不同浓度气态甲醛慢性染毒对小鼠卵泡发育影响的研究

目的:研究不同浓度气态甲醛慢性染毒对小鼠卵泡发育的影响,探讨环境污染导致卵巢性不孕的相关因素。方法:将40只性成熟SPF级雌性昆明小鼠随机分为空白对照组和3个不同浓度(0.1mg/m3、1.0mg/m3、10mg/m3)气态甲醛染毒组(模型组),每组10只。模型组采用不同浓度气态甲醛动态吸入式染毒,6h/d,连续14d,对照组给予吸入过滤的新鲜空气,时间同前。造模成功后处死小鼠,取出卵巢,计算卵巢脏器系数,光学显微镜下观察卵巢组织形态学改变,计数始基卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡、排卵前卵泡和闭锁卵泡数。结果:不同浓度气态甲醛慢性染毒均可使小鼠一般状况差,动情周期延长且不规则,卵巢脏器系数降低。各染毒组闭锁卵泡数量增多,中、高浓度染毒组窦前卵泡、窦状卵泡和排卵前卵泡数明显减少,各组间始基卵泡和总卵泡数无明显差异。结论:不同浓度气态甲醛慢性染毒均可影响小鼠发育期卵泡,中、高浓度染毒可导致卵泡不可逆的损害,发育期卵泡数量明显减少。环境污染会诱发不孕症的发生。     

利用不同浓度气态甲醛建立小鼠卵巢早衰模型的研究

目的:探讨利用不同浓度气态甲醛建立小鼠卵巢早衰模型的方法及可行性。方法:将40只性成熟SPF级雌性昆明小鼠随机分为空白对照组和3个不同浓度(0.1mg/m3、1.0mg/m3、10mg/m3)气态甲醛染毒组(模型组)。对照组给予吸入经过滤的新鲜空气,模型组采用不同浓度气态甲醛动态吸入式染毒,6h/d,连续14d,观察气态甲醛对小鼠一般状态、动情周期、性激素水平及卵巢脏器系数的影响。结果:不同浓度气态甲醛染毒均可使小鼠一般状态差,模型组小鼠动情周期延长且不规则,血清E2水平明显降低,FSH、LH及FSH/LH水平明显升高,卵巢脏器系数显著降低,与对照组比较均有明显差异(P<0.05)。结论:利用10mg/m3浓度气态甲醛慢性染毒建立小鼠卵巢早衰模型是可行的。     

甲醛致雌性小鼠卵巢细胞DNA损伤及Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨甲醛致小鼠卵巢细胞DNA损伤效应及对Bcl-2和Bax表达的影响与其相关作用的机制。方法采用单细胞凝胶电泳方法,检测甲醛染毒(剂量分别为0.3、1.2、4.8 mg/kg)后小鼠卵巢细胞DNA损伤情况,采用免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax的表达。结果甲醛致卵巢组织结构损伤,染毒浓度越高,病理损害越明显;卵巢细胞Bcl-2下调,Bax表达上调,并有量-效关系,甲醛染毒各组Bcl-2和Bax表达的相对灰度值较对照组均有差异(P<0.01);试剂量范围内,小鼠卵巢细胞彗星率随甲醛染毒剂量增加而增高(P<0.05),其彗星尾长随甲醛染毒剂量增加而缩短,尤其高甲醛染毒组更短(P<0.01)。结论甲醛能致卵巢细胞DNA损伤效应,损伤小鼠卵巢的结构,使卵巢细胞凋亡增加,Bcl-2表达下调、Bax表达上调;Bcl-2和Bax表达的变化可能是诱导凋亡的机制。     

RLF mRNA在不同阶段大鼠卵巢中的表达

目的 探讨松弛素样因子(RLF)在啮齿类动物的正常卵巢中有无表达以及与卵巢功能的关系，对RLF在大鼠卵巢动情周期、假孕模型中的表达进行研究。方法 采用RT-PCR方法。结果 在成年大鼠整个动情周期中都有RLF的表达，RLF的表达强度在动情前期、动情期卵巢较强，动情间期和动情后期卵巢较弱；未成年大鼠，激素处理使卵泡发育至窦前期、排卵前期时，RLF呈现持续的强表达，在黄体早期RLF的表达明显升高，而黄体中期、黄体晚期中RLF表达下降。结论 RLF与卵泡发育、排卵、黄体形成和退化密切相关。     

ZNF191 mRNA在卵巢恶性肿瘤中的表达及临床意义

采用RT-PCR方法检测31例卵巢恶性肿瘤组织和31例正常卵巢组织中ZNF191 mRNA的表达。结果显示,与正常卵巢组织相比,ZNF191 mRNA在卵巢恶性肿瘤组织中的表达显著下调(P<0.01);在浆液性癌、黏液性癌、宫内膜样癌等上皮性卵巢癌中的下调程度显著大于颗粒细胞瘤(P<0.05).而在上皮性卵巢癌各组织类型间无显著差异;ZNF191 mRNA的表达水平在不同分期、不同分化程度的卵巢恶性肿瘤中无显著差异。本组资料提示ZNF191基因的变异参与了卵巢恶性肿瘤的发生,可能在卵巢恶性肿瘤的早期发病机制中发挥作用,。     

甲醛灌胃染毒对小鼠骨髓细胞微核率的影响

目的：研究甲醛灌胃染毒对小鼠骨髓细胞微核率的影响。方法：ICR小鼠30只,雌雄各半,随机分为4个组,即空白对照组、阳性对照组、低剂量组和高剂量组,每组10只,雌雄各半,用灌胃的方法给予实验组小鼠甲醛,1次／d,连续5d,阳性对照组给予环磷酰胺。染毒结束后,处死小鼠,取小鼠骨髓进行涂片,在显微镜下观察并计数含微核的嗜多染红细胞,并计算微核率。结果：高剂量组的微核率为（8．41±2．45）‰,低剂量组的微核率为（1．82±1．30）‰,空白对照组的微核率为（0．50±0．85）‰,与空白对照组相比,高剂量组的微核率明显增加,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：甲醛灌胃染毒对小鼠骨髓细胞微核率有一定的影响,可使小鼠骨髓细胞微核率上升。     

黄芩对甲醛损伤小鼠免疫系统的影响

目的研究黄芩对吸入甲醛损伤小鼠免疫系统的影响。方法设置正常对照组,染毒组、黄芩保护组。测定小鼠免疫器官重量,巨噬细胞吞噬功能,淋巴细胞转化率。结果黄芩保护组与染毒组比较有显著性差异,P〈0．01。结论提示黄芩在免疫功能方面,对有害的甲醛有明显的拮抗作用。     

磷酸二酯酶5在小鼠卵巢内的表达

目的 探讨cGMP特异性结合的磷酸二酯酶5(PDE5)在小鼠卵巢内的定位和表达情况.方法 应用免疫组织化学对小鼠卵巢切片进行染色,检测PDE5在卵巢内不同部位的表达情况.利用Western blot检测PDE5在小鼠不同组织和细胞内的表达情况.结果 PDE5在小鼠卵巢的黄体细胞(CL)和卵泡膜细胞(TC)上有强表达,卵母细胞(Oos)上以及大有腔卵泡的卵丘细胞(CCs)也有表达,而在小卵泡的颗粒细胞上没有表达.结论 揭示了PDE5在小鼠卵巢内的表达情况,为进一步研究PDE5对卵巢功能的调节提供了生理学基础.     

FOXL2评估卵巢储备功能的临床应用

女性出生时约有100万个卵子,青春期初潮时减至30～50万,随着年龄的增长,"卵泡池"逐渐耗竭,但卵巢的储备功能却因人而异,血清抑制素B(inhibin B,INHB)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradial,E2)、抗苗勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)测定及超声评估窦状卵泡数目(antral follicle count,AFC)等都是目前评估卵巢储备功能的常用方法.     

血管生成素1在小鼠卵巢组织中的表达及其意义

目的：观察血管生成素1(Ang-1)在小鼠卵巢组织中的表达,探讨其对小鼠卵泡发育、排卵以及黄体形成与退化的影响。方法：建立小鼠性成熟模型、马绒毛膜促性腺激素(eCG)诱导的卵泡发育模型、人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导的排卵模型以及黄体形成和退化模型,RT-PCR法检测不同时间Ang-1在不同模型的小鼠卵巢组织中的表达。结果：Ang-1 mRNA在小鼠出生后第10和20天表达较低;在出生后第25天,Ang-1 mRNA的表达量升高,与第10天比较差异有统计学意义(P<0.01);之后Ang-1表达逐渐降低。在注射eCG后,Ang-1 mRNA的表达量均高于0 h组,在48 h表达量达到最高值(P<0.01)。注射hCG后3、5和9 h,Ang-1 mRNA表达量降低;而在hCG注射后0.5和7.0 h,Ang-1的表达量较高;各组与0.5 h组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。Ang-1 mRNA在hCG注射后1~15 d均有表达,且在注射后5~15 d,Ang-1的表达逐渐升高,与1 d组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);在注射hCG后第15天,Ang-1的表达水平最高。结论：Ang-1可能参与了小鼠卵泡发育、排卵和黄
体形成与退化的过程。     

白藜芦醇对气态甲醛诱导大鼠脑损伤及神经颗粒素表达的影响

目的探讨气态甲醛蓄积对大鼠学习记忆能力及前额皮层、海马区神经颗粒素(neurogranin,Ng)表达的影响,研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对气态甲醛蓄积所致脑损伤的防治效果。方法成年雄性SD大鼠84只,每组12只完全随机分组法分为对照组(N组)、气态甲醛蓄积低浓度组(FL组)、气态甲醛蓄积中浓度组(FM组)、气态甲醛蓄积高浓度组(FH组)、气态甲醛蓄积低浓度+白藜芦醇组(FLR组)、气态甲醛蓄积中浓度+白藜芦醇组(FMR组)、气态甲醛蓄积高浓度+白藜芦醇组(FHR组),每组12只。采用气态甲醛暴露法建立甲醛染毒动物模型,运用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能,采用蛋白免疫印迹法检测前额皮层、海马Ng表达与分布。结果(1)与N组大鼠逃避潜伏期、原平台滞留时间[(19.75±4.08)s,(43.47±2.43)s]相比,FM、FH组大鼠逃避潜伏期均延长[(25.52±2.98)s、(27.45±2.39)s,t=-4.97,-5.82;均P<0.01],原平台滞留时间均缩短[(30.99±4.21)s、(18.70±2.58)s,t=10.24,25.71;均P<0.01]。与FM、FH组等对应甲醛蓄积组相比,FMR、FHR组大鼠逃避潜伏期均明显延长[(21.37±3.80)s、(24.26±3.56)s,t=1.86,3.93;均P<0.05],原平台滞留时间明显延长[(40.33±3.63)s、(23.46±4.73)s,t=-7.50,-3.95;均P<0.01]。(2)与N组大鼠皮层、海马Ng表达[(0.99±0.03),(1.07±0.03)]相比,FM、FH组大鼠皮层、海马Ng蛋白表达显著降低[(0.62±0.06),(0.39±0.03),(0.77±0.09),(0.46±0.10),t=11.55,14.08,11.51,13.17;均P<0.01]。与FM、FH组等对应甲醛蓄积组相比,FMR、FHR组大鼠皮层、海马Ng表达均有明显升高[(0.94±0.11),(0.48±0.04),(0.95±0.05),(0.60±0.09),t=-5.26,-2.09,-5.32,-2.21;均P<0.05]。结论白藜芦醇能改善气态甲醛蓄积所致大鼠学习记忆功能减退,其机制可能是与Ng表达上调有关。     

辅助生殖技术中超促排卵反应性预测指标的探讨

目的　探讨辅助生殖技术中超促排卵周期卵巢反应性的预测指标。方法　回顾性分析不同原因不孕行控制性超促排卵的 348个周期的临床资料。结果　卵巢体积 ,窦卵泡数随年龄增长逐渐减少 (P <0 .0 5 ) ,促性腺激素用量随年龄增长而增加 ,E2 峰值和获卵数随年龄增长而降低 (P <0 .0 5 )。随bFSH增长 ,E2峰值、获卵数均降低 (P <0 .0 5 )。获卵数随E2 峰值升高而增加。卵巢体积、窦卵泡数与促性腺激素用量成负相关 ,与获卵数成正相关。结论　年龄与卵巢储备、卵巢反应性的关系更为紧密 ;bFSH只是反映卵巢储备功能的指标之一 ,其预测卵巢反应性的能力有限 ;总窦卵泡数与卵巢体积是反映卵巢反应性最直接的指标     

腹腔镜下与经腹卵巢囊肿剥除术对患者卵巢储备功能的影响

目的探讨腹腔镜下与经腹卵巢囊肿剥除术对患者卵巢储备功能的影响。方法选择2015年1月～2017年1月在我院诊断治疗的卵巢囊肿患者100例的临床资料进行回顾性分析。其中50例患者采用经腹手术治疗为对照组,50例患者采用腹腔镜下手术治疗为观察组。比较两组手术情况,包括术中出血量、手术时间、术后下床活动时间。分别于术前及术后6个月检测AMH、FSH、E2水平。结果观察组手术时间短于对照组,术中出血量少于对照组,术后下床时间早于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。两组治疗前E2、FSH水平比较差异无统计学意义(P0.05);治疗后观察组AMH水平与治疗前差异无统计学意义(P0.05);对照组治疗后AMH水平低于治疗前,差异有统计学意义(P0.05);治疗后观察组AMH水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论腹腔镜下卵巢囊肿剥除术对患者AMH影响更小,并且手术时间短,创伤小,术后恢复快。     

维A酸干预前后卵巢癌细胞中维A酸受体的表达变化及意义

目的:检测维A酸干预前后卵巢癌细胞COC2中维A酸受体RARα和RXRαmRNA的表达情况,从分子生物学水平探讨维A酸对卵巢癌细胞的作用。方法:利用实时定量PCR方法检测经不同浓度维A酸干预前后卵巢癌COC2细胞中维A酸受体RARα和RXRαmRNA的表达。结果:维A酸受体RARαmRNA表达在维A酸干预后的卵巢癌细胞株COC2中有所升高,且在一定范围内随维A酸浓度增高而升高;而RXRαmRNA在维A酸干预后表达降低,且在一定范围内随维A酸浓度增高而降低。结论:维A酸干预后,卵巢癌细胞维A酸受体RARα的表达上调,RXRα表达下调,说明维A酸所产生的抗卵巢癌作用可能是通过改变核受体mRNA的表达水平而产生的。     

荷人卵巢癌严重联合免疫缺陷鼠腹腔移植模型的建立

目的 :建立荷人卵巢癌细胞株 SKOV3严重联合免疫缺陷小鼠 (SCID)动物模型。方法 :SCID鼠腹腔注射人 SKOV3卵巢癌细胞 1× 10 7个 /只 ,饲养在无特定病原体环境中 ,观察其生物学特性。结果 :实验组 3只 SCID小鼠腹腔内均见肿瘤生长 ,并形成以横膈、肠系膜、肝周、腹膜为主的转移灶 ,其中 1只肺部有镜下转移灶。移植后肿瘤细胞在形态、生长、分泌 CA12 5功能方面均与原细胞株保持一致。结论 :建立的荷人 SKOV3卵巢癌 SCID鼠腹腔移植模型能较好地模拟人卵巢癌腹腔播散的生物学特征。     

cyclinD1在卵巢癌裸鼠移植瘤组织中的表达及意义

目的探讨细胞周期蛋白D1(cyclinD1)在上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤组织中的表达及意义。方法构建人上皮性卵巢癌3AO裸鼠皮下移植瘤模型;设阴性对照组及早、中、晚期3个肿瘤组,应用免疫组化方法及流式细胞术(FCM)检测正常组织及移植瘤卵巢癌组织中cyclinD1的表达。结果 3AO卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型平均成瘤率91.7%。正常组织cyclinD1表达阴性或弱阳性,而卵巢癌组织中cyclinD1呈过表达(54.63%)。早、中、晚期卵巢癌组织中cyclinD1阳性表达率分别是35.00%、55.60%和73.30%,肿瘤细胞凋亡率分别是7.97%、3.45%及1.83%,Mean值分别是23.15、37.31、63.28。结论 cyclinD1在卵巢癌组织中呈过表达,且其表达与移植瘤生长增殖呈正相关,cyclinD1的表达与卵巢癌发生发展关系密切。     

小鼠外周血白细胞节律相关基因cry2,per2,timeless,rev-erb表达的近日节律性研究

目的探讨在12 h光照/12 h黑暗（12L/12D）光暗循环条件下,小鼠外周血白细胞中相关基因cry2,per2,timeless,rev-erb近日节律性表达特点。方法用完全随机分组法将C57/BL6小鼠分成6组,每组对应一个时相点,在12L/12D条件下词养4周后分别在6个时相点（9：00,13：00,17：00,21：00,1：00,5：00）取外周血并分离白细胞。抽提总RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠外周血白细胞cry2,per2,timeless,rev-erb 4种节律基因的mRNA水平,用余弦函数拟合节律参数,并经振幅f检验分析是否存在近日节律。结果 cry2,per2,timeless,rev-erb 4种基因mRNA存在明显的近日节律性,各基因的峰值明显高于谷值（P〈0.01）;per2峰值相位时间在4：00左右,而cry2,timeless,rev-erb基因的峰值时间在11：00-12：00;从峰值时间和震荡幅度看,cry2,timeless,rev-erb峰值时间比per2超前,振幅比per2高,cry2、timeless、rev-erb的峰值时间、振幅大小比较接近。结论 C57/BL6小鼠外周血白细胞4种基因cry2,per2,timeless,rev-erb的mRNA存在明显的近日节律性。cry2,timeless,rev-erb在负反馈中的作用强于per2,而cry2,timeless,rev-erb在负反馈中的作用相似。该研究为深入理解哺乳动物的免疫功能昼夜波动打下了基础,也为诊断、治疗免疫功能紊乱相关疾病提供了靶目标。但这4种基因如何调控外周血中的免疫细胞,尚需进一步深入研究。     

免疫重建荷人卵巢癌严重联合免疫缺陷鼠腹腔移植模型的建立

目的：建立免疫重建的荷人卵巢小鼠腹腔移植模型。方法：用人外周血淋巴细胞（PBL悬液腹腔注射建立有免疫功能的严重联合免疫缺陷（SCID）鼠模型3只;用人PBL和人卵巢癌细胞株SKOV3细胞腹腔注射建立免疫重建荷人卵巢癌SKOV3 SCID鼠模型3只,观察其生物学、免疫学特性。结果：每组免疫重建小鼠成瘤比例为3／3。免疫重建均检测到人IgG 存在,与未重建组比较差异有显著意义（P＜0．05）;免疫重建荷瘤鼠主要成瘤在腹腔,分布于肝下素、腹膜、横膈、肠系膜等部位,与未重建组比较,成瘤减少;原代移植瘤细胞形态、CA125表达与SKOV3细胞相似,但透射电镜观察到早期细胞凋亡表现;组织学观察到成片淋巴细胞浸润。结论：免疫重建荷人卵巢癌SCID鼠腹腔移植模型已初步建立,本模型较好地模拟了在免疫功能情况下人卵巢癌腹腔播散的生物学行为,为卵巢癌治疗的临床前研究提供了较理想动物模型。