中药复方861对肝星状细胞的增殖和胶原合成的影响

目的 研究中药复方861对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)引起的肝星状细胞增殖、细胞内钙浓度及胶原合成的影响。方法 体外实验对象为肝星状细胞系(HSC—T6)。细胞增殖采用甲基-^3H胸腺嘧啶核苷(-^3H—TdR)掺人法，细胞内钙浓度测定用Fluo-3／AM(乙酰氧甲基酯)标记后共聚焦显微镜下测定荧光光密度值。培养上清液中I型胶原(CoL—I)用酶联免疫吸附(ELISA)法测定，Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)的浓度用放免法检测。HSC-T6细胞CoL—Ⅰ及Ⅲ型胶原(CoI一Ⅲ)mRNA的水平用RT—PCR方法检测。结果 AngⅡ可促进HSC-T6细胞的增殖和细胞内钙浓度的增加，复方861可阻断这些变化。复方861也可降低HSC—T6细胞CoL—Ⅰ及PⅢP的分泌和CoL—Ⅰ及CoL—Ⅲ mRNA的水平。结论 复方861通过作用于血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)抑制肝星状细胞的增殖及胶原蛋白的合成，这可能是其抗纤维化的机理之一。     

肝星状细胞活化增殖和凋亡及奥曲肽的影响

背景:肝星状细胞的活化增殖在肝硬化的发生发展中起关键作用,临床广泛应用的生长抑素衍生物奥曲肽有多种生物学效应,但它对肝星状细胞的活化增殖及凋亡有何影响尚不清楚。目的:观察奥曲肽对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响。方法:实验选用肝星状细胞株HSC-T6的传代细胞。MTT法检测不同浓度(1×10-2,1×10-3,1×10-4,1×10-5,1×10-6,0mmol/L)奥曲肽干预24,48,72h对肝星状细胞增殖的影响;TUNEL凋亡检测试剂盒荧光显微镜方法检测不同浓度(0,1×10-5,1×10-2mmol/L)奥曲肽干预24h对肝星状细胞凋亡的影响。结果与结论:奥曲肽浓度越高、作用时间越长对培养的肝星状细胞增殖抑制越明显,呈现浓度和时间依赖性;奥曲肽对培养的肝星状细胞凋亡随奥曲肽浓度的增加而增加。结果可见奥曲肽对培养的肝星状细胞增殖抑制呈浓度(0～10-2mmol/L)和时间(24,48,72h)依赖性,并能诱发其凋亡。     

肝星状细胞活化机制研究进展

肝纤维化不是一个独立的疾病,而是许爹漫性肝病共同的病理过程,且为最终发展为肝硬化、肝癌的必经阶段。近年来,大量实验业已证实,肝星状细胞（HSCs）是致肝纤维化的主要效应细胞,     

丹参酮ⅡA对肝星状细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对大鼠肝星状细胞增殖及分泌细胞外基质分泌的影响。方法：用不同浓度的丹参酮ⅡA处理大鼠肝星状细胞，以MTT比色法测定细胞的增殖；放射免疫法测定透明质酸和层粘连蛋白；酶联免疫吸附法(ELISA)测定Ⅰ型胶原的水平。结果：丹参酮ⅡA可剂量依赖性地抑制HSC增殖，不同程度抑制Ⅰ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白分泌。结论：丹参酮ⅡA可显著抑制HSC的增殖及分泌细胞外基质。     

肝星状细胞的研究进展

早在1876年德国学者Kupffer即报道肝窦的内皮细胞近血流侧存在枯否细胞,而在肝窦的内皮细胞近肝细胞的一侧即狄氏(Disse)腔有星状或纺锤状细胞,其功能不明,当时命名为星状细胞(hepaticstellate cell,HSC),又称贮脂细胞(fat-storing cell,FSC),lipocyte或Ito细胞,是在肝纤维化时及正常情况下肝脏中细胞基质(Extracellular matrix,ECM)的主要来源细胞,HSC的活化、增殖及胶原产生的增加是肝纤维化发生发展的中心环节.本文就HSC的分离、生物学特性、以及与肝纤维化形成关系的研究进展作一综述.     

阻断Wnt/β-catenin信号通路对肝星状细胞活化的影响

目的：探讨活化的肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）内是否存在功能性Wnt／β-catenin信号通路的激活，以及阻断该信号通路对HSC活化的影响。方法：免疫细胞化学染色检测β-catenin在HSC-T6细胞内的表达。通过转染T细胞因子（T-cell factor，TCF）依赖的荧光素酶报告质粒（pTOPFLASH）测定HSC-T6细胞内的Wnt／β-catenin信号。将TCF的显性负性突变体（dominant negative TCF，dnTCF）表达质粒转染HSC-T6阻断Wnt／β-catenin信号的转导．用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原表达变化。结果：HSC-T6细胞的核内有β-catenin的表达，转染pTOPFLASH的细胞荧光素酶活性显著高于对照组（P〈0．01）。与对照组相比，转染dnTCF的HSC-T6细胞α-SMA及Ⅰ型胶原表达均显著下降（P〈0．05）。结论：活化的HSC中存在Wnt／β-catenin信号通路的激活．阻断该信号通路可抑制HSC的活化。     

肝星状细胞在肝纤维化中的作用

众所周知,肝纤维化（HF）是对各种病因所致的慢性肝损伤的一种修复反应,其实质是肝内细胞外基质（ECM）合成大于降解导致大量ECM过度沉积。研究证实,肝星状细胞（HSC）是ECM的主要来源,在HF的形成、发展和恢复过程中发挥着关键的作用。现就近年来有关HSC在肝纤维化中的作用作一综述。     

4种莪术有效成分对肝星状细胞-T6基因表达的影响

目的：研究莪术4种有效成分(莪术油、莪术醇、β-榄香烯、姜黄素)对肝星状细胞-T6(HSC—T6)基因表达的影响。方法：从基因库中查询50种肝纤维化相关基因的mRNA序列，用寡核苷酸探针设计软件设计探针，在PE8909DNA合成仪上合成寡核苷酸，用OGR-04点样仪及醛基化玻片制备成基因芯片。以秋水仙碱、莪术油、莪术醇、β-榄香烯、姜黄素不同浓度含药培养液培养HSC—T6细胞。根据细胞毒性实验，确定细胞存活率在50％以上的药物浓度作为实验所用浓度，每组设空白对照组，分别按1、6、12和24h4个时间段收集细胞。按操作步骤提取细胞总RNA，经逆转录荧光标记、杂交和洗涤，用Genepix4000B扫描仪扫描芯片和Ima Gene4．2软件进行数据分析并归一化处理，使用看家基因和阳性对照对Cy3和Cy5扫描结果进行校正。结果：秋水仙碱6．25μg／ml作用HSC—T6细胞12h，可使基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMPl)表达下调220％；莪术油78．125μg／ml作用HSC—T6细胞24h，可使基因TIMP2、白细胞介素-6表达分别下调230％和220％；莪术醇1．5625μg／ml作用HSC—T6细胞12h，可使转化生长因子-β1、P450a基因表达下调230％和210％。结论：本研究从分子水平揭示了莪术有效成分莪术油、莪术醇的抗肝纤维化机制。     

肝纤维化中肝星状细胞和肌纤维母细胞的形态学观察

目的：观察肌纤维母细胞和肝星状细胞在人慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化过程中的作用。方法：对69例肝穿刺活检组织标本行HE、Masson三色及Sweet网织纤维的染色，按照2000年新的病毒性肝炎病理分级分期标准，进行炎症活动度和纤维化程度评定，应用免疫组织化学方法，观察平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、vimentin、结蛋白（desmin)在肝星状细胞、肌纤维母细胞的表达。结果：在慢性肝炎肝纤维化过程中α－SMA阳性细胞不仅仅是肝星状细胞的活化。结论：在人的慢性肝炎肝纤维化过程中，并不排除肝星状细胞所起的作用，但随着肝组织炎症损伤的修复，以肌纤维母细胞为代表的间叶细胞在纤维化过程中可能起主要作用。     

氨茶碱对淋巴瘤细胞系增殖与凋亡的影响及机制探讨

为探讨磷酸二酯酶（phosphodiesterase，PDE）抑制剂在淋巴瘤细胞增殖与凋亡中的作用及机制，研究了非选择性PDE抑制剂氨茶碱（aminophylline，AM）对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的影响。采用MTT检测，光学显微术，电镜术及膜联蛋白V染色观察细胞增殖、细胞凋亡的形态学变化及凋亡率；用流式细胞术和RT-PCR技术检测细胞周期，周期蛋白B1和Bcl-2的表达及线粒体跨膜电位的变化。结果显示，氨茶碱对Raji细胞增殖呈浓度依赖性抑制作用；形态学观察发现随氨茶碱浓度增加，细胞体积明显缩小，核固缩，核染色质核膜下聚集，出现凋亡小体；细胞涂片显示，核染色质凝聚、核碎裂；电镜观察有典型凋亡细胞；膜联蛋白V染色显示氨茶碱诱导Raji细胞凋亡率增加，线粒体跨膜电位（Δφm）呈浓度依赖性下降；流式细胞术及RT-PCR显示氨茶碱下调Bcl-2蛋白及mR-NA的表达；细胞周期分析显示经氨茶碱处理的细胞出现S期阻滞、细胞周期蛋白B1表达下调。结论：氨茶碱可通过S期阻滞抑制细胞增殖、下调Bcl-2的表达及降低线粒体膜电位而诱导Raji细胞凋亡。     

Notch信号通路对VEGF促大鼠间充质干细胞增殖的作用

本研究旨在探讨Notch信号传导通路在VEGF促大鼠间充质干细胞增殖中的作用.体外培养大鼠间充质干细胞,取对数生长期的细胞用于实验研究.用Notch通路阻断剂DAPT阻断Notch信号传导,观察该通路在VEGF作用下大鼠间充质干细胞的增殖情况.实验分为4组：空白对照组、VEFG组、DAPT组及VEGF＋ DAPT组.应用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,RT-PCR法检测各组相关基因（Notch1、Notch2、Flk-1、HES-1）mRNA水平的变化.结果表明,细胞培养3d,各时间点（24h,48 h,72 h） DAPT组及VEGF＋ DAPT组细胞存活率均较低,细胞形态变圆脱落,数目明显减少;VEGF组存活率最高,差异具有统计学意义（P＜0.01）;与对照组相比,VEGF组的Notch1、Notch2和Flk-1的表达水平均上调,而DAPT组及VEGF＋ DAPT组Notch1和Notch2的表达水平均下调,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;VEGF组Hes-1基因水平下调,而DAPT组及VEGF＋ DAPT组Hes-1基因水平上调,差异具有统计学意义（P＜0.05）;DAPT组及VEGF＋ DAPT组的Flk-1基因表达水平稍有下调,但差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：Notch信号通路在VEGF作用下对大鼠间充质干细胞的增殖具有明显促进作用,而DAPT可抑制这种增殖效应.     

人工肝支持系统治疗造血干细胞移植后并发重症肝静脉闭塞病

目的 了解人工肝支持系统抢救造血干细胞移植合并重症肝静脉闭塞病的临床疗效.方法 对2002年1月- 2010年12月因造血干细胞移植并发重症肝静脉闭塞病的6例患者,利用人工肝支持系统,选用血浆置换程序进行血浆置换.结果 6例患者经血浆置换治疗后,胆红素均明显下降,3例最终恢复,2例因肝功能再次恶化死亡,1例死于严重混合...     

鹿茸多肽对神经母细胞瘤细胞增殖作用的实验研究

目的 研究鹿茸多肽溶液对神经母细胞瘤细胞增殖及抑制其凋亡作用.方法 鹿茸多肽与神经母细胞瘤细胞共同培养,通过MTT法测定其细胞活性;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;结果 通过MTT细胞活性检测证明,鹿茸多肽促神经母细胞瘤细胞增殖效果明显,而且鹿茸多肽具有良好的生物活性,当鹿茸多肽剂量达到400 mg/ml,其凋亡百分数是50.02%;当鹿茸多肽剂量达到800 mg/ml,凋亡百分数51.24%,可观察到400 mg/ml和800 mg/ml的鹿茸多肽对神经母细胞瘤细胞的凋亡具有明显的抑制作用.结论 鹿茸多肽促神经母细胞瘤细胞增殖效果明显,且具有良好的生物活性.鹿茸多肽具有明显抑制神经母细胞瘤细胞凋亡的作用.     

TLR2配体肽聚糖对骨髓间充质干细胞增殖和细胞周期的影响

本研究探讨不同剂量的Toll样受体2（TLR2）的配体肽聚糖（peptidoglycan,PGN）在体外对人骨髓间充质干细胞（BM—MSC）增殖和细胞周期的影响。采用Ficoll淋巴细胞分离液、密度梯度离心法分离BM—MSC,体外扩增,并通过流式细胞术检测其表面标志以鉴定纯度;将分离培养的BM—MSC按一定浓度接种于96孔板中,以1、10、20μg/ml的PGN与BM—MSC共培养为实验组,不加PGN的BM—MSC为对照组;培养第1至第7天,MTT法检测BM—MSC的增殖情况;以上述浓度的PGN与BM—MSC共培养72小时后,流式细胞术检测BM—MSC的细胞周期。结果表明,BM—MSC与PGN共培养后,BM—MSC的增殖指数明显增加,呈时间、剂量依赖性,以10μg／ml PGN促BMMSC增殖作用最明显。与对照组比较,PGN干预组G0／G1期细胞比例降低,S期和G2／M期细胞比例增加,以10μg／ml组最明显。结论：在培养条件下PGN可以促进更多的BM—MSC进入DNA合成期,从而有更多的细胞分裂,产生大量的增殖细胞,并且这种影响呈时间、剂量依赖性。     

利用SELDI技术检测大鼠肝纤维化组织的实验研究

目的初步建立表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF/MS)技术检测大鼠肝纤维化组织样本的方法。方法采用SELDI技术及弱阳离子交换表面蛋白芯片(CM10)对组织样本进行分析,从组织样本制备、组织裂解液选择、上样浓度控制、重复性验证等方面进行实验条件的优化,并对大鼠肝纤维化组和对照组肝组织各4例进行差异蛋白分析。结果液氮研磨法结合含两性电解液和蛋白酶抑制剂的裂解液处理样本,以及组织蛋白样本浓度为5μg/μl时,芯片检测得到的蛋白峰强度和蛋白数量最优;对两组样本重复检测3次,蛋白丰度的平均变异系数(CV值)分别为0.105和0.155;两组样本共检测到292个蛋白峰,其中差异表达蛋白54个,在肝纤维化组中表达上调16个,表达下调38个。结论初步建立了SELDI技术检测组织样本的方法,并初步筛选出大鼠肝纤维化差异表达蛋白。     

辣椒素对K562细胞增殖影响的研究

[目的]研究辣椒素对慢性粒细胞性白血病(CML)细胞株K562细胞增殖的影响.[方法]常规培养K562细胞,以MTT、^3H-TdR掺入法及流式细胞术观察细胞增殖情况.[结果]辣椒素能促进K562细胞代谢MTT,增加其^3H的掺入率,并呈现剂量依赖性.在100μg/L时,流式细胞术显示,辣椒素可促进K562细胞由静止期进入DNA合成期.[结论]辣椒素能刺激K562细胞的分裂增殖,并呈剂量依赖性.     

The Effects of Selective Stellate Ganglion Manipulation on Ventricular Refractoriness and Excitability

The effects of selective stellate ganglion stimulation or stellectomy on ventricular excitability were studied in 30 open chest mongrel dogs anesthetized with alpha-chloralose. The elective refractory period (ERP) and strength interval curves (stimulus intensity (S2) = twice the diastolic threshold (ERP), and 2, 3, 5, 7, and 14 mA) were determined using bipolar epicardial electrodes placed in the mid-anterior wall of the right ventricle (RV) and the mid-posterolateral wall of the left ventricle (LV) during left stellate ganglion stimulation (LSGSt, n = 8) or right stellate ganglion stimulation (RSGSt, n = 8), or after left stellectomy (LSGEx, n = 7) or right stellectomy (RSGEx, n = 7). LSGEx prolonged ERP-LV (172 ± 9 vs 167 ± 8 msec, P < 0.05) and ERP-RV (163 ± 10 vs 158 ± 14 msec, P < 0.05). RSGEx prolonged ERP-LV (168 ± 17 vs 162 ± 15 msec, P < 0.01) and ERP-RV (166 ± 14 vs 160 ± 13 msec, P < 0.01), and the times of the strength interval curves obtained for each S2 intensity in both ventricles. LSGSt decreased ERP-LV (157 ± 11 vs 163 ± 12 msec, P < 0.01) and ERP-RV (147 ± 18 vs 157 ± 17 msec, P < 0.05), and the times of the strength interval curves obtained for each S2 intensity in both ventricles. RSGSt did not significantly decreased ERP-LV (152 ± 11 vs 156 ± 9 msec); however, it significantly shortened the times of the strength interval curves obtained for S2 intensities of 2 and 7 mA in the LV, and shortened ERP-RV (139 ± 10 vs 145 ± 7 msec, P < 0.01) and the times of the strength interval curve for S2 intensities of 2, 3, and 5 mA in the RV. A significant interaction (MANOVA test) was observed between the ventricle studied and the ganglion stimulated for S2 intensities of 2 and 3 mA, and between the effect of stimulation and the ganglion stimulated for S2 intensities of 3 and 14 mA. To conclude, selective stellectomy prolonged epicardial ventricular refractoriness in both the mid-anterior wall of the RV and the mid-posterolateral wall of the LV; the magnitude of the epicardial excitability variations in both areas was different during selective stellate ganglion stimulation,     

复方甘草酸酐对慢性乙肝患者T细胞亚群及白细胞介素的影响

目的：探讨复方甘草酸酐注射液（美能）对慢性乙型肝炎患者T细胞亚群及白细胞介素IL-6、IL-8的影响。方法：对56例慢性乙型肝炎患者，静脉点滴美能注射液60-80ml，治疗前后分别检测肝功能、T细胞亚群、IL-6及IL-8。结果：对照组ALT复常率为72．8％，治疗组ALT复常率为95．7％，明显高于对照组（P〈0．05）。T细胞亚群检测显示治疗组经治疗后，CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋明显升高（P〈0．01），CD8^＋明显下降（P〈0．05）。治疗组经治疗后，IL-6及IL-8明显下降（P〈0．01）。结论：美能注射液治疗慢性乙型肝炎，不仅能改善T细胞功能，而且也能调节细胞因子。