四逆散有效成分对内脏高敏感大鼠5-HT信号通路的多靶点协同调控

目的:研究芍药苷、辛弗林、甘草酸对内脏高敏感大鼠5-羟色胺(5-HT)信号通路的多靶点[色氨酸羟化酶1(TPH1)/5-羟色胺转运体(SERT)/5羟色胺3受体(5-HT3R)/5-HT4RI调控,探讨各成分间的协同交互作用,探索四逆散有效成分干预内脏高敏感状态的潜在机制。方法:SD大鼠随机分为正常组,模型组,匹维溴铵组(15 mg·kg-1),芍药苷组(50 mg·kg-1),辛弗林组(50 mg·kg-1),甘草酸组(50 mg·kg-1),芍药苷+甘草酸组(25 mg·kg-1+25 mg·kg-1),芍药苷+辛弗林组(25 mg·kg-1+25 mg·kg-1),辛弗林+甘草酸组(25 mg·kg-1+25 mg·kg-1),芍药苷+辛弗林+甘草酸组(16.7 mg·kg-1+16.7 mg·kg-1+16.7 mg·kg-1),四逆散组(10 g·kg-1)。采用复合应激法建立肠易激综合征(IBS)内脏高敏感大鼠模型;以大鼠一般状态评分和直肠扩张腹壁撤退反射(AWR)的最小容量阈值评价大鼠肠道敏感性程度;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠结肠组织5-HT,TPH1,SERT,5-HT3R,5-HT4R水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠结肠组织TPH1,5-HT3R,5-HT4R mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠结肠组织TPH1,5-HT3R蛋白水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠一般状态评分和最小容量阈值显著下降(P0.01),结肠组织5-HT,TPH1,5-HT3R水平显著升高,SERT,5-HT4R水平明显降低(P0.05,P0.01),TPH1,5-HT3R mRNA及蛋白表达显著升高,5-HT4R mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01)。与模型组比较,芍药苷+辛弗林+甘草酸组结肠5-HT,TPH1,5-HT3R水平明显降低,SERT,5-HT4R水平明显升高,TPH1,5-HT3R mRNA及蛋白表达明显降低,5-HT4R mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01);TPH1,5-HT3R,5-HT4R mRNA多靶点纠偏作用明显,最小容量阈值和一般状态评分明显升高(P0.05,P0.01),组内成分之间存在协同交互作用。结论:芍药苷+辛弗林+甘草酸组合对內脏高敏感大鼠结肠5-HT合成限速酶(TPH1)和相关受体(5-HT3R,5-HT4R)具有协同增效的调控作用,有效成分组合对5-HT通路的多靶点纠偏效应可能是四逆散改善大鼠内脏高敏感状态的重要机制。     

四逆散中主要有效成分芍药苷对睡眠影响的实验研究

目的 研究四逆散中主要有效成分芍药苷对睡眠的影响,为确定四逆散改善睡眠作用药效物质基础提供可靠的方法 依据.方法 采用四逆散中主要有效成分芍药苷对阈剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间影响的分析研究,来研究其对睡眠的影响.结果 四逆散中主要有效成分芍药苷可明显延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间,与空白组比较,具有极显著性差异(P<0.01).结论 四逆散中主要有效成分芍药苷在延长阈剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间上确实有效,且实验重现性较好,从而肯定了四逆散中主要有效成分芍药苷治疗失眠的作用.为四逆散改善睡眠作用的药效物质基础及机制的研究提供了可靠依据.     

赤灵芝对小鼠镇静催眠作用的研究及机制分析

目的研究赤灵芝的中枢镇静催眠作用,并初步探讨其作用机制。方法通过给予阈下剂量和阈剂量的戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠(腹腔注射),记录其入睡情况、睡眠潜伏期和睡眠持续时间,用酶联反应法测定小鼠脑匀浆液中GABA、Glu、Gln、5-HT和5-HIAA含量。结果与蒸馏水组比较,阈下剂量的戊巴比妥钠可使赤灵芝组小鼠入睡率增加(P0.05)。赤灵芝组小鼠脑内GABA、5-HT含量显著上升(P0.01),Glu、Gln含量显著下降(P0.01)。结论赤灵芝可能通过增加小鼠脑内GABA、5-HT含量,降低Glu、Gln含量,来发挥一定的镇静、催眠作用。     

三清安眠汤剂的镇静催眠作用及作用机制探讨

目的:考察三清安眠汤剂是否具有镇静催眠作用,及其可能的五羟色胺能机制。方法:连续灌胃给药14天后测定对正常小鼠和给与咖啡因导致中枢兴奋小鼠自主活动的影响,测定对正常小鼠与阈上戊巴比妥钠催眠作用的协同作用;连续灌胃给药21天后测定对正常小鼠与阈下戊巴比妥钠催眠作用的协同作用;连续灌胃给药14天后,用HPLC-电化学检测器测定对正常大鼠海马5-HT含量的影响。结果:三清安眠汤剂显著减少正常小鼠和咖啡因导致中枢兴奋小鼠的自主活动;与阈上和阈下剂量的戊巴比妥钠有显著性的协同作用;显著升高正常大鼠海马5-HT的含量。结论:在本实验条件下,三清安眠汤剂对实验动物具有显著的镇静催眠作用其作用机制可能与升高海马5-HT的含量有关。     

龙胆碱镇静催眠作用及对小鼠脑内5-HT、GABA含量的影响

目的探讨龙胆碱的镇静、催眠作用,并观察其对脑内递质5-HT、GABA含量影响,初步探讨龙胆碱镇静催眠作用的机制。方法腹腔注射不同剂量的龙胆碱溶液,观察其对ICR小鼠自主活动的影响,协同戊巴比妥钠对小鼠的催眠作用;ELASA法测定脑匀浆液中GABA、5-HT含量。结果龙胆碱高、低(200 mg/kg、50 mg/kg)均能减少小鼠自主活动次数(P<0.05),增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡的只数并延长小鼠睡眠时间,龙胆碱能够增加脑内GABA含量,但对5-HT含量无影响。结论龙胆碱具有良好的镇静、催眠作用,其作用与增加脑内GABA含量有关。     

红景天苷对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间影响的实验研究

目的观察红景天苷对戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响.方法本实验采用延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间的实验,研究红景天苷镇静催眠的药理作用.翻正反射消失即睡眠开始,实验指标为睡眠潜伏期和睡眠持续时间.结果红景天苷能明显缩短戊巴比妥钠(55mg/kg,i.P.)所致小鼠睡眠的睡眠潜伏期和显著延长睡眠持续时间.结论红景天苷具有明显的镇静催眠作用,且量效关系显著.     

HPLC-DAD法分析栝楼桂枝汤血中移行成分

目的研究栝楼桂枝汤血中移行成分。方法采用HPLC-DAD全波长扫描法,色谱柱:Diamonsial C18(460×250 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱;流速:0.8 m L/min;柱温:30℃;进样量:10μL。结果采用相对保留时间和DAD全波长扫描图相结合,推测大鼠灌胃给药栝楼桂枝汤后含药血清中有22个入血移行成分,并经标品比对鉴定其中16个化合物:没食子酸、氧化芍药苷、芍药苷亚硫酸酯、芍药内酯苷、芍药苷、芹糖甘草苷、甘草苷、五没食子酰葡萄糖、芹糖异甘草苷、异甘草苷、芒柄花苷、甘草素、肉桂酸、苯甲酰芍药苷、异甘草素、甘草酸。结论本研究基于DAD全波长扫描法分析复方血中移行成分,为揭示栝楼桂枝汤在体内抗脑卒中后肢体痉挛与神经保护药效物质提供一定实验依据。     

花生茎叶不同提取部位对小鼠镇静催眠作用的初步探讨

目的:初步探讨花生茎叶镇静催眠的活性部位及作用机制。方法:观察花生茎叶水提物(10、30、100 g/kg)对小鼠自主活动和阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠的影响,确定花生茎叶水提物有效剂量。将花生茎叶水提物进一步用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次提取,得到极性由小到大的3个提取部位,分别观察花生茎叶上述提取部位对小鼠自主活动和阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠的影响,以确定有效部位;观察花生茎叶不同提取部位对小鼠脑内单胺类递质的影响,以初步探讨其镇静催眠作用机制。结果:花生茎叶水提物(生药100 g/kg)能减少小鼠自主活动次数,增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡率;花生茎叶石油醚部位和乙酸乙酯部位能显著减少小鼠自主活动次数、增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡率,升高小鼠脑内5-HT含量。结论:花生茎叶的石油醚部分和乙酸乙酯部位是镇静催眠作用的有效部位,其镇静催眠作用机制可能与提高小鼠脑内5-HT水平有关。     

基于炮制与配伍探究四逆散在抑郁模型大鼠体内代谢成分的差异

目的 研究炮制与配伍对四逆散中主要有效成分在抑郁模型大鼠血浆、胆汁、尿液及粪便中代谢成分的差异。方法 建立慢性不可预期温和应激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）抑郁大鼠模型,造模结束后分别ig柴胡、白芍、柴胡-白芍药对、四逆散及含醋炙柴胡和醋炙白芍的四逆散提取物,并在连续ig 7 d后收集24 h尿液及粪便,再次ig收集血浆及胆汁。采用超高效液相色谱-四极杆飞行质谱（UPLC-Q-TOF/MS）技术对血浆、胆汁、尿液及粪便样本进行检测,并结合PeakView^TM和MetabolitePilot^TM软件进行鉴定分析。结果 依据代谢途径和离子碎片信息,推测柴胡皂苷a、柴胡皂苷b₂、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷、氧化芍药苷、橙皮苷、橙皮素、柚皮苷、甘草苷、甘草酸以及甘草素在抑郁模型大鼠体内主要以原型、脱糖、脱氧、去甲基化、氧化、甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸化等形式存在。最终在柴胡组中鉴定了27种代谢产物,在白芍组中鉴定了30种代谢产物,在柴胡-白芍药对组中鉴定了52种代谢产物,在四逆散组中鉴定了118种代谢产物,在含醋炙柴胡和醋炙白芍的四逆散组中鉴定了168个代谢产物。结论 在抑郁模型大鼠体内,配伍前后的“单味药-药对-复方”和炮制前后的“生品-醋炙品”的代谢产物存在较大差异。即经醋炙及配伍后,14种主要活性成分的原型及其代谢产物的分布更为广泛,且醋炙在一定程度上促进了某些成分参与肝肠循环,进一步为四逆散抗抑郁作用的药效物质研究奠定基础,同时也为阐明炮制与配伍机制提供科学依据。     

手参镇静催眠作用的实验研究

目的：探讨手参对小鼠镇静催眠作用。方法：用自发活动仪记录法记录5min内各小鼠自发活动次数,用公式计算给药组小鼠的自发活动抑制率;利用协同戊巴比妥钠睡眠时间实验法和阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠实验,观察藏药手参的催眠作用。结果：手参可抑制小鼠的自发活动,减少小鼠双前肢的抬举次数,能够明显延长阈上剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠持续时间和增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠的入睡个数。结论：手参具有镇静、催眠作用。     

HPLC法同时测定四逆散中8种成分

目的建立HPLC法同时测定四逆散(甘草、白芍、枳实等)中没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、橙皮苷、槲皮素、甘草酸、柠檬苦素、川陈皮素的含量。方法该药物20%甲醇提取液的分析采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相乙腈-水(含0.1%磷酸),梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温35℃;检测波长210、240 nm。结果8种成分在各自范围内线性关系良好(R²≥0.9990),平均加样回收率94.21%~100.12%,RSD 0.56%~2.41%。结论该方法简便、准确、稳定,重复性好,可用于四逆散的质量控制。     

四逆散冻干粉中柚皮苷和甘草次酸含量的测定

目的对四逆散冻干粉两种成分含量的测定,为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。方法利用高效液相色谱(HPLC)方法,梯度洗脱。色谱条件为:Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流速1.0 ml/min,柱温28℃,流动相A为甲醇;流动相B为磷酸水(pH=3),流动相A梯度洗脱(90%~75%乙腈),分析时间为25 min。结果四逆散中两种主要化学成分含量测定结果:柚皮苷为2.41%,甘草次酸为2.33%,符合《中国药典》2005年版标准。结论根据上述测定结果,采用HPLC方法测定四逆散中两种主要化学成分的含量,操作简单,可靠,重复性好,可作为四逆散药材质量控制的有效方法。     

HPLC法同时测定十三味和中丸中9种成分

目的建立HPLC法同时测定十三味和中丸(柴胡、枳壳、延胡索等)中芍药苷、延胡索乙素、盐酸小檗碱、柚皮苷、橙皮苷、黄芩苷、甘草酸、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含有量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Waters Sunfire^TM C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.2%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长210、230、283、345 nm。结果 9种成分在各自范围内线性关系良好(R²≥0.999 1),平均加样回收率95.1%～102.3%,RSD 0.48%～3.11%。结论该方法简便可靠,可用于十三味和中丸的质量控制。     

基于UPLC-PDA-MS/MS技术的四逆散水煎液体内外物质基础研究

目的:采用液质联用技术,分析四逆散水煎液体外化学成分及血中移行成分,对其体内外物质基础进行研究。方法:采用ACQUITY UPLCTMBEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-2 mmol.L-1醋酸铵水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL.min-1,柱温35℃;质谱采用ESI源,正负离子同时检测,在m/z 100～1 000进行扫描,并对特征离子进行2次裂解,获得二级质谱数据。结果:在四逆散水煎液中,检测到芍药苷、甘草酸、柴胡皂苷a及柚皮苷等20种化学成分。在体内样品中,发现芍药苷、柚皮苷、橙皮苷等8种成分以原型入血;同时还检测到6种代谢物,包括葡萄糖醛酸结合物、硫酸酯结合物及葡萄糖醛酸硫酸酯结合物等。结论:采用UPLC-PDA-MS/MS技术分析四逆散水煎液的体内外化学成分,能比较全面、快速地反映四逆散水煎液的体内外物质基础,为进一步研究四逆散的药效物质基础提供依据。     

加味四逆散对恶劣心境障碍模型大鼠海马单胺类神经递质的影响

目的:观察加味四逆散对大鼠恶劣心境障碍模型海马单胺类神经递质的影响。方法:选择OPEN-FIELD法评分相近的40只成年SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀组、加味四逆散小剂组和加味四逆散大剂组,每组各8只。应用分养和长期不可预见性中等强度应激造成大鼠恶劣心境障碍模型。以HPLC-EC法对照研究恶劣心境障碍大鼠海马单胺类神经递质的改变。结果:①与对照组比,模型组海马NE和5-HT含量下降。②与模型组比,氟西汀组、加味四逆散小剂组和大剂组海马NE和5-HT含量升高。结论:结果提示恶劣心境障碍模型大鼠海马去甲肾上腺素和5-羟色胺的量降低,加味四逆散对恶劣心境障碍的治疗机理可能与升高海马NE和5-HT的含量,平衡去甲肾上腺素能和5-羟色胺能神经的功能状态有关。     

加味四逆颗粒大孔树脂精制工艺研究

目的对加味四逆颗粒大孔树脂吸附精制的方法进行工艺考察，选取最佳工艺条件。方法采用正交试验设计，以柴胡皂苷A、芍药苷、橙皮苷、甘草酸4种成分为指标，采用HPLC法对上述指标成分进行含量测定。结果选用AB-8型大孔树脂，每克树脂的最大吸附量分别为柴胡皂苷A2．8mg、芍药苷62.8mg、橙皮苷49.6mg、甘草酸84.9mg，上样药液浓度为0.5g（原药材）／mL、树脂柱的径高比为1：7、吸附流速为2BV／h为最佳上样工艺。结论大孔树脂吸附法可用干加味四逆颗粒的精制。     

加味四逆散对慢性应激模型大鼠下丘脑单胺类神经递质的影响

目的:观察加味四逆散对慢性应激模型大鼠下丘脑单胺类神经递质的影响。方法:选择OPEN-FIELD法评分相近的40只成年SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀组、加味四逆散小剂量组和加味四逆散大剂量组,每组各8只。应用分养和长期不可预见的中等强度应激造成大鼠慢性应激抑郁状态。以HPLC-EC法对照研究大鼠下丘脑单胺类神经递质的改变。结果:与对照组比,模型组大鼠下丘脑NE升高,5-HIAA和5-HT降低。与模型组比,氟西汀组、加味四逆散组NE降低而5-HIAA和5-HT升高。结论:慢性应激模型大鼠下丘脑单胺能神经功能活动失常,以去甲肾上腺素的升高和5-羟色胺的下降为主,加味四逆散的作用机理可能与平衡下丘脑单胺能神经的功能状态有关。     

一测多评法同时测定解郁胶囊中9种成分

目的建立一测多评法同时测定解郁胶囊(丹参、柴胡、石菖蒲等)中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、丹参素、丹酚酸B、丹参酮ⅡA的含有量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Agilent Extend-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量0.9 mL/min;柱温30℃;检测波长210、230、280 nm。以芍药苷为内标,计算其他8种成分的相对校正因子,测定其含有量。结果 9种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 1),平均加样回收率96.97%~100.18%,RSD 0.60%~1.51%,一测多评所得结果与外标法接近。结论该方法稳定可靠,可用于解郁胶囊的质量控制。     

正交试验法优选柴胡消瘿颗粒的乙醇提取工艺

目的:优选柴胡消瘿颗粒的醇提工艺,为该制剂的临床用药提供参考。方法:以干膏率和芍药苷、橙皮苷、柴胡皂苷a及柴胡皂苷d含量的综合评分为指标,通过正交试验考察乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间及提取次数对醇提工艺的影响。采用HPLC测定指标成分含量,柴胡皂苷类成分的流动相乙腈(A)-0.1%磷酸水(B)梯度洗脱(0~10 min,10%~25%A;10~25 min,25%~35%A;25~33 min,35%~45%A;33~50 min,45%A;50~55 min,45%~10%A),检测波长210 nm;芍药苷与橙皮苷的流动相乙腈-0.2%乙酸(15∶85),检测波长分别为230,283 nm。结果:最佳提取工艺为加6倍量60%乙醇回流提取2次,每次1.5 h。干膏率35.98%,干膏中芍药苷、橙皮苷、柴胡皂苷a+d的质量分数分别为0.944%,1.543%,0.089%。结论:优选的提取工艺科学合理、稳定可行,为柴胡消瘿颗粒的工业化生产提供参考。