小蘖碱对甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞分化的影响

目的 观察小蘖碱对体外培养的甲状腺相关眼病患者眼眶前脂肪细胞诱导分化的影响.方法 体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶前脂肪细胞,鉴定与传代,加入小蘖碱使其浓度分别为10 mol·L-1、20 mol·L-1、40 mol·L-1、80 mol·L-1组,另设不加小蘖碱的为对照组,进行诱导分化及油红O染色,图像分析系统计算分化后脂肪细胞内脂质/核的平均积分光密度值(integrated optical density,IOD).结果 体外培养的前脂肪细胞经免疫组织化学染色鉴定为间叶来源.不同浓度小蘖碱分化后脂肪细胞内脂质/核的平均IOD值呈浓度依赖性降低,其中对照组IOD值为1.11±0.21,10 mol·L-1、20 mol·L-1、40 mol·L-1、80 mol·L-1小蘖碱组IOD值分别为0.93±0.15、0.68±0.13、0.31±0.09、0.19±0.05,与对照组相比差异有统计学意义(F=22.53,P＜0.05),组间两两比较差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).结论 小蘖碱可以抑制眼眶前脂肪细胞的分化和细胞内脂质的形成,抑制程度呈浓度依赖性.     

AdPLA基因在Ⅲ级静止期甲状腺相关眼病眼眶脂肪内高表达研究

目的 检测甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)患者和正常人眼眶脂肪组织中脂肪特异性磷脂酶A2(adipose-specific phospholipase A2,AdPLA) mRNA的表达水平.方法 2015年8月至2016年10月16例静止期Ⅲ级TAO患者(TAO组)在深圳市眼科医院接受眼眶减压术,同期29位正常人(正常对照组)行眼部整形手术.术中取患者和正常对照一眼的眼眶脂肪;记录每位受试者的年龄、性别、身高、体质量,计算体质量指数(body mass index,BMI),测量取脂肪一侧眼的眼球突出度和眼眶脂肪体积;用实时定量多聚酶链式反应定量检测眼眶脂肪组织中AdPLA mRNA的表达水平.结果 TAO组与正常对照组年龄、性别和BMI相比差异均无统计学意义(均为P＞0.05),TAO组的眼球突出度(20.406±1.369)mm明显多于正常对照组(14.207±1.146) mm,TAO组的眼眶内脂肪量(32.162 ±1.923) mL明显多于正常对照组(24.279±1.070) mL.TAO组眼眶脂肪中AdPLA mRNA的表达量为0.039 42±0.009 85,正常对照组眼眶脂肪中AdPLA mRNA的表达量为0.004 42±0.001 36,两组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 静止期Ⅲ级TAO患者的眼球突出度和眼眶内脂肪量明显多于正常人,眼眶脂肪组织中AdPLA mRNA的表达量明显高于正常人.AdPLA的高表达可能使TAO眼眶脂肪水解减少,造成眼眶脂肪堆积,加重了眼球突出.     

重组人抵抗素对TAO患者眼眶前脂肪细胞分化的影响

目的探讨重组人抵抗素对甲状腺相关眼病（TAO）患者眼眶前脂肪细胞分化的影响及其在TAO发病中的可能作用。方法10例严重TAO患者眼眶脂肪组织来自眼眶减压术中,正常对照组来自各种原因行眼球摘除术者。培养眼眶前脂肪细胞,并诱导分化,在分化液中分别加入0、10、25、50、100μg／L质量浓度的重组人抵抗素,采用逆转录PCR（RT—PCR）法检测分化过程中过氧化物酶增生体激活受体γ（PPARγ）基因的表达,研究重组人抵抗素对前脂肪细胞分化的作用。结果TAO患者及正常对照组眼眶前脂肪细胞在体外均可被诱导分化成脂肪细胞。分化成熟的脂肪细胞可被油红O染成橘红色。重组人抵抗素对眼眶前脂肪细胞的分化有抑制作用,RT-PCR结果显示PPARγ基因的表达随着抵抗素质量浓度的升高而减弱,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论重组人抵抗素可抑制人眼眶脂肪组织来源前脂肪细胞的分化,脂肪细胞标记性PPARγ基因的表达减弱,有望在TAO治疗方面开创新的研究方向。     

TNF-α对甲状腺相关眼病分化后眼眶脂肪细胞瘦素mRNA表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α（TNF—α）对体外培养的甲状腺相关眼病（TAO）分化后眼眶脂肪细胞瘦素mRNA表达的影响。方法取TAO患者行眼眶减压术的眼眶脂肪组织，体外培养眼眶前脂肪细胞，诱导分化，采用不同质量浓度、不同作用时间的TNF-α处理分化后的脂肪细胞，实时荧光定量PCR检测瘦素mRNA的表达。结果体外培养的眼眶前脂肪细胞在诱导分化刺激下，分化为脂肪细胞；0．5～50ng／mL的TNF—α作用24h，瘦素mRNA表达随质量浓度的增大而下降，呈量效依赖性；5ng／mL的TNF-α作用12～48h能下调瘦素mRNA的表达，呈时效依赖性；与对照组相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论TNF-α对TAO分化后眼眶脂肪细胞的瘦素mRNA表达有下调作用。     

甲状腺相关眼病患者眼眶脂肪组织相关基因的异常表达

目的 探讨甲状腺相关眼病（thyroid-associated ophthalmopathy, TAO）患者眼眶脂肪组织相关基因的表达.方法 选用TAO患者（20例）及正常对照（17例）眼眶脂肪组织,采用RT-PCR法对脂肪细胞分化转录因子前脂肪细胞因子-1（Pref-1）、过氧化物酶体增殖体激活受体γ（PPARγ）,脂肪细胞分泌因子瘦素、脂联素以及共同抗原TSHR等5个基因进行检测.比较TAO及正常人眶脂肪组织基因表达的改变.结果 RT-PCR法测得的TAO患者眼眶脂肪组织中各基因mRNA表达的相对灰度值为：瘦素1.23±0.03、脂联素1.16±0.08、PPARγ 1.03±0.06、 TSHR 0.96±0.04、 Pref-1 0.48±0.07,其中瘦素、脂联素、PPARγ、TSHR mRNA表达明显较正常对照组增强,而Pref-1表达则减弱（P《0.05）.结论 TAO患者眼眶脂肪组织中存在着异常的基因表达,在TAO的发生、发展中可能起着重要作用.     

IL-6对甲状腺相关眼病分化后眼眶脂肪细胞瘦素mRNA表达的影响

目的 探讨白介素-6(interleukin-6,IL-6)对体外培养的甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)分化后眼眶脂肪细胞瘦素mRNA表达的影响.方法 取TAO患者行眼眶减压术的眼眶脂肪组织,体外培养眼眶前脂肪细胞,诱导分化,采用0.5 μg·L-1、5 μg·L-1和50 μg·L-1的IL-6处理分化后的脂肪细胞24 h(设空白对照组),以及5 μg·L-1的IL-6分别处理分化后的脂肪细胞0 h、12 h、24 h、48 h,实时荧光定量PCR检测瘦素mRNA的表达.结果 体外培养的眼眶前脂肪细胞在诱导分化刺激下,分化为脂肪细胞;0.5 μg·L-1、5 μg·L-1和50 μg·L-1的IL-6作用24 h,瘦素mRNA表达分别为1.61±0.53、0.88±0.62、0.21±0.56,随质量浓度的增大而下降,呈量效依赖性,但与对照组(1.84±0.82)相比,差异没有统计学意义(P＞0.05);5 μg·L-1的IL-6作用12 h、24 h、48 h,瘦素mRNA表达分别为1.43±0.46、1.05±0.62、0.20±0.75,随时间的延长而下降,呈时效依赖性,但与0 h组(1.73±0.31)相比,差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 IL-6对TAO分化后眼眶脂肪细胞的瘦素mRNA表达有下调作用,但无统计学意义.     

甲状腺相关眼病患者眼眶前脂肪细胞分化前后相关基因表达

目的 探讨甲状腺相关眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)患者眼眶前脂肪细胞分化前后相关基因表达的改变,进一步验证脂肪细胞分化在TAO发病中的重要作用.方法 培养TAO患者(14例)眼眶前脂肪细胞,并诱导其向脂肪细胞分化,采用RT-PCR法检测分化前后脂肪细胞分化转录因子前脂肪细胞因子-1(Pref-1)、过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)、脂肪细胞分泌因子瘦素(Leptin)、脂联素(Adiponectin)以及共同抗原促甲状腺激素受体(TSHR)5个基因mRNA表达的改变.结果 RT-PCR法测的TAO眼眶前脂肪细胞分化后各基因mRNA表达的相对灰度值为Leptin 0.82±0.09、Adiponetic 0.79±0.05、PPARγ 0.62 4±0.05、TSHR 0.86±0.08、Pref-10.70±0.04,其中前4个基因表达明显较分化前增强(P＜0.05),Pref-1则未见统计学差异.结论 TAO患者眼眶前脂肪细胞在一定条件下可向成熟脂肪细胞转化,并伴随着相关基因的改变,在TAO的发生、发展中可能起着重要作用.     

TAO患者眼眶脂肪组织中脂肪特异性磷脂酶A2 mRNA表达水平分析

目的：分析甲状腺相关眼病(TAO)患者与正常人眼眶脂肪组织中脂肪特异性磷脂酶A2(AdPLA)mRNA 表达水平差异性。

方法：选取2016-12/2017-12在本院进行眼眶减压手术的37例37眼TAO(静止期Ⅲ级)患者作为观察组,选取同期正常眼眶脂肪组织35例35眼为对照组,其来源为美容、眼袋切除手术和上睑下垂矫正手术者; 使用眼球突出计检测观察组与对照组选取脂肪一侧眼球突出度,并计算两组对象BMI状况,使用西门子emotion16排螺旋CT对两组对象眼眶行CT检测,使用Image J检测选取脂肪一侧眼部脂肪体积状况,Real time PCR法检测眼眶脂肪组织内AdPLA mRNA表达状况。

结果：观察组与对照组平均年龄、BMI及性别对比差异均无统计学意义(P>0.05); 观察组患眼内脂肪含量、眼球突出度及组织内AdPLA mRNA表达量分别为32.21±1.85mL、19.97±1.56mm、0.04±0.01高于对照组的24.05±1.64mL、14.07±1.48mm、0.01±0.003,差异均有统计学意义(P<0.05)。

结论：TAO患者眼内脂肪含量、眼球突出度及组织内AdPLA mRNA表达量均比正常人高,TAO患者眼部脂肪组织内AdPLA表达量升高造成了其脂肪水解量降低,脂肪堆积量增大使其眼球突出程度加重。     

重组人瘦素蛋白对甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞诱导分化的影响

目的探讨重组人瘦素蛋白对体外培养的甲状腺相关眼病（TAO）患者眼眶前脂肪细胞诱导分化的影响。方法体外培养TAO患者眼眶前脂肪细胞,鉴定并传代,设加入不同质量浓度的重组人瘦素蛋白为瘦素组,另设对照组,进行诱导分化及油红染色,图像分析系统计算分化后脂肪细胞内脂质／核的平均积分光密度（IOD）值。结果体外培养的前脂肪细胞经免疫组织化学染色鉴定为间叶来源。不同质量浓度瘦素组分化后脂肪细胞内脂质／核的平均IOD值呈剂量依赖性降低;50、100、500μg／L瘦素组与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0,05）。结论重组人瘦素蛋白能够抑制眼眶前脂肪细胞的分化和细胞内脂质的形成,提示瘦素可能在TAO的发病中起反馈调节作用。     

甲状腺相关眼病及正常人眼眶成纤维细胞与前脂肪细胞培养及分化诱导

目的 研究不同浓度3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX）、胰岛素、地塞米松对培养的甲状腺相关眼病（TAO）及正常人眼眶成纤维细胞与前脂肪细胞的诱导作用。方法 原代培养13个TAO与7个正常人眼眶成纤维细胞与前脂肪细胞；透射电镜检查超微结构；油红O染色，光度法检测不同浓度地塞米松、胰岛素、IBMX对脂肪细胞转化率和细胞内脂肪含量的影响。结果 培养了TAO与正常人眼眶成纤维细胞与前脂肪细胞，并诱导前脂肪细胞向脂肪细胞转化，获得最佳的诱导浓度：地塞米松0．1μmol／L、胰岛素10μ／ml、IBMX0．25mmol／L。结论 TAO患者与正常人眼眶成纤维细胞和前脂肪细胞在形态学上未见明显差异，但前脂肪细胞能诱导分化为脂肪细胞，眼眶前脂肪细胞在TAO的发病中可能起重要作用。     

甲状腺相关眼病眼眶组织透明质酸合成酶表达的研究

目的探讨透明质酸合成酶2（HAS2）mRNA在甲状腺相关眼病（TAO）患者球后脂肪组织及眼外肌中的表达。方法收集四川大学华西医院眼科2000—2005年确诊并行眼眶减压术或斜视矫正术的TAO患者21例为TAO组,获得眼外肌标本18个,脂肪标本17个;Ⅱ期义眼台植入患者、眼袋整形者及共同性斜视患者18例作为对照组,共获得眼外肌组织标本17个,脂肪组织标本11个。所有标本通过原位杂交的方法,测量吸光度（A）值,计算HAS2mRNA的表达。依据活动期的临床表现对TAO患者进行临床活动性评分（CAS）,采用Spearman秩相关分析对HAS2mRNA在待测眼组织标本中的表达量与TAO患者CAS的相关性进行评估。结果 TAO组患者眼外肌和脂肪间质组织HAS2明显黄染,对照组均呈轻度黄染。TAO组和对照组的眼外肌组织中HAS2mRNAA值分别为191.133±48.898和133.200±48.933,差异有统计学意义（P=0.001）（95%CI：24.275～91.590）;TAO组和对照组眶脂肪组织中HAS2mRNAA值分别为50.430±26.812和33.048±11.690,差异有统计学意义（t=2.350,P=0.028）（95%CI：2.099～32.664）;CAS与TAO脂肪组织中HAS2mRNA的表达无明显相关性（r=0.044,P=0.868）,与肌肉组织中HAS2mRNA的表达呈弱正相关性（r=0.496,P=0.036）。结论 TAO患者HAS2mRNA的高表达是造成眶后透明质酸堆积的原因之一。     

脂多糖诱导炎症反应对甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞分化的影响

目的 观察脂多糖诱导炎症反应对甲状腺相关眼病( TAO)眼眶前脂肪细胞分化的影响,探讨TAO眼眶脂肪增殖的发病机制。方法 实验研究。眼眶组织取TAO行开眶减压术的患者。将体外培养的TAO眼眶成纤维细胞,分为A组与B组,A组采用1 mg/L的脂多糖作用8h,然后常规用诱导分化液Ⅰ和Ⅱ诱导直至分化结束,B组仅用诱导分化液Ⅰ和Ⅱ诱导至分化结束。采用油红O染色法测定分化后脂肪细胞相对含量,逆转录聚合酶链反应法与Western blot法检测环氧化酶2( COX2)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) mRNA与蛋白的表达,酶联免疫吸附实验检测上清液中前列腺素E2( PG E2)的表达。两样本均数比较采用t检验,多样本比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK检验。结果 分化后油红O染色显示两组细胞形态上无明显差异。A组细胞吸光度(A)值(1.02±0.08)较B组(0.74±0.06)明显升高,差异具有统计学意义(t=8.502,P=0.000)。A组细胞分化后PPARγ mRNA( 1.74±0.19)与蛋白(0.47 ±0.04)的表达分别较分化前PPARγ mRNA(0.30±0.07)与蛋白(0.08±0.02)的表达明显增强(P＜0.05);B组细胞分化后PPARγ mRNA(1.15 ±0.18)与蛋白(0.35±0.03)的表达分别较分化前PPARγ mRNA(0.13 ±0.04)与蛋白(0.03 ±0.01)的表达明显增强(P＜0.05);A组细胞分化后COX2 mRNA (0.28±0.07)与蛋白(0.24±0.03)的表达分别较分化前COX2 mRNA( 1.54 ±0.10)与蛋白(0.49±0.03)的表达明显减弱(P＜0.05);B组细胞分化后COX2 mRNA的表达（0.08±0.03）较分化前(0.19±0.07)明显减弱(P＜0.05),而COX2蛋白的表达(0.01±0.01)与分化前(0.03±0.01)比较差异无统计学意义(P＞0.05)。分化后A组细胞上清液中PGE2分泌水平(208.43±15.06)ng/L较分化前(898.75±21.09)ng/L显著降低(P＜0.05);分化后B组细胞上清液中PGE2分泌水平(30.61±5.75) ng/L与分化前（35.75±4.09）ng/L比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。诱导分化前A组细胞COX2 mRNA与蛋白的表达及PGE2的分泌较B组明显增强(P＜0.05),而PPARγ mRNA与蛋白的表达亦强于B组(P＜0.05),分化后A组细胞COX2及PPARγmRNA与蛋白的表达、PGE2的分泌均强于B组(P＜0.05)。结论 脂多糖可诱导TAO眼眶前脂肪细胞产生炎症反应,使其炎症标志物COX2及其控制合成的PGE2表达增强,并使脂肪生成关键转录因子PPARγ表达上调,分化后PPARγ表达显著增强,而COX2与PGE2的表达明显降低。     

脂多糖诱导炎症反应对TAO眼眶成纤维细胞环氧合酶-2及前列腺素E_2表达的影响

目的观察脂多糖（LPS）对甲状腺相关眼病（TAO）眼眶成纤维细胞环氧合酶-2（COX-2）表达及前列腺素E2（PGE2）分泌的影响。方法眼眶组织分别取自3例3眼因眼球萎缩行义眼台植入（正常对照组）和4例4眼因TAO行开眶减压术（TAO组）的患者。细胞原代培养采用组织块法。将体外培养的2组眼眶成纤维细胞,分别采用0、10、100、1000μg/L的LPS作用24h,或1000μg/LLPS分别作用0、4、8、12、24h。半定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测各组COX-2mRNA的表达,ELISA法检测上清液中PGE2的表达。结果组织块培养法第3天即有成纤维样细胞自组织块边缘游出,细胞呈长梭形和多角形。10、100、1000μg/LLPS作用后,与未用LPS刺激时相比,正常对照组和TAO组眼眶成纤维细胞COX-2mRNA的表达均增强,PGE2的分泌增加。与正常对照组相比,1000μg/LLPS作用时间相同时,TAO组COX-2mRNA表达及PGE2的分泌增加更为明显（P〈0.05）。结论 COX-2通路可能参与了活动期TAO的炎症过程;在疾病的活动期,采用抑制COX-2的治疗,可减轻局部炎症反应,可能对活动期TAO的治疗有效。     

肥大细胞在甲状腺相关眼病脂肪组织中的分布

目的 研究甲状腺相关眼病(TAO)患者,眼眶脂肪结缔组织中肥大细胞的分布特点.方法 对10例TAO患者和6例正常对照的眼眶脂肪结缔组织进行大体观察、HE染色和肥大细胞甲苯胺蓝法染色.结果 TAO患者较对照组的脂肪结缔组织有韧性,脂肪结缔组织中偶见肥大细胞、可见淋巴细胞等炎症细胞浸润及纤维组织增生,而对照组未见明显的炎症细胞.结论 静止期TAO患者的球后脂肪结缔组织中仍然有淋巴细胞及肥大细胞,还存在轻微的炎症反应,反应中的肥大细胞与其免疫性炎症的特点相符合.     

甲状腺相关眼病患者和正常人眼眶脂肪组织中脂肪特异性磷脂酶A2的表达

目的　测量甲状腺相关眼病患者和正常人眼眶脂肪组织中脂肪特异性磷脂酶Ａ２（ａｄｉｐｏｓｅ-ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２,ＡｄＰＬＡ）的表达水平。方法　用实时定量聚合酶链反应定量检测３例甲状腺相关眼病患者和４例正常人眼眶脂肪组织的ＡｄＰＬＡｍＲＮＡ的表达水平。结果　甲状腺相关眼病患者眼眶脂肪组织中ＡｄＰＬＡｍＲＮＡ的表达量为０．０８８８２±０．０１３９１（中位数０．８２２００）,正常人眼眶脂肪组织中ＡｄＰＬＡｍＲＮＡ的表达量为０．０１２１９±０．０５１２９（中位数０．００８７６）,两组差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论　ＡｄＰＬＡｍＲＮＡ在甲状腺相关眼病患者和正常人眼眶脂肪组织中均有表达,而且甲状腺相关眼病患者的表达量明显高于正常人。     

Orbital pathology in thyroid-associated ophthalmopathy

Thyroid-associated ophthalmopathy (TAO) is a disfiguring disease. The clinical symptoms are the consequence of inflammation in the orbital tissues in response to as yet unknown antigens, causing swelling of the extraocular muscles, edema and fibrosis, and subsequently eye movement impairment, exophthalmos and sometimes compression of the optic nerve. Analysis of orbits from 40 patients with Graves' ophthalmopathy showed an increased volume of both the extraocular muscles and the orbital adipose/connective tissue in 48%, increased muscle volume with normal adipose/connective tissue in 20% and normal muscles with increased adipose/connective tissue in 28%. The other orbits were normal (4%).

Knowledge of the overall anatomy and the distribution of immunocompetent cells may help to shed light on the pathophysiology of TAO. In normal orbital tissues B-lymphocytes were scarce, but T-lymphocytes were numerous in normal extraocular muscles, orbital connective tissue septa and in the loose connective tissue surrounding the adipose tissue. The most predominant cell type in normal extraocular muscles and in the orbital connective tissue is the macrophage. In TAO, irrespective of the activity state, significant increases in numbers of macrophages were found in the minor connective tissue septa and in the levator palpebrae/Miiller's muscle complex. In the latter muscle complex the number of macrophages per mm² is increased, whereas the number of HLA-DR⁺ cells is drastically reduced compared to controls. Overall these results show a shift in population from HLA-DRV macrophages, in control tissues, to HLA-DR7macrophages in orbital tissues obtained from patients with TAO.     

早期原发性慢性闭角型青光眼多焦视网膜电图的变化

目的:观察早期原发性慢性闭角型青光眼(PACG)多焦视网膜电图的变化,评估闭角型青光眼高眼压对视网膜功能的早期影响。方法:采用罗兰RETIscan(Version 3.15)多焦电生理系统对20例原发性闭角型青光眼患者和20位正常人进行mfERG检查。mfERG的分析对象为多焦电生理产生的鼻上(SN)、鼻下(IN)、颞下(IT)、颞上(ST)4个象限、6环以及总和反应的波形,对总和反应平均密度、P1和N1的潜伏期结果用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果:PACG组P1和N1波的总和反应平均密度分别为23.33±8.67,9.12±2.74nV/deg2。PACG组P1波和N1波总和反应平均密度较正常组明显降低(P<0.05)。PACG组SN,IN,IT和ST象限P1反应波平均密度分别为24.89±10.18,24.64±9.27,23.79±7.97,21.45±7.88nV/deg2,较正常组明显降低(P<0.05),两组N1反应波平均密度无明显差异。PACG组R1~R6P1,R1,2,3,5N1反应波平均密度分别为60.23±27.76,46.90±19.85,37.86±15.14,30.25±11.52,22.45±9.59,18.58±6.56,18.92±9.72,13.78±6.26,11.29±4.63,6.90±2.51nV/deg2,较正常组明显降低(P<0.05)。结论:早期受到眼压变化的影响PACG可以出现mfERG的特征变化,总和反应平均密度明显降低,各象限和6环P1波以及内3环N1波反应的平均密度降低。