舒尼替尼治疗早产儿视网膜病变动物模型的研究

目的观察玻璃体腔内注射不同剂量舒尼替尼(Sunitinib)对视网膜新生血管是否具有抑制作用,及其抑制效果是否呈剂量依赖性。方法 高浓度氧气诱导Wistar鼠仔建立早产儿视网膜病变动物模型。鼠龄7d的鼠仔108只,随机分为6组(A:空气对照组、B:高氧对照组、C:高氧+PBS组、D:高氧+5μg舒尼替尼组、E:高氧+25μg舒尼替尼组、F:高氧+125μg舒尼替尼组)。当鼠仔脱氧时,C、D、E、F组分别玻璃体腔内注射单纯无菌PBS缓冲液和相应剂量的舒尼替尼。视网膜铺片(ADP酶法)观察视网膜血管形态、病理切片计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数目及RT-PCR检测VEGFR2mRNA的含量。结果 视网膜铺片结果显示:A组视网膜血管从视盘发出向四周放射状均匀分布,周边血管形态正常。B组视网膜血管在持续高氧环境中收缩闭塞,在相对缺氧环境中迂曲扩张并形成大量新生血管。舒尼替尼治疗后新生血管有不同程度的减少,抑制效果随着剂量增加而明显。视网膜新生血管内皮细胞核计数:A组为2.650±0.875,B组31.450±0.686,C组31.600±0.681,D组26.450±1.099,E组21.250±1.070,F组12.550±0.999,A与B组间差异有统计学意义(P<0.05),B与C组间差异无统计学意义(P>0.05),C、D、E、F各组间比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。RT-PCR结果示:A组VEGFR2mRNA的表达维持在一个较低水平。持续高氧环境下VEGFR2mRNA表达显著下降,而相对缺氧环境下其表达显著增加。舒尼替尼治疗组其表达不同程度降低,降低效果随剂量的增加而明显。A、B组17d时VEGFR2mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),B、C2组于17d时VEGFR2mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),C、D、E、F组于17d时VEGFR2mRNA的表达各组间比较差异均具有统计学意义(均为P<0.05)。结论 舒尼替尼能抑制视网膜新生血管的生成,且抑制效果呈剂量依赖性。     

重组腺病毒载体介导色素上皮衍生因子基因抑制视网膜新生血管形成

目的 观察重组腺病毒载体介导色素上皮衍生因子（PEDF）基因对视网膜新生血管（RNV）发生的影响。方法 将20只鼠龄7 d 的Spraque-Dawley大鼠建立模型后随机分为2组，分别于出生后14 d 行玻璃体内注射空白腺病毒载体（AV-Blank组）及编码PEDF基因的重组腺病毒载体（AV-PEDF组），采用RNV内皮细胞计数、运用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学法检测玻璃体、视网膜中PEDF基因及其蛋白表达的变化。结果 注射药物后AV-PEDF组视网膜的新生血管数较AV-Blank组明显减少（t＝42.009，P＜0.001）；视网膜PEDF蛋白的表达较AV-Blank组明显增加（t=36.638，P＜0.001）；玻璃体组织中的PEDF mRNA表达量也较AV-Blank组明显增加（t=9.128，P＜0.001）。结论 重组腺病毒载体介导的PEDF基因可上调大鼠RNV眼玻璃体及视网膜组织中PEDF的表达；推测PEDF的表达可能与RNV的抑制与消退相关。     

血管内皮生长因子反义寡脱氧核苷酸联合血管生成素-1对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响

目的 观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)反义寡脱氧核苷酸(ASODN)联合血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响.方法 选取健康雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组(A组)5只和糖尿病组55只,糖尿病组通过链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病模型成功后再饲养3个月行眼底荧光血管造影检查,确定DR大鼠模型且视网膜病变程度相仿的大鼠,随机抽取45只分为DR对照组(B组,5只)、PBS缓冲液对照组(C组,10只)、VEGF ASODN干预组(D组,10只)、Ang-1干预组(E组,10只)、联合干预组(F组,10只).C组玻璃体内注射PBS缓冲液5μL;D组玻璃体内注射浓度为100 μmol·L-1 VEGF ASODN 5 μL;E组玻璃体内注射浓度为160 mg·L-1Ang-1 5 μL;F组玻璃体内注射100 μmol·L-1 VEGF ASODN及160 mg·L-1 Ang-1各5μL;3 d后再次行上述操作.各组大鼠行眼底荧光血管造影检查,对比观察不同组别大鼠视网膜血管渗漏情况,病理组织切片光学显微镜下突破内界膜的观察视网膜新生血管芽细胞核数.结果 A、B、C、D、E和F组视网膜新生血管渗漏面积分别为0、( 20.98±1.14) mm2、(21.47±1.65) mm2、(14.60±1.55) mm2、(13.80 ±1.19) mm2、( 10.81±1.35) mm2;D、E、F组新生血管渗漏面积低于B、C组,差异有统计学意义(F=103.99,P ＜0.05);F组渗漏面积低于D、E组,差异有统计学意义(F=190.94,P＜0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t =0.22,P＞0.05).A、B、C、D、E和F组突破内界膜的新生血管芽细胞核数分别为(1.13±0.31)个、(80.31±5.21)个、(81.08 ±2.57)个、(37.37±3.41)个、(41.07±2.09)个、(14.41±1.23)个;D、E、F组突破内界膜的血管芽细胞核数均低于B、C组,差异有统计学意义(F=1339.41,P＜0.05);F组突破内界膜的血管芽细胞核数低于D、E组,差异有统计学意义(F =714.91,P ＜0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t=0.35,P＞0.05).结论 VEGFASODN联合Ang-1玻璃体内注射能明显抑DR大鼠视网膜新生血管的生成,减少视网膜血管渗漏.     

α-黑素细胞刺激素抑制氧诱导视网膜病变小鼠视网膜新生血管的生成

背景 视网膜新生血管形成(RNV)可发生于多种眼病,导致视网膜出血甚至脱离,抑制病理性RNV已逐渐成为眼科疾病治疗中的重点.α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对视网膜发育过程中的生理性血管生成有抑制作用,但其在病理性RNV方面的作用尚未见报道. 目的 以氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠为模型,研究玻璃体腔注射不同质量浓度的α-MSH对病理性RNV的作用. 方法 选取健康清洁级7日龄C57BL/6J幼鼠40只,应用随机数字表法随机分为OIR+0.33μg/μl α-MSH组、OIR+1.67 μ.g/μl α-MSH组、OIR+3.30 μg/μlα-MSH组、OIR组和正常对照组,每组8只.不同剂量α-MSH干预组和OIR组幼鼠在氧体积分数(75±2)％的高氧环境下饲养5d,然后在普通空气环境中饲养5d,正常对照组幼鼠则在普通空气环境中饲养10d.各组取17日龄鼠,球后静脉注射高相对分子质量异硫氰酸葡聚糖(FITC-dextran),制备视网膜铺片,观察视网膜的血管形态,计算无灌注区面积相对于整个视网膜的面积.对小鼠眼球行石蜡切片和苏木精-伊红染色,计数突破内界膜突入玻璃体腔的血管内皮细胞核数. 结果 视网膜铺片结果显示,正常对照组、OIR组、OIR+O.33 μg/μl α-MSH组、OIR+1.67 μg/μl α-MSH组和OIR+3.30 μg/μl α-MSH组视网膜无灌注区相对面积分别为(0.00±0.00)％、(23.01±3.39)％、(18.14±7.20)％、(15.64±7.07)％和(7.62±6.52)％,各组间视网膜无灌注区相对面积总体比较,差异有统计学意义(F=19.635,P＜0.05);其中OIR组无灌注区相对面积显著高于OIR+3.30 μg/μl α-MSH组,差异有统计学意义(t=4.293,P＜0.01).组织病理学检查结果显示,正常对照组、OIR组、OIR+0.33 μg/ μl α-MSH组、OIR+ 1.67 μg/μl α-MSH组和OIR+3.30 μg/μl α-MSH组突入玻璃体腔的血管内皮细胞核数分别为(0.00±0.00)、(11.45±4.26)、(6.35±2.34)、(4.96±1.79)和(1.03±1.25)个.各组突入玻璃体腔的新生血管内皮细胞核数总体比较,差异有统计学意义(F=147.87,P＜0.05);其中OIR组突入玻璃体腔新生血管内皮细胞核数显著高于OIR+0.33μg/μl α-MSH组、OIR+ 1.67 μg/μlα-MSH组和OIR+3.30 μg/μl α-MSH组,差异均有统计学意义(均P＜0.001). 结论 α-MSH可减少OIR小鼠模型视网膜中无灌注区的相对面积和视网膜新生血管核数,其对病理性RNV的抑制作用呈剂量依赖性.     

玻璃体腔注射塞来昔布抑制大鼠视网膜新生血管的作用

目的:通过对大鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)模型进行玻璃体腔注射塞来昔布,探讨塞来昔布在OIR中对视网膜新生血管的作用及其机制.方法:选取7天龄SD乳鼠96只随机分为6组:Z组:正常组;O组:OIR组;A组:OIR+溶媒对照组;B组:OIR+塞来昔布5μg组;C组:OIR+塞来昔布20μg组;D组:OIR+塞来昔布80μg组.除Z组在正常环境饲养外,其余各组乳鼠均建立OIR模型.乳鼠于生后第12 d出氧箱后给予玻璃体内注射二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)及相应剂量的塞来昔布,于生后第17 d处死,做组织切片HE染色观察视网膜组织形态并计数突破内界膜的血管内皮细胞核数,石蜡切片行免疫组化染色检测VEGF蛋白的表达.结果:HE染色显示,Z组、O组、A组、B组、C组、D组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数分别为0.44±0.18、30.60±5.36、28.05±4.68、19.58±4.58、10.13±1.93、7.58±2.68个;除O组与A组外,各组间差异均有统计学意义(P<0.05),经塞来昔布治疗后,突破内界膜的血管内皮细胞核明显减少,且与剂量正相关;免疫组化结果显示,Z组VEGF蛋白表达呈阴性,表达率为10%,其余各组可见VEGF蛋白的阳性表达,O、A组阳性表达较高,阳性率分别为90%、86%,表现为棕褐色颗粒或团块,均高于B、C、D组,且三组的阳性表达依次减低为68%、42%、30%.结论:塞来昔布能够有效抑制大鼠OIR模型视网膜新生血管的生长,且抑制效果与剂量正相关,其作用可能通过抑制VEGF表达实现.     

Lewis鼠结膜下注射雷帕霉素的眼毒性研究

目的 探讨Lewis鼠结膜下注射雷帕霉素的眼毒性.方法 将20只Lewis鼠随机分为A、B、C、D、E 5组,每组4只.A组Lewis鼠结膜下注射4 μg·kg-1雷帕霉素,B组为20 μg·kg-1,C组为40 μg·kg-1,D组为100 μg·kg-1,E组为200 μg·kg-1.左眼注射5 μL平衡盐溶液(BSS)作为对照,通过裂隙灯、直接检眼镜、视网膜电流图及组织病理切片观察结膜、角膜、前房、虹膜、晶状体、玻璃体和视网膜的变化.结果 A、B、C、D、E和对照组裂隙灯及检眼镜检查均未见结膜充血、水肿及坏死,晶状体透明,玻璃体无混浊,视网膜血管未见缩窄;视网膜电流图检查所有Lewis鼠眼差异未见统计学意义(P>0.05);病理学检查所有鼠角膜结构清晰,虹膜基质及虹膜上皮未见异常,视网膜各层结构清晰,形态规整,未见细胞水肿.4 μg·kg-1、20 μg·kg-1、40 μg·kg-1、100 μg·kg-1 、200 μg·kg-1雷帕霉素剂量组在结膜下注射前和注射后进行裂隙灯、直接眼底镜、视网膜电流图和组织病理学检查均未见明显的异常改变.结论 Lewis鼠结膜下注射200 μg·kg-1及以下剂量雷帕霉素不会引起眼部组织结构及视网膜功能的异常.     

VEGF对大鼠慢性高眼压视网膜神经节细胞的作用

目的：探讨血管内皮生长因子（vascular endothelium growth factor, VEGF）对大鼠视网膜色素上皮生长因子（pigment epithelium-derived factor, PEDF）表达的影响及VEGF对慢性高眼压条件下神经节细胞（retinal ganglion cells, RGCs）的保护作用和可能途径。方法：雌性SD大鼠30只,随机分为高眼压＋VEGF组A(包括A3d,A14d)、高眼压＋安慰剂组B(包括B3d,B14d)和正常＋VEGF组C(包括C3d,C14d),A、B组模型制作应用巩膜浅层静脉烧烙法建立慢性高眼压模型,C组只剪开球结膜,不烧烙巩膜浅静脉。A、C组在模型建立后即刻用10μL微注射器于大鼠角膜缘后2mm处刺入玻璃体腔,抽出玻璃体2μL,再向玻璃体腔内注射2μL（0.05μg/μL）重组大鼠VEGF,B组同法注入等量的去离子水。在3d和14d后处死动物,取眼球,冰冻切片,免疫组织化学法观察视网膜PEDF的表达,用TUNEL染色检测各组视网膜神经节细胞的凋亡,免疫荧光双标观察PEDF染色阳性的细胞是何细胞。结果：术后眼压明显升高(P<0.05),术后3d和14d的眼压无显著性差异。视网膜PEDF染色阳性细胞,B组多于A组,A组多于C组;TUNEL荧光染色显示VEGF高眼压组RGCs的凋亡明显的少于高眼压组。 结论：玻璃体腔注射VEGF可减少高眼压视网膜神经节细胞的凋亡。     

CCN1在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的表达及意义

目的:研究富含半胱氨酸蛋白61(CCN1/Cyr61)在氧诱导小鼠视网膜新生血管(retinal neovascularization,RNV)中的表达及意义,探讨特异性抑制CCN1对RNV形成的抑制作用。方法:取C57BL/6J小鼠200只,随机分为对照组、高氧组、高氧对照组和CCN1治疗组,每组各50只。高氧对照组和CCN1治疗组分别玻璃体腔内注射空载体质粒和CCN1siRNA表达质粒。ADP酶视网膜铺片观察视网膜血管形态,HE染色计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数,免疫组织化学、Western blot和RT-PCR法检测CCN1蛋白及mRNA的表达情况。结果:高氧组和高氧对照组视网膜可见大片无灌注区和大量突破内界膜的新生血管内皮细胞核(25.25±1.26个;23.12±1.16个),CCN1治疗组较高氧组和高氧对照组的无灌注区及新生血管内皮细胞核数(8.47±1.15个)明显减少。高氧组和高氧对照组较对照组相比,CCN1蛋白及mRNA表达显著增高,CCN1治疗组较高氧组和高氧对照组显著减弱,均有统计学意义(均为P<0.05)。结论:CCN1的异常表达可能与RNV形成密切相关,特异性抑制CCN1能有效抑制RNV的形成,为预防和治疗ROP提供新的思路及对策。     

PEDF和Avastin对大鼠角膜碱烧伤新生血管作用的比较

目的:比较局部应用PEDF与Avastin对大鼠碱烧伤角膜新生血管(CNV)的作用。方法:建立碱烧伤诱导大鼠CNV模型,将30只SD大鼠随机分为5组:A组于烧伤当日开始给予10μg/mL PEDF点眼;B组于烧伤后第3d开始给予10μg/mL PEDF点眼;C组于烧伤当日开始给予5mg/mL Avastin点眼;D组于烧伤后第3d开始给予5mg/mL Avastin点眼;E组于烧伤当日开始使用生理盐水点眼,均每日4次,每次10μL。裂隙灯显微镜观察CNV情况并计算各组CNV的面积,采用免疫组织化学染色观察VEGF和CD31的表达。结果:第12d时,A组CNV面积小于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.01);B,C组与D组相比,差异无统计学意义(P=0.215,0.058)。免疫组织化学检测VEGF及CD31示A组VEGF及CD31表达较弱,B,C,D组表达增多,E组表达显著增强。结论:局部应用Avastin及PEDF均能抑制大鼠角膜化学伤后的CNV。烧伤后早期使用PEDF效果优于Avastin。     

Captopril抑制鼠视网膜新生血管的形成(英文)

目的:探讨Captopril对鼠视网膜新生血管形成的抑制作用。方法:将60只7d龄小鼠随机分为对照组(30只)和治疗组(30只),置于体积分数750±50mL/L高氧环境下饲养5d后回到正常空气环境中饲养,出氧箱后治疗组每天1次玻璃体腔内注射2.7mL/kg Captopril,对照组注射9g/L的氯化钠注射液2.7mL/kg,连续5d。两组小鼠均于17d处死并摘除眼球,采用ADP酶视网膜铺片、HE染色及免疫组织化学法分别观察视网膜血管的改变、计数视网膜新生血管内皮细胞核数及检测MMP-2、PEDF蛋白的表达。结果:治疗组与对照组相比视网膜血管分布规则、分支良好、新生血管密度减少,且突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目明显减少(P<0.05);治疗组MMP-2染色较对照组减弱,PEDF染色较对照组增强。结论:玻璃体腔内注射2.7mL/kg Captopril能够有效抑制高氧诱导下的小鼠视网膜新生血管形成, Captopril有望成为防治血管增生性视网膜病变的一种有效的方法。     

Inhibitory effect of captopril on retinal neovascularization in mice

AIM: To study the inhibitory effect of captopril on retinal neovascularization (RNV). METHODS: Sixty seven-day-old mice were randomly divided into treated group and control group with thirty mice in each group. These mice were exposed to 750 ± 50mL/L oxygen for 5 days and then to room air. The treated group had been injected captopril (2.7mL/kg), while control group had been injected 9g/L sodium chloride (2.7mL/kg) by intravitreal for 5 days. The mice were sacrificed at the 17th day after birth and the eyes were enucleated. Adenosine diphosphate-ase (ADPase) stained retina flat-mounts was performed to assess the retinal vascular profiles, Hematoxylin Eosin (HE) staining method was applied to count the number of new vascular cell nuclei and the expression of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and pigment epithelium derived factor (PEDF) was detected by immunohistochemical method. · RESULTS: Comparing with control group, regular distributions, good branch and reduced density of RNV were observed in the treated group. The number of nucleus of new vessels vascular endothelial cells breaking through the internal limiting membrane was less in the treated group than in the control group ( <0.05). Stain of retinal MMP-2 was weaker in the treated group than in the control group and stain of retinal PEDF was stronger in the treated group than in the control group. CONCLUSION: Intravitreal injection of captopril (2.7mL/kg) may block the RNV in the oxygen-induced mouse model and the method may provide an effective method for preventing RNV.     

Inhibition of retinal angiogenesis by PEDF

AIM: To investigate the effect of PEDF on retinal neovascularization in mice. METHODS: 40 7-day-old C57BL/6J mice was exposed to 750mL/L oxygen for 5 days and then to normal situation to produce the murine model of oxygen-induced retinopathy(OIR). One eye of the mouse was regarded as experimental one and the other served as control. Eyes in experimental group received intravitreal injection of PEDF and eyes in control group received intravitreal injection of PBS at postnatal day 12. All mice were executed at postnatal day 17. The changes of retinal vessels of mice were observed by ADPase histochemical technique. The inhibitory effect of PEDF on retinal neovascularization was evaluated by counting the endotheliocyte nuclei of new vessels which extended from retina to vitreous in the tissue slice of HE staining. RESULTS: Neovascularization was reduced, retinal blood vessels distributed regularly and non-perfusion areas were not found in eyes of experimental group compared with control group. The number of endotheliocyte nuclei of new vessels extending from retina to vitreous was significantly less in the eyes of experimental group (10.18±1.74) than that in control group (38.89±2.98) (P <0.01). Retinal toxicity and inflammatory reactions were not found in tissue slice. CONCLUSION: PEDF inhibits retinal angiogenesis in OIR and the feasibility should be determined for use of PEDF in ocular angiogenesis treatment.     

PEDF抑制鼠视网膜新生血管的实验研究(英文)

目的:观察PEDF对氧诱导的血管增生性视网膜病变动物模型视网膜新生血管的抑制作用。方法:40只7日龄的C57BL/6J新生鼠暴露在750mL/L高氧环境中,然后回到正常空气中建立氧诱导的血管增生性视网膜病变的动物模型。随机取1眼为实验眼,在出氧箱时(12d)玻璃体腔注射PEDF,另1眼为对照组,玻璃体腔注射PBS。所有小鼠均于17d处死,视网膜铺片,ADP酶染色观察视网膜血管情况。HE染色,在光学显微镜下观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞细胞核数目。结果:与对照组相比,实验组视网膜血管分布规则,未见明显的无灌注区形成;实验组突破内界膜的内皮细胞细胞核数目(10.18±1.74)比对照组(38.89±2.98)明显减少(P<0.01) ;组织切片未见视网膜毒性及炎症反应。结论:PEDF能够有效抑制视网膜新生血管的生成。     

Efficacy of intravitreal captopril on oxygen-induced retinopathy in mice

AIM: To study the inhibitory effect of intravitreal captopril on oxygen-induced retinopathy (OIR) in mice. METHODS: Eighty postnatal day (P)7 C57BL/6J mice were randomly divided into treated group and control group with forty mice in each group. The mice were exposed to 75% ± 2% oxygen for 5 days (P7-P11) and then returned to room air for 5 days (P12-P17) to induce retinal neovascularization (RNV). Beginning on P12, the mice in treated group received daily intravitreal injections of captopril (3.0mL/kg), while those in control group received daily intravitreal injections of phosphate-buffered saline (PBS) (3.0mL/kg) through P17. After anesthetized at P17, one eye was chosen randomly as experimental eye and were enucleated. RNV was examined by Adenosine diphosphate-ase (ADPase) stained retina flat-mounts and was quantitated histologically by counting the neovascular endothelial cell nuclei anterior to inner limiting membrane (ILM). The expressions of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and vascular endothelial growth factor (VEGF) were measured by immunohistochemical method. RESULTS: Comparing with control group, more regular distributions, better branch and reduced density of RNV were observed in eyes of treated group. The number of neovascular cell nuclei was less in treated group than that in control group (t=6.135, P<0.01). Stain of MMP-2 and VEGF was weaker in treated group than that in control group. CONCLUSION: The results indicate that captopril can significantly inhibit RNV in OIR mice.     

基质金属蛋白酶抑制剂对高氧诱导的小鼠视网膜色素上皮衍生因子的影响

目的:通过高氧诱导的小鼠视网膜新生血管动物模型玻璃体内注入GM6001观察对视网膜PEDF表达的影响。方法:选取鼠龄为7d的SPF级C57BL/6J小鼠48只(96眼),随机分为4组:正常组、高氧组、GM6001干预组和磷酸盐缓冲液对照组,每组12只。正常对照组鼠在正常空气环境中饲养,其余3组鼠置于氧箱中,建立高氧诱导的视网膜新生血管动物模型。在出生后第12dGM6001干预组幼鼠向玻璃体腔内注射GM60011μL(100μmol/L),而磷酸盐缓冲液对照组注射相同体积的磷酸盐缓冲液,正常组和高氧组不做处理。各组小鼠均在出生后第17d处死。摘除左眼球制作石蜡标本,分别用抗色素上皮衍生因子(PEDF)和抗CD34抗体作免疫组织化学标记视网膜切片进行组织病理学观察;右眼剥离视网膜提取蛋白,采用ELISA法分析PEDF以及基质金属蛋白酶(MMPS)在视网膜中的含量。结果:17d龄时,正常组和GM6001组小鼠在视网膜各层可见PEDF阳性表达产物,其中以神经节细胞层及神经纤维层表达为著,为高表达,对照组与高氧组小鼠,17d龄时表达显著减少,只在神经节细胞层有较高表达,其余各层表达极少见。MMP-2,MMP-9,PEDF的含量GM6001组和PBS对照组及高氧组之间在统计学上均有差异P<0.01GM6001组和正常组之间没有统计学差异P>0.05,高氧组和PBS对照组没有统计学差异P>0.05。结论:玻璃体内注入一定剂量的GM6001通过抑制基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9能够有效增强高氧诱导下的小鼠视网膜PEDF的表达并使新生血管的增长受到抑制。     

组织蛋白酶B抑制剂干预鼠视网膜新牛血管形成的研究

目的 探讨组织蛋白酶B(Cathepsin B)抑制剂CA-074Me对视网膜新生血管形成的干预作用.方法 实验研究.将C57BL/6J 7日龄小鼠60只用随机数字表法分为正常对照组、空白对照组、阴性对照组和实验组,每组15只,空白对照组、阴性对照组和实验组在缺氧环境中建立视网膜新生血管模型.实验组小鼠出氧箱后每眼球周注射CA-074Me 5 mg·kg-1·d-1,阴性对照组球周注射与实验组溶剂等量的二甲基亚砜,正常对照组、空白对照组均不给予任何药物,连续5 d.测定眼组织组织蛋白酶B活性;通过免疫组织化学的方法 观察组织蛋白酶B在视网膜组织的表达;通过HE染色法测定不同组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目;通过视网膜ADP酶染色铺片,测量无血管区面积、无血管区面积与视网膜面积的比值.结果 正常对照组、空白对照组、阴性对照组、实验组组织蛋白酶B活性分别为(17.75±2.30)、(28.75±3.14)、(29.16±2.78)、(23.14±3.53)nmol·min-1·mg-1,实验组分别与各对照组比较,两组之间差异均有统计学意义(F=13.16,P＜0.01),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);免疫组化测定正常对照组、空白对照组、阴性对照组和实验组组织蛋白酶B平均吸光度值分别为0.24±0.02、0.35±0.05、0.36±0.07、0.35±0.01,实验组、空白对照组、阴性对照组之间两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);视网膜石蜡切片HE染色后,正常对照组、空白对照组、阴性对照组、实验组平均每张切片中突破内膜新生血管内皮细胞核数分别为2.71±1.07、67.51±11.55、65.16±5.78、27.14±3.53,实验组与各对照组比较差异均有统计学意义(F=9.12,P＜0.01),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);正常对照组、空白对照组、阴性对照组、实验组无血管区面积分别为(1.17±0.30)、(5.34±0.74)、(5.16±0.68)、(2.38±0.53)mm2,实验组与各对照组比较差异均有统计学意义(F=7.57,P＜0.01),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);正常对照组、空白对照组、阴性对照组和实验组无血管区面积/视网膜面积分别为0.09±0.01、0.24±0.03、0.23±0.07,0.16±0.05,实验组与各对照组比较差异均有统计学意义(F=8.32,P＜0.01),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 组织蛋白酶B抑制剂CA-074 Me对C57BL/6J小鼠视网膜新生血管形成有一定程度的抑制作用,有可能成为治疗视网膜新生血管的一种新的方法 .(中华眼科杂志,2008,44:207-211)     

Matrix metalloproteinase-9 and vascular endothelial growth factor expression change in experimental retinal neovascularization

AIM: To investigate the signal transduction mechanism of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) mediated- vascular endothelial growth factor (VEGF) expression and retinal neovascularization (RNV) in oxygen-induced retinopathy (OIR) model. METHODS: C57BL/6J mice were divided into four groups: control group, OIR group, OIR control group (phosphate-buffered saline by intravitreal injection) and treated group [tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 (TIMP-1) by intravitreal injection]. OIR model was established in C57BL/6J mice exposed to 75%±2% oxygen for 5d. mRNA level and protein expression of MMP-9, TIMP-1 and VEGF were measured by real-time polymerase chain reaction and Western blotting, and located by immunohistochemistry. RESULTS: Levels of MMP-9 and VEGF in retina were significantly increased in animals with OIR and OIR control group. Levels of TIMP-1 in retina was significantly reduced in animals with OIR and OIR control group. Furthermore, a significant correlation was found between MMP-9 and VEGF. Intravitreal injection of TIMP-1 significantly reduced MMP-9 and VEGF expression of the OIR mouse model (all P<0.05). CONCLUSION: These results demonstrate that MMP-9-mediated up-regulation of VEGF promotes RNV in retinopathy of prematurity (ROP). TIMP-1 may be a potential target for the prevention and treatment of ROP.     

FLK-1单克隆抗体抑制实验性视网膜血管新生的实验研究

目的:观察血管内皮生长因子受体2(FLK-1)单克隆抗体(anti-FLK1mAb)对视网膜新生血管形成(retinal neovascularization,RNV)的抑制作用,同时分析其对缺血性视网膜病变的影响。方法:将生后第7d的C57BL/6幼鼠置于高氧箱中饲养5d后取回至正常空气环境诱导RNV模型,生后第12,13,15d利用腹腔注射的方法给与实验组小鼠anti-FLK1 mAb500μg(对照组给与等量的大鼠免疫球蛋白),生后第17d处死动物行视网膜铺片和免疫组织化学染色检查,测量视网膜血管无灌注区的面积,计数RNV内皮细胞核数目,定量分析anti-FLK1 mAb对于缺血性视网膜病变以及实验性RNV形成的影响。结果:对照组和实验组均成功建立了RNV模型,实验组RNV的形成明显受到抑制(P<0.01),同时anti-FLK1 mAb也加重了RNV模型的缺血过程(P<0.05)。结论:拮抗FLK-1可以有效抑制RNV的形成,提示拮抗FLK-1可能成为治疗RNV有效的生物学方法之一,其可能加重缺血性视网膜病变的潜在副作用需进一步探讨。