蟾酥注射液联合同步放化疗治疗局部晚期胰腺癌的临床研究

目的：探讨蟾酥注射液联合同步放化疗治疗局部晚期胰腺癌的疗效和毒性反应。方法：2010年1月-2012年5月共收治局部晚期胰腺癌患者28例,实验组17例采用蟾酥注射液联合同步放化疗治疗;对照组仅采用同步放化疗。放疗采用调强适形放疗（IMRT）,DT：50-60Gy;同步化疗方案为：吉西他滨1000mg,dl,d8,d15。四周重复与放疗同步,放疗结束后行同方案化疗,共4-6周期。结果：所有患者均完成同步放化治疗。治疗组有效率为76.5%,对照组有效率为72.7%,两组比较无统计学差异（P〉0.05）;毒副作用主要是骨髓抑制和胃肠道反应,骨髓抑制和胃肠道反应 I-IV 比较有统计学差异（P〈0.05）,肝肾功能损伤I-IV比较无统计学差异（P〉0.05）。结论：蟾酥注射液联合同步放化疗治疗局部晚期胰腺癌疗效显著,能够缓解同步放化疗毒副反应。     

蟾酥注射液质量标准的研究

研究了蟾酥注射液的质量标准,建立了蟾酥的ＴＬＣ方法,用紫外分光光度法以５－羟色胺作对照品,测定了样品中水溶性吲哚类总生物碱的含量,平均回收率为９７．２６％,变异系数为１．１２％。该法可作为该制剂的质量控制方法。     

复方蟾酥缓释滴丸的制备及其体外释放性能考察

目的:根据蟾酥有效成分难溶于水、血药浓度波动大、易产生毒副作用等特点,将蟾酥与灵芝联合应用后制成复方蟾酥缓释滴丸,以改善蟾酥的副作用。方法:以聚乙二醇4000(PEG4000)和硬脂酸为基质,利用熔融法制备复方蟾酥缓释滴丸。以滴丸滴制情况为指标,采用单因素试验考察滴丸成型因素。以圆整度、丸重差异及释放度为指标,采用正交试验优化复方蟾酥缓释滴丸的制备工艺。结果:最佳制备工艺为药物-基质(1∶2),PEG4000-硬脂酸(5∶1),熔融温度80℃,滴距8 cm,冷凝液管口温度50~5℃;缓释滴丸在体外释放达12 h,符合Ritger-Peppas方程模型。结论:优选的复方蟾酥缓释滴丸制备工艺稳定可行,能够使蟾酥的血药浓度波动降低、毒副作用减少,符合临床治疗需要。复方蟾酥缓释滴丸的释放更接近于non-Fickian扩散,其释药机制为扩散和骨架溶蚀两者的结合。     

治疗耳聋的地塞米松原位凝胶给药系统的研究

 目的探索温度敏感原位凝胶作为内耳局部给药载体的可行性,为其治疗耳聋提供依据。方法以泊洛沙姆407为基质制备地塞米松磷酸钠(DSP)温度敏感原位凝胶,测定其低临界溶液温度(LCST)。建立DSP和地塞米松(Dex)HPLC测定方法；考察凝胶中药物的稳定性；采用扩散池方法评价其体外释放行为；与溶液剂相比较,研究鼓室注射载药原位凝胶后耳蜗外淋巴液中药动学规律。结果制得的DSP温度敏感原位凝胶的LCST为26.5℃,制剂较稳定,体外释放遵循Higuchi方程。鼓室注射DSP原位凝胶,药物在内耳组织的局部生物利用度显著提高,AUC是静脉注射DSP溶液的492.8倍；而且其缓释特征明显,同鼓室注射DSP溶液相比,MRT增加了近5倍。结论温度敏感原位凝胶传递系统可望成为一种新型的内耳局部给药系统,值得进一步开发研究。     

蟾酥注射液对恶性腹水的实验研究

目的:探讨蟾酥注射液对恶性腹水的作用机理。方法:将30只荷瘤昆明小鼠随机分为3组。给小鼠腹腔注射药物:蟾酥注射液组(简称治疗组1:注射蟾酥注射液每次1.5mL/只)、环磷酰胺组(简称治疗组2:注射环磷酰胺,每次以生理盐水稀释0.5mL中含0.5mg的环磷酰胺/只)和生理盐水组(简称对照组:每次注射生理盐水0.5mL/只。),每组10只。全部组隔离5天注射1次,共给药3次。每次注射前,称体重1次,最后1次注射后5天,采集血液,检测T淋巴细胞CD3、CD4、CD8,肿瘤坏死因子。结果:显示小鼠体重治疗组与对照组比较P<0.05,治疗组之间比较P>0.05;T淋巴细胞CD3治疗组与对照组比较P<0.05,治疗组之间比较P>0.05,CD4治疗组与对照组比较P>0.05,治疗组之间比较P>0.05;CD8治疗组与对照组比较P<0.05,治疗组之间比较P>0.05;肿瘤坏死因子治疗1组与对照组比较P<0.01,治疗2组与对照组比较P>0.05,治疗组之间比较P<0.05。结论:蟾酥注射液对恶性腹水具有抑制作用,能够提高免疫功能,其对免疫功能的影响,主要是通过提高CD、降低CD,使CD/CD比值降低体现,与环磷酰胺相比效果更优。     

蟾酥注射液治疗恶性胸腔积液的临床观察

目的观察蟾酥注射液联合顺铂治疗恶性胸腔积液的临床疗效。方法将48例恶性胸腔积液患者随机分成治疗组:胸腔注射蟾酥注射液20 m l和顺铂40 mg 生理盐水20 m l,对照组:胸腔注射顺铂40 mg 生理盐水20 m l,每周1次,2~3周为1个疗程,1个月后进行疗效评价。结果治疗组26例,有效率(CR NR)80.8%,对照组22例,有效率(CR NR)50.0%,两组间有显著性差异(P<0.05)。结论蟾酥注射液与顺铂合用治疗恶性胸腔积液临床疗效好,毒副反应轻,值得推广应用。     

蟾酥注射液对Lewis肺癌的实验研究

目的:探讨蟾酥注射液治疗Lewis肺癌小鼠的作用机理。方法:60只荷瘤C57BL/6小鼠,30只为一单元,其中一单元随机分为3组。给小鼠腹腔注射药物:蟾酥注射液组(治疗1组)、环磷酰胺组(治疗2组)和生理盐水组(对照组),每组10只。全部组隔5天注射1次,共给药3次。另一单元30只以相同方法分成3组,注射药物后仅记录生存时间。结果:实验后小鼠体重治疗1组与治疗2组、对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。CD3、CD8治疗1组、治疗2组与对照组比较,CD4治疗1组与治疗2组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。治疗1组生存期最长,与治疗2组、对照组比较,差异有显著性或非常显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论:蟾酥注射液对Lewis肺癌小鼠能够提高免疫功能,其对免疫功能的影响,主要是通过提高CD3、CD4,降低CD8,与环磷酰胺相比效果更优,并且蟾酥注射液可以延长荷瘤小鼠的生存期。     

蟾酥注射液抑制淋巴瘤U937细胞增殖和诱导其凋亡的研究

目的揭示蟾酥注射液(Chansu Injection,CHS)体外抑制淋巴瘤U937细胞增殖的机制.方法采用MTT法检测CHS对淋巴瘤U937细胞增殖的影响;采用Giemsa染色和透射电镜技术观察CHS处理的U937细胞形态学和超微结构变化;采用琼脂糖凝胶电泳检测CHS处理的U937细胞的DNA片段化.结果CHS 24h对淋巴瘤U937细胞增殖出现抑制(P＜0.05).CHS处理的U937细胞光镜和电镜出现核着边、核碎片和凋亡小体;CHS处理的U937细胞DNA电泳出现DNA梯状图谱.与对照组比,2.25×10-1μg·mL-1CHS作用,24,48,72h后凋亡指数(AI)升高(P＜0.05),2.25,2.25×10-1,2.25×10-2μg·mL-1CHS作用48h的U937细胞AI升高(P＜0.05).结论CHS蟾酥注射液体外抑制淋巴瘤U937细胞增殖,并且诱导其凋亡.诱导凋亡可能是CHS抑制淋巴瘤细胞增殖的机制.     

蛇床子提取液的局部麻醉作用

蛇床子提取液对蟾蜍离体坐骨神经有阻滞麻醉作用;对豚鼠有浸润麻醉作用,并可被盐酸肾上腺素所增强;对家兔有椎管麻醉作用,但对兔角膜没有表面麻醉作用;可明显增强阈下催眠剂量的戊巴比妥钠对小鼠的催眠作用。     

利用聚多巴胺制备丹参注射液缓释制剂的研究

目的:利用聚多巴胺(PDA)对丹参注射液中多成分进行负载,构建丹参注射液(SMI)缓释制剂(PDA-SMI)。方法:建立丹参注射液的原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B3种成分的分析方法并进行含量测定;制备PDA,在pH值2.5的条件下对SMI进行负载,制备PDA-SMI;对PDA-SMI体外释放行为进行考察。结果:SMI中原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的浓度分别为0.344、0.214、0.262 mg/mL;PDA-SMI对原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的载药量分别为8.59%,15.90%和20.57%;PDA-SMI中原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B体外累计释放率分别为84.05%,77.57%和63.12%。结论:PDA可以负载SMI的多种成分,载药量较高,并具有良好的缓释效应。     

蟾酥提取工艺优化与提取物体外抗肿瘤活性研究

目的优化蟾酥中脂溶性成分华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的提取工艺,并探讨蟾酥提取物对人宫颈癌HeLa细胞和卵巢癌SKOV-3细胞的增殖及细胞周期的影响。方法采用U5（54）均匀设计,考察酒精浓度、酒精用量、提取时间等因素对指标性成分提取的影响;MTT法检测蟾酥提取物对HeLa与SKOV-3细胞增殖的影响;流式细胞技术检测细胞周期变化;倒置显微镜下观察HeLa和SKOV-3细胞形态变化。结果以100倍量95%酒精加热回流提取2次,每次2.5 h,两种指标性成分转移率最大,为（117.20±3.52）%;蟾酥提取物呈时间和剂量依赖性地抑制HeLa和SKOV-3细胞增殖;随着蟾酥提取物剂量的增加,HeLa细胞出现S期和G2/M期阻滞,SKOV-3细胞出现G0/G1期阻滞,两种细胞均出现空泡样变性。结论均匀设计法优选蟾酥有效成分的提取工艺合理可行;蟾酥提取物可显著抑制HeLa和SKOV-3细胞的增殖,使细胞出现空泡样变性,并阻滞细胞周期。     

高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱分析蟾酥有效成分

 目的采用高效液相色谱-高分辨电喷雾飞行时间质谱(HPLC-DAD/ESI-TOF-MS)联用技术,对蟾酥中的部分有效成分进行初步分析,探讨HPLC-DAD/ESI-TOF-MS联用技术作为蟾酥质量控制方法的可行性。方法采用Agilent C₁₈色谱柱,以乙腈和水(含体积比0.1%醋酸)为流动相,采用梯度洗脱,流速为0.8mL·min^-1,室温,DAD检测器检测波长为291nm,ESI-TOF-MS采用正离子模式。通过HPLC-ESI-TOF-MS在线测定部分化合物的精确分子量,结合文献报道,对蟾酥毒素进行鉴别。结果结合文献报道,在色谱峰当中对12个主要色谱峰进行鉴定。结论高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用技术是蟾酥质量控制的有效方法。     

高效液相色谱法测定蟾酥中有效成分的含量

目的:建立HPLC法测定蟾酥药材中有效成分的含量。方法:选用0.5%磷酸二氢钾溶液乙腈(50:50)(磷酸调节pH为3.25±0.02)为流动相测定蟾酥药材中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量。结果:测定组分具有良好的线性关系和分离度,华蟾酥毒基的平均回收率为100.35%,RSD=1.86%,脂蟾毒配基的平均回收率为100.38%,RSD=2.09%。结论:本方法简便、快速、准确,具有实用性     

蟾酥抗肿瘤有效成分的活性追踪分离及急性毒性研究

目的从传统中药蟾酥中寻找抗肿瘤活性强而毒性低的化合物。方法采用追踪分离的方式,以体外肿瘤细胞生长抑制强度为活性指标,同时结合小鼠急性毒性实验,对蟾酥的主要化学成分进行初步研究。结果采用活性追踪分离方式,从蟾酥中分离得到具有抑制肿瘤细胞生长活性同时对小鼠急性毒性较低的化合物蟾毒它灵,其对人非小细胞肺癌A549细胞具有较好的生长抑制作用,小鼠iv给药的LD50约为蟾毒灵的4倍,而且稳定性较好。结论综合化合物的活性、毒性及稳定性等因素,初步判断蟾毒它灵较其他同类化合物具有更好的抗肿瘤药物开发前景。     

蟾酥乳膏透皮吸收及促进伤口愈合作用的初步研究

目的:将制备的蟾酥乳膏剂进行体外透皮吸收实验并评价其对皮肤伤口愈合的效果。方法:利用体外Franz扩散池法测定蟾酥乳膏的体外透皮吸收率;采用小鼠断尾法测定小鼠止血时间及出血量;根据全层皮肤缺损法制备兔皮肤缺损模型,考察乳膏对兔皮肤伤口愈合的影响。结果:实验结果表明,制备乳膏剂光泽度、细腻度、延展性良好,具有良好的稳定性,透皮吸收率高,并能缩短小鼠断尾止血时间、减少出血量,并且可以促进家兔皮肤伤口愈合(P<0.05)。结论:本实验确定了蟾酥乳膏剂的体外透皮吸收量,并进行了初步的药效试验。家兔皮肤伤口愈合实验结果:蟾酥乳膏在给药1周后表现出促进伤口愈合的效果,且涂抹乳膏后未见兔皮肤出现红斑、红肿,显示了蟾酥乳膏具有一定的安全性。     

蟾酥药材和饮片(蟾酥粉)的质量标准研究

蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans或黑眶蟾蜍B.melanosticus耳后腺及皮肤腺分泌物的干燥加工品。蟾酥粉为蟾酥的酒制加工品。该研究针对现行蟾酥标准局限性和存在问题,结合前期研究,构建改进的蟾酥药材整体质量控制方法和标准,包含采用优化的薄层鉴别方法进行定性鉴别;采用【含量测定】项下的色谱条件建立HPLC特征图谱;完善一测多评法的相对校正因子,并将其用于38批蟾酥药材中蟾蜍甾的含量测定,制定合理含量限度。在此基础上,参照药材拟修订方法,对不同批蟾酥粉进行【性状】、【鉴别】(薄层鉴别)、【特征图谱】、【检查】(水分)和【含量测定】等检测项研究,起草蟾酥粉的质量标准。该研究为完善《中国药典》2020年版蟾酥的质量标准提供参考。     

雷公藤胃漂浮缓释片的制备和质量评价

目的 研制雷公藤胃漂浮缓释片,考察其漂浮和释药性能.方法 采用粉末直接压片法制备雷公藤胃漂浮缓释片,以漂浮性能、雷公藤总二萜内酯的释放度为考察指标,进行处方筛选,并采用正交设计实验对处方进行优化.结果 以羟丙基甲基纤维素(HPMC_(K4M))为骨架材料,十六醇为助漂剂,碳酸氢钠为产气剂,聚维酮为致孔剂,制备了一天给药两次的胃内漂浮型缓释片.该制剂在人工胃液中立即起漂,2h释放约30%,6 h释放约60%,12 h释放90%以上,满足12 h释放要求,体外释药规律符合Higuchi方程,说明本缓释片属于药物扩散和骨架溶蚀混合控释机制.结论 研制的雷公藤胃漂浮缓释片具有良好的漂浮性能和释药特性.     

黄豆苷元介孔二氧化硅纳米粒缓释片制备及口服药动学研究

目的 制备黄豆苷元介孔二氧化硅纳米粒缓释片（daidzein mesoporous silica nanoparticles sustained-release tablets,Dai-MSNs-SRT）,并考察Beagle犬的口服药动学行为。方法 选择羟丙基甲基纤维素K4M（hydroxypropyl methyl cellulose K4M,HPMC K4M）用量、羧甲基淀粉钠（carboxyl methyl starch sodium,CMS-Na）用量和聚乙二醇400（polyethylene glycol 400,PEG 400）用量为主要影响因素,Dai-MSNs-SRT在2、6、12 h累积释放率的综合评分为响应值,采用Box-Behnken设计-效应面法优化IMP-SD-HMSRT最佳处方优化处方工艺。对Dai-MSNs-SRT释药模型和释药机制进行探讨。按10 mg/kg（以黄豆苷元计）进行ig,比较Dai-MSNs-SRT口服药动学行为,并计算相对口服生物利用度。采用Loo-Rigelman法评价Dai-MSNs-SRT体内外相关性。结果 Dai-MSNs-SRT最佳处方为Dai-MSNs粉末350 mg/片,HPMC K4M用量为15.2%,CMS-Na用量为9.5%,PEG 400用量为2.1%。Dai-MSNs-SRT缓释特征明显,12 h累积释放率达94.87%。Dai-MSNs-SRT体外释药符合Higuchi模型,释药机制为扩散和骨架溶蚀并存。药动学结果显示,Dai-MSNs-SRT血药浓度（C_max）波动幅度小,达峰时间（t_max）由（1.53±0.42）h延后至（4.26±0.44）h,半衰期（t_1/2）由（3.26±0.56）h延长至（6.63±2.17）h,与上市品相比,相对生物利用度提高至其1.88倍。Dai-MSNs-SRT在pH7.4磷酸盐缓冲液中体外释放与体内吸收相关性良好。结论 Dai-MSNs-SRT工艺重复性良好,C_max波动幅度小,提高了其生物利用度。     

欧前胡素固体分散体凝胶骨架缓释片的制备及药动学评价

目的 制备欧前胡素固体分散体（imperatorin solid dispersion,IMP-SD）凝胶骨架缓释片（hydrogel matrix sustained-release tablets）（IMP-SD-HMSRT）,并研究口服药动学行为及体内外相关性。方法 溶剂挥发法制备IMP-SD。在单因素考察的基础上,选择HPMC K15M用量、聚乙二醇（PEG）400比例和PEG总用量为主要影响因素,缓释片在2、6、12 h累积释放率的综合评分为响应值,采用Box-Behnken设计-效应面法优化IMP-SD-HMSRT最佳处方,并考察在家兔体内的药动学行为。利用Loo-Rigelman法评价其体内外相关性。结果 IMP-SD-HMSRT最佳处方为HPMC K15M用量为48 mg/片、PEG 400比例为58%、PEG总量为26.5 mg/片。HMSRT的12 h累积释放率达到95.54%。药动学结果显示IMP-SD- HMSRT的C_max波动小,t_max延后至（4.08±0.43）h,与欧前胡素普通片相比IMP-SD-HMSRT的相对生物利用度提高至219.76%。IMP-SD-HMSRT在pH 6.8磷酸盐缓冲液中体外释药行为与体内吸收存在相关性。结论 IMP-SD-HMSRT释药缓慢,促进了药物吸收,体内吸收与体外释药具有良好的相关性。