白细胞介素-10在川崎病炎性细胞因子介导的血管损伤中的作用初探

目的　探讨白细胞介素 10 (IL 10 )在炎性细胞因子介导的川崎病血管内皮损伤中的作用及机制。方法　建立人脐静脉内皮细胞培养模型 ,ELISA双抗体夹心法检测川崎病患儿外周血单个核细胞 (PBMC)活化后培养上清IL 6、IL 1β、肿瘤坏死因子 α(TNF α)、IL 10的分泌量 ;AnnexinV/PI双染色法 ,流式细胞仪检测川崎病患儿PBMC培养上清所诱导的内皮细胞凋亡率 ;凝胶电泳迁移率转换实验 (EMSA)检测所活化PBMC核因子NF κB活性。结果　川崎病组患者PBMC体外刺激活化后IL 6、IL 1β、TNF α等炎性细胞因子及IL 10的分泌量均明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ,其培养上清所诱导内皮细胞凋亡率 (38 4± 7 8) %较正常组 (2 8± 0 8) %明显升高。抗IL 6、TNF αMcAb、IL 1ra加入川崎病患儿PBMC培养上清 ,可不同程度抑制川崎病患儿PBMC培养上清所诱导内皮细胞的凋亡 ,而抗IL 10McAb加入川崎病患儿PBMC培养上清所诱导内皮细胞的凋亡细胞反而增多 ,凋亡细胞的百分率高达 (5 8 6± 14 6 ) %。川崎病患儿PBMC刺激活化后核因子NF κB活性显著增高。于PBMC培养上清加入IL 10 ,可见伴随着IL 6、IL 1β、TNF α等炎性细胞因子在PBMC中的表达降低 ,NF κB活性也降低 ,同时内皮细胞凋亡明显减少。结论　IL 10抑制川崎病患儿免疫     

小干扰RNA对川崎病血清诱导血管内皮细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的 观察川崎病急性期血清对血管内皮细胞摹质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响以及MMP-9小干扰RNA(siRNA)对上述过程的调节作用.方法 构建MMP-9 siRNA质粒,脂质法转染血管内皮细胞(ECV-304).ECV-304细胞培养分为川崎病血清+siRNA阴性对照组、正常血清组、川崎病血清+MMP-9 siRNA1组、川崎病血清+MMP-9 siRNA2组、川崎病血清+人血丙种球蛋白组、川崎病血清组.应用逆转录聚合酶链式反应检测MMP-9 mRNA的表达,免疫印迹法检测MMP-9蛋白的表达.结果 川崎病血清组和川崎病血清+siRNA阴性对照组的MMP-9 mRNA、MMP-9蛋白表达分别是2.49±0.03、1.20±0.04和2.45±0.03、1.15±0.03,均较正常血清组(1.21±0.03、0.52±0.03)明显增高(均P<0.01).川崎病血清+MMP-9 siRNA1组(0.78±0.03、0.31±0.02)、川崎病血清+MMP-9 siRNA2组(0.74±0.04、0.28±0.04)及川崎病血清+人血丙种球蛋白组(1.58±0.03、0.88±0.04)的MMP-9 mRNA、MMP-9蛋白表达与川崎病血清组及川崎病血清+siRNA阴性对照组比较均明显减少(均P<0.01).结论 川崎病急性期血清能诱导血管内皮细胞的MMP-9表达增高,可能参与川崎病冠状动脉损伤的发生.构建的MMP-9 siRNA能显著抑制MMP-9 mRNA和蛋白的表达.     

川崎病患儿血清抗内皮细胞抗体和抗中性粒细胞胞浆抗体检测的临床意义

目的探讨川崎病患儿血清抗内皮细胞抗体和抗中性粒细胞胞浆抗体检测的临床意义。方法选取2016年5月至2017年5月本院收治的川崎病患儿25例,作为研究组,应用酶联免疫吸附试验定量检测60例川崎病患儿急性期、缓解期血清抗内皮细胞抗体和抗中性粒细胞胞浆抗体水平,并行心脏超声心动图了解冠状动脉损害(CAL)发生情况治疗。随机选取同期因呼吸道感染发热患儿25例作为对照组应用酶联免疫吸附试验定量检测血清抗内皮细胞抗体和抗中性粒细胞胞浆抗体水平。结果在研究组中急性期川崎病患儿血清抗内皮细胞抗体和抗中性粒细胞胞浆抗体水平均显著高于对照组(P0.05)。在研究组中,与急性期相比,缓解期血清血清抗内皮细胞抗体和抗中性粒细胞胞浆抗体水平下降,但仍高于对照组(P0.05)。伴有冠状动脉损害的川崎病患儿急性期血清抗内皮细胞抗体水平明显高于无冠状动脉损害的患儿(P0.05)。结论抗内皮细胞与抗中性粒细胞胞浆抗体可能与川崎病血管炎及其冠状动脉损伤的发生有关。急性期血清中抗内皮细胞抗体、抗中性粒细胞胞浆抗体对早期难以确诊的川崎病有参考价值,抗内皮细胞抗体含量的增高对冠状动脉损害有一定的预警价值。     

不同心肌病充血性心力衰竭患者细胞因子的变化

目的 :探讨细胞因子在不同心肌病充血性心力衰竭 (CHF)中升高的触发机制。方法 :选择不同心肌病CHF患者 6 0例 (缺血性心肌病和扩张型心肌病各 30例 ) ,并选择 30例匹配的正常人作为对照组 ,放射免疫法检测肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)、白细胞介素 - 1 (IL- 1 )、IL- 6和神经激素〔醛固酮 (AL D)、心钠素 (ANP)、肾素 (PRA)、血管紧张素 (AT )〕。结果 :TNF- α、IL- 1、IL- 6在 CHF患者中较正常人明显增高 (P <0 .0 0 1 )。不同心肌病CHF患者 ,在相同心功能分级时细胞因子水平无显著性差异。 TNF- α的升高与 ANP水平以及 IL- 6的升高与AL D水平均呈正相关。结论 :细胞因子在 CHF中起重要作用 ;但与不同心肌病无关。     

幽门螺杆菌相关胃炎中TNF-α和IL-1β分泌的原位研究

目的 :原位检测幽门螺杆菌 (Hp)感染时胃黏膜活检标本中肿瘤坏死因子 α(TNF α)和白介素 1 β(IL 1 β)的产生情况。方法 ;采集 1 3例Hp阴性受检者和 32例Hp阳性受检者的胃黏膜活检标本 ,通过放免法、免疫组织化学法观察并比较两组胃黏膜活检标本中细胞因子TNF α和IL 1 β的产生。结果 :胃黏膜活检标本中TNF α和IL 1 β的分泌在Hp阳性组显著高于Hp阴性组 (P <0 .0 1 ) ,但其分泌与胃黏膜的病理分型似无显著相关性 (P >0 .0 5)。TNF α和IL 1 β的组织表达在Hp阳性组也显著高于Hp阴性组 (P <0 .0 5)。结论 :Hp感染可以使局部细胞因子TNF α和IL 1 β产生增加 ,可能在Hp相关胃炎中起致病作用     

静脉注射丙种球蛋白无反应型川崎病Th17细胞的变化及意义

目的 探讨Th17细胞在静脉注射丙种球蛋白(IVIG)无反应型川崎病(KD)免疫发病机制中的作用.方法 选取KD患儿45例,其中IVIG敏感型KD 35例,IVIG无反应型KD 10例,同年龄健康对照组30名.KD患儿分别于IVIG治疗前后直接取血备检,IVIG无反应型KD分别在病程第8、9、11天取血备检.采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测CD4~+T细胞白细胞介素(IL)-17A/F、转录因子ROR-γt mRNA表达;采用流式细胞术检测外周血Th17细胞占CD4~+T细胞比例.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Th17细胞相关的细胞因子IL-17A和IL-6的表达.结果 ①急性期KD患儿CD4~+T细胞IL-17A/F表达明显高于对照组(P<0.01);②急性期IVIG无反应型KD患儿CD4~+T细胞内IL-17蛋白、IL-17A/F mRNA、Th17细胞转录因子ROR-γt的基因表达明显高于IVIG敏感型KD,经IVIG治疗后敏感型KDTh17细胞相关因子表达明显降低(P<0.01),无反应型KD Th17细胞相关因子仍持续高表达(P>0.05);③急性期KD患儿治疗前IL-17A和IL-6血浓度明显高于对照组(P<0.01),其中IVIG无反应型KD活化细胞因子水平明显高于1VIG敏感型KD组(P<0.01).经治疗后均有下降趋势,但IVIG无反应型KD仍高于敏感型KD(P<0.01);④甲泼尼龙冲击治疗IVIG无反应型KD当天退热.血浆IL-6,IL-17A较前明显降低,C反应蛋白(CRP)恢复快,能够迅速控制血管炎性反应.结论 Th17细胞过度活化可能是导致IVIG无反应型KD的原因之一.     

SOCS1和SOCS3低甲基化对川崎病Th1/Th2细胞失衡的影响

目的 探讨SOCS1和SOCS3低甲基化对川崎病Th1/Th2细胞失衡的影响.方法 急性期川崎病患儿36例,健康同年龄对照组16名.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆白细胞介素(IL)-6蛋白浓度;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测CD4+T细胞SOCS1、SOCS3、T-bet、干扰素(IFN)-γ、GATA3、IL-4基因mRNA表达;流式细胞术检测外周血Th1/Th2细胞比例和CD4+T细胞磷酸化STAT3(pSTAT3)蛋白平均荧光强度(MFI);甲基化特异性定量PCR(MethySYBR PCR)检测CD4+T细胞SOCSl基因外显子2、SOCS3基因5'端非翻译区(5'-UTR)3个可能的STAT3结合位点CpG岛甲基化水平.采用t检验进行统计分析.结果 ①急性期川崎病患儿血浆IL-6浓度[分别为(51.8±16.3)pg/ml和(8.6±2.0)pg/ml]、CD4+T细胞pSTAT3 MH水平[分别为(52±14)和(10±4)]显著上调(P＜0.05).其中川崎病合并冠状动脉损伤组(川崎病-CAL+)IL-6和pSTAT3 MFI水平均明显高于无冠状动脉损伤组[IL-6为(87.2±27.4)pg/ml与(36.2±12.8)pg/ml,P＜0.05;pSTAT3 MFI为(75±15)和(42±11),P＜0.05].②急性期川崎病患儿Th1、Th2细胞比例及相关因子(T-bet、IFN-γ、GATA3和IL-4)表达明显增高(P＜0.05),Th1/Th2比值低于健康对照组(P＜0.05).其中川崎病-CAL+组Th1、Th2细胞比例及相关因子表达水平高于川崎病-GAL-组(P＜0.05),而Th1/Th2比值则略低于后者(P＜0.05).③急性期川崎病患儿CD4+T细胞SOCS1和SOCS3 mRNA水平显著高于同年龄对照组(P＜0.05),其中川崎病-CAL+组 SOCS1和SOCS3 mRNA表达低于川崎病-CAL-组(P＜0.05);健康对照组SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'-UTR区第3个STAT3结合位点的CpG岛完全去甲基化,急性期川崎病患儿呈低甲基化状态(P＜0.05),其中川崎病-CAL+组去甲基化水平明显低于川崎病-CAL组(P＜0.05);各组SOCS3基因5'-UTR区第1、2个STAT3结合位点CpG岛均处于完全去甲基化状态(P＞0.05).结论 SOCS1和SOCS3基因低甲基化所致表达相对不足可能是川崎病Th1/Th2细胞失衡的因素之一.     

细胞因子与高血压病心功能不全的相关性研究

目的　观察高血压病 (EH)心衰患者细胞因子白细胞介素 6(IL- 6)、白细胞介素 8(IL- 8)、肿瘤坏死因子 α(TNF- α)、γ干扰素 (IFN- γ)及 Apo- 1 / Fas的变化 ,分析心功能改变与细胞因子相关性 ,以期为临床应用更有效的干预治疗提供理论依据。方法　采用 ELISA法检测 60例高血压病患者和 2 0例正常对照组血清各炎性细胞因子浓度 ,并应用彩色多普勒超声心动图测定其左室收缩及舒张功能 ,分析心功能改变与细胞因子相关性。结果　与正常对照组比较 EH组的血清细胞因子含量明显升高 ,增高的程度与心衰的严重程度相一致 ,心功能不全组间比较也有明显差别 ,EH组收缩功能减退及舒张功能减退与炎性细胞因子的增高密切相关。结论　高血压病心衰患者存在着细胞因子的过度激活及心肌细胞的凋亡 ,并与心衰程度加重密切相关 ,在心衰的发生发展中起着重要的作用     

老年COPD患者痰IL-4、IL-10、INF-γ水平及临床意义

目的探讨COPD患者痰白细胞介素4(interleukin,IL-4)、IL-10、干扰素-γ(interferon,INF-γ)水平及临床意义。方法老年COPD患者共60例(重度20例,中度20例,轻度20例),正常对照20例。采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验,检测诱导痰IL-4、IL-10、INF-γ水平。结果①急性期重、中度COPD组痰IL-4水平低于轻度组(P<0.05)。②急性期重度组痰IL-10水平均高于轻度组。治疗后重度、中度组痰IL-10水平均比治疗前显著升高(P均<0.01)。③重、中度组急性期痰IFN-γ值显著高于治疗后缓解期(P均<0.01),且重、中度组急性期痰IFN-γ值均高于轻度组。④老年COPD患者痰中IL-4与IL-10;IL-10与IFN-γ存在相关,IL-4与IFN-γ不存在相关。结论 COPD时Th1类细胞因子(IFN-γ)呈优势状态;前炎症因子水平增高。     

丙种球蛋白对不完全川崎病与典型川崎病治疗的效果差异

目的探讨丙种球蛋白对不完全川崎病与典型川崎病治疗的临床效果。方法抽取2015年3月到2017年9月90例川崎病患儿,运用随机数字表法将其分为对照组(n=45)与实验组(n=45),对照组为典型川崎病患儿组,实验组为不完全川崎病患儿组,对两组患儿予以阿司匹林与静脉丙种球蛋白的治疗方式,观察两组患儿的临床症状好转情况与各项血液指标的检测情况。结果实验组患儿的临床症状好转情况明显优于对照组,各项血液指标检测结果明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论静脉丙种球蛋白对不完全川崎病治疗具有显著效果,可有效的缓解患儿的临床症状,治疗效果优于典型川崎病,具有较高的临床推广价值。