灵芝孢子粉破壁技术、质量分析与深加工相关研究进展

破壁灵芝孢子粉为一种灵芝深加工产品,具有多种药理学活性,更易被人体吸收。灵芝孢子的破壁方法包括生物化学法、物理法和机械法等,工业生产多综合利用多种方法。破壁灵芝孢子粉的质量分析还没有统一的国家标准,灵芝孢子粉质量可以参考地方标准进行综合评价,还可以参考近期发表的一些分析方法。灵芝孢子粉提取物产品以孢子油为主,其它产品也有研发并推出市场。药理学研究表明,灵芝孢子油、灵芝孢子粉水提物和醇提物均具有抗癌活性,有良好的应用前景。     

灵芝孢子油中三萜类成分的定量研究

灵芝孢子油对肿瘤的抑制作用已经由药理实验得到公认。中国科学院中科灵芝项目组对其抗癌作用的研究表明，灵芝孢子油是灵芝孢子抗癌作用的“主力”，其抑瘤率平均可达91．16％。文献报道，灵芝孢子油中包含了灵芝孢子中的三萜类、多糖类及核苷类等全部有效成分，是灵芝孢子有效成分的集合体。采用超临界CO2萃取技术从灵芝孢子粉中提取孢子油，     

灵芝孢子粉、破壁灵芝孢子粉对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长和VEGF表达的比较研究

目的:比较灵芝孢子粉、破壁灵芝孢子粉对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:采用C_(57)BL/6小鼠左前肢腋下皮下接种建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,灵芝孢子粉、破壁灵芝孢子粉各设3、2、1g/kg三个剂量组,连续灌胃给药18天。给药期间观察小鼠体重,记录肿瘤体积变化;末次给药后处死,取肿瘤、胸腺和脾脏,称重并计算抑瘤率、胸腺指数和脾指数;HE染色观察肿瘤组织病理状况;Tunel法检测肿瘤组织细胞凋亡情况;免疫组化法检测肿瘤组织VEGF表达。结果:灵芝孢子粉与破壁灵芝孢子粉均有抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤的作用,但破壁灵芝孢子粉(3、2g/kg)在提高荷瘤小鼠体重、脾指数、抑制肿瘤生长方面的效果优于灵芝孢子粉;破壁灵芝孢子粉能诱导肿瘤细胞凋亡,降低VEGF蛋白表达。结论:破壁灵芝孢子粉抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长的效果优于灵芝孢子粉,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡、降低VEGF表达有关。     

从灵芝类保健食品批准情况看未来中药类保健食品发展方向

灵芝在中国有近千年的使用历史,在传统中药中被列为上品,其养生保健作用被历代医家认可。近年来,灵芝可用部位不断被挖掘,在保健食品中的可用部位原料包括灵芝子实体、灵芝孢子粉、灵芝孢子油和灵芝菌丝体。截至2018年底,已批准含有上述可用部位的保健食品数量达到1270余个。本研究首次系统地对1997年以来批准的灵芝类保健食品进行分类梳理总结。首先对每个可用部位的单方和复方产品批准情况分别统计;再对灵芝传统使用部位的复方保健食品配方配伍进行分析;最后以灵芝为例,分析了已批准中药类保健食品的现状,提出未来中药类保健食品发展方向。     

灵芝孢子粉提取物对裸鼠移植性人肝癌血管生成的抑制作用

目的:研究灵芝孢子粉提取物对裸鼠移植性人肝癌血管生成的影响,并初步探讨其抑瘤机制.方法:建立裸鼠移植性人肝肿瘤模型,采用随机区组设计法随机分为空白对照组、5-氟尿嘧啶组及灵芝孢子粉提取物组,观察裸鼠肿瘤生长.采用苏木精-伊红染色法、SP免疫组织化学法及病理Imagepro Plus 5.0彩色图像定量分析法检测裸鼠肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD).结果:灵芝孢子粉为2.1 g生药/kg时,对裸鼠移植瘤的抑制率为57.0%,与空白对照组比较有极显著差异(P<0.01).镜下观察,灵芝孢子粉组与空白对照组相比,肿瘤坏死组织较多,细胞异型性较小.灵芝孢子粉组VEGF、MVD表达水平较空白对照组有明显下降.结论:高浓度及大剂量的灵芝孢子粉对肝肿瘤有明显的抑制作用,并能抑制肿瘤新生血管生成,其机制可能与对VEGF表达的抑制有关.     

灵芝孢子粉引起胃肠道肿瘤患者CA72-4升高3例并文献分析

灵芝孢子粉是由多孔菌科真菌灵芝加工制作的保健产品,在我国拥有很高的知名度和广泛的使用率,2002年灵芝孢子粉获美国食品和药物管理局(Food and Drug Administration,FDA)认证,成为成功进入美国市场的中药之一[1]。近年来,大量体内外实验证实灵芝孢子粉具有多种药理特性,特别对于肿瘤患者能够起到抑制肿瘤增殖与转移,促进肿瘤细胞凋亡,改善患者免疫状态,增强放化疗敏感性等作用,成为临床推荐的肿瘤辅助治疗药物之一[2,3]。目前,研究普遍认为灵芝孢子粉是一种安全、有效的药物[4],但这种安全性并未经过严格的随机对照试验证实。笔者在临床治疗中发现3例胃肠道肿瘤患     

灵芝及灵芝孢子提取物的抗肿瘤及对DNA拓扑异构酶作用的研究

目的：观察灵芝子实体水提物及醇提物混合品（灵芝提取物）、灵芝孢子粉提取物（油）的体内外抗肿瘤作用,并测定它们对DNA拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ的作用。方法：台盼蓝计数法、MTT法观察体外对肿瘤细胞的抑制作用;应用小鼠移植瘤模型研究体内抗肿瘤作用,同时测定荷瘤小鼠的胸腺指数及脾指数;DNA超螺旋解旋法测定拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ活性。结果：灵芝提取物对K562、HL60、SGC-7901细胞作用24h的IC50值分别为0.44mg/ml、0.39mg/ml、0.90mg/ml,灵芝孢子油对K562、HL60、SGC-7901细胞作用24h的IC50值分别为1.13mg/ml、2.27mg/ml、6.29mg/ml;体内实验中,对S180、H22移植瘤株的抑制率灵芝提取物4g/kg分别为39.1%、44.6%,灵芝孢子油1.2g/kg分别为30.9%、44.9%;灵芝提取物1g/kg和2g/kg对S180的抑制率分别为15.6%和19.0%,对H22的抑制率分别为28.8%和38.5%;灵芝提取物对荷瘤小鼠的免疫功能有一定的上调影响,灵芝孢子油则无明显作用;两者对拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ的活性均有抑制作用。结论：灵芝提取物、灵芝孢子油均具有体内外抗肿瘤作用,二者的抗癌机制与抑制拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ的活性有关。     

灵芝孢子油乳剂及含药血清对L929细胞的增殖影响

目的：分别观察灵芝孢子油乳剂以及灵芝孢子油乳剂含药血清对L929细胞增殖抑制的影响。方法：分别用灵芝孢子油乳剂以及给小鼠腹腔注射7天乳剂后所取血清，MTT比色法检测对L929细胞增殖作用影响。结果：灵芝孢子油乳剂在较高浓度时对L929有抑制作用，较低浓度时有促进作用。含药血清在较高浓度时对L929有促进作用，较低浓度时有抑制作用。结论：灵芝孢子油乳剂以及灵芝孢子油乳剂含药血清对L929细胞增殖抑制结论不一致。     

灵芝孢子油软胶囊对H22肝癌小鼠抑瘤作用及免疫功能的影响

目的:研究灵芝孢子油软胶囊抗肝癌作用及对肝癌小鼠免疫功能的影响。方法:将接种H22肝癌细胞的小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组、灵芝孢子油高、中、低剂量组。给药7d后剥离瘤块,计算肿瘤抑制率;给药11d后检测各组小鼠网状内皮细胞的吞噬功能、体液免疫功能、特异性细胞免疫功能、TNF-α、IFN-γ生物调节因子水平。结果:高剂量灵芝孢子油对H22实体瘤的生长具有显著性的抑制作用。高、中、低剂量灵芝孢子油均可显著提高荷瘤小鼠网状内皮细胞吞噬功能及特异性细胞免疫功能(P<0.05,P<0.01);高、中剂量灵芝孢子油可显著提高荷瘤小鼠的血清溶血素水平(P<0.05,P<0.01);高剂量灵芝孢子油能显著提高荷瘤小鼠血清生物调节因子IFN-γ和TNF-α水平(P<0.05)。结论:灵芝孢子油能有效抑制H22肝癌小鼠实体瘤的生长,调节荷瘤小鼠的免疫功能可能是其发挥作用的途径之一。     

破壁与不破壁灵芝孢子粉多糖的分析

目的研究灵芝孢子粉多糖的组成、相对分子质量及相对分子质量分布,比较破壁与不破壁灵芝孢子粉多糖的异同。方法用不同提取方法提取灵芝孢子粉多糖,采用气相色谱-质谱(GC-MS)、高效液相色谱(HPLC)分析灵芝孢子粉多糖的单糖组成,用凝胶渗透色谱(GPC)分析灵芝孢子粉多糖的相对分子质量及其分布。结果不同提取方法所得灵芝孢子粉多糖的得率不同,破壁后灵芝孢子粉含的多糖是不破壁的1.7倍;灵芝孢子粉多糖是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖,破壁与不破壁的多糖组成完全相同,其相对质量分数略有区别;破壁灵芝孢子粉多糖的GPC有两个多糖峰,相对分子质量分别为7.80×104和1.17×104,而不破壁灵芝孢子粉多糖只有相对分子质量为7.80×104的一个峰。结论破壁与不破壁孢子粉多糖的单糖组成相同,但破壁灵芝孢子粉多糖较不破壁孢子粉的多糖高出70%,增加部分为相对分子质量较小的多糖。这可以解释破壁灵芝孢子粉的功效好于不破壁灵芝孢子粉的原因。     

灵芝精粉和孢子粉对荷瘤鼠IL-2及TNF-α的诱生作用

目的：探讨灵芝精粉和孢子粉抗肿瘤的免疫学机理。方法：采用Elisa法测定不同剂量灵芝精粉和孢子粉对S180荷瘤小鼠IL-2、TNF-α含量的影响。结果：小剂量组（0．5mg／kg体重）IL-2和TNF-α水平明显高于对照组（P〈0．05）。结论：小剂量的灵芝精粉和孢子粉对荷瘤鼠IL-2、TNF-α均有一定的诱生作用，提示小剂量的灵芝精粉和孢子粉可能通过影响宿主BRM系统而发挥其抑制肿瘤的作用。     

一种灵芝孢子粉收集器的研究

目的:开发一种方便实用、低本高效的灵芝孢子粉收集器,收集优质灵芝孢子粉.方法:利用白卡纸或油光纸等通用材料,生产灵芝孢子粉收集器,以温度、湿度为主要指标比较孢子粉采集器对灵芝生长环境的影响,并调查集粉效果.结果:研发的灵芝孢子粉采集器能有效地把灵芝子实体与外界相对隔离,形成一个基本封闭的独立空间,阻止了孢子粉的自由飘散;孢子粉采集器的使用对灵芝生长的温度与湿度等环境影响小,不仅不会影响灵芝子实体发育,而且因采集器内空气相对湿度变化更趋平缓而更有利于孢子粉的散发.结论:该灵芝孢子粉采集器孢子粉收集效率高、质量好,大面积应用时灵芝孢子粉产量可达孢子粉与灵芝子实体总量的38.3%.     

灵芝孢子油对MCF-7细胞凋亡及迁移的影响

目的：观察灵芝孢子油对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：CCK-8法检测灵芝孢子油对MCF-7增殖的影响;伤口愈合实验观察灵芝孢子油对MCF-7细胞迁移的作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT—PCR法检测抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Bax及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达水平。结果：不同浓度的灵芝孢子油对MCF-7的增殖和迁移均有一定程度的抑制作用,且呈时间、剂量依赖性;灵芝孢子油能显著诱导MCF-7细胞凋亡;RT—PCR结果显示,灵芝孢子油能上调Bax同时下调Bcl-2和VEGF的mRNA表达水平。结论：灵芝孢子油能抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调VEGF和Bcl-2／Bax的比值有关。     

灵芝孢子油通过下调miR-21促进人肺腺癌SPC-A1细胞凋亡

目的:通过检测灵芝孢子油对人肺腺癌细胞SPC-A1增殖、凋亡与miR-21及其靶基因表达的影响,探讨灵芝孢子油的抗肿瘤机制。方法:灵芝孢子油处理人肺腺癌细胞SPC-A1 24 h以及48 h后,采用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡,Real-time PCR检测miR-21及其靶基因PTEN和PDCD4的表达。结果:灵芝孢子油剂量、时间依耐性地抑制人肺腺癌SPC-A1细胞的增殖;当灵芝孢子油体积分数达到0.2%时,细胞形态发生明显变化;Annexin-V/PI双染检测提示,灵芝孢子油在低浓度下就可促进细胞凋亡;灵芝孢子油显著下调SPC-A1细胞中miR-21的表达并相应上调PTEN以及PDCD4基因的表达。结论:灵芝孢子油能显著抑制人肺腺癌细胞SPC-A1细胞增殖,引起细胞形态学改变。通过下调miR-21的表达,上调抑癌基因PTEN以及PDCD4的表达,从而促进肺癌细胞凋亡,达到抗肿瘤的作用。     

灵芝孢子油通过下调miR-21促进人肺腺癌SPC-Al细胞凋亡

目的:通过检测灵芝孢子油对人肺腺癌细胞SPC-Al增殖、凋亡与miR-21及其靶基因表达的影响,探讨灵芝孢子油的抗肿瘤机制.方法:灵芝孢子油处理人肺腺癌细胞SPC-Al 24 h以及48 h后,采用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡,Real-time PCR检测miR-21及其靶基因PTEN和PDCD4的表达.结果:灵芝孢子油剂量、时间依耐性地抑制人肺腺癌SPC-Al细胞的增殖;当灵芝孢子油体积分数达到0.2%时,细胞形态发生明显变化;Annexin-V/PI双染检测提示,灵芝孢子油在低浓度下就可促进细胞凋亡;灵芝孢子油显著下调SPC-Al细胞中miR-21的表达并相应上调PTEN以及PDCD4基因的表达.结论:灵芝孢子油能显著抑制人肺腺癌细胞SPC-Al细胞增殖,引起细胞形态学改变.通过下调miR-21的表达,上调抑癌基因FFEN以及PDCD4的表达,从而促进肺癌细胞凋亡,达到抗肿瘤的作用.     

破壁灵芝孢子粉对虚热证和虚寒证小鼠环核苷酸水平及免疫功能的影响

目的研究破壁灵芝孢子粉(Sporoderm-broken Spores of Ganoderma Lucidum,SSGL)对虚热和虚寒证小鼠环核苷酸水平及免疫功能的影响。方法健康雄性昆明小鼠适应性喂养一周后随机分组,用甲状腺素、氢化可的松分别制备小鼠虚热、虚寒模型,各组给予相应药物后观察破壁灵芝孢子粉对虚热和虚寒证小鼠血清环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)、cAMP/cGMP、白介素-2(interleukin-2,IL-2)、白介素-4(interleukin-4,IL-4)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)等的影响。结果与虚热模型组比,破壁灵芝孢子粉高剂量能升高小鼠体重、胸腺和脾脏指数(P0.05),并降低小鼠血清中cAMP、cGMP、cAMP/cGMP值(P0.05);破壁灵芝孢子粉低剂量升高小鼠脾脏指数、血清中cAMP、cGMP、IL-2、TNF-α值(P0.05),降低IL-4值(P0.01)。与虚寒模型组比,破壁灵芝孢子粉高、低剂量均能升高小鼠的体重、免疫脏器指数、血清中cAMP、cGMP、cAMP/cGMP、IL-2、TNF-α值(P0.05),并降低小鼠血清中IL-4值(P0.05)。结论破壁灵芝孢子粉能降低虚热证小鼠环核苷酸水平,升高虚寒证小鼠环核苷酸水平,具有"平"性药"双向适用,条件显性"药性特点;同时破壁灵芝孢子粉性平偏温,味甘能补,具有扶正固本功效,能调节虚热和虚寒证小鼠免疫功能。     

灵芝孢子粉免疫调节作用的研究

灵芝孢子是灵芝繁殖后代的种子。据国内许多资料报道 ,灵芝孢子粉具有抑制肿瘤、调节免疫、调节神经、调节机能四大药理作用 ,对很多因机能、神经不调而引起的疾病效果很好。为了验证灵芝孢子粉的免疫调节作用强弱 ,作者进行了灵芝孢子粉免疫调节作用的研究。现将研究结果报告如下。1　实验材料1 1　样品　由本中心提供神力源牌灵芝孢子粉 ,样品为袋装红棕色粉末 (10 0 0ｇ) ,室温保存。1 2　实验动物　选用中国人民解放军军事医学科院学实验动物中心繁殖的ＢａｌＢ/ｃ健康雌性小鼠 48只 ,体重 8～ 2 2ｇ ,分为 4组 ,每组 12只 ,作为免疫 1…     

灵芝孢子油对化学性肝损伤保护作用的研究

目的探讨灵芝孢子油对化学性肝损伤的保护作用。方法分别以0.17g/Kg、0.33g/Kg、1.00g/Kg三个剂量对小鼠每日灌胃给予灵芝孢子油,空白对照组和模型对照组给予玉米油。30天后将各组动物禁食16h,模型组及灵芝孢子油各剂量组动物按0.1ml/10g一次灌胃给予CCl4制作模型,灵芝孢子油各组造模4h后继续给予灵芝孢子油。24h后摘取小鼠眼球取血,分离血清,测定ALT、AST,同时处死动物,取肝脏进行组织病理学检查。结果CCl4模型组小鼠的ALT、AST含量比空白对照组显著升高(P<0.05),低、中、高各剂量组的ALT值及AST值与CCl4模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。结论灵芝孢子油对CCl4化学性肝损伤具有保护作用。     

超临界CO2萃取灵芝孢子油的工艺条件研究

灵芝孢子是灵芝在发育后期产生释放出的种子,是灵芝的精华,而灵芝孢子油中包含了灵芝孢予中的三萜类、多糖类及核苷类等全部有效成分,是灵芝孢子有效成分的集合体,具有多种生理活性,尤其是对肿瘤的抑制作用已经由药理实验[1]得到公认.     

灵芝孢子粉的质量控制

目的:探讨建立灵芝孢子粉的质量控制方法。方法:采用薄层色谱法鉴别灵芝孢子粉;检查控制灵芝孢子粉的含水量、粗脂肪含量以及酸值;比较蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法测定灵芝孢子粉总多糖的含量。结果:薄层色谱法鉴别供试品,在对照药材出现斑点的位置有相同颜色的清晰斑点;灵芝孢子粉样品的含水量均小于12.0%,粗脂肪含量及酸值因产地不同有较大的差异;蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法中,D-无水葡萄糖在考察的浓度范围内均呈良好的线性关系;苯酚-硫酸法中,灵芝孢子粉样品的总多糖含量为1.19%、1.26%、0.63%,蒽酮-硫酸法中,灵芝孢子粉样品的总多糖含量为1.00%、0.75%、0.40%。结论:该方法为灵芝孢子粉企业内控质量标准的制订以及灵芝孢子粉多糖类成分的深入研究奠定了基础。