结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药水平与其耐药基因突变的相关性研究

目的 探讨Mtb耐药相关基因katG、inhA、oxyR-ahpC突变与对INH的耐药水平及rpoB突变与对RFP的耐药水平的关系。 方法 采用微孔板Alamar blue显色法分别检测59株耐INH的Mtb临床分离株对INH和30株耐RFP菌株对RFP的最低抑菌浓度（the minimum inhibitory concentration,MIC）,同时用直接测序法检测对INH耐药菌株katG、inhA、oxyR-ahpC和对RFP耐药菌株rpoB的突变情况。 结果 INH MIC为0.2500~1.0000 μg/ml（低水平耐药菌株）和 MIC≥2.0000 μg/ml（高水平耐药菌株）的INH耐药株,inhA启动子突变率前者高于后者［53.8% (7/13),4.3% (2/46)］,katG 315突变率前者低于后者［15.4% (2/13),76.1% (35/46)］,χ²值分别为15.57和13.48,P值均为0.000。RFP MIC为0.5000～16.0000 μg/ml和MIC≥32 0000 μg/ml的RFP耐药株,rpoB 531和526位总突变率前者低于后者［62.5% (5/8),95.5%(21/22)］,P_确切概率＝0.048。 结论 INH耐药菌株inhA启动子突变与INH低水平耐药有关,katG 315突变与INH高水平耐药有关;rpoB 531和526位突变与RFP高水平耐药有关。     

rpoB基因点突变与结核分枝杆菌对利福平耐药相关性的研究

目的了解浙江地区分离的结核分枝杆菌临床菌株对利福平（RFP）的耐药率及该菌rpoB基因点突变与RFP耐药性的关系。方法从浙江地区肺结核病人的痰液或咽拭子标本中分离并鉴定结核分枝杆菌72株。采用K-B纸片法和E-试验法检测上述结核分枝杆菌临床菌株对RFP的耐药性。采用PCR检测上述结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因携带率。通过对RFP敏感或耐药各10株结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因T-A克隆后测序，了解该基因氨基酸序列第516、526和531位点突变情况及其与RFP耐药性的关系。结果38．9％（28／72）结核分枝杆菌临床菌株对RFP耐药。所有结核分枝杆菌临床菌株均携带rpoB基因。1株RFP敏感的结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因氨基酸序列中出现S526L点突变。5株RFP耐药的结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因氨基酸序列中出现S526L点突变，另5株发生H531D点突变，但均未发现516位氨基酸突变或526和531位氨基酸联合突变。结论浙江地区分离的结核分枝杆菌临床菌株有较高的RFP耐药频率。上述结核分枝杆菌临床菌株对RFP耐药性与rpoB基因氨基酸序列526或531位点突变密切相关。     

快速方法检测耐利福平结核分枝杆菌基因突变的研究

目的建立快速诊断结核杆菌利福平（RFP）耐药的方法，探讨其临床应用价值。方法设计5条覆盖rpoB基因热点突变区域的MGB探针，结合实时PCR方法检测结核杆菌rpoB基因的点突变。结果50株临床分离结核杆菌菌株中，12株RFP耐药株，38株敏感株。双探针实时PCR方法检测结核杆菌13株检出rpoB基因突变，突变率占26％。531位点单突变11株，526位点单突变1株，531、526双位点联合突变1株。12株耐药株均检出rpoB基因突变。结论双探针实时PCR技术能快速、准确地检测结核杆菌rpoB基因位点的突变，可用于临床对结核杆菌RFP耐药的快速诊断。     

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的价值北大核心CSCD

目的分析南京市结核分枝杆菌(MTB)感染患者的耐药情况,评价荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的临床价值,探究RFP和INH耐药相关基因突变的特征。方法对鉴定为MTB的780株菌株同时进行绝对浓度法药物敏感性试验和荧光PCR熔解曲线法检测对RFP和INH的耐药性。以绝对浓度法药物敏感性试验结果为标准,分析熔解曲线法检测RFP和INH的灵敏度、特异度、符合率和一致性(Kappa检验)。结果780株MTB中,22株(2.82%)为RFP单耐药,62株(7.95%)为INH单耐药,143株(18.33%)为耐多药。以绝对浓度法药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法检测MTB对RFP和INH耐药性的灵敏度分别为98.18%和85.85%,特异度分别为95.28%和97.39%,符合率分别为95.90%和94.36%,Kappa值分别为0.88和0.85。RFP分子耐药菌株中全部检测出rpoB基因位点突变,其中以rpoB 529~533位点为最常见的突变(63.87%,122/191),突变位点为rpoB 507~512的20株菌株中只有7株表型耐药,rpoB基因双位点突变的18株菌株全部表型耐药;INH分子耐药菌株中最常见的突变为katG 315位点(66.49%,127/191),其次是inhA启动子区(17.80%,34/191),90%以上的INH分子耐药菌株为表型耐药。结论南京市结核耐药情况严重,以耐多药结核病为主。荧光PCR熔解曲线法与药敏试验结果高度一致,且弥补了药敏试验对于低度耐药突变株菌检测的局限性。耐药相关基因突变位点的检测有利于结核病的及时诊断和个体化治疗的实施。     

徐州市耐多药结核耐药分析及分枝杆菌基因突变特征研究

目的 研究徐州市耐多药结核(MDR-TB)耐药表型、耐INH或RFP相关基因突变情况,分析耐药表型与基因突变间关系,为耐多药结核疾病的诊断提供科学依据。方法 采取随机方法抽取徐州市115例MDR-TB菌株和66株全敏感菌株进行耐药情况分析,使用基因芯片检测技术对耐INH相关基因katG、 inhA和aphC以及耐RFP相关基因rpoB突变位点进行检测,对结果进行t检验分析。结果 徐州市MDR-TB菌株耐药表型有9种组合,主要是以耐INH+RFP组合为主,比例为47.83%,其次为耐INH+RFP+SM组合,比例为20.00%。与耐INH的相关基因突变率87.83%,基因突变类型分别为单基因katG(64.35%)和inhA(3.48%),双基因katG+inhA(12.17%)和katG+aphC(12.17%)。耐多药株(115例)和敏感株(66例)总体变异率均数比较(t=107.56,P<0.05), 其中katG基因突变率比较(P<0.05),二者差异均有统计学意义。与耐RFP相关rpoB基因总突变率86.09%,耐RFP相关rpoB基因突变类型分别为单531(45.22%)、516(8.70%) 和526位点,双(531+516)(13.91%)、(531+513)(12.17%)和516+533突变位点, 531+516+513(3.48%)三位点突变。耐多药株和敏感株总体和单个位点突变率均数比较(t=94.92,P<0.05), 531(P<0.05)、516(P<0.05)、533(P<0.05),二者差异均有统计学意义。结论 研究发现了徐州市MDR-TB耐药表型特征。徐州市MDR-TB菌株与耐INH和RFP相关基因突变客观存在,并表现出多态性和地区性。与耐INH相关katG基因、与耐RFP的相关rpoB基因531、516、533位点突变相对稳定,有临床应用价值,可作为徐州市耐药结核菌株快速诊断的指标。     

维生素D在豚鼠结核感染中的辅助治疗作用评价

目的 建立豚鼠慢性结核病模型,评价维生素D在结核病辅助治疗中的作用。方法 采用结核分枝杆菌标准株H37Rv以气溶胶方式成功感染豚鼠48只,按照随机数字表法分为空白对照组8只,每日常规剂量维生素D给药组(VD组)8只,单次高剂量维生素D隔周给药组(VD_H组)8只,异烟肼-利福平给药组(H-R组)8只,异烟肼-利福平化疗联合每日常规剂量维生素D给药组(H-R+VD组)8只;异烟肼-利福平化疗联合单次高剂量维生素D隔周给药组(H-R+VD_H组)8只。结核感染豚鼠4周后开始给药。分别于给药4周和8周后每组取4只豚鼠称体质量,处死,解剖,观察肺脏和脾脏病变,并进行病理学检查和活菌计数。结果 豚鼠感染及给药过程中各组耐受性良好,无死亡。单独维生素D治疗的两组均未见豚鼠肺脏和脾脏活菌计数下降,也未观察到肺脏和脾脏病变减轻。治疗4周H-R组肺脏和脾脏活菌计数分别为(4.98±0.26)lgCFU和(4.02±0.03)lgCFU, H-R+VD_H组肺脏和脾脏活菌计数分别为(4.39±0.11)lgCFU和(2.30±0.43)lgCFU,H-R+VD_H组较H-R组肺脏和脾脏活菌计数分别下降了0.59lgCFU和1.72lgCFU,并观察到脾脏病理改变较之减轻。治疗8周后H-R组肺脏和脾脏活菌计数分别为(3.73±0.23)lgCFU和(2.26±0.24)lgCFU, H-R+VD_H组肺脏活菌计数为(3.21±0.23)lgCFU,脾脏达到无菌化,H-R+VD_H组较H-R组肺脏和脾脏活菌计数分别下降了0.52lgCFU和2.26lgCFU,并观察到肺脏病理改变较之减轻。治疗4周后H-R+VD组脾脏活菌计数为(2.36±0.10)lgCFU, H-R+VD组较H-R组脾脏活菌计数下降了1.66lgCFU。结论 在豚鼠慢性结核病模型中,维生素D显示出辅助异烟肼-利福平治疗结核病的作用,可以进一步研究以应用于临床。     

吡嗪酰胺每日一次与三次给药在小鼠体内的药代动力学比较及其对异烟肼-利福平的影响

目的 在小鼠体内,探讨吡嗪酰胺每日给药1次与给药3次在药代动力学上的差别,为吡嗪酰胺的合理应用提供依据。方法 将平均体质量（18±2）g的6周龄BALB/c小鼠分为5组,每组30只。分别为单独使用吡嗪酰胺1次/d和3次/d给药组（1组和2组）、单独使用异烟肼-利福平组（3组）、异烟肼-利福平联用吡嗪酰胺1次/d和3次/d给药组（4组和5组）。给药后不同时间点取血,液相色谱-质谱联合检测血药浓度,并计算药代动力学参数血药浓度-时间曲线下面积（AUC）、峰浓度（C_max）、达峰时间（T_max）和半衰期（T_1/2）。结果 吡嗪酰胺单独给药时,1次/d给药组C_max为（155.3±5.1）μg/ml, AUC_0～8h（8h内药时曲线下面积）为269.5mg·h/L,分别是3次/d给药组C_max（43.2±2.6）μg/ml, AUC_0～8h 70.9mg·h/L的3.5倍以上（t=27.71,P<0.01）;当吡嗪酰胺联用异烟肼、利福平给药时,1次/d给药组C_max为（151.8±17.3）μg/ml,AUC_0～8h 383.1mg·h/L也远远高于3次/d给药组C_max（45.1±1.0）μg/ml, AUC_0～8h 81.0mg·h/L（t=8.718,P<0.05）。而且,当联用异烟肼、利福平并3次/d给药时,吡嗪酰胺对异烟肼有拮抗作用,使异烟肼的C_max和AUC_0~8h分别由（6.1±0.9）μg/ml和6.6mg·h/L下降为（0.05±0.001）μg/ml和0.2mg·h/L。结论 小鼠体内,吡嗪酰胺1次/d给药药代动力学参数优于3次/d给药,尤其是和异烟肼-利福平联用时。     

耐多药结核分枝杆菌基因突变分析

目的对临床分离的耐多药结核分枝杆菌株进行基因突变分析。方法对耐多药结核分枝杆菌临床分离菌株进行耐药基因的PCR检测,利用基因序列测定方法分析耐药基因突变情况。结果从耐多药结核病（MDR-TB）患者临床分离菌株中快速检测到rpoB、katG、rpsL、embB基因及其突变。耐多药菌株、全耐及单耐利福平分离菌株均检测rpoB基因点突变,突变位点主要为第516、526和531常见密码子,1例MDR-TB出现第479位和第531位密码子同时突变。耐多药菌、全耐菌及单耐异烟肼的菌株均检测有katG基因点突变,突变位点均为第2066位碱基C突变为Go全耐菌和对乙胺丁醇（EMB）耐药的耐多药菌株均检测有embB基因点突变,突变位点均为第306位密码子ATG突变为ACG。全耐菌和对链霉素（SM）耐药的MDR-TB菌株均检测有rpsL基因点突变,突变密码子为CCT突变为CTT,其中从1株对SM敏感的MDR-TB中也检测到突变。全敏感株、标准株及利福平（RIF）、异烟肼（INH）或EMB敏感的耐药株均无rpoB、katG或embB基因突变。结论PCR及基因序列测定可快速检测耐多药结核基因,结核分枝杆菌耐多药性与多个基因突变相关。     

结核分枝杆菌rpoB基因突变特征的初步探讨

目的 了解浙江省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变特征.方法 对65株临床分离菌株rpoB基因509-631位点分别进行PCR-SSCP检测和DNA序列测定,观察不同耐药株rpoB基因突变的规律.结果 耐利福平分离株96.4%（27/28）存在rpoB基因突变,其中526位突变率64.3%（18/28）,513位突变率21.4%（6/28）,531位突变率7.1%（2/28）,529位突变率3.6%（1/28）;耐其他抗结核药18.5%（5/27）存在rpoB基因突变,突变位点具有随机性.所有敏感菌株均无突变.结论 rpoB基因突变与利福平耐药密切相关,浙江省rpoB基因突变主要以526位突变为主,其次为513位,两者占总数的86%（24/28）,而耐其他抗结核药菌株也存在rpoB基因的突变,但没有明显规律,且均对利福平敏感.     

应用等位基因特异性多重聚合酶链反应同步检测结核分枝杆菌的耐药性

目的建立可同步检测结核分枝杆菌katG和ropoB基因突变的等位基因特异性多重聚合酶链反应（MAS-PCR）的方法，以快速检测结核分枝杆菌对利福平（RFP）和异烟肼（INH）的耐药性。方法根据结核分枝杆菌katG和rpoB基因序列，分别设计特异性寡聚核苷酸引物，采用MAS-PCR技术，分别检测katG基因315位点和rpoB基因中531、526和516三个最常见的突变位点。结果19株INH敏感株中均未发现katG基因315位点的突变，耐药株中发现有79．2％（61／77）的菌株存在突变；15株RFP敏感株中未发现rpoB基因突变。MAS-PCR方法可检测出81．5％（66／81）的利福平耐药株。结论MAS-PCR方法对katG和rpoB基因的同步检测有较高的敏感性和特异性，有望用于耐药结核分枝杆菌的快速检测。     

利福布汀抗结核分枝杆菌活性及其耐药性与rpoB基因突变关系的探讨

目的 比较利福平和利福布汀的体外抗MTB活性,分析其交叉耐药性,评价利福平和利福布汀耐药性与rpoB突变的关系.方法 采用微量平板Alamar Blue检测(MABA)法,检测利福平和利福布汀对MTB临床分离菌株168株的抗菌活性,并对其rpoB基因核心区进行DNA序列测定.两组间基因突变率的比较采用x2检验.结果 66株利福平敏感菌株均对利福布汀敏感( MIC≤0.125 mg/L),未检测到rpoB基因耐药决定区存在突变;102株利福平耐药菌株中有76株同时对利福布汀耐药( MIC ＞0.5 mg/L),交叉耐药率为74.5％(76/102);26株MIC≤4 mg/L的利福平耐药菌株仍对利福布汀敏感(MIC≤0.5 mg/L);516、526和531位点的氨基酸改变与利福平和利福布汀耐药均有关,而511和533位点的氨基酸改变可能仅与利福平耐药有关,利福布汀耐药菌株的rpoB基因突变率(92.1％,70/76)显著高于利福布汀敏感菌株(23.9％,22/92),差异有统计学意义(x2=78.12,P＜0.05).结论 对利福平低度耐药(MIC≤4 mg/L)的MTB仍对利福布汀敏感.MTB的rpoB基因突变可用于利福平耐药性检测,且对检测利福布汀的耐药性也有参考意义.     

结核分枝杆菌中利福平和异烟肼耐药相关基因突变与耐药水平的相关性研究

目的 探究结核分枝杆菌中利福平和异烟肼耐药基因突变谱的分布,为研发更为精准的耐药分子诊断技术和临床决策提供依据。方法 收集国家耐药监测点新疆维吾尔自治区柯坪县、岳普湖县和疏勒县193株和湖南省怀化市、永顺县、祁东县、桃江县和耒阳市592株结核分枝杆菌。采用微孔板法测定菌株的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。根据药物敏感性试验(简称“药敏试验”)结果选取利福平和异烟肼耐药菌株,经CTAB/NaCl法提取核酸后进行全基因组测序(whole genome sequencing,WGS),将所得基因组原始序列过滤后上传至TBprofiler分析工具以确定耐药基因型。结果 785株结核分枝杆菌中,124株(15.80%)为利福平和(或)异烟肼耐药,包括利福平耐药74株,异烟肼耐药111株,耐多药61株(7.77%)。97.22%(70/72)利福平耐药菌株检测出rpoB基因位点突变,其中98.57%(69/70)的突变位于利福平耐药决定区(RRDR),1株检测出RRDR区以外的与利福平耐药相关的罕见突变I491F。利福平耐药突变主要位于rpoB 450、rpoB 445及rpoB 435密码子,占81.43%(57/70),其中rpoB S450L突变出现的频率最高(45.71%,32/70), rpoB 450位点突变对应高浓度利福平耐药(MIC≥16μg/ml),rpoB 452 位点突变主要对应低浓度利福平耐药(MIC=2μg/ml)。93.58%(102/109)的异烟肼耐药菌株存在耐药相关基因突变,85.29%(87/102)的异烟肼突变位于katG 315及fabG1启动子区,katG S315T为最常见的耐药突变(57.84%,59/102),主要对应高浓度异烟肼耐药(MIC≥2μg/ml),其次为fabG1(C15T)(16.67%,17/102),主要对应低浓度异烟肼耐药(MIC=0.25~1.00μg/ml)。结论 不同耐药基因突变导致的结核分枝杆菌耐药水平不同。对于利福平,rpoB 452位点突变对应低浓度耐药,rpoB 445和450位点突变对应高浓度耐药;对于异烟肼,发病fabG1-15突变对应低浓度耐药,katG 315突变对应高浓度耐药。     

聚合酶链反应-单链构象多态性技术检测耐多药结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL突变的研究

目的　应用PCRSSCP技术快速检测耐INH,RFP,SM结核分支杆菌分离株KatG、rpoB、rpsL基因突变,评价其在检测结核分支杆菌耐药性方面的价值。方法 32株耐INH、RFP、SM结核分支杆菌临床分离株及25株结核分支杆菌敏感分离株用PCRSSCP方法分别检测,rpoB、KatG、rpsL基因突变。结果 32株耐多药结核分支杆菌分离株中,rpoB、KatG、rpsL PCR扩增产物PCR-SSCP分别有28株(87.5%)rpoB基因,19株(59.3%)KatG基因和23株(71.9%)rpsL基因电泳条带与结核分支杆菌标准株H₃₇Rv电泳条带相比有明显差异,而25株结核分支杆菌敏感株的PCR-SSCP条带与结核分支杆菌H₃₇Rv相似,特异性为100%。结论 PCR-SSCP方法敏感、特异,可快速检测结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL耐药基因突变,有利于耐多药结核分支杆菌耐药性的快速检测。     

耐利福平核分支杆菌耐药分子机制的研究

目的 研究中国五省、市部分耐利福平（ＲＦＰ）或含ＲＦＰ的耐多药结核分支杆菌临床分离株ｒｐｏＢ基因突变的情况及抽提鉴定是否含有质粒,为评价耐ＲＦＰ的分子机制,进而为结核病基础和临床研究提供分子遗传学依据。方法 采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术,对来自河南省、河北省、安徽省、北京市、上海市２６２株结核分支杆菌临床分离株（其中敏感株７４株,耐ＲＦＰ或含ＲＦＰ耐多药株１８８株）ｒｐｏＢ基因突变的发生率进行研究;同时,对７６株结核发支杆菌临床分离株按碱性溶菌法抽提分离并鉴定是否含有质粒。结果中国五省、市的部分耐ＲＦＰ或含ＲＦＰ耐多药结核分支杆菌临床分离株ｒｐｏＢ基因突变的发生率平均为９２％,而各地分别为：河南省９０％,河北省９１％,北京市９１％,上海市９２％,经统计学处理,五省、市之间差异无显性意义（ｘ＾２＝０．４２,Ｐ〉０     

Molecular characterization of rifampicin- and isoniazid-resistant Mycobacterium tuberculosis strains isolated in Kazakhstan

Kazakhstan is one of the 14 countries with a high rate of morbidity due to multidrug-resistant tuberculosis (MDR TB) in WHO European region. The aim of our study was to characterize mutations associated with drug resistance to rifampicin and isoniazid in Mycobacterium tuberculosis isolates from Kazakhstan. M. tuberculosis strains were isolated from TB patients in different regions of Kazakhstan. A drug susceptibility test was performed on Lowenstein-Jensen medium using the absolute concentration method. Sequencing analysis was performed of the rpoB rifampicin resistance-determining region and the katG gene, the oxyR-ahpC intergenic region, and the inhA promoter region in 259 MDR M. tuberculosis isolates, in 51 isoniazid-resistant isolates, and in 13 rifampicin-resistant isolates. The mutational analysis revealed that the most frequent mutations associated with rifampicin and isoniazid resistance in M. tuberculosis are the substitutions at codons 531 (82.7%) and 315 (98.4%) in the rpoB and katG genes, respectively. In addition, we have found mutations with lower frequency at codon 526 (8.4%), 533 (1.5%), and 516 (1.1%) in the rpoB gene. In 6.2% of the isolates, no mutations were found in the rpoB gene. The findings of this study provide useful data for a better understanding of the mutation spectrum of isoniazid and rifampicin resistance among strains isolated from patients in Kazakhstan. Our results are also useful for the development of diagnostic tests of MDR M. tuberculosis.     

Direct detection of rifampicin resistant Mycobacterium tuberculosis in sputum by line probe assay (LiPA)

OBJECTIVES: To examine the direct detection of rifampicin (RFP)-resistant Mycobacterium tuberculosis in sputum by Line Probe Assay (LiPA). MATERIALS AND METHODS: We collected 130 sputa and analyzed both by LiPA and the Amplicor M.tuberculosis assay. For culture-positive samples, RFP resistance testing was performed and compared with the results by LiPA. RESULTS: Eighty two out of 84 M. tuberculosis samples were detected by LiPA and all of 10 Mycobacteria other than M. tuberculosis (MOTT) samples and 36 negative samples were negative by LiPA. The detection rate is same as Amplicor. For culture-positive samples, LiPA showed mutation pattern for all of 22 RFP-resistant strains and wild type pattern for 19 of 20 RFP-sensitive strains. The one remaining showed mixed pattern of wild type and mutation pattern. CONCLUSION: The use of LiPA for sputum coould enable early detection of RFP-resistant tuberculosis and seems to be useful for the control of tuberculosis.     

Multiple mutations in the rpoB gene of Mycobacterium leprae strains from leprosy patients in Thailand

A new finding is reported of multiple mutations in the rpoB gene of 9 Mycobacterium leprae strains from leprosy patients in Thailand, who did not respond to therapy even when rifampicin, the main drug in multi-drug therapy was used. By means of sequence analysis of 9 Thai M. leprae strains, various mutations in 289 bps of the rpoB gene revealed forms of mutation never before described, such as multiple mutations (ie, mutation at two, three, six, seven, eight and nine positions in the rpoB gene), most of which were point-mutation substitutions (a few of which were silent), and some insertions. This investigation demonstrates that mutation in the rpoB gene of M. leprae strains from Thailand involves more variety than previously reported for rpoB mutation patterns in rifampicin resistance M. leprae strains.     

单耐利福平结核分枝杆菌耐药分子机制研究

目的 探讨单耐利福平结核分枝杆菌中耐药相关基因突变以及药物外排泵两种不同耐药机制的功能。 方法 从国家结核病参比实验室2007-2008年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐利福平的菌株23株。采用直接测序法检测利福平耐药相关基因rpoB突变情况。提取rpoB无突变菌株的RNA后反转录并采用real-time PCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量,对比菌株最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）实验结果,筛选可能与利福平药物外排相关的基因,并选用大肠埃希菌为模式生物,构建表达载体,检测过表达目的外排泵的大肠埃希菌对利福平的耐药程度以验证。结果 在23株单耐利福平的菌株中,有16株（69.6%）检测到rpoB突变,其中包括531位点突变9株,526位点突变6株及533位点突变1株。Ser531Leu、His526Asp表现为高浓度耐药,其MIC分别为192 μg/ml和256 μg/ml;而突变类型His526Gly、His526Leu、His526Arg和Leu533Pro表现为低浓度耐药,其MIC分别为0.75 μg/ml、4 μg/ml、2 μg/ml和0.5 μg/ml。在rpoB未突变菌株中,通过real-time PCR发现Rv2936、Rv0783和Rv0933的转录水平与MIC呈正相关。在对照组和转入pEASY-E1-Rv0933的大肠埃希菌中MIC均为 8 μg/ml,而转入pEASY-E1-Rv2936和 pEASY-E1-Rv0783的大肠埃希菌的MIC均有不同程度的提高,分别为32 μg/ml和16 μg/ml。结论 不同耐药突变类型导致的耐药程度不同,Rv2936和Rv0783可能是与利福平耐药相关的的药物外排泵基因。     

Comparative study on the pharmacokinetics of rifampicin between the old and middle-aged tuberculosis patients

The pharmacokinetics of rifampicin was studied in 16 tuberculosis patients including the elderly (64.3 +/- 4.8 yrs, n = 8) and the middle-aged (35.9 +/- 7.6 yrs, n = 8). 450 mg of rifampicin (RFP) were given orally. The concentration of RFP was assayed by HPLC. The plasma concentration-time curves of both groups fitted to one-compartment model. Important parameters were taken: t 1/2 2.39 +/- 0.66, 3.84 +/- 1.91 h; Cmax: 14.56 +/- 6.45, 9.83 +/- 2.55 micrograms/ml; vd: 0.43 +/- 0.11, 0.67 +/- 0.15L/kg; CL: 0.14 +/- 0.03, 0.13 +/- 0.06 L.h-1/kg respectively. No significant difference was found between the old and middle aged TB patients on the pharmacokinetics of rifampicin (P greater than 0.05). We suggest that 450 mg/day of rifampicin taken orally are available for aging tuberculosis patients.