通用真菌引物和探针检测人全血标本中侵袭性真菌DNA载量的方法

目的 建立实时定量PCR(RQ-PCR)以真菌通用引物和探针快速准确检测人全血标本中侵袭性真菌DNA载量的方法,并与细菌相鉴别及进行初步临床应用.方法 选择临床常见的真菌基因组多拷贝基因5.8S rDNA作为靶基因设计特异性通用真菌引物和TaqMan探针,采用QIAamp(R)血液DNA小提试剂盒提取多种致病真菌基因组DNA,建立20μl RQ-PCR反应体系,对含有不同载量致病真菌的模拟人全血标本和71份外科发热患者全血标本进行侵袭性真菌基因组的定量检测.结果 本方法的特异性良好,检测限为101拷贝/μl上机待测液(即约105拷贝/ml全血);检测灵敏度和特异度分别为95.5％和97.6％,阳性预告值和阴性预告值分别为98.7％和92.0％;标准曲线R2在0.9931～ 0.9977;批内及批间平均变异系数分别为(10.4±4.0)％和(27.9±2.0)％;人血标本中真菌基因组DNA平均回收率为(91.0±7.6)％,相对回收率平均变异系数为(14.9±4.0)％.71份外科发热患者血标本中未检测出侵袭性真菌基因组.结论 RQ-PCR可以借通用真菌引物和TaqMan探针快速、特异、灵敏地定量检测人血标本中侵袭性真菌DNA的载量并可与细菌相鉴别,且有着较好的准确度与精密度.外科发热患者血中侵袭性真菌基因组的存在率可能很低.     

应用通用引物PCR检测诊断细菌和真菌性中枢神经系统感染的价值

目的了解细菌和真菌性中枢神经系统（CNS）感染病原谱,并探讨通用引物聚合酶链反应（PCR)检测技术的病原学诊断价值。方法收集某院2009年1月—2015年3月疑似或确诊CNS细菌或真菌性感染患者资料,分析其脑脊液培养病原菌种类,采用细菌16S rRNA和真菌28S rRNA通用引物对患者脑脊液DNA进行PCR扩增和序列测定,并与同期脑脊液培养及鉴定结果进行比较。结果共收集确诊或疑似CNS细菌或真菌感染者400例,其中脑脊液培养阳性132例。共分离病原菌150株,其中革兰阳性菌48株,革兰阴性菌90株,真菌12株;居前3位的细菌为鲍曼不动杆菌（32株）、凝固酶阴性葡萄球菌（16株）和肺炎克雷伯菌（13株）;最常见真菌为新生隐球菌（8株）。选取88份感染患者脑脊液标本和20例非感染患者脑脊液进行PCR扩增,PCR扩增法灵敏度（35.23％,31/88）高于培养法（28.41%,25/88）（χ2＝4.17,P＜0.05）。PCR扩增和培养法阴性预测值分别为25.97%、24.10%,两种方法的特异度、阳性预测值均为100.00%。PCR扩增测序与培养结果符合率为84.00%（21/25）;PCR检测平均报告时间（48 h）较培养结果报告时间（细菌平均约72 h,真菌平均约96 h）更快速。结论CNS 感染病原分布广泛,以革兰阴性菌为主;通用引物PCR检测具有快速、灵敏、准确等特点,具有良好的临床推广和应用价值。     

非培养检测方法在终末期肝病合并侵袭性真菌感染诊断中的应用

侵袭性真菌感染(IFI)已经成为终末期肝病(ESLD)患者治疗失败乃至死亡的重要原因。然而,由于临床表现不一,真菌培养阳性率低及培养周期时间长等,ESLD合并IFI的早期、准确诊断具有挑战性。近年来,非培养检测方法如直接显微镜镜检(包括真菌荧光染色)、血清学检测方法及分子生物学方法被引入IFI的检测,逐渐成为有广泛临床...     

痰液中结核杆菌4种检查方法的结果分析

目的 通过临床实践,对痰液聚合酶链反应法(PCR)、痰液常规培养法、痰液直接涂片镜检法、痰液浓集涂片镜检法,进行比较,从而评估其诊断价值,进而日常临床检查方法提供客观有效的参考.方法 对采集到的同一组标本,运用4种方法进行检查,PCR法检测痰液中TB-DNA;常规培养法培养痰液中结核菌;直接涂片镜检法和浓集镜检法分别检测抗酸杆菌.结果 PCR法阳性率25.7％,常规培养法阳性率5.6％,直接涂片镜检法阳性率3.5％,浓集涂片镜检法阳性率10.6％.结论 PCR法检测TB-DNA既能缩短检测时间又具有敏感度高.要降低漏检率,可同时采用PCR法、常规培养法、浓集涂片镜检法等不同方法,从不同角度进行检测.     

用PCR法检测某化工厂患足癣工人皮损处真菌的实验研究

[目的]评价聚合酶链反应（PCR）技术直接从临床诊断为足癣的化工厂工人皮损处检测真菌的方法。[方法]采用蛋白酶K消化法和煮沸法处理标本，从中提取真菌DNA，然后用以源于医学机会性致病性真菌18srDNA保守区的一对寡核苷酸序列B2F（5′-ACTTTCGTAGGATAG-3′）和B4R（5′-TGATCGTCTTCGATAAATA-3′）为通用引物进行PCR扩增检测，并与直接镜检和培养法进行对比。[结果]在208例临床诊断为足癣的某化工厂工人皮损处皮屑中，用PCR检出真菌阳性者193例（92.79%），检出的真菌菌种为红色毛癣菌、絮状表皮癣菌和须癣毛癣菌；用培养法检测真菌阳性者186例（89.42%），检出的真菌菌种为红色毛癣菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌和犬小孢子菌；真菌直接镜检检出阳性者141例（67.79%）。[结论]用PCR法检测化工厂工人的足癣具有快速诊断的价值，并且具有较好的敏感性、特异性和准确性，可用于化工企业工人患足癣后进行真菌的常规检测和诊断。     

实时荧光定量PCR与1,3-β-D葡聚糖试验在儿童肺部真菌感染中的诊断意义

目的探讨实时荧光定量PCR与1,3-β-D葡聚糖试验(G试验)在儿童侵袭性肺部真菌感染诊断中的价值。方法对拟诊肺部真菌感染的31例患儿,取咽部吸出物做真菌培养、涂片,真菌、白色念珠菌PCR检测,取全血做G试验,比较检测的准确性。结果研究组31例中,白色念珠菌PCR检测阳性12例,G试验阳性15例。对照组11例标本PCR检测、G试验均阴性。PCR与G试验一致性检验结果显示两组间一致性中等(Kappa=0.512),研究组与对照组检测阳性率比较有统计学差异(P<0.05)。结论实时荧光定量PCR检测可用于儿童侵袭性肺部真菌感染的早期诊断,与G试验联合应用可提高诊断的敏感性。     

（1，3）-β-D-葡聚糖检测对深部真菌感染的诊断意义

目的探讨血浆（1,3）-β-D-葡聚糖[（1,3）-β-DGlucan,BDG]检测对深部真菌感染的诊断价值。方法回顾性分析430例疑似病例的BI）G结果及其临床特征,应用MB-80微生物动态快速检测系统及GKT25MSet动态真菌检测试剂盒定量检测血浆中BDG的含量,结合患者血液、痰或中段尿标本的真菌培养,用统计学方法计算BDG试验在真菌感染早期诊断中的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。同时连续检测血清BDG浓度变化,观察其与疾病进展和预后间的关系。结果BDG检测法阳性135例,阳性率为31．4％;真菌培养法116例阳性,阳性率为26．9％。真菌培养阳性组的BDG含量为（91．85±25．26）pg／ml,真菌培养阴性组BDG含量为（30．69±10．95）pg／ml,两组血浆BDG浓度差异有统计学意义（t=2．349,P〈0．05）。以真菌培养结果作标准,BI）G的灵敏度为90．9％,特异性为77．4％。抗真菌治疗过程中,血清BDG水平在感染恶化患者持续升高,在治疗好转患者中明显下降。结论血浆BDG试验结果与临床侵袭性真菌诊断具有很好的一致性,与传统的真菌培养法相比,BDG检测简便、快速、阳性率高,可用于侵袭性真菌感染的早期快速诊断及疗效判断指标。     

PCR法快速检测、诊断职业驾驶员皮肤癣病

目的比较用聚合酶链反应(PCR)法和培养法检测某地区患股癣的职业司机所感染真菌的异同,探讨用PCR法在普查诊断职业司机皮肤癣菌病的意义。方法用真菌通用引物ITS86和ITS4(5-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3和5-GTGAATCATCGAATCTTTAAC-3)对职业司机所患股癣的常见致病真菌进行PCR;同时用传统的培养法进行培养。结果在218例临床诊断为股癣的职业司机皮损处皮屑中,用PCR方法检测出真菌阳性者199例,占91.28%,检出的真菌菌种为红色毛癣菌、絮状表皮癣菌和须癣毛癣菌;用培养法检测出真菌阳性者191例,占87.61%,检出的真菌菌种也是红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、须癣毛癣菌。结论采用真菌通用引物ITS对患股癣的职业司机进行PCR检测,具有准确、快速、特异性和敏感性高的特点,可用于职业性皮肤癣菌病的检测和诊断。     

57株深部真菌感染血培养阳性结果分析

目的 分析血培养真菌阳性标本,寻找深部真菌感染特点。方法 血培养使用Bact/Alert血培养仪,分离使用沙保弱培基,真菌和细菌鉴定使用VITEKAMS－60自动微生物分析仪,HCMV检验使用PCR和RT－PCR方法。结果 血培养阳性57株,以念珠菌属为主92．08％;阳性结果时间平均35．06h,72h内获得结果者53株占92．98％;65％患者从血以外的其他标本获得真菌阳性结果,真菌感染多见于免疫低下者,本组40例患者中各种肿瘤占33例（82．5％）。结论 真菌血培养阳性是患者真菌感染的确证依据,多系统真菌感染为临床致死原因;部分患者还可在标本中同时检出其他疫原微生物。     

降钙素原在侵袭性真菌感染诊断中的应用价值研究

目的 评价血清降钙素原(PCT)在侵袭性真菌感染(IFI)诊断中的应用价值.方法 纳入有全身炎症反应综合征(SIRS)表现、临床感染、标本培养结果阳性的患者,同时半定量免疫色谱法测定PCT.结果 当PCT＜0.5 ng/ml,真菌感染组36例占73.47％,细菌感染组5例占9.62％;当PCT≥0.5 ng/ml时,诊断细菌感染的敏感度为90.38％,特异度为73.47％,阳性预测值78.33％,阴性预测值87.8％,PCT＜0.5 ng/ml可高度提示真菌感染.结论 对于有临床感染征像的患者,PCT＜0.5 ng/ml时,高度提示真菌感染;PCT可以作为真菌与细菌鉴别的一个有效的临床辅助诊断指标.     

自发性食管破裂的诊断和及时治疗

目的探讨自发性食管破裂的诊断方法和及时治疗的理念，以提高临床诊疗水平。方法回顾性分析1999年2月至2011年6月本科收治的16例食管自发性破裂的相关临床资料及手术方式。其中中段食管破裂4例，下段食管破裂12例。16例均为1处破口，破裂长度为1．5～5（2．6±1．1）cm，破入左胸11例，右胸2例，无胸腔破入3例，主要症状为胸腹剧烈疼痛、发热、呼吸困难及休克等，查体见液气胸10例，皮下气肿5例。结果全组24h内修补11例，24h后修补5例，均采用可吸收线间断缝合食管，大网膜包埋固定，改良抗返流手术。全组均顺利度过围手术期，无死亡病例。随访无食管狭窄，返流2例，采用保守治疗均明显缓解。结论早期诊断和确诊后及时剖胸探查手术、闭合破裂口重建消化道并大网膜包盖固定、确保消化道连续性是治疗自发食管破裂的关键。     

血清降钙素原检测在感染性疾病诊治中的应用价值

目的探讨血清降钙素原（PCT）检测在感染性疾病诊治中的应用价值。方法采用胶体金免疫层析分析法,对94例细菌感染者、74例病毒感染者和40例健康对照者进行PCT检测,并作PCT水平比较。结果细菌感染组PCT水平明显升高,且与病情严重程度呈正相关,病毒感染组PCT水平不升高或轻度升高,健康对照组大多〈0.5 ng/m L。细菌感染组与病毒感染组、健康对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,病毒感染组与健康对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论血清PCT水平检测可用于细菌感染性疾病的早期诊断及与病毒感染性疾病的鉴别诊断,且PCT水平对判断病情轻重及患者预后有很好的价值。     

尿微量白蛋白和β2微球蛋白联合检测对糖尿病肾病的诊断价值

目的探讨尿β2微球蛋白(β2-MG)和微量白蛋白(mAlb)对糖尿病肾病早期诊断的价值。方法采用放射免疫法,检测85例糖尿病(DM)患者尿中的β2-MG和mAlb,并与70例健康体检人员作对照。结果 DM患者尿中的β2-MG和mAlb明显高于健康组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论尿β2-MG和mAlb联合检测对糖尿病肾病(DN)的早期诊断有非常重要的临床参考价值,对DM患者早期发现、诊断和治疗肾损害具有重要临床意义。     

小儿腹腔内囊状淋巴管瘤的诊断和治疗

目的探讨小儿腹腔内囊状淋巴管瘤的临床特点、诊断和治疗。方法回顾性分析8例小儿腹腔内囊状淋巴管瘤的临床资料。结果临床表现为腹痛5例，腹腔内包块3例，腹胀3例，其他手术术中发现1例。手术切除8例，术后并发症发生率为12.5%（1/8）。结论小儿腹腔内囊状淋巴管瘤常常缺乏典型的临床表现，B超、CT和MR I检查对该病的定位、定性诊断具有重要价值。手术完整切除是治疗首选。     

癌胚抗原检测在胸腔积液鉴别诊断中的意义

目的探讨肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)在良、恶性胸腔积液鉴别诊断中的临床意义。方法采用免疫放射法分别检测58例恶性胸水和57例良性胸水患者血清、胸水样本中CEA的含量,并计算其胸水/血清比值。结果恶性组血清、胸水样本中CEA含量及CEA之胸水/血清比值均明显高于良性组(p<0.01),恶性组胸水中CEA的含量高于血清组(p<0.01)。检测胸水中CEA含量在恶性胸水诊断中的灵敏度、特异性和准确率分别为91.4%、68.4%和80.0%;采用血清、胸水中CEA含量及CEA之胸水/血清比值联合检测方法的灵敏度、特异性和准确率为75.9%、94.7%和87.0%。结论联合检测胸水、血清中CEA的含量并计算胸水/血清比值在胸腔积液鉴别诊断中具有有重要的临床价值。     

肿瘤特异性生长因子测定在肝癌及肝硬化诊断中的意义

目的研究肿瘤相关物质肿瘤特异性生长因子(TSGF)在肝癌、肝硬化及健康对照之间的差异性,从而探讨TSGF在肝癌与肝硬化诊断中的意义。方法采用光电比色法检测53例肝癌患者治疗前后以及66例健康体检者、60例肝硬化患者血清中TSGF的含量,并进行对比分析。结果肝癌治疗前TSGF明显高于对照组(t=31.67,P<0.01)及肝硬化组(t=12.77,P<0.01)。肝癌组治疗后与治疗前相比,TSGF明显降低(t=10.215,P<0.01)。结论血清TSGF测定对肝癌诊断具有较高的敏感性,且在监测治疗效果、转移及复发、人群普查等方面具有较大的实用价值。     

胚外体腔穿刺术用于产前诊断的可行性研究

目的 探讨胚外体腔穿刺术的实施方法 及进行产前诊断的可行性研究.方法 孕6～12周要求人工流产的孕妇58例,在人工流产前行胚外体腔穿刺术抽取胚外体腔液,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测Y染色体上SRY(sex-determining resion Y)基因,并以绒毛检测结果 作为对照标准.观察穿刺前后胎心率、囊内出血及血肿情况.结果 胚外体腔穿刺总成功率96.6%.穿刺均在5 min内完成,一次穿刺成功率孕6周～者为25.0%,孕7～10周者为93.2%,孕～12周者为50.0%.穿刺前后胎心率无明显变化(P＞0.05).胚外体腔细胞SRY基因检测的准确率为91.1%(51/56).其中30例女胎胚外体腔细胞检测结果 全部与绒毛相符;21例绒毛检测为男胎者,有5例胚外体腔细胞结果 不相符,男胎的准确率为80.8%(21/26).结论 胚外体腔穿刺术的最佳时间为孕7～10周,其操作简单易行,成功率高,安全可靠.     

35例腺性膀胱炎的诊断与治疗

目的探讨腺性膀胱炎的临床特点、诊断和治疗。方法对2006年至2010年诊治的35例腺性膀胱炎患者的临床资料进行回顾性分析。结果 35例患者主要症状为尿路刺激症状和血尿,均行膀胱镜检查及膀胱黏膜活检,证实为腺性膀胱炎。35例均行经尿道电切,术后应用丝裂霉素膀胱灌注治疗,随访32例中有26例症状消失,6例症状部分改善,分别于术后5、12及18个月复查发现3例复发,再次治愈后无复发。结论膀胱镜检查及膀胱黏膜组织活检是确诊腺性膀胱炎首选的检查方法,经尿道腺性膀胱炎电切联合术后灌注治疗是治疗腺性膀胱炎有效的方法。     

The predictive value of microbiologic diagnostic tests if asymptomatic carriers are present

If a proper gold standard is not available, then the predictive value of a test cannot be estimated. In this paper the concept of etiologic predictive value (EPV) is introduced. It is a quantity that will yield the predictive value of a test to predict presence of a specified disease in situations for which no proper gold standard is available. This is achieved by using information obtained from a healthy control population. This quantity requires that the marker in our test is present in all individuals having the specified disease, as in the case where the marker is the aetiologic factor for the specified disease. Furthermore this quantity requires that asymptomatic carriers are present. This means that not all individuals with the marker has the specified disease. EPV is developed with special reference to the evaluation of bacterial cultures, or rapid tests to detect a bacterium, but the quantity might be used in other circumstances as well. EPV is applied to an example in which conventional throat culture is evaluated. Further information concerning EPV can be found at http://www.infovice.se/fou/epv.     

串联质谱技术在发育迟缓患儿早期诊断中的应用价值

目的探讨串联质谱的定量检测在发育迟缓患儿早期诊断中的应用价值。方法应用串联质谱方法对155例发育迟缓患儿进行血氨基酸和酰基肉碱的定量检测,并分析检出结果与临床症状及治疗转归情况。结果155例患儿中确诊10例氨基酸及肉碱缺乏疾病。其中4例确诊为甲基丙二酸血症,1例丙酸血症,1例中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症,1例鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症,3例苯丙酮尿症。临床表现主要为运动及智力发育迟缓。经过治疗,大部分好转。结论对氨基酸及肉碱的检测,有利于运动及发育迟缓患儿的病因诊断及疗效判断。