抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因克隆、测序

肿瘤免疫导向治疗中与抗癌药物、放射性核素偶连的载体单克隆抗体 (monoclonal antibody ,Mc Ab)的异源性问题是束缚肿瘤免疫导向治疗临床应用的主要障碍 ,异源 Mc Ab的人源化改造是肿瘤免疫导向治疗研究的重点和难点[1 ] 。目前 ,抗视网膜母细胞瘤 (retinoblastoma,RB) Mc Ab基因人源化研究尚未见报道 ,现将我们这方面的部分研究结果报道如下。1　材料和方法分泌小鼠抗人 RB Mc Ab的杂交瘤细胞株 3C6由本病理室制备 ,Mc Ab亚型为 Ig G2 a。实验中所需要的酶类及测序载体p GEM - T Easy等为美国 Promega公司产品。 TRIZOL试剂购…     

视网膜母细胞瘤组织直接免疫制备抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体及其抗原特性的实验研究

目的 研究新鲜视网膜母细胞瘤（retinoblastoma,Rb)细胞制备的抗人Rb单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb)的抗原特性。方法 利用手术中获得的新鲜Rb组织细胞制备成细胞悬液,并将其注射入3呈BALB－C小鼠腹腔中,免疫小鼠。取其脾淋巴细胞与SP2／0骨瘤细胞融合,以抗原的性质进行检测,观察McAb相应抗原蛋白在Rb组织中的表达。结果 经反复单细胞克隆化操作及抗体特异性筛选,共获得3株能持续,稳定分泌抗人Rb McAb的杂交瘤细胞系。其中3C6株杂交瘤细胞在体外经≥2年反复冻存,传代培养,仍能稳定分泌特异性强,效价高的抗体,为IgG1亚类。免疫荧光及免疫组化检测结果显示,McAb3C6相应抗原蛋白在Rb组织中呈强阳性表达,而在其他肿瘤及正常组织中无表达。免疫印迹法检测表明,McAb3C6相应抗原蛋白相分子质量约25000。结论 采用新鲜的实体瘤细胞制备的抗人Rb McAb 3C6在Rb组织中呈高度特异性表达,与其他肿瘤及正常眼组织无交叉反应,其所针对的抗原蛋白相对分子质量约为25000,提示可能有新的基因参与Rb肿瘤的发生。     

Rb基因扩增与视网膜母细胞瘤发生的关系初步探讨

在对视网膜母细胞瘤病人的Rb 基因存在状态进行检测时,发现一例患者体细胞Rb 基因有明显扩增改变。Rb 基因在视网膜母细胞瘤患者中的扩增改变,为首次报导,是否意味着Rb 基因扩增与肿瘤发生有着某种关联。     

双眼视网膜母细胞瘤Rb基因缺失研究

利用Ｒｂ基因ＣＡＤ探针，采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ方法，检测５例双眼视网膜母细胞瘤患者及家系中相关人员共１９例外周血白细胞ＤＮＡ。２例患者体细胞出现Ｒｂ基因半合缺失，其中１例Ｒｂ基因半合缺失来自亲代生殖细胞，另１例Ｒｂ基因半合缺失可能发生于配子形成期。这一结果为以分子水平为基因的“二次突变论”提供了依据，并表明此方法在临床上有推广应用价值。文中还讨论了第二恶性肿瘤问题。     

视网膜母细胞瘤抑制基因分子生物学研究进展

视网膜母细胞瘤（ＲＢ）由于仅发生在婴幼儿，又有遗传与非遗传二种形式，一直被认为是研究肿瘤遗传学及肿瘤发病机理的理想模式。有关肿瘤发生的“二次突变论”、“隐形调节基因假说”及“抗癌基因理论”都是在研究ＲＢ的基础上建立并完善的。目前Ｒｂ基因研究是当今国际上肿瘤学、细胞生物学及分子生物学的前沿课题，因为Ｒｂ基因除参与ＲＢ肿瘤的形成外，在正常细胞周期的调控及多种不同组织学来源的恶性肿瘤发生发展中也起重要作     

视网膜母细胞瘤自杀基因疗法的研究进展

视网膜母细胞瘤（Rb)是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤,其发病率有逐渐升高的趋势。Rb的恶性程度高,发病早,可侵及单眼和双眼,对视功能的损害极大,甚至威胁生命,自杀基因疗法是目前肿瘤基因治疗中一种具有很大临床应用前景的治疗策略。但其用于视网膜母细胞瘤治疗的研究近年才刚刚起步,本综述从作用机制,旁观效应,设计策略及基础实验的疗效评估等方面介绍近年来视网膜母细胞瘤自杀基因疗法的研究进展。     

单眼散发性视网膜母细胞瘤Rb基因缺失的研究

对12例单眼散发性视网膜母细胞瘤患者进行了Rb基因存在状态的检测,其中3例Rb基因剂量低于正常对照、2例有异常大小DNA片段出现、2例DNA片段部分缺失,并且1例体细胞Rb基因有扩增改变,这种改变为首次报导。     

视网膜母细胞瘤基因（Rb基因）的作用机制

Ｒｂ基因是与视网膜母细胞瘤发生有关的基因，是人类克隆成功的第一个抗癌基因。Ｒｂ基因具有抑制肿瘤细胞的生长及肿瘤性的抗癌作用。Ｒｂ基因的这种抗癌性主要与Ｒｂ蛋白的蛋白结合功能、Ｒｂ蛋白对多种与细胞增殖有关的基因转录的影响，以及由此导致的细胞周期在Ｇ１期停滞有关。Ｒｂ基因的功能还受到各种细胞机制的调节，特别是Ｒｂ蛋白细胞周期性的磷酸化和脱磷酸化对Ｒｂ蛋白功能的调节最为重要。     

晶体上皮细胞单克隆抗体的动物实验研究第一部分晶体上皮细胞的培养

试图以免疫学方法制备特异性晶体上皮细胞膜单克隆抗体来抑制晶体上皮细胞的生长，以探索防止后发障的发生。共分四部分：１．晶体上皮细胞的培养；２．晶体上皮细胞膜单克隆抗体的制备；３．抗体的免疫学检测；４．所制备的单克隆抗体对动物和人的晶体上皮细胞的抑制作用。报告家兔晶体上皮细胞的原代和继代培养的方法并进行讨论。     

单克隆抗体双位点ELISA方法检测泪液溶菌酶

应用抗鸡蛋溶菌酶（HEL）单克隆抗体（McAb)混合组分双位点ELISA方法检测正常人泪液溶菌酶38眼份，并作了方法学探讨，38眼份正常人泪液溶菌酶OD值分布在0.8-1.6者占65.8%。HEL标准曲线在此范围内与其重合。组内、组间重复试验CV值均<10%，提示本方法为泪液溶菌酶检测方法开辟新的途径。     

单克隆抗体治疗单纯疱疹性角膜炎的临床观察

应用抗HSV 糖蛋白gC 和gD 的单克隆抗体制成的滴眼液,滴眼治疗单纯疱疹病毒性角膜炎患者共43例46只眼,其中治愈39只眼(84.8%),基本治愈7只眼(15.2%),总有效率为100%.表明局部应用单克隆抗体制剂是治疗单纯疱疹病毒性角膜炎的一条新途径。     

抗腺病毒3型单克隆抗体的制备及临床应用研究

目的制备特异性抗腺病毒3型（ADV-3）的单克隆抗体（mAB），并用于腺病毒性角膜结膜炎的临床实验室诊断。方法用密度梯度超速离心技术纯化ADV-3免疫5只BALB／c小鼠，取脾细胞及骨髓瘤细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水注射制备mAb。采用ELISA及免疫组织化学技术进行鉴定。结果经3次克隆化获得了3株可分泌抗ADV-3mAb的杂交瘤细胞株，经多次复苏传代仍能稳定分泌抗体，分别命名为E7、B9和G11。1株（E7）Ig重链为IgG2b，2株（B9、G11）为IgG1，轻链均属于K型。ELISA效价均〉10^4，相对亲合力E7〉B9〉G11，相对亲合力常数分别为8．14×10^9±1．48、2．03×10^8±0．43和1．63×10^7±0．15。腹水中mAb滴度为1×10^5-1×10^6。用抗腺病毒ADV-3E7检测临床诊断为病毒性角膜结膜炎患者标本30例，阳性者20例，阳性率66．7％，PCR检出阳性者21例，阳性率70％，两种检测方法的阳性检出率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论3株杂交瘤细胞株分泌的抗体对ADV-3抗原具有高特异性和亲和力，用于腺病毒性角膜结膜炎的临床诊断具有速度快、阳性率高的优点。     

视网膜母细胞瘤细胞系SO—Rb50瘤细胞Rb基因突变动态变化研究

目的：研究SO－Rb50细胞系瘤细胞Rb基因突变的动态变化。方法：1．用Southern blot杂交法分析SO－Rb50细胞系第327代瘤细胞DNA。2．用PCR－SSCP法对SO－Rb50细胞系第415代及第713代瘤细胞的Rb基因27个外显子和1个启动子逐个筛查。3．将SO－Rb50细胞系的第775代克隆出3个细胞株：MC2、MC3及MC4。用PCR－SSCP－HA法对MC2、MC3及MC4第11代细胞和MC3第138代细胞的Rb基因的27个外显子逐个筛查。结果：SO－Rb50细胞系第327代细胞DNA缺失3．5Kb、2.9Kb及1.0Kb的三条带,证明SO－Rb50细胞系瘤细胞Rb基因缺失。第415代瘤细胞Rb基因第23外显子少一条单链;第713代第25外显子发生新的突变。SO－Rb50细胞系第775代的3个克隆株MC2、MC3及MC4的第11代细胞,只有MC4第24外显子突变;而MC3第138代第24外显子突变,提示MC3经多次传代后第24外显子发生新突变。结论：SO－Rb50细胞系在长期培养传代过程中,瘤细胞的Rb基因突变有动态变化。     

Preliminary Report of Molecular Detection of Retinoblastoma Gene Mutations

To develop gene diagnosis for retinoblastoma predisposition, it is necessary to disclose the retinoblastoma gene mutations or deletions in detail. Genomic DNA from tumor and peripheral white blood cells in 33 patients with retinoblastoma was detected with 3.8kb probe derived from 3‘ end of retinoblastoma gene cDNA. The gene abnormalities, including deletion, partial deletion and rearrangement, were found in 18 patients. Further research will be aimed at microdeletions or mutations for those patients wti...