荧光定量PCR技术在肺结核诊断中的临床应用研究

目的评价荧光定量PCR技术在肺结核病诊断中的应用价值。方法采用荧光定量PCR、金胺O染色荧光镜检和培养法同时检测860例肺结核患者的痰标本,对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR检测灵敏度可达10~100 cfu/ml,重复性好,对其他呼吸道病原体检测结果均为阴性。肺结核患者痰标本荧光定量PCR检测阳性率要高于金胺O染色荧光镜检和培养法的阳性率,差异有统计学意义(P0.01)。结论应用荧光定量PCR方法检测结核杆菌,具有特异、灵敏、简便、快速的特点,可作为结核病诊断的方法之一。     

支气管肺泡灌洗液GeneXpert-MTB/RIF检测在活动性肺结核诊断中的效能

目的探讨支气管肺泡灌洗液Xpert-MTB/RIF检测对肺结核早期诊断的价值。方法选择2017年9月～2018年9月在苏州大学附属传染病医院肺科住院,临床诊断肺结核患者共158例,分别对其支气管肺泡灌洗液及痰标本行GeneXpert-MTB/RIF法(简称"Xpert法")检测,同时对其支气管肺泡灌洗液行涂片抗酸染色镜检、MGIT 960培养、荧光定量PCR,并对Xpert法检测法结果进行分析。结果 Xpert法检测支气管肺泡灌洗液阳性率明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05);支气管肺泡灌洗液培养阳性率也明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05);支气管肺泡灌洗液PCR检测结核分枝杆菌DNA阳性率也明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05)。Xpert法检测阳性率明显高于PCR检测结核分枝杆菌DNA,差异有统计学意义(P0.05);上述四项联合检测阳性率明显高于Xpert法、结核培养等,差异有统计学意义(P0.05)。而Xpert法检测阳性率与痰培养阳性率比较,差异无统计学意义(P0.05)。以支气管肺泡灌洗液结核培养为金标准,Xpert法检测敏感度78.75%,特异度为65.38%。支气管镜BALF Xpert法检测阳性率57.0%,痰Xpert法检测阳性率32.3%,支气管肺泡灌洗液Xpert法检测阳性率明显高于痰标本,差异有统计学意义(P0.05)。结论支气管肺泡灌洗液Xpert法检测相比痰检及其他传统检测方法快捷、安全、高敏感性,能很大程度提高结核病及耐药结核的早期诊断率,有极大的临床应用前景。     

荧光定量PCR在肺结核临床诊断及疗效评估中的应用

目的 建立荧光定量PCR检测结核分枝杆菌方法,评估其在肺结核的临床诊断和疗效评估中的应用价值.方法 针对结核分枝杆菌保守序列IS6110基因设计引物和探针,建立荧光定量PCR方法.分别以荧光定量PCR、集菌培养和染色镜检法检测疑似肺结核和确诊肺结核患者随访的痰标本,比较各方法在结核病诊断以及治疗效果评估中的作用.结果 荧光定量PCR的检测灵敏度为4 Copies/反应,远高于抗酸染色法和集菌培养法.荧光定量PCR法与集菌培养法和抗酸染色法对临床样本的检出率分别为64.29％、35.12％和12.5％.患者治疗效果的随访检测结果显示,结核分枝杆菌的数量呈持续减少的趋势.结论 荧光定量PCR方法具有快速、敏感和特异性高的特点,可以快速、及时获取肺结核患者服药后的治疗效果,为医生的后续督导治疗提供依据,具有重要的临床意义.     

荧光定量PCR对痰涂片阴性肺结核的临床诊断价值

目的探讨荧光定量PCR检测对痰涂片阴性的肺结核的诊断价值。方法采集180例痰涂片阴性的肺结核病患者及100例非结核性肺部疾病患者(肺炎、肺癌及矽肺患者)的支气管灌洗液(BALF),应用荧光定量PCR检测BALF中的TB-DNA,同时进行BALF结核杆菌培养及抗酸染色法检查结核杆菌,比较不同方法对肺结核的临床诊断效率。结果肺结核组中BALF中TB-DNA阳性检出率为62.77%,显著高于BALF抗酸染色法的阳性检出率33.89%(P0.05),与BALF结核杆菌培养法无明显统计学差异(P0.05),治疗1个月后TB-DNA的阳性检出率也高于抗酸染色法(P0.05)。结论荧光PCR定量检测TB-DNA能提高结核杆菌的检出率,可作为诊断及判断疗效的方法。     

实时荧光PCR检测儿童肺结核粪便中Mtb-DNA的效果评价

目的 应用实时荧光PCR快速检测肺结核患儿粪便中Mtb-DNA,并初步评估其临床效果。 方法 收集肺结核住院儿童粪便标本76份,应用实时荧光PCR检测Mtb-DNA,检测结果与20例其他呼吸系统疾病患儿的粪便实时荧光PCR检测Mtb-DNA、76例粪便抗酸杆菌涂片检查以及41例患儿痰标本的涂片和(或)培养、实时荧光PCR检测结果进行比较。 结果 粪便实时荧光PCR检测敏感度达到23.68%(18/76),特异度为100.00％(20/20),肺结核患儿粪便PCR阳性率［23.68%(18/76)］明显高于涂片阳性率［6.58%(5/76)］,41例患儿中痰涂片和(或)培养阳性例数(15例)和痰PCR检测阳性例数(18例)高于粪便PCR检测阳性例数(11例)。 结论 实时荧光PCR检测儿童粪便Mtb-DNA,是一种特异度高、比较敏感、非侵入性且相对安全的儿童肺结核快速诊断方法。     

实时荧光核酸恒温放大检测（SAT）法对肺结核诊断价值的研究

目的 检测实时荧光核酸恒温放大检测（SAT）法对结核病诊断的作用。 方法 收集172例疑似肺结核患者的痰液标本2份/例,1份进行涂涂片金-胺染色,另一份进行罗氏培养基培养与菌种鉴定及SAT法检测结核分枝杆菌,如SAT法和培养结果不符合则使用痰荧光定量PCR法（FQ-PCR)进行复核。 结果 172例入组患者中有156例根据临床及实验室结果确诊为肺结核病。如果以Mtb培养鉴定结果和荧光PCR结果作为判定金标准,SAT检测的敏感度和特异度分别为97.8%（89/91）和97.5%（79/81）。如以临床诊断为标准,SAT诊断结核的敏感度为58.3%（91/156）,特异度为100.0％（16/16）。对于痰菌阳性肺结核患者,SAT 阳性率为84.9%（79/93）;对于痰菌阴性患者,SAT的阳性率为19.0%（12/63）。 结论 SAT法可以作为临床对结核病的辅助诊断方法。     

实时荧光核酸恒温扩增技术在肺结核诊断中的价值分析

目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT-TB)在肺结核诊断中的价值。方法纳入1121例非相同患者痰标本,其中26例为非结核分枝杆菌。570例肺结核为观察组,525例其他肺部疾病患者为对照组。对治疗前的痰标本分别进行抗酸杆菌涂片、培养及鉴定和SAT法检测。阳性检出率的比较使用卡方检验。结果临床诊断肺结核570例,痰培养结核菌阳性率46.5%(265/570),SAT法检测阳性率46.7%(266/570),痰涂片阳性率34.4%(196/570),SAT与涂片法阳性率的差异有统计学意义(χ2=17.83,P0.01)。在涂阴肺结核中,SAT阳性率达19.5%。以培养阳性作为金标准,SAT法诊断结核病的灵敏度为89.4%,特异度96.3%,阳性似然比为24.2,阴性似然比为0.11,一致率是94.6%,阳性预测值是88.4%,阴性预测值为96.6%。在非结核分枝杆菌肺病中SAT检测阳性率为零。结论 SAT-TB法在肺结核的早期诊断中是一种快速、准确、敏感的方法,值得推广。     

荧光染色法在结核分枝杆菌检测中的应用

目的 观察荧光染色法在肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌的阳性率检测中的临床应用价值.方法 250例肺结核患者,收集深咯痰标本,每份痰标本涂抹2张玻片,分别采用荧光染色法（荧光染色组）和抗酸染色法（抗酸染色组）检测结核分枝杆菌,比较两组阳性率.结果 荧光染色组检出结核分枝杆菌阳性109例,阳性率为43.60％,其中（＋）、（＋＋）、（＋＋＋）、（＋＋＋＋）阳性率分别占13.20％、11.60％、8.40％、10.40％;抗酸染色组阳性86例,阳性率为34.40％,其中（＋）、（＋＋）、（＋＋＋）、（＋＋＋＋）分别占6.80％、8.80％、8.00％、10.80％.两组总阳性率及（＋）阳性率比较P均＜0.01.与抗酸染色组比较,荧光染色组检测痰中结核杆菌的灵敏度、特异性均较高（P均＜0.05）.结论 荧光染色法检测肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌的阳性率高于抗酸染色法,且差异主要体现在含菌量少的痰标本上,这对于那些病变活动性轻,排菌量较少的肺结核的诊断具有重要意义.     

免疫组织化学及PCR技术在淋巴结结核病理诊断中的应用价值

目的 探讨免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)及PCR技术在淋巴结结核病理学诊断中的应用价值。方法 收集首都医科大学附属北京胸科医院病理科保存的2012年1月至2013年7月之间的48例手术根治切除淋巴结结核患者(结核组)和21例非淋巴结结核患者(非结核组)的石蜡包埋组织标本,分别应用IHC染色、荧光定量PCR和抗酸染色法对标本进行检测,以临床最后诊断为金标准,比较各方法的检测效能。结果 IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色检测的敏感度分别为52.1%(25/48)、60.4%(29/48)及27.1%(13/48);IHC染色和荧光定量PCR检测敏感度均高于抗酸染色,差异均有统计学意义(χ ²值分别为 6.27、10.84,P值分别为0.012、0.001);而IHC染色与荧光定量PCR比较,敏感度差异无统计学意义(χ ²=0.68,P=0.411)。IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色法检测非结核组结果均为阴性,特异度均为100%(21/21)。IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色法的阴性预测值分别为47.7%(21/44)、52.5%(21/40)、37.5%(21/56);符合率分别为66.7%(46/69)、72.5%(50/69)、49.3%(34/69),IHC染色、荧光定量PCR均优于抗酸染色法。 结论 IHC染色、荧光定量PCR与抗酸染色法相比,可提高阳性检出率,在淋巴结结核的病理学诊断中具有良好应用价值。     

抗酸染色全自动显微扫描识别系统的临床应用评价

目的 评价抗酸染色全自动显微扫描系统(AFB-AS)检测肺结核患者痰液标本应用价值。方法 搜集2019年1月至8月于北京结核病控制研究所确诊的462例肺结核患者作为研究对象,每例患者留取3份初诊痰液标本,共计1386份。所有标本均完成萋-尼抗酸染色,采用双盲法使用传统抗酸杆菌染色镜检和AFB-AS检查;每例患者选取2份痰液标本进行分枝杆菌分离培养,共计完成924份;其中1份同时进行GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)检测,共计完成462份。比较不同方法检测肺结核患者痰标本结果;以分枝杆菌分离培养结果为参照,分析传统抗酸杆菌染色镜检和AFB-AS检测肺结核患者痰标本的效能;分析传统抗酸杆菌染色镜检和AFB-AS检测均为阳性结果的等级相关性。结果 各方法检测肺结核患者痰标本阳性率从高到低依次为Xpert(69.26%,320/462)、分枝杆菌分离培养(43.61%,403/924)、AFB-AS(43.22%,599/1386)、传统抗酸杆菌染色镜检(38.24%,530/1386)。AFB-AS检测痰标本阳性率明显高于传统抗酸杆菌染色镜检,差异有统计学意义(χ²=67.015,P<0.01)。AFB-AS与传统抗酸杆菌染色镜检判读阳性结果等级的相关系数为0.954。以分枝杆菌分离培养结果为参照,AFB-AS检查肺结核患者痰标本敏感度为94.29%(380/403)、特异度为90.40%(471/521)、阳性预测值为88.37%(380/430)、阴性预测值为95.34%(471/494),Kappa值为0.841。结论 AFB-AS检测肺结核患者痰液标本具有较好的应用价值,检验性能能够满足实施萋-尼抗酸染色查找抗酸杆菌项目的要求。     

液基夹层杯技术检测抗酸杆菌应用性研究

目的评价液基夹层杯技术检测抗酸杆菌的应用价值。方法收集1 190例肺结核可疑症状者的642份晨痰标本和1 140份即时痰标本,每份痰标本均采用液基夹层杯技术、直接涂片查找抗酸杆菌技术和罗氏结核分枝杆菌培养技术进行检测,比较直涂法、液基法与培养法对痰标本的阳性检出率,并在以培养法为金标准的前提下考察液基法、直涂法的灵敏度和特异度,同时评价晨痰和即时痰、1次痰和2次痰对肺结核涂阳病人发现的差异。结果液基法、直涂法和培养法对642份晨痰标本的阳性检出率分别为23.5%、12.7%和26.6%,对1 140份即时痰的阳性检出率分别为18.1%、9.6%和23.3%。以培养法作为金标准,液基法的灵敏度和特异度分别为68.9%和95.8%,并与直涂法相对应的指标差异有统计学意义(P0.05)。液基法检测表明:642份晨痰阳性检出率显著高于1 140份即时痰阳性检出率(P0.05)。结论液基法能够提高痰标本的灵敏度,特异度较高,操作标准化,且所需设备简单,便于基层开展,是一种可能具有推广价值的检测方法。     

纤支镜灌洗液的结核分支杆菌快速培养对不典型肺结核的诊断价值

目的　评价纤维支气管镜(以下简称纤支镜)支气管肺泡灌洗液(BALF)的结核分支杆菌快速培养对不典型肺结核的诊断价值。方法 选无痰或痰菌阴性的不典型肺结核患者49例行纤支镜检查,进行活检、刷检、BALF经BBLMGIT分支杆菌快速培养查结核杆菌。结果 49例经纤支镜刷检、BALF快速培养结核分支杆菌检出率分别是67.4%、83.7%,其中15例经纤支镜肺活检,10例病理证实为结核肉芽肿,检出率为66.7%。结论 纤支镜对无痰或痰菌阴性下BALF行结核分支杆菌快培对不典型肺结核具有较高的诊断价值,快速,阳性率较高。根据镜下所见采用不同的取材方法可望提高诊断率。     

术后标本行分子生物学检测对结核病患者诊疗的价值

目的 初步探讨分子生物学检测技术在结核病患者术后快速诊断中的价值。方法 回顾性分析2015年1月至2018年2月期间在上海市公共卫生临床中心胸外科接受手术治疗、临床资料齐全的170例结核病患者。170例患者中,男100例(58.82%)、女70例(41.18%); 1~18岁年龄组18例(10.59%)、19~65岁年龄组142例(83.53%)、66~82岁年龄组10例(5.88%);肺结核39例(22.94%)、肺外结核131例(77.06%)。取术后标本采用PCR膜条杂交及二代测序技术的分子生物学方法进行菌种鉴定和耐药相关基因检测。所有患者术前进行晨痰及穿刺活检,或者术中取样进行抗酸染色涂片检测。在进行痰涂片的同时,进行分枝杆菌改良罗氏固体培养、BACTEC MGIT 960快速培养及药物敏感性试验(简称“药敏试验”)。结果 (1)痰液抗酸染色阳性率为9.41%(16/170),其中肺结核患者的阳性率为23.08%(9/39), 而穿刺活检或者术中取样(脓液或分泌物等)的抗酸染色阳性率为51.76%(88/170)。(2)分枝杆菌培养阳性率为27.65%(47/170),其中耐药结核病检出率为14.12%(24/170)。(3)术后标本分子生物学菌种鉴定阳性率为51.76%(88/170);PCR膜条杂交显示,7例为NTM,4例培养联合MPB64抗原检测结果显示为NTM,但未鉴定到菌种;3例培养结果为阴性,无法进行MPB64抗原检测。7例标本进行了分子生物学菌种鉴定,1例为瘰疬分枝杆菌、戈登分枝杆菌复合感染,3例为胞内分枝杆菌, 1例为海分枝杆菌, 1例为鸟分枝杆菌,1例为脓肿分枝杆菌。(4)除去7例NTM感染患者,剩余的163例进行了分子生物学耐药基因检测,对一线抗结核药物耐药基因的检出率为54.60%(89/163), 对二线抗结核药物耐药基因的检出率为49.69%(81/163);与培养后药敏试验结果相比,药敏试验阳性的标本中有29.79%(14/47)在分子生物学耐药基因检测时的结果为阴性,而分子生物学耐药基因检测与药敏试验检测结果阳性的一致性为90.00%(27/30);分子生物学耐药基因检测与BACTEC MGIT 960快速培养药敏试验联合判断对耐药结核病的检出率为63.19%(103/163)。结论 分子生物学检测技术在术后标本的快速诊断中具有重要的价值,可区分结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌及是否耐药,为结核病患者术后进一步诊治提供重要参考。     

两种实验室技术对肺结核患者手术后不同组织标本的检测结果分析

收集2017年6月至2019年1月就诊于安徽医科大学附属省立医院胸外科,获得肺部组织标本的60例疑诊肺结核患者作为研究对象。对比患者肺部组织病理标本GeneXpert MTB/RIF和抗酸染色的检测结果,评估GeneXpert MTB/RIF和抗酸染色对肺结核患者手术组织标本的检测价值。60例患者中,GeneXpert MTB/RIF检测和抗酸染色的阳性检出率分别为46.7%(28/60)和48.3%(29/60)。5例标本抗酸染色呈阳性,GeneXpert MTB/RIF检测呈阴性,通过分枝杆菌菌种鉴定提示均为结核分枝杆菌。两种方法联合检测的阳性检出率为55.0%(33/60),达到"十三五"全国结核病防治规划要求的病原学检出率提高至50%的目标。研究结论认为,GeneXpert MTB/RIF与抗酸染色方法联合检测肺结核患者肺组织标本,阳性率较高,具有一定的临床应用价值。     

溶血离心培养法检测肺结核患者外周血分支杆菌及其L型

目的　建立一种自血液中分离分支杆菌及其L型的新方法。方法　肺结核患者的外周血直接或溶血离心后取沉淀种入 92 3TB和 92 3TBL液体培养基培养 ,培养物用免疫酶染色 (ABC法 )鉴定。结果　 6 5份标本分支杆菌和分支杆菌L型血培养的阳性率、总检出率分别为 15 %、2 6 %、32 % ;溶血离心培养法的阳性率明显高于直接培养法 (P <0 0 5 ) ;相应痰培养中 ,抗酸杆菌和抗酸菌L型的阳性率、总检出率分别为 38%、2 0 %和 5 2 % ,高于肺结核患者外周血培养的阳性率 (P <0 0 5 ) ;但血、痰配对检测总阳性率可达 6 5 %。结论　肺结核患者外周血存在分支杆菌及其L型 ,并以L型为主 ;溶血离心液体培养结合免疫酶染色可常规用于检测血液中分支杆菌及其L型 ;结合痰标本检测 ,可提高肺结核患者细菌学检查的阳性率     

Fluorescein Diacetate Vital staining for detecting viability of acid-fast bacilli in sputum of pulmonary tuberculosis patients

ObjectiveTo compare the performance of the Fluorescein diacetate (FDA) vital staining method with Ziehl-Neelsen staining method in detecting the viability of acid-fast bacilli using MGIT culture as “reference standard”.MethodsThis was a single centre prospective observational study conducted from October 2015 to November 2016. Microbiologically confirmed ZN-Smear positive (3+) sputum specimens were obtained from 30 pulmonary tuberculosis patients taking anti-tuberculosis treatment at DOTS centre of NITRD, New Delhi. Patients were made available to collect the first baseline sputum sample before commencing treatment, and an early morning sputum sample was collected as per RNTCP guidelines. After starting treatment, sputum specimens were collected weekly in the first month and thereafter twice-weekly until 18th week. All sputum specimens from patients receiving anti-tuberculosis treatment were examined using Ziehl-Neelsen (ZN) smear microscopy, FDA vital staining, and MGIT culture.ResultOut of 360 follow up sputum specimens collected from 30 adult microbiologically confirmed ZN- Smear (3+) pulmonary tuberculosis patients, 146 were ZN-positive and 130 FDA-positive. Of 130 FDA-positive sputum samples, mycobacteria tuberculosis (MTB) growth was found in 116 sputum samples, of which 116 sputum specimens were positive for FDA. Additionally, 14 culture-negative specimens were FDA positive. No FDA-negative sputum samples were positive for MGIT culture. Among ZN positive specimens, FDA had 100% sensitivity and 85.3% specificity with an accuracy of 96.58% for the detection of viable mycobacteria. Among ZN negative sputum specimens, FDA had comparatively high specificity (95.7%). Using positive MGIT culture as a reference for viability, negative predictive value (NPV) and positive predictive value (PPV) from FDA vital staining method were found to be 100 and 89% respectively.ConclusionFDA staining is a simple and rapid tool for identifying viable MTB bacilli. Because of its excellent NPV and encouraging specificity, FDA staining is useful to identify patients with non-viable bacilli (FDA negative) among retreatment cases at diagnosis and patients on anti-tuberculosis treatment for both drug-sensitive and drug-resistant tuberculosis for follow up for the response of treatment.     

聚合酶链反应检测肺结核患者外周血单个核细胞中结核分 …

探讨外周血单个核细胞中结核分支杆菌ＤＮＡ检测在肺结核诊断中的价值。方法采用改良Ｔｒｉｔｏｎ－ｘ－１００法分离，制备单个核细胞中模板，ＤＮＡ，聚合酶链反应扩增结核分支杆菌２４０ｂｐ基因片段，同时分析了影响ＰＣＲ结果的有关因素。结果８９例肺结核患者的血标本，８４例肺结核患者的痰标本中，结核分支杆菌ＤＮＡ阳性率分别为７３％和５７％；８４例肺结核患者外周血，痰标本配对检测总阳性率可达８７％。     

液基夹层杯技术用于基层实验室结核病诊断的可行性研究

目的 评价液基夹层杯法在基层实验室用于结核病诊断的可行性及安全性。 方法 在泰兴、江阴CDC两个县级结核病实验室,对385例疑似肺结核患者的754份痰标本同时采用液基夹层杯法与直接痰涂片法进行镜检,结合临床诊断,比较2种方法的阳性检出率。采用四格表Fisher确切概率法进行比较,并进一步比较两种方法对不同性状、不同时间收集的痰标本的阳性率。选取12份阳性痰标本,设定不同的痰消化液比例,不同的消化时间,加热与否处理痰标本,将处理后的消化液接种到罗氏培养基,37℃培养,通过比较生长情况评价液基法的安全性。 结果 液基夹层杯法、直接痰涂片法对754份痰标本的阳性检出率分别为23.5%(177/754)、16.8%(127/754),检测结果差异有统计学意义（χ²=48.02,P=0.000）;比较不同性状、不同时间采集的痰标本采用两种方法的检测结果,得出脓痰直涂法阳性检出率为40.9%（81/198）,液基法阳性检出率为47.5%（94/198）,两种方法对于脓痰的检测结果差异有统计学意义（Fisher确切概率法,P_确切概率＜0.001）;非脓性痰（包括血痰、黏液痰、口水痰）直涂法阳性检出率为4.7%（9/193）,液基法阳性检出率为13.5%(26/193),差异有统计学意义（P_确切概率值均＜0.001）。安全性试验发现经消化液处理的痰标本,培养8周后未见结核分枝杆菌生长。 结论 液基夹层杯法提高了疑似肺结核患者细菌学检查的阳性检出率,且操作简单、安全性高,适合在基层实验室应用并便于开展质量控制,是一种很有推广价值的检测方法。