TGF-β1诱导小鼠成牙本质细胞系MDPC-23细胞凋亡

目的:研究转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)是否诱导成牙本质细胞系MDPC23细胞凋亡。方法:培养MDPC23细胞,用不同浓度的TGFβ1刺激培养48h后,分别用3种检测细胞凋亡的方法,包括膜联蛋白V(AnnexinV)和碘化丙啶(propidiumiodide,PI)双染色法、细胞凋亡的酶联免疫分析法、以及DNA琼脂糖凝胶电泳法,检测MDPC23细胞凋亡情况。结果:TGFβ1能诱导MDPC23细胞凋亡,且呈剂量依赖性。结论:TGFβ1在成牙本质细胞凋亡过程中发挥一定的作用     

TGF-β1对成牙本质细胞系MDPC-23中 Smads mRNA表达的影响

目的：研究TGF—β1对成牙本质细胞系MDPC-23细胞中Smads mRNA表达的影响，探讨成牙本质细胞内Smads分子基因表达调控机制。方法：培养MDPC-23细胞，细胞分为5组，分别用TGF—β1刺激0、0．5h、1．5h、4h、24h，提取总RNA。用半定量RT—PCR观察Smad2、Smad3和Smad7mRNA表达变化。结果：MDPC-23细胞表达Smad2、Smad3和Smad7 mRNA。在TGF—β1作用24h内，MDPC-23细胞内Smad2 mRNA表达水平无明显变化。在TGF—β1作用4h后，Smad3 mRNA表达水平下调。Smad7 mRNA水平在TGF—β1作用下1．5h达到最高峰，以后逐渐下降。结论：在成牙本质细胞内，TGF—β1可能通过不同的方式调控其细胞内信号分子Smad2、Smad3和Smad7的表达，从而使成牙本质细胞对Smad介导的TGF—β1信号得到精确调控。     

多种生长因子对胚胎面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的诱导作用

目的: 探讨转化生长因子β1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)、TGFβ1 DNCP、肝素 胰岛素样生长因子1(IGF-1)在诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中的作用.方法:取妊娠12.5 d SD大鼠胎鼠颌突外胚间充质细胞(第4代),在转化生长因子β1(TGFβ1)(2 ng/mL)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)(100 μg/mL)、TGFβ1(2 ng/mL) DNCP(100 μ/mL)、肝素(1 μg/mL) IGF-1(100 ng/mL)的诱导下,通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法,探索生长因子在外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中的作用.结果:6 d后,在DNCP、TGFβ1 DNCP作用下,胎鼠面突外胚间充质细胞出现明显的形态改变,细胞由成纤维样变为梭形,部分核极化,有很长的突起,部分细胞呈现平行排列趋势.TGFβ1组部分细胞出现极化改变.DNCP、TGFg 1 DNCP诱导组抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应,RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSPP),另外DMP1亦呈阳性表达.TGFβ1组不表达DSPP、DMP1.肝素 IGF-1组在细胞形态和蛋白、mRNA上均未出现成牙本质细胞特异的表达.结论:胎鼠面突外胚问充质细胞在DNCP和TGFβ1 DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞.表明在诱导中起关键作用的是DNCP.TGFβ1可诱导细胞在形态学上分化成类成牙本质细胞.本结果与该细胞在三维体系中的诱导分化结果相似,表明胚胎面突外胚间充质细胞在体外被诱导分化为成牙本质样细胞不是偶然现象,这为研究牙齿的分化和发育提供了良好的模型和实验依据.     

牙本质磷蛋白在人牙胚发育中的原位杂交研究

目的：观察牙本质磷蛋白（DPP）基因在人牙胚组织发育过程中的表达，探讨其在牙齿发育中的作用。方法：采用原位杂交的方法，检测帽状期、钟状期牙胚组织DPPmRNA的表达。结果：人牙胚帽状期、钟状早期均未检测到DPPmRNA的表达，在钟状晚期前期牙本质形成时成牙本质细胞、前成釉细胞中呈阳性表达。结论：牙本质磷蛋白基因的转录具有明显的的时空特异性，它可能在牙体硬组织的形成中起重要的作用。     

TGF-β1在修复性牙本质形成早期的基因表达

目的 :利用原位杂交技术 ,观察TGF - β1在大鼠牙髓修复性牙本质形成早期的基因表特征。 方法 :在Wistar大鼠上下颌第一磨牙近中面制备一单面洞。分别观察 3天和 15天后处死动物。组织学处理后切片。体外转录合成单链RNA探针并标记地高辛。将标记探针与标本进行原位杂交。利用生物素标记的抗地高辛抗体和SABC标记 ,DAB显示杂交信号。苏木素复染。结果 :TGF - β1mRNA在备洞 3天后的成牙本质细胞和成牙本质细胞层下方的牙髓细胞内表达强阳性。 15天后 ,修复性牙本质下方的成牙本质细胞样细胞表达TGF - β1。 结论 :在牙髓修复早期 ,TGF - β1通过自分泌途径 ,参与了修复性牙本质的形成     

TGF—β1在修复性牙本质形成早期的基因表达

目的：利用原位杂交技术，观察TGF－β1在大鼠牙髓修复性牙本质形成早期的基因表特征。方法：在Wistar大鼠上下颌第一磨牙近中面制备一单面洞。分别观察3天和15天后处死动物。组织学处理后切片。体外转录合成单链RNA探针并标记地高辛。将标记探针与标本进行原位杂交。利用生物素标记的抗地高辛抗体和SABC标记，DAB显示杂交信号。苏木素复染。结果：TGF－β1mRNA在备洞3天后的成牙本质细胞和成牙本质细胞层下方的牙髓细胞内表达强阳性。15天后，修复性牙本质下方的成牙本质细胞样细胞表达TGF－β1。结论：在牙髓修复早期，TGF－β1通过自分泌途径，参与了修复性牙本质的形成。     

转化生长因子β1和重组人骨形成蛋白2对成牙本质细胞系MDPC-23牙本质基质蛋白1表达的影响

目的 观察转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和重组人骨形成蛋白2(bone morphogenic protein 2,rhBMP2)单独或联合作用对小鼠成牙本质细胞系 MDPC-23牙本质基质蛋白 1(dental matrix potein,DMP1)合成分泌的影响。方法 利用不同浓度的TGF-β1和rhBMP2以及二者联合刺激培养MDPC-23细胞,用免疫组化SABC方法和图像分析观察分析结果。结果 2μg/L的 TGF-β1能够增强 MDPC-23细胞 DMP1的表达;不同浓度的 rhBMP2均可增强细胞 DMP1的表达量,呈浓度依赖性增强;2μg/L的 TGF-β1和不同浓度的 rhBMP2联合应用可明显增强 DMP1的表达。诱导的 DMP1主要表达于胞质和细胞突起中。结论 TGF-β1和rhBMP2单独和联合应用能够增强成牙本质细胞系MDW-23产生DMP1,二者联合应用作用更加显著,说明二者对成牙本质细胞的分泌和成熟有一定促进作用。     

aFGF和TGFβ1联合诱导猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化

目的建立猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化的体外诱导方案。方法联合应用aFGF和TGFβ1对体外培养的猪牙乳头细胞进行平面诱导,观察诱导后细胞的形态学变化,通过Von Kossa染色检测诱导后细胞的矿化能力,并采用免疫荧光染色和RT-PCR检测成牙本质细胞特异性标志物——DSP蛋白和DSPP mRNA在诱导后细胞中的表达。结果诱导后部分细胞出现细长的单侧细胞突起,在矿化液培养2周后形成典型的矿化结节,并且表达DSP蛋白和DSPP mRNA。结论联合应用aFGF和TGFβ1可以诱导体外培养的猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化。     

体外三维培养下诱导人胚胎面突外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化

目的: 探讨人胚胎面突外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的过程.方法:采用体外细胞三维立体培养的方法在转化生长因子β1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)的诱导下通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法探索外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的可能性及生长因子在其中所起的作用.结果:人胚胎面突外胚间充质干细胞在胶原中生长良好.培养4 d在TGFβ1+DNCP组中细胞出现核极化有很长的突起细胞平行排列.诱导的细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构.抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应.碱性磷酸酶活性增强.细胞在矿化液中能形成矿化结节.RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSPP).结论:三维立体培养下人胚胎面突外胚间充质干细胞在TGFβ1及DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞.本结果将外胚间充质干细胞作为前体诱导分化出成牙本质样细胞为研究牙齿的发育及分化提供了良好的模型和实验依据.     

牙本质磷蛋白mRNA原位杂交方法的建立

目的:建立检测牙本质磷蛋白(DPP)mRNA表达的原位杂交方法。方法:选用发育各阶段的牙胚、牙齿和体外培养的MDPC-23成牙本质细胞为对象,采用地高辛标记的寡核苷酸探针的原位杂交方法。结果:DPP mRNA在牙胚与牙齿中的成牙本质细胞、前成釉细胞和体外培养的成牙本质细胞存在阳性表达。结论:设计的探针敏感性高,特异性高,所建立的原位杂交方法是研究牙本质发育和损伤修复的良好方法。     

转化生长因子β(TGF-β)受体在人牙胚中的分布及意义

目的 :探讨TGF - β受体在人牙胚发育过程中的表达和意义。方法 :采用免疫组织化学方法观察TGF - β受体在人牙胚发育过程中的表达情况。结果 :人钟状期TGF - βⅠ型、Ⅱ 型受体在内釉细胞、外釉细胞、牙乳头细胞中染色阳性 ;正在分泌硬组织基质的成牙本质细胞和成釉细胞TGF - βⅠ型、Ⅱ 型受体呈强阳性表达 ;Ⅲ 型受体在前成釉细胞、外釉细胞、牙乳头细胞、成牙本质细胞、成釉细胞以及牙囊中呈弱阳性表达。结论 :TGF - β受体参与了牙胚发育。     

TGF-β1对人年轻恒牙牙髓细胞的增殖效应

目的:探讨转化生长因子(transforminggrowthfactor,TGFβ1)对培养人牙髓细胞的增殖效应。方法:应用MTT、3H-TdR渗入法观察TGFβ1对人牙髓细胞的增殖效应。结果:TGFβ1浓度在0.1ng/ml～100ng/ml时均可显著促进牙髓细胞的增殖,增殖效应呈现出浓度依赖性。结论:TGFβ1可能通过促进牙髓细胞的增殖参与牙本质—牙髓复合体的修复过程。     

牙本质陶瓷粉、牙本质陶瓷粉复合TGF-β1盖髓的初步研究

目的：观察牙本质陶瓷粉（Ceramic Dentin Powder;CDP),CDP复合转化生长因子（Transforming growth factors-TGF－β1(CDP/TGF－β1)对大鼠修复性牙本质形成的作用。方法：牙本质粉煅烧后与TGF－β1复合，用SD大鼠牙作直接盖髓实验，并用组织学方法评价材料对修复性牙本质形成的作用。结果：术后14d,CDP组：穿刺下方成牙本质细胞的正常排列消失，周围有炎细胞浸润；CDP／TGF－β1组；穿髓孔周围见成纤维细胞增殖，呈团块状包绕穿髓孔。术后28d,CDP组：穿髓下方可见少量修复性牙本质团块形成；CDP／TGF－β1组；在成纤维细胞下方可大量修复性牙本质形成；结论：CDP／TGF－β1能控制炎症的蔓延，促进大鼠牙体，牙髓组织修复。     

牙本质磷蛋白在大鼠牙齿发育中表达的原位杂交研究

目的；观察牙本质磷蛋白(DPP)在大鼠牙齿发育各期的表达，探讨其在牙齿发育中的作用。方法：采用原位杂交方法，检测大鼠牙齿发育各阶段DPP mRNA的表达。结果：在分化成熟的大鼠成牙本质细胞中存在DPP mRNA表达，在前成釉细胞也存在DPP mRNA表达，在成釉细胞中可见较弱的表达，成牙骨质细胞和牙髓细胞呈阴性表达。结论：DPP的表达具有明显的时空特异性，它不但对牙本质的形成起重要作用，而且可能作为成釉细胞分化的信号分子调控牙釉质的形成。     

人牙源性间充质细胞向成牙本质细胞的诱导分化

目的:建立人牙源性间充质细胞向成牙本质细胞分化的体外诱导方案。方法:应用bFGF IGF 1或TGF β1分别对培养早期的人牙源性间充质细胞进行平面定向诱导,观察诱导后细胞的形态学改变,采用免疫荧光染色和RT PCR方法检测成牙本质细胞标志物———DSP蛋白和DSPPmRNA在诱导后细胞中的表达,并通过VonKossa染色检测诱导后细胞的矿化能力。结果:诱导后部分细胞出现单侧较长的细胞突起,表达DSP蛋白和DSPPmRNA,体外连续培养可自发形成矿化结节,出现较典型的成牙本质细胞的形态和功能特征。结论:bFGF IGF 1或TGF β1可促进牙源性间充质细胞向成牙本质细胞分化。     

基质金属蛋白酶-2，9，8在成人成牙本质细胞中的表达及转移生长因子对其分泌的影响

目的:观察研究基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)在成牙本质细胞中的表达和调控.方法:利用酶谱、Western blot和免疫组化等方法,研究MMP-2,9,8的表达以及转移生长因子β1(Transforming growth factor beta 1,TGF-β1)作用后MMP-2,9,8的表达变化.结果:酶谱显示MMP-2、MMP-9在成牙本质细胞中均有表达,TGF-β1上调MMP-2下调MMP-9;Western blot显示成牙本质细胞中有MMP-8的表达,TGF-β1增强其表达;免疫组化检测到MMP-8定位表达在成牙本质细胞层.结论:成牙本质细胞是MMP-2,9,8的来源之一;TGF-β1可能调节MMP-2,9,8的表达.     

转化生长因子-β受体Ⅰ型及Ⅱ型在人年轻恒牙中的表达

目的　探讨转化生长因子 - β受体Ⅰ、Ⅱ (TGF βRⅠ、Ⅱ )在人年轻恒牙牙本质 -牙髓复合体中的表达及其生物学作用。方法　应用免疫组化方法检测TGF βRⅠ、Ⅱ在人年轻恒牙牙本质 -牙髓复合体中的表达。 结果　TGF βRⅠ、Ⅱ在年轻恒牙牙本质 -牙髓复合体中的表达呈现空间分布特异性 ,在成牙本质细胞中呈强阳性表达 ,其他牙髓细胞呈弱阳性表达。结论　TGF βRⅠ、Ⅱ在年轻恒牙牙本质 -牙髓复合体的修复过程中发挥重要作用。     

Smads蛋白在成牙本质细胞系MDPC-23中的表达及功能

目的研究Smads蛋白在成牙本质细胞系MDPC-23作为转化生长因子(TGF)β信号分子的作用。方法常规条件下培养MDPC-23细胞,在TGF-β1刺激培养1h后,观察细胞内Smad分子的定位变化。将Smads真核表达载体分别与报告基因载体p3TP-Lux瞬时共转染至MDPC-23,在TGF-β1刺激培养24h后,裂解细胞,用双荧光素酶报告基因检测系统检测细胞裂解液中的荧光素酶活性。结果MDPC-23细胞表达Smad2和Smad3蛋白分子,主要定位于细胞质,在TGF-β1刺激1h后,Smad2和Smad3从胞质向胞核转位聚集。TGF-β1可诱导p3TP-Lux基础启动子活性,约增加13倍。过表达野生型Smad3蛋白可促进TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导,但是过表达Smad3突变体抑制TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导。和Smad3作用相比,过表达Smad2野生型或突变型蛋白对TGF-β1诱导p3TP-Lux启动子活性无明显影响。结论在成牙本质细胞系MDPC-23内,Smad信号途径存在并参与介导TGF-β1诱导的转录调控。     

外源性转化生长因子β1对口腔鳞癌细胞系恶性表型的影响

目的 探讨转化生长因子（TGF－β1）和口腔鳞癌侵袭转移的关系。方法 采用^3H-TdR掺入法和免疫组化法观察不同浓度的TGF－β1作用于口腔鳞癌TSCCa细胞系及颈淋巴转移癌GNM细胞系后细胞增殖能力和C－-myc蛋白表达的变化。结果 相同浓度的TGF－β1对两细胞系作用不同；TGF－β1可促进GNM细胞^3H-TdR掺入率，同时GNM细胞中C－myc蛋白表达明显上调；而TGF－β1可抑制TSCCa细胞的增殖，TGF－β1作用于TSCCa细胞后C－myc蛋白表达水平开始下降，并与TGF－β1有剂量依赖关系。结论 TGF－β1可能在不同转化的口腔鳞癌细胞中的作用不同。     

转化生长因子β2 mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中表达的研究

目的：探讨转化生长因子β2（transforminggrowthfactor-β2，TGFβ2）mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达及其意义。方法：制备小鼠磨牙各发育阶段标本，用原位杂交分析TGFβ2mRNA在牙胚中的表达与分布。结果：TGFβ2mRNA在小鼠磨牙牙胚不同发育阶段呈时间一空间特异性模式表达。结论：TGFβ2mRNA在牙形态发生过程中可能通过自分泌和旁分泌机制协同调控上皮一间充质相互作用及成牙本质细胞和成釉细胞的分化。