STR基因在胎儿21三体异常中的表达

目的探讨应用短串联重复序列（STR）基因对胎儿细胞进行21三体定性诊断的可行性。方法选择31例高风险胎儿及其双亲为对象，抽提羊水细胞基因组DNA，用聚合酶链反应扩增D21S1 411、D21S1414、D21S1412和D21S11位点的STR片段，并对其进行单链构象多态性分析，通过DNA密度扫描定量分析特征诊断21三体。以脐带血染色体G显带核型分析为对照。结果本法可以通过检测STR片段DNA密度扫描定量分析来诊断21三体。应用谊基因诊断方法鉴别出21三体的胎儿9例，其诊断结果与细胞遗传学核型分析结果相符。结论STR基因的聚合酶链反应一单链构象多态性分析技术是一种简单、快速和可靠的21三体定性基因诊断技术，可应用于21三体的微创基因诊断和遗传筛查。     

联合应用PCR-单链构象多态性和短串联重复序列连锁分析方法进行20例苯丙酮尿症产前基因诊断

目的 建立技术简便、准确性高的苯丙酮尿症产前基因诊断方法,探索遗传性疾病的产前基因诊断的临床应用价值.方法 应用聚合酶链反应.单链构象多态性和短串联重复序列连锁分析的方法,对20例经典型苯丙酮尿症再怀孕家系进行了产前基因诊断.结果 经过产后基因诊断和新生儿血苯丙氨酸浓度筛查的验证,取得令人满意的产前诊断结果.结论 联合应用聚合酶链反应.单链构象多态性和短串联重复序列方法是技术简便、准确性高的产前基因诊断方法,具有较高的临床应用价值.     

用PCR-STR、ASPCR、PCR-SSCP技术对PKU患者进行产前基因诊断

为探讨苯丙酮尿症的产前诊断途径，应用３种基因诊断方法从不同角度对１６个苯丙酮尿症家系的苯丙氨酸羟化酶基因进行了分析。（１）聚合酶链反应－短串联重复序列连锁分析：通过扩增苯丙氨酸羟化酶基因内含子３中含短串联重复序列的ＤＮＡ区域，并进行扩增片段长度多态性分析，结果表明：能进行准确产前基因诊断者占６２．５％，能进行５０％排除诊断的家系占３７．５％，１例风险胎儿的产前基因诊断和另一家系生后１５天婴儿的症前诊断获得成功；（２）多重等位基因特异性聚合酶链反应，对苯丙氨酸羟化酶基因中两种最常见的突变点分析结果为：Ａｒｇ２４３Ｇｌｕ检出率为１９％，Ａｒｇ４１３Ｐｒｏ检出率为１２％；（３）应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析，不仅检出３例已知的基因突变，还发现２例可能为新的基因突变，诊断率达到４０％。为苯丙酮尿症的产前基因诊断提供了依据。     

21三体综合征的快速基因诊断

目的探讨一种快速、简便、准确检测21三体综合征的基因诊断方法。方法选用位于21号染色体Down′s综合征核心区（21q21-21q22）内及其附近的短串联重复序列（STR）（D21S1432,D21S11,D21S1436,D21S1442,D21S1270,D21S1411,D21S1446）,建立STR-PCR快速诊断平台。通过对经染色体核型分析的10例正常胎儿的羊水脱落细胞DNA,及4例判定为21三体综合征胎儿的绒毛组织DNA进行21号染色体STR分析,从而进行方法评价。结果在上述7个STR位点中,10名正常胎儿除在D21S1436位点存在2∶1条带的占5/10,其余位点杂合度（64.29%-92.86%）及相互间的符合率为100%。4例21三体胎儿经6个STR位点联合分析,均被确诊为21三体综合征。结论6个STR位点（D21S1432,D21S11,D21S1442,D21S1270,D21S1411,D21S1446）可作为21三体综合征有价值的遗传标记,可用于对其做出快速、准确的基因诊断。     

利用短串联重复序列产前基因诊断唐氏综合征

目的探索用STR-PCR方法进行唐氏综合征产前基因诊断的可行性。方法收集经羊水细胞培养、核型分析已确诊为唐氏综合征的孕妇羊水标本,提取其中的胎儿DNA,并利用聚合酶链反应扩增21号染色体上4个STR位点（D21S11、D21S1411、D21S2039、D21S2055）,根据扩增产物聚丙烯酰胺凝胶电泳分型结果诊断唐氏综合征患者。结果与核型分析结果对比。结果运用STR-PCR电泳分型技术对10例唐氏综合征孕妇的羊水进行诊断,结果与染色体核型分析一致。结论联用4个位点对唐氏综合征标准型患者进行诊断结果准确度高,适宜产前诊断临床应用。     

PCR-短串联重复法快速产前筛查唐氏综合征的应用价值

目的 探讨PCR短串联重复(PCR-short tandem repeat,PCR-STR)法快速产前筛查唐氏综合征(Down syndrome,DS)的应用价值及7个STR位点多态性分布特点.方法 选择21号染色体核心区域(21q22.1-21q22.2)及其附近的7个STR位点(D21S11、D21S1411、D21S1412、D21S1413、D21S1414、D21S1432、D21S2039),应用PCR-STR扩增对978例高危孕妇羊水样本和82例疑似DS患者外周血样本进行基因诊断筛查检测,并与细胞培养染色体核型分析结果比较.结果 (1)978例羊水和82例外周血样本PCR-STR检测全部成功,7个STR位点多态信息联合分析,以检出2个位点面积比或强度为1∶1∶1三条带;或1个位点1∶1∶1三条带,同时有2个位点面积比或强度为1∶2或2∶1两条带为DS基因诊断标准,共检出DS阳性40例,其中羊水14例阳性,外周血26例阳性.(2)羊水细胞培养染色体核型分析成功961例(98.3％),17例培养失败(1.7％),检出异常染色体核型44例(4.6％),其中14例为DS核型,包括12例标准DS核型,1例易位DS核型,1例嵌合DS核型.17例培养失败羊水经脐带血染色体分析证实均为正常核型.(3)82例可疑DS患者外周血培养全部成功,检出异常染色体核型30例(36.6％),其中26例为DS核型,包括22例标准DS核型,4例易位DS核型;其它异常核型4例.(4)PCR-STR法对7个STR位点联合分析,单例样本可检出1～4个位点为1∶1∶1三条带,或可见2～4个位点为面积比率或强度比为2∶1或1∶2的两条带.羊水和外周血样本DS基因诊断结果与细胞培养染色体核型分析诊断结果完全一致,PCR-STR法快速产前基因诊断DS筛查的灵敏度为100％,未发现假阳性和假阴性结果.(5)7个STR位点杂合率在0.624～0.812,D21S2039和D21S1412位点杂合度最高(＞0.80),D21S1411和D21S1432位点杂合度较低(＜0.70).D21S11和D21S2039位点检出1∶1∶1三条带比率最高(≥40％),而D21S1411、D21S1432、D21S1413位点检出单一条带(纯合率)比率最高(≥30％).结论 PCR-STR法是产前诊断DS的一种快速、有效的筛查方法,7个STR位点联合分析,提供的诊断信息量大,结果准确、可靠.     

中国汉族人群D11S2010基因座的遗传多态性研究

短串联重复序列 (short tandem repeats,STR)广泛存在于人类基因组中 ,是由 2～ 7bp核心序列串联重复构成 ,它的多态性主要由核心序列的数目变异所致 [1 ]。作为第 2代 DNA遗传标记 ,STR位点已广泛用于法医学个人识别和亲子鉴定。近年来 ,国内外学者为开发 STR位点做了许多工作 ,对于中国人群在不同民族及不同地区的遗传多态性也有一些报道[2 - 5] 。我们采用 PCR、PAG垂直电泳和银染的方法 ,对中国河北 16 8名汉族健康无关个体 D11S2 0 10位点进行了调查 ,同时对 10个家系进行了分析 ,获得了汉族人群 D11S2 0 10基因座群体遗传学…     

北京汉族群体21号染色体上4个STR位点的遗传多态性

目的研究人类21号染色体上唐氏综合症关键区域内或附近的4个短串联重复序列(D21S1432、D21S2039、D21S1414、D21S1270)在中国汉族人群中的遗传多态性。方法应用Chelex法提取北京地区无血缘关系汉族253份个体血样DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增,非变性聚丙酰胺凝胶电泳或ABI鄄310电泳分型结合测序进行STR分型。结果得到4个STR基因座等位基因频率、各基因座的杂合度、个体识别率、多态信息含量等群体遗传学数据。4个位点基因型分布均符合Hardy鄄Weinberg平衡定律。结论21号染色体上4个STR位点多态性较好,基因型分布符合Hardy鄄Weinberg平衡定律,具有较高的个体识别率,在法医学及唐氏综合征的基因诊断和产前基因诊断研究中具有较高的应用价值。     

应用D21S11、D21S1440和Penta D短串联重复序列诊断唐氏综合征

目的 探讨应用短串联重复序列(short tandem repeat,STR)诊断唐氏综合征(Down's syndrome,DS)的可行性,为建立一种快速、准确诊断DS的技术提供依据.方法 用定量荧光聚合酶链反应扩增719份样本(包括外周血389例、羊水282例和绒毛48例)21号染色体上D21S11、D21S1440和Penta D STR基因座,通过对扩增产物条带的分析达到诊断DS的目的.结果 核型正常的652份样本中,635份表现为荧光强度为1∶1的2条带或1条带,17例表现3条带,为假阳性.67份DS样本均得到了诊断,53份样本出现1∶1∶1的3条带(峰),14份样本出现2:1的2条带(峰).D21S11、D21S1440和PentaD STR基因座诊断DS的灵敏度和特异度分别为76.12％和98.62％、71.64％和98.93％、89.55％和99.85％.联合应用3个基因座诊断DS的灵敏度为100％(67/67),特异度为97.39％(635/652).结论 用定量荧光聚合酶链反应扩增STR基因座具有灵敏度高、特异度强、简便、快速等优点,在临床上有广阔的应用前景,是大规模产前筛查DS的理想工具.     

应用PCR-STR分型技术快速产前基因诊断Down综合征

目的探讨应用PCR-STR分型技术,快速产前基因诊断Down综合征(Down syndrome,DS)方法.方法选择21号染色体上的4个短串联重复序列D21S2055、D21S1244、D21S1435和D21S1809,进行PCR扩增,尿素非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染分型.根据谱带的条数及浓度判断是否为21三体,根据父母基因型判断额外21号染色体的亲代来源,选择30例高危孕妇进行21三体的产前基因诊断.结果应用此方法可检出所有的由核型分析确诊的单纯型21三体,并可判定额外染色体的亲代来源.30例产前诊断筛出2例21三体患儿.结论该方法不用细胞培养,避免放射性标记,并可进行早期产前诊断.该方法比传统的方法操作简单、速度快,是一种产前诊断和大规模筛查21三体的良好的方法.     

应用定量PCR方法快速基因诊断Down综合征

目的探讨用定量聚合酶链反应方法对Ｄｏｗｎ综合征进行基因诊断。方法以短串联重复序列（Ｄ２１Ｓ１１）作为遗传标记,合成特异引物,用同位素标记聚合酶链反应扩增后对１１名正常人（６例外周血,５例羊水）及２８例Ｄｏｗｎ综合征患者（外周血）进行定量检测。结果１１名正常人中１０人出现ＤＮＡ含量为１∶１关系的２条电泳带,１人为１条带。２８例患者中２４人出现ＤＮＡ含量２∶１的２条带,３人为ＤＮＡ含量为１∶１∶１的３条带,１人为１条带。结论Ｄ２１Ｓ１１位点短串联重复序列多态是对Ｄｏｗｎ综合征基因诊断很有应用价值的遗传标记,应用定量聚合酶链反应方法可在２４小时内对Ｄｏｗｎ综合征做出快速、准确的产前及临床基因诊断。     

D21S11位点定量PCR快速基因诊断先天愚型

为了探讨定量ＰＣＲ方法在分子水平对Ｄｏｗｎ 综合征基因诊断意义,本实验以ＳＴＲ（Ｄ２１Ｓ１１） 做为遗传标记,合成特异引物对１１ 例正常人（６ 例外周血,５ 例羊水）及２８ 例先天愚型患者外周血进行同位素标记ＰＣＲ 扩增后定量分析,结果显示１１ 例正常人中１０ 人呈ＤＮＡ 含量为１ ：１ 关系的两条电泳带,１ 人为１ 条带。２８ 例患者中２４ 人呈ＤＮＡ含量为２ ：１ 的两条带,３ 人为ＤＮＡ 含量为１ ：１：１ 关系的三条带,１ 人为１ 条带。实验表明Ｄ２１Ｓ１１ 位点ＳＴＲ多态是对Ｄｏｗｎ 综合征基因诊断很有应用价值的遗传标记,应用定量ＰＣＲ的方法可在２４ 小时内对先天愚型做出快速、准确的产前及临床基因诊断。     

多重PCR联合DHPLC诊断21三体综合征方法的建立

目的初步建立多重PCR联合DHPLC技术检测21-三体综合征的方法。方法针对21号染色体上特异的3个STR位点(D21S1435、D21S1411、D21S11)设计引物,对100例外周血标本(其中25例21三体标本)提取基因组DNA进行多重PCR扩增,得到的PCR产物通过DHPLC仪进行结果分析。结果 DHPLC分析100例标本中21例为21-三体标本,其中20例21-三体标本的诊断结果与染色体核型分析结果一致,DHPLC技术检测21-三体异常灵敏度和特异度分别为80%,98.67%。结论 DHPLC技术诊断外周血标本结果与染色体核型诊断结果具有同一性,DHPLC技术可以对21三体综合症作出快速、较为准确的诊断。     

Rapid prenatal diagnosis of trisomy 21 by real-time quantitative polymerase chain reaction with amplification of small tandem repeats and S100B in chromosome 21

Trisomy 21 (Down syndrome) is the most common congenital anomaly, and it occurs in one out of 700-1000 births. Current techniques such as amniocentesis and chorionic villi sampling (CVS) require lengthy laboratory culture procedures and high costs. This study was undertaken to establish a rapid prenatal diagnosis of trisomy 21 using real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR) of fetal DNA from amniotic fluid. Real-time quantitative PCR was performed with DNA templates obtained from 14 normal blood samples, 10 normal amniotic fluid samples, 14 Down syndrome blood samples, and 7 Down syndrome amniotic fluid samples. Primers for D21S167 and S100B of chromosome 21 were used. Primers that direct the amplification of the 165-bp fragment of the insulin-like growth factor (IGF)-1 gene on chromosome 12 using a PCR primer were included to generate an internal standard for quantitation. The relative levels of D21S167 and S100B were 2.6 and 2.4 times higher in the blood of Down syndrome patients than those in the control group. The differences between these two groups were statistically significant (p-values were 0.0012 and 0.0016, respectively). The relative levels of D21S167 and S100B were 2.1 and 2.7 times higher in the amniotic fluid of Down syndrome fetuses than those in the control group. The difference between these two groups was statistically significant (p-values were 0.0379 and 0.0379, respectively). Prenatal diagnosis of trisomy 21 by real-time quantitative PCR using STR (small tandem repeats) amplification of D21S167 and S100B is a useful, accurate and rapid diagnostic method. Furthermore, it may also be useful for prenatal diagnosis with fetal DNA from maternal blood, and for preimplantation genetic diagnosis and prenatal counseling.     

STR新位点产前诊断21、18、13三体综合征

目的短串联重复新位点D13S252、D13S305、D13S628、D13S325,D18S390、D18S819、D18S978、D21S1409、D21S1435在产筛高危孕妇中产前诊断21、18、13三体。方法选择产前血清学筛查高危和或胎儿B超异常100例孕妇羊水和脐血样本为研究对象,包含上述位点的单管多重体系检测21、18、13三体,PCR产物测序检测,Gene MapperID3.2软件分析处理。计算体系中各位点杂合度和多态信息含量。结果 97例扩增,检测出25例染色体非整倍体,包括18例21-三体,6例18-三体,1例13-三体,和72例正常二体,3例扩增失败。所有结果与染色体核型分析相符。体系中各STR位点的等位基因数4～14个,H为0.61～0.88,PIC为0.556～0.870。新位点的PIC为0.575～0.793,均0.5。21号染色体联合使用4个以上STR位点,18号染色体5个以上位点检出率才能达100%。结论上述STR新位点杂合度和多态信息含量高,可用于21、18、13三体产前诊断。     

云南藏族四个短串联重复序列基因座的基因频率

目的：了解云南藏族D21S11、D8S1179、D16S539和LPL4个短串联重复序列基因座的基因频率。方法：采用4个STR基因座引物在同一反应体系中互不干扰的复合扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染法显色技术，对105名云南藏族个体4个STR基因座进行了基因频率调查。结果：观察到D21S11基因座的13个等位基因和33个基因型；D8S1179基因座的8个等位基因和21个基因型；D16S539基因座的7个等位基因和16个基因型；LPL基因座的6个等位基因和9个基因型。结论：4个基因座的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律，且在藏族群体中有较好的多态性分布，适用于法医个体识别和亲权鉴定、遗传学及人类学的相关研究。     

Rapid prenatal diagnosis of Down Syndrome using quantitative fluorescent PCR in uncultured amniocytes

Rapid prenatal diagnosis of common chromosome aneuploidies have been successful through quantitative fluorescent PCR (QF-PCR) assays and small tandem repeat (STR) markers. The purpose of our study was to investigate the clinical feasibility for rapid prenatal detection of Down syndrome using the quantitative fluorescent PCR in uncultured amniocytes. DNA was extracted from uncultured amniotic fluid of normal karyotype (n=200) and of Down syndrome (n=21). It was amplified using QF-PCR with four STR markers located on chromosome 21. Among normal samples, the ranges of diallelic peaks for at least one STR marker were 1.0-1.3 for D21S11, 1.0-1.4 for D21S1411 and 1.0-1.5 for D21S1270. Down syndrome samples showed trisomic triallelic patterns or trisomic diallelic patterns. The sensitivity, specificity, and efficiency of the assay for detecting Down syndrome were 95.4%, 100%, and 99.5%, respectively. Rapid prenatal diagnosis of Down syndrome using QF-PCR is a reliable technique that aids clinical management of pregnancy.     

Assessment of multiplex fluorescent PCR for screening single cells for trisomy 21 and single gene defects

A great majority of patients seeking preimplantation genetic diagnosis (PGD) are women >35 years of age. In addition to being carriers for single gene defects, these women also have a higher risk of having children with Down's syndrome (trisomy 21). For these patients, it would be advantageous if a diagnostic test for trisomy 21 was developed, which could be used in conjunction with tests for single gene defects. Here, we assessed the feasibility of developing an accurate genetic test for diagnosing trisomy 21 and the mutation causing spinal muscular atrophy (SMA) in single cells using multiplex fluorescence polymerase chain reaction (PCR). Single- and two-round PCR were developed using a combination of primers for the survival motor neuron (SMN) gene exons 7 and 8 and two chromosome 21 short tandem repeats (STRs), D21S226 and D21S11. After only 36 cycles, 88 and 68% of normal single cells were screened for SMA mutations and trisomy 21 respectively. In multiplex PCR using only two primers (SMN exon 7 and D21S11) instead of four, the efficiency of SMA diagnosis was increased to 93%. In the same reactions, the D21S11 alleles were detected in 83% of the normal single cells. Clinical applications of this assay should enable detection of those embryos that have inherited three heterozygous alleles and, therefore, benefit many PGD patients who are at an increased risk of Down's syndrome.     

染色体17q21区域发育性髋关节发育不良易感基因的定位

目的 在染色体17q21区域的D17S1820附近定位发育性髋关节发育不良(developmental dysplasia of the hip,DDH)的易感基因.方法 根据等位基因的数目(≥5)、杂合度(≥0.70)及多态信息含量(≥0.5),在D17S1820附近选择了11个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点,采用PCR-毛细管电泳的方法,对103个DDH核心家系的309名成员进行基因分型,并进行传递不平衡检验(transmission disequilib rium test,TDT).结果 D17S810和D17S931因不能提供充足的多态信息,未进行TDT检验.其余9个STR多态位点在103个核心家系中的基因型分析结果符合孟德尔遗传模式.TDT检验结果显示,位于两端的D17S1787和D17S787与DDH不存在传递不平衡,而D17S855、D17S858、D17S806、D17S1877、D17S941、D17S752及D17S790与DDH均存在传递不平衡.将DDH易感基因的区域初步定位于D17S855～D17S790之间约11.70 cM的范围内.结论 17号染色体D17S855～D17S790之间约11.70 cM的区域与DDH有关联,在该区域可能存在DDH的易感基因.