　中毒组大鼠肝脏中各亚细胞组分中砷的含量均极显著高于正常对照组 (P <0 .0 1或 P <0 .0 0 1) ;且砷在各亚细胞组分中的浓度并非均匀分布 ,在中毒组肝脏亚细胞中的浓度遵循微粒体 >胞液 >线粒体 >细胞核。结论　砷在微粒体、胞液和细胞核中的大量蓄积 ,可能导致肝细胞损伤。     

蛋白激酶C参与调节肿瘤坏死因子α刺激大鼠气管上皮细胞MUCSAC蛋白的表达

气道黏液高分泌是呼吸道多种疾病如慢性史气管炎、支气管哮喘(简称哮喘)和囊性肺纤维化等发病仉制的一个重要特征。目前黏液分秘的机制尚不清楚．近年讲究发现MUC5AC蛋白在气道分泌物中尤为重要。我们的实验旨在研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)在MUC5AC黏蛋白高分泌中的作片及其刺激黏蛋白高表达的细胞内机制。     

大鼠哮喘模型气道蛋白激酶C表达的研究

观察大鼠哮喘模型气道蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）表达的变化，为探讨ＰＫＣ在哮喘发病机制中的作用提供实验资料。材料与方法　（１）大鼠哮喘模型的建立：参照吕国平等［１］报道的方法，哮喘组大鼠每只腹腔内注射抗原液１ｍ１致敏，２周后用超声雾化喷雾１％鸡卵清蛋白（ＯＶＡ）让大鼠吸入２０分钟激发哮喘，对照组腹腔内注射０９％生理盐水１ｍ１。（２）分组：ＳＤ雄性大鼠（同济医科大学实验动物中心提供）２８只，体重１５０～２５０ｇ，随机分为４组，每组７只。Ａ组（正常对照组）：喷雾生理盐水２０分钟，每日１次，共２周。Ｂ组（即…     

蛋白激酶C及其在肾脏疾病中的作用

虽已知蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)参与信号转导途径、细胞增殖、分化和凋亡,但PKC在肾脏疾病中的作用尚未完全阐明。正常肾组织中可见多种PKC同工酶,肾脏     

蛋白激酶C和TGF-β1在糖尿病大鼠肾脏中的表达

目的研究糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶C（PKC）活性变化和转化生长因子-β1（TGF-β1）的动态变化，探讨二者之间相互关系及其与糖尿病肾病（DN）发生发展的关系。方法用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠实验模型，将大鼠随机分为正常对照组（N）、糖碌病2w组（DM2）和糖尿病4w组（DM4）。断头处死，分离肾小球，提取纯化胞浆及胞膜蛋白，利用（γ-32^P）-ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC括性。用免疫组织化学和400倍光镜检测TGF-β1在各组大鼠肾脏的表达。结果（1）糖尿病大鼠肾小球细胞内总的PKC活性与对照组无显著性差异，胞浆PKC活性略有下降，相差不显著；肾小球细胞膜PKC活性明显高于正常对照组，膜结合PKC百分比显著增加，且细胞膜PKC活性与肾脏肥大指数及Cer呈正相关。（2）糖尿病组TGF-β1的表达多于正常组。（3）肾小球细胞膜PKC活性与TGF-β1的表达正相关。结论高血糖慢性刺激可引起肾小球PKC活性增高，并诱导TGF-β1的表达。在糖尿病早期肾内血流动力学改变中发挥着重要的调控作用。     

烟雾暴露和低氧单独及联合作用对大鼠肺血管重建及蛋白激酶C-α表达的影响

目的探讨烟雾暴露和低氧单独及联合作用对大鼠肺血管重建及蛋白激酶C-α(PKC-α)表达的影响。方法健康雄性W istar大鼠56只,随机分为正常对照组(C组)、烟雾暴露组(S4W组和S8W组)、低氧组(H4W组和H8W组)和烟雾暴露+低氧组(SH4W组和SH8W组),复制大鼠慢性烟雾暴露及低氧模型。右心导管法记录并测定平均肺动脉压(mPAP),分离心脏计算右心室肥厚指数(RVH I)。弹力纤维染色计算腺泡内肺动脉3种类型血管的构成比及肺动脉管壁骨架蛋白(α-SM-actin)染色显示肺血管重建,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡、增殖细胞核抗原(PCNA)染色检测细胞增殖、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PKC-αmRNA表达,免疫荧光及W estern b lot检测PKC-α蛋白表达。结果与C组大鼠mPAP[(14±4)mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa]比较,H4W、H8W、SH4W、SH8W组大鼠mPAP均显著增高[(31±7)(32±8)、(32±9)、(31±10)mm Hg,P均<0.01],而S4W、S8W组均无显著升高[(15±5)、(16±6)mm Hg,P均>0.05]。S4W、S8W、H4W、H8W、SH4W和SH8W组大鼠RVH I(0.258±0.024、0.394±0.021、0.374±0.020、0.414±0.019、0.434±0.023、0.442±0.020)、肌型动脉占血管总数的百分比[(33.5±6.8)%、(41.1±9.8)%、(35.9±6.6)%、(46.0±6.3)%、(42.9±6.5)%、(50.2±9.9)%]及α-SM-actin表达(53±15、75±14、56±11、82±17、83±17、98±16)均显著高于C组(P均<0.01),凋亡指数(2.5±1.0、3.8±1.4、2.3±1.1、3.3±1.1、3.5±1.4、4.8±1.4)和增殖指数(33.1±11.8、43.8±11.0、36.5±10.6、46.3±12.1、45.3±12.4、53.3±13.4)均高于C组(P均<0.01)。肺动脉PKC-αmRNA和蛋白的表达均增强(P均<0.01)。且SH4W、SH8W组各指标分别与H4W、H8W组比较,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论烟雾暴露和低氧均能诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡与增殖,导致肺血管重建,二者协同作用能加重肺血管重建;激活PKC信号转导途径可能是其部分机制。     

低甲状腺激素状态大鼠的肾脏结构

对低甲状腺激素状态(简称低甲)大鼠的肾脏进行了光、电镜下立体计量学研究。结果表明,肾小体体积减小,肾小管管径变细,近端小管刷状缘变短,线粒体体积减少,侧基底细胞膜面积减少。这些发现为低甲时肾功能的改变提供了形态学依据。     

阻断肾素-血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性的影响

目的　观察阻断肾素 血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾组织蛋白激酶C(PKC)活性的影响。方法　以链脲佐菌素造成大鼠糖尿病模型。未给予链脲佐菌素的大鼠作为正常对照组 (A组 ) ,糖尿病大鼠分为未处理组 (B组 )、福辛普利治疗组 (C组 )、洛沙坦治疗组 (D组 )和福辛普利 洛沙坦联合治疗组 (E组 )。 2 4周后测血糖、HbA1c、肾重 /体重、尿蛋白排泄率 (UPER)及肾组织PKC活性。结果　 ( 1)B组的肾重 /体重和UPER显著高于其余各组 ,C组和D组之间差异无显著性 ,E组较C组和D组更低 (P <0 .0 5 )。 ( 2 )B组肾组织膜PKC活性显著高于A组 (P <0 .0 0 1)、C组、D组和E组 (P <0 .0 1) ;B组胞液PKC活性显著低于A组(P <0 .0 1)、C组、D组和E组 (P <0 .0 5 ) ;B组胞液和膜PKC活性比显著低于A组 (P <0 .0 0 1)、C组、D组和E组 (P <0 .0 1)。C组和D组胞液PKC活性、膜PKC活性及二者之比差异无显著性 ,但E组的变化较C组和D组更为显著 (P <0 .0 5 )。结论　 ( 1)血管紧张素转化酶抑制剂 (ACEI)和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)均能减轻糖尿病大鼠的肾脏肥大 ,减少UPER。 ( 2 )长期高糖可引起大鼠肾脏PKC活性异常升高并诱导胞液PKC向细胞膜转位。 ( 3 )ACEI和ARB均可抑制糖尿病大鼠肾脏PKC活性的升高及转位 ,二者的作用相当 ,联合