c-Kit+Lin-细胞体外扩增及体内分化的实验研究

目的　研究移植刚分选及扩增后雄性小鼠的骨髓c-Kit+Lin-细胞到酒精性肝纤维化雌性模型小鼠体内后,模型小鼠的肝脏形态改变、肝功能变化和移植细胞的分布、分化及归巢情况。　方法　　采用酒精灌胃法建立酒精性肝纤维化雌性小鼠模型,造模成功后随机选取8只模型小鼠（模型组）与正常小鼠8只（对照组）比较两组肝功能变化。剩余模型小鼠再随机选取32只,分为4组处理,并再随机选取8只正常小鼠（第1组）与其对照。模型小鼠的4组分别为：移植前取血处死组（第2组）,移植新鲜分选的c-Kit+ Lin-细胞组（第3组）,移植扩增后的c-Kit+ Lin-细胞组（第4组）,仅予以注射Buffer组（第5组）。采用免疫磁珠法分选雄性小鼠骨髓c-Kit+Lin-细胞;利用SCF+ HGF+ FL+LIF +TPO+ IL-3因子组合对其进行体外扩增;将刚分选及扩增后c-Kit+Lin-细胞移植入酒精性肝纤维化雌性模型小鼠体内,检测两组肝功能改变、肝脏纤维化改善、含雄性小鼠Y染色体性别决定基因cDNA(Sry)的移植细胞在受体肝内定居分化情况。　结果　　（1） 两移植组在移植30天后,较移植前肝脏纤维化改善明显;（2） 两移植组在移植30天后AST、ALT、ALB与移植前比较差异有显著性意义（P<0.05）;（3）两移植组均可见含雄性小鼠Y染色体性别决定基因cDNA(Sry)的移植细胞,并同时表达ALB mRNA,计数细胞比例,比较差异无显著性意义（P>0.05）。　结论　　移植c-Kit+ Lin-细胞后能在受体肝内定居并转化成有功能新生肝细胞;移植c-Kit+ Lin-细胞后能明显改善肝损伤小鼠的肝功能及肝脏纤维化;扩增对c-Kit+Lin-细胞的归巢、在体内分化没有明显影响。     

小鼠c-Kit+lin-骨髓细胞移植生成肝细胞的实验研究

目的 评价小鼠c-Kit^＋Lin-骨髓细胞的肝干细胞潜能,为骨髓源性肝干细胞的临床运用提供可行性实验依据。方法 供体为纯系BALB／C雄性小鼠．c-Kit^＋Lin-骨髓细胞采用免疫磁珠分选法分离细胞。受体为行35Gy全肝照射处理后的同龄同系BALB／C雌性小鼠,立即移植供体c-Kit^＋lin-骨髓细胞。接受c-Kit^＋lin-骨髓细胞移植1月后,活杀取肝做常规病理学检查、Y染色体的原位杂交检查、甲胎蛋白与白蛋白的免疫组化检测。结果 移植1月后小鼠肝脏的组织结构已恢复正常．肝组织细胞中存在原位杂交和免疫组化均呈阳性反应的双阳性细胞。结论 小鼠c-Kit^＋Lin-骨髓细胞具有肝干细胞潜能,移植后可以在肝内定居并分化形成肝细胞。可做为肝病细胞移植疗法的种子细胞。     

肝纤维化小鼠骨髓源性肝干细胞动员及确定

目的 建立小鼠四氯化碳性及酒精性肝纤维化模型并初步探讨干细胞动员情况,确定骨髓源性肝干细胞的表面标记.方法 四氯化碳皮下注射和酒精灌胃法使小鼠形成肝纤维化,分别取其骨髓干细胞,采用流式细胞仪检测肝纤雏化模型中不同干细胞标记的细胞群体包括c-kit Lin-,Thy1.2 Lin-,CD34 Lin-,Sca 1 Lin-的数量变化,寻找可能的肝干细胞动员情况.结果 与对照组相比,两组纤维化模型小鼠骨髓内c-kit Lin-细胞显著增高,其他干细胞类型细胞数量变化小.结论 c-kit Lin-细胞的数量在肝纤维化模型小鼠中存在明显动员情况,可能参与肝脏的修复,并成为肝干细胞的标记物.     

间充质干细胞和单个核细胞异种移植治疗小鼠肝损伤的研究

目的：研究大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）和单个核细胞（MNCs）在四氯化碳（CCl4）诱导性小鼠肝损伤治疗中的作用。方法：无菌条件下取雄性Wistar大鼠骨髓分离MNCs,培养纯化及流式细胞仪筛选获得MSCs;采用CCl4制作雌性Balb/c小鼠肝损伤模型,随机分为MSCs移植组、MNCs移植组和肝损伤对照组。2个细胞移植组分别在CCl4损伤后立即经尾静脉注入大鼠MSCs或MNCs,各组分别于移植细胞输入前即刻（T0）、输入后第1（T1）、7（T2）、14（T3）、28（T4）、42 d（T5）断尾取血检测谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）。6周后处死小鼠,比较肝脏质量指数,肝病理学切片检测肝损伤程度,PCR检测大鼠Sry基因片段植入小鼠肝脏的情况。结果：MSCs CD44、CD90均表达阳性,而CD45表达阴性;2个细胞移植组在T1~5时点ALT和AST浓度差异有统计学意义（P＜0.05）;与肝损伤对照组比较,MSCs移植组ALT和AST浓度在T1~5时点均降低; MSCs移植组肝损伤修复程度明显好于MNCs移植组和肝损伤对照组;仅MSCs移植组肝内有大鼠Y染色体阳性细胞存在。结论：体外分离培养及扩增的大鼠MSCs可植入到CCl4诱导性肝损伤小鼠的肝组织中,并改善CCl4导致的肝损伤。     

骨髓间质干细胞肝向诱导分化前后肝功能代偿能力的比较

目的探讨不同分化状态骨髓间质干细胞移植对急性肝功能衰竭大鼠的肝功能重建的影响,并进行综合比较评估。方法以D一氨基半乳糖胺（D—gal）构建的雌性大鼠急性肝衰竭模型后大鼠,随机分为4组：BMSCs移植组,幼稚肝细胞移植组,成熟肝细胞移植组和空白对照组,结合多项血生化指标对不同分化阶段BMSCs的肝功能代偿能力进行综合评估。并以sry基因为分子标志,采用PCR技术检测植入细胞在受体动物体内的存留状态及定位情况。结果各组肝衰模型动物经细胞移植后,所测各项血清生化指标均有显著变化。血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）的水平明显下降,白蛋白（ALB）的水平有所上升。各移植组之间相比,诱导至成熟肝细胞状态的细胞无论对肝功能的改善或是降低动物死亡率,效果均为最优。细胞移植后的第30天,仍能在受体动物肝脏内检查到sry基因信号。结论体外诱导分化至不同阶段的BMSCs均能在一定程度上代偿衰竭肝脏的功能,而诱导分化至成熟状态的细胞对肝功能的代偿能力最强,可作为代偿肝功能的重要细胞源之一.     

Sry监测体外扩增造血细胞植入效果的实验研究

目的：探讨Y染色体性别决定基因(Sry)作为评价和追踪造血细胞移植后植入状态检测指标的可行性。方法：根据Sry DNA序列设计引物及制备探针，然后进行PCR检测、斑点杂交和原位杂交．动态追踪经不同条件下体外扩增的纯系雄性小鼠BMMNC回输至雌性小鼠后的植入状态。结果：PCR结果显示在各移植组小鼠的骨髓有核细胞、脾细胞及外周血白细胞中均有Y染色体特异性序列的存在；斑点杂交结果显示在各回输组间并无明显差别，但用脾脏组织作原位杂交的结果则发现基质细胞支持扩增回输组的阳性颗粒数目与输注新鲜细胞组相似，但略少于雄性小鼠；而输注细胞因子扩增细胞实验组小鼠则明显少于雄性动物的阳性对照标本和基质细胞支持扩增回输组。结论：(1)经重复检测表明上述方法的重复性好，结果可信．可作为检测性别不同时造血干细胞移植效果的一种检测手段；(2)证实基质细胞支持下的体外扩增的造血细胞具有较好的植入能力。     

胚胎干细胞来源的肝细胞对急性肝功能衰竭小鼠的移植治疗作用

目的观察胚胎干细胞（ESC）来源的肝细胞对急性肝功能衰竭（FHF）小鼠的移植治疗方法和作用。方法选用小鼠D3-KS细胞,利用转化生长因子、成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子等进行肝细胞方向诱导分化;用反转录聚合酶链反应、免疫细胞化学等方法检测肝细胞标记物甲胎蛋白（AFP）、白蛋白（ALB）和葡萄糖6磷酸酶（G6P）等的表达;观察阳性细胞的空间分布规律,用细胞铲分选阳性区域细胞并将其移植入同系（129系）小鼠肝脏内,利用四氯化碳诱发FHF,然后观察小鼠生存时间、肝功能指标和移植细胞生长状态等情况。结果（1）AFP、白蛋白和G6P等最早于第3天开始表达并逐渐增强。（2）移植组平均生存时间（60h）与对照组（22h）差异有统计学意义（P〈0．05）;移植组肝功能指标均较对照组明显改善（P〈0．05）。（3）移植细胞表达ALB,移植部位未发现肿瘤形成。结论ESC来源的肝细胞可表达成熟肝细胞功能,移植后能对小鼠FHF起到较好的治疗作用。     

静脉移植BMSCs在急性肝损伤小鼠肝内的分布

目的 研究静脉移植的骨髓间充质干细胞(BMSCs)在急性肝损伤小鼠肝组织内的分布情况。方法雌性昆明种小鼠42只,随机分为正常对照组、损伤模型组和干细胞移植组。损伤模型组和干细胞移植组小鼠均以橄榄油配制的含体积分数0.4的CCl4一次性灌胃制备急性肝损伤模型。分离同种小鼠BMSCs,体外扩增、BrdU标记后经尾静脉移植于灌胃后24h的干细胞移植组小鼠体内。分别于CCl4灌胃后的第5、10、15天取损伤模型组和干细胞移植组小鼠的肝脏,每组每个时间点取材6只,正常对照组小鼠不做处理,直接取6只小鼠肝脏,各组均制备石蜡切片和连续冷冻切片,苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织的结构变化,免疫组织化学染色追踪BrdU阳性标记干细胞在肝组织内的迁移和分布情况。结果 HE染色结果显示,干细胞移植组小鼠在CCl4灌胃后的第5、10、15天的肝组织修复状态明显好于相同时间点的损伤模型组;干细胞移植组小鼠CCl4灌胃后的第15天肝组织接近正常。免疫组化结果显示,干细胞移植组小鼠在CCl4灌胃后第5天肝组织内散在分布着大量的黄色或褐色的BrdU阳性细胞胞核;干细胞移植组小鼠CCl4灌胃后第10天时肝组织内的BrdU阳性细胞胞核数目较第5天时少,而第15天时较第10天时明显减少,第15天与第5、10天比较,差异有显著性(t=3.350、2.907,P<0.05)。结论静脉移植的BMSCs可以迁移至急性肝损伤小鼠肝脏,并可促进损伤肝脏的修复;随着移植时间的延长单位面积内BrdU阳性细胞数量减少。     

骨髓移植小鼠二甲基亚硝胺肝纤维化模型的建立

目的构建绿色荧光蛋白(GFP)标记骨髓细胞的小鼠,并复制其二甲基亚硝胺(DMN)肝纤维化模型。方法 ICR雄性小鼠32只,随机分为正常组6只和移植组26只。移植组接受致死量γ射线照射后,经尾静脉输入GFP转基因小鼠的骨髓细胞;正常组不进行照射和移植,仅尾静脉注射等量生理盐水。两个月后制备血涂片,观察移植组造血重建情况,造血重建动物再分为对照组和造模组,造模组用DMN按每次10mg/kg体重腹腔注射制备肝纤维化模型,隔日一次,正常组和对照组给予等量生理盐水。设染毒后3周和4周两个时间观察点,生化法测定肝功能;Jamall法检测肝组织羟脯氨酸含量;HE染色及天狼猩红染色观察肝组织炎症、坏死及纤维组织增生情况;GFP免疫荧光组织化学观察骨髓源性细胞在肝脏的归巢特点。结果骨髓移植两个月后,移植组外周血中出现满视野GFP+细胞。与正常组比较,两个时间观察点造模组肝功能(ALT、AST、Alb及T.Bil)均明显异常(P<0.05),肝组织羟脯氨酸含量显著增高(P<0.05),造模3周末肝组织出血性坏死,有炎性细胞浸润,但尚未形成完全的纤维间隔;造模4周末肝组织炎症、坏死程度加重,可见完全的纤维间隔,在DMN造模动物肝组...     

肝细胞与骨髓间质干细胞共移植提高移植效率

目的:探讨肝细胞与骨髓间质干细胞(MSC)共移植提高肝细胞移植效率的可行性。方法:分为共移植组、肝细胞移植组和移植对照组,分别将雄性小鼠肝细胞与雌性小鼠MSC(1∶1)、雄性小鼠肝细胞与雌性小鼠肝细胞(1∶1)、雄性小鼠肝细胞与雌性裸鼠肝细胞(1∶1)植入雌性裸鼠脾脏,14d后,应用实时荧光定量PCR技术检测受体肝脏中Y染色体性别决定区(sex-determining region Y,Sry)基因;并由标准曲线计算出移植细胞在受体肝脏中的比例。结果:共移植组Sry的含量明显比其他两组为高[(32.04±0.36)vs(36.97±0.66),P=0.030;(32.04±0.36)vs(35.50±0.62),P=0.045],肝细胞移植组与移植对照组无明显差异[(36.97±0.66)vs(35.50±0.62),P=0.837];共移植组整合的移植肝细胞仅占受体肝脏的(1.09±0.01)%。结论:肝细胞与骨髓间质干细胞共移植较单一移植可以提高肝细胞的移植效率。     

阿扎胞苷和CsA＋MTX对小鼠Allo—PBSCT后急性GVHD的预防效果比较

摘要：目的比较阿扎胞苷（AzaC）和环孢素A＋甲氨蝶呤（CsA＋MTx）对小鼠异基因外周血干细胞移植（A110～PBSCT）后发生急性移植物抗宿主病（aGVHD）的预防效果并初步分析其原因。方法雄性SPF级BAI。B／c（H-2d）小鼠为供鼠，雌性C57BI。／6（H-2b）小鼠为受鼠，随机选20只雌性C57BL／6（H-2b）受鼠为预处理组。另将供、受鼠随机分为PBS组、AzaC组和CsA＋MTX组各40只（每组含雄性供鼠、雌性受鼠各20只）。给PBS组、AzaC组和CsA＋MTX组的受鼠全身放疗（TBI）后输注供鼠T细胞去除（TCD）的外周血单个核细胞（PBMNC）和T细胞，再皮下注射PBS、AzaC和CsA＋MTX。检测受鼠的嵌合状态、生存天数、aGVHD观察及平均体重变化百分率和外周血CD4＋CD25＋FOXP3＋Tregs百分率。结果PBS组、AzaC组和csA＋MTx组受鼠外周血白细胞中均检测到雄性供鼠的sRY基因，未移植组＋20d内相继死亡，PBS组较早出现较严重的aGVHD，CsA＋MTX组随后也出现了aGVHD，而AzaC组未出现aGVHD。AzaC组的平均体重变化百分率、生存天数和外周血CD4＋CD25＋FOXP3＋Tregs百分率均与CsA＋MTX组和PBS组差异有统计学意义（P〈O．01）。结论AzaC预防小鼠A110—PBSCT后aGVHD的效果优于CsA＋MTX，可能与其增加了移植后外周血cD4＋CD25＋FOXP3＋Tregs数量有关。     

大鼠骨髓细胞CD34+β2m-CD90+亚群肝内移植的研究

目的观察骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞在受体大鼠纤维化肝内的定居、生长以及对受体肝的影响。方法将雄性肝纤维化大鼠的骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞用PKH26-GL标记后，从门静脉注射到预先经放疗的同种模型雌性大鼠肝内；PCR检测雌鼠血清Y染色体的表达，荧光显微镜检测PKH26-GL标记的骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞在受体肝内的分布；病理学检查移植骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞后大鼠肝纤维化组织形态学改变；免疫组化检测肝内白蛋白、α-SMA的表达，放免法测定受体血清层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）的水平，斑点杂交检测肝脏Ⅰ、Ⅲ型前肢原mRNA的表达。结果 在移植后2周内，雌性受体血清一直能检测到Y染色体特异的Sty基因表达，肝内有PKH26-GL红色荧光分布并有聚集成团趋势；受体肝纤维化减轻，间隔和胞周性纤维化较对照组改善；受体血清层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）的水平下降（P〈0．05），肝组织α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达下降（P〈0．05），白蛋白的表达升高（P〈0.05）。结论 大鼠骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞自体移植入纤维化肝后，可能定居并有一定程度的增殖；大鼠移植CD34^＋β2m-CD90^＋细胞后，受体肝纤维化程度有减轻的趋势。     

移植前输注供体细胞的小鼠单倍体相合骨髓移植实验

目的建立小鼠非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,探讨移植前输注供体细胞的造血干细胞植入效果。方法以CB6F1雌性小鼠为受鼠,C57BL/6雄性小鼠为供鼠,移植前3d经尾静脉输注供鼠脾细胞或骨髓细胞3×107,输注细胞后24h和48h分别通过腹腔注射阿糖胞苷0.015g/d,移植前1d予450cGy全身照射（TBI）,移植当天输注供鼠骨髓有核细胞5×107/只。监测受鼠白细胞恢复、Y染色体性别决定基因（SRY）以及外周血供鼠CD3＋细胞嵌合状态。结果单纯给予TBI小鼠均存活,且移植后30d白细胞恢复正常,TBI＋骨髓细胞移植（TBI＋BMT）组移植后14、30、60d时外周血SRY基因PCR检测结果均阳性,60d供体CD3^＋细胞嵌合率达54.4%。移植前输注供体脾细胞组嵌合率最高,移植后60d达93.5%±4.8%,优于移植前输注供体骨髓细胞组（P〈0.05）。结论 450cGy TBI的非清髓性预处理可以成功建立非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,移植前输注供体脾细胞可促进造血干细胞植入。     

大鼠间充质干细胞在小鼠肝损伤中的作用

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)在四氯化碳(CCl4)导致小鼠肝损伤中的作用,为临床进行细胞移植治疗肝脏疾病提供新策略.方法 无菌条件下取雄性Wistar大鼠骨髓,分离培养及流式细胞仪检测MSC;采用CCl4制作雌性BALB/c小鼠肝损伤模型,肝损伤小鼠随机分为MSC移植组和肝损伤对照组.MSC移植组在CCl4损伤后立即经尾静脉注入大鼠MSC,6周后处死小鼠,检测小鼠肝损伤程度和大鼠MSC植入情况.结果 流式细胞仪结果显示:第3代大鼠MSC CD45-/CD90 细胞为94.54%,CD45-/CD44 细胞为91.25%;肝组织学观察显示:MSC移植组肝损伤修复程度明显好于肝损伤对照组;PCR方法证实只有MSC移植组肝内有大鼠Y染色体阳性细胞存在.结论 体外分离培养及扩增的大鼠MSC移植到CCl4肝损伤小鼠体内,可参与肝损伤修复,减轻CCl4导致的肝损伤.     

骨髓来源细胞参与肝脏损伤的修复

目的 探讨小鼠骨髓来源干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)在体内分化为肝细胞的可行性及BMSCs是否参与肝功能受损的修复.方法 30只雌性C57BL/6小鼠全身一次性接受10 Gy 60Co射线照射后,立即接受同品系雄性小鼠骨髓干细胞移植.移植后21 d后以CCl4 致骨髓嵌合小鼠肝功能受损,并于CCl4 致伤后第2、3、4、7、14、21、28天取骨髓嵌合小鼠肝脏,冰冻切片行Y染色体FISH和白蛋白(albumin,ALB)免疫荧光双标染色法,检测BMSC阳性细胞在受体小鼠肝内的分化情况,ELISA法检测肝脏基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factorl,SDF-1)及其趋化因子受体(CXCR4)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、干细胞因子(stem cell factor,SCF)的表达.结果 伤后2、3、4、7、14、21、28 d骨髓嵌合小鼠肝内皆可见FISH和ALB共表达的双阳性细胞,计数Y染色体FISH与ALB双阳性的细胞数量为3.763%～5.578%.ELISA法检测相关干细胞因子发现,在肝损伤后同一批次各时相点肝脏组织匀浆标本中SDF-1、CXCR-4、SCF、HGF 4种因子均呈现增高趋势,并在肝损伤第21天达到高峰表现,与其他时相点相比显著增加(P<0.05),同FISH与ALB荧光双标记共表达计数结果一致.结论 BMSCs 可通过直接分化为肝细胞及分泌相关细胞因子间接促进受体肝脏干细胞增殖参与受损肝脏的修复.     

人骨髓间充质干细胞移植对肝衰竭大鼠的治疗作用

目的:探讨体外诱导肝向分化成功后的人骨髓间充质干细胞经门静脉移植对肝衰竭大鼠肝功能及组织的影响。方法:人骨髓间充质干细胞传至第6代后,体外利用肝细胞生长因子(HGF)和上皮细胞生长因子(EGF)诱导其肝向分化。使用四氯化碳建立急性肝衰竭大鼠模型,随机分5组:HGF诱导分化细胞移植组、EGF诱导分化细胞移植组、HGF+EGF联合诱导移植组、无诱导细胞移植组和无细胞移植组,经门静脉移植人骨髓间充质干细胞,分别于移植后12 h、72 h、7 d、1月和2月时间点观察检测肝功能指标及肝脏病理的变化情况。结果:HGF诱导分化细胞移植组、EGF诱导细胞移植组、HGF+EGF联合诱导移植组、无诱导细胞移植组大鼠的生存情况、谷丙转氨酶、胆红素、白蛋白水平各指标较无细胞移植组均明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);但HGF诱导细胞移植组、EGF诱导细胞移植组和HGF+EGF联合诱导移植组各指标较无诱导细胞移植组,差异无统计学意义(P>0.05)。病理分析提示细胞移植组的大鼠肝显微结构较无细胞移植组改善明显。结论:肝向分化的人骨髓间充质干细胞移植入肝衰竭大鼠体内能够显著改善肝功能。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症CD34+CD59+细胞长期造血的动物实验

目的获得阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者正常克隆干细胞（CD34^＋CD59^＋）支持长期造血的证据。方法纯化、扩增PNH患者骨髓CD34^＋CD59^＋细胞并移植入联合免疫缺陷（SCm）小鼠体内,90d后以首次移植的小鼠骨髓细胞进行二次移植。结果分别移植了PNH患者和正常对照骨髓CD34^＋CD59^＋细胞的小鼠在移植后第90天,外周血细胞水平均恢复正常;两组小鼠的组织中均有CD45的表达,且差异无统计学意义。分别移植了由PNH患者和正常对照骨髓CD34^＋CD59^＋细胞重建造血的小鼠骨髓细胞的小鼠在移植后第30天,外周血细胞水平差异无统计学意义;两组小鼠的组织中均有C1M5的表达,且差异无统计学意义;移植后小鼠骨髓细胞里均可扩增出供者的SRY基因片段。结论经体外纯化、扩增后的PNH患者骨髓CD34^＋CD59^＋细胞具有与正常CD34^＋CD59^＋细胞同样的长期造血的能力。     

骨髓间充质干细胞改善高氧致肺纤维化的研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs）移植对高氧致新生大鼠肺纤维化的影响。方法：将SD雄性大鼠来源的BM-MSCs移植入受体大鼠体内。将受体大鼠分为正常对照组、正常BM-MSCs移植组、高氧对照组、高氧BM-MSCs移植组4组。实验第14天取各组大鼠肺组织行病理学检查和羟脯氨酸含量测定;提取雌性大鼠肺组织DNA,PCR检测性别决定基因Sry基因表达。结果：高氧对照组肺组织结构紊乱,纤维化明显,羟脯氨酸含量较正常对照组明显升高,高氧BM-MSCs移植组病理改变较高氧对照组减轻,羟脯氨酸含量亦明显降低;PCR结果显示,正常BM-MSCs移植组和高氧BM-MSCs移植组均可检测到Sry基因,高氧BM-MSCs移植组较正常BM-MSCs移植组表达增高。结论：体内移植BM-MSCs可减轻高氧致新生大鼠肺纤维化。     

受体特异性骨髓干细胞诱导肝移植大鼠长期存活的研究

目的 研究受体特异性骨髓干细胞在大鼠移植肝中的诱导分化情况及对大鼠长期存活的影响.方法 雌性受体SD大鼠随机分成空白对照组、D-hanks液组、间充质干细胞组、造血干细胞组.空白对照组仅行原位肝移植术;D-hanks液组在肝移植术后大鼠门静脉注射D-hanks液0.5ml;间充质干细胞组在肝移植术后大鼠门静脉注射雄性SD大鼠骨髓问充质干细胞0.5ml(5×105个/mL);造血干细胞组注射骨髓造血干细胞0.5ml(5×105个/mL).观察大鼠的中位生存时间及术后60d Sry基因原位杂交和白蛋白免疫组化双标检测观察骨髓干细胞的分化情况.结果 间充质干细胞组、造血干细胞组中位生存时间分别为大于180 d、102d,较空白对照组、D-hanks液组明显延长(P＜0.05);间充质干细胞组又较造血干细胞组明显延长(P＜0.05);间充质干细胞组、造血干细胞组Sry基因原位杂交和白蛋白免疫组化双标检测呈阳性,且双阳性细胞百分率间充质干细胞组高于造血干细胞组(P＜0.05).结论 受体特异性骨髓干细胞能诱导大鼠肝移植术后长期存活,并能在移植肝的环境中诱导分化为肝细胞,表达白蛋白,并逐渐替代移植肝本身的细胞;间充质干细胞在移植肝内诱导分化为肝细胞并替代的能力较强;移植的肝脏被受体特异性骨髓干细胞分化来的肝细胞替代,是大鼠长期存活的可能原因.     

同种异体骨髓单个核细胞肝内移植治疗急性肝损伤的MVD改变及VEGF的表达

目的：探讨骨髓单个核细胞移植后急性肝损伤模型的血管内皮生长因子（VEGF）表达及微血管密度（MVD）值的动态变化。方法：随机选择急性肝损伤模型兔42只,移植组及对照组各21只,在细胞移植组行骨髓单个核细胞移植后的第7,14,28天,移植组及对照组分别处死7只,处死前行肝功能检查而后行肝脏病理切片免疫组织化学检查,测定并比较VEGF表达阳性细胞数及MVD值。结果：细胞移植前,移植组与对照组肝功能无差别（P>0.05）,细胞移植后各观察时点移植组的肝功能指标均好于对照组（P<0.05）,VEGF表达阳性细胞数及MVD值均高于对照组（P<0.05）。移植组内部各时点相互比较,VEGF表达阳性细胞数逐渐降低,第7,14天较第28天高（P<0.05）,第7天较第14天高（P>0.05）; MVD值逐渐增高,第14天及第28天较第7天高（P<0.05）,第28天较第14天高（P>0.05）。对照组各时点比较,VEGF表达阳性细胞数逐渐降低,第7天较第14天及第28天高（P<0.05）,第14天较第28天高（P>0.05）;MVD值逐渐增高,各时点两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：骨髓单个核细胞移植可以促进急性肝损伤模型的VEGF表达及MVD值增加,有利于肝脏功能的恢复。