新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后肝脏SOD、MDA变化的实验研究

目的检测新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后不同时间肝脏组织中SOD、MDA的水平变化,观察新生儿缺氧缺血性脑病多脏器损害中肝脏的损害程度。方法将新生7日Wister大鼠105只,分为正常对照组、单纯缺氧组、缺氧缺血性脑损伤组,分别于2、12、24、48、72小时断头处死一小组大鼠,取不同时间肝脏测SOD、MDA值。结果缺氧缺血性脑损伤组肝脏SOD值明显低于正常对照组和单纯缺氧组,MDA值明显高于正常对照组和单纯缺氧组,经统计学处理有显著性差异(P<0.01),肝脏损伤在2小时即已明显。结论缺氧缺血性脑病是以脑损伤为主的多脏器损害性疾病,在治疗时应注意早期保护肝脏功能。     

氨茶碱对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的干预作用

目的:观察氨茶碱对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的干预作用。方法:建立新生大鼠HIBD模型,随机分为假手术组,HIBD组和氨茶碱组,于缺氧72 h断头取脑,测定脑组织含水量、大脑损伤程度、超氧化物歧化酶活性(SOD)及氧化代谢产物丙二醛(MDA)含量和脑组织内cAMP含量;HE染色观察各组大脑皮层结构及神经细胞形态。结果:与HIBD组相比,氨茶碱组脑组织含水量下降、大脑损伤程度减轻;MDA下降,SOD活性升高;给药后24 h,可使脑组织内cAMP含量轻度升高;病理变化减轻,凋亡细胞减少。结论:氨茶碱对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤有一定保护作用。     

不规则趋化因子在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织中的表达及参附注射液干预作用的研究

目的:探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后大脑皮质不规则趋化因子(CX3CL1)活性的变化及参附注射液对其干预作用.方法:参照Rice法制备新生大鼠HIBD模型,7日龄SD新生大鼠随机分为假手术组(S组),生理盐水对照组(C组)和参附治疗组(SF组),每一组按照观察时间点的不同,进一步分为6h、12 h、1天、3天、5天、7天六个亚组,每个亚组8只.C组于造模成功后腹腔注射生理盐水10 ml/kg,1次/天,连用3天,SF组于造模成功后即刻腹腔注射等量参附注射液,S组仅分离右侧颈总动脉后腹腔注射等量生理盐水.免疫组化法和Western-Blot法检测大脑皮质CX3CL1的表达变化.结果:免疫组化法和Western-Blot法显示CX3CL1在S组各时间点表达量均较少,差异无统计学意义(P＞0.05);C组和SF组CX3CL1在各时间点的表达水平较S组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05),且在3天达到高峰,随后其表达下降;SF组CX3CL1在各个时间的表达水平均低于C组,差异有统计学意义(P＜0.05),但高于S组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:HIBD时CX3CL1表达增多,参与脑损伤炎症免疫反应,参附注射液能抑制CX3CL1大量表达从而抑制炎症免疫反应,对HIBD后的新生大鼠可能起到脑保护作用.     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经细胞凋亡以及凋亡诱导因子核转移的抑制作用

【目的】探讨高压氧（hyperbaric oxygen，HBO）对缺氧缺血性脑损伤（hypoxia-ischemia brain damage，HIBD）新生大鼠神经细胞凋亡以及凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor，AIF）核转移的影响，以揭示HBO治疗的分子机制。【方法】42只7日龄SD大鼠随机分为假手术组、HIBD组和HBO干预组。HBO干预组在HIBD后2h给予单次HBO治疗（2．5ATA，1．5h）。然后于规定时间点取脑进行Nissl染色、TUNEL染色进行皮质区、海马CA1区以及丘脑区凋亡神经细胞定量分析，并用免疫组织化学方法检测AIF核转移的情况。【结果】在HIBD后48h皮质区、海马CA1区神经元有明显丢失。而HBO干预组相应脑区的神经元丢失不明显。HIBD后12、24、48h皮质区和海马CA1区TUNEL阳性细胞数随时间逐渐增加；HBO干预组两个脑区在不同的时间点TUNEL阳性细胞数均比HIBD组减少，其中两组在24h和48h时差异有显著性（P〈0．05）。HBO干预组各观察脑区在不同的时间点AIF阳性细胞数均明显减少。与HIBD组相比差异均有显著性（P〈0．05）。【结论】单次HBO（100％，2．5ATA）治疗可以有效抑制HIBD后神经细胞的凋亡。可能的机制是抑制HIBD后AIF的核转移以阻断其介导的非Caspase依赖性的神经细胞凋亡。     

促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的:探讨促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的保护作用及其可能的机制。方法:新生7天大鼠随机分3组:假手术组、HIBD模型组和EPO治疗组(HIBD+EPO组)。观察缺氧缺血后脑组织含水量、病理改变、免疫组织化学检测凋亡因子Bcl-2的表达以及脑萎缩程度。结果:EPO治疗能显著减轻缺氧缺血侧(左侧)大脑半球水肿、病理学改变和大脑半球萎缩程度。左大脑半球含水量降至(85.93±1.19)%,显著低于HIBD模型组(86.75±0.87)%(P<0.05),左脑组织萎缩比(14.95±14.15)%,显著低于模型组(28.26±19.39)%(P<0.01)。HIBD+EPO组大鼠缺血侧皮层Bcl-2阳性细胞表达较HIBD模型组及假手术组均显著增多。结论:EPO对新生鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用,其机制与提高抑制细胞凋亡的发生有关。     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用及远期影响

【目的】探讨早期应用神经生长因子(neural growth factor,NGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的近、远期影响。【方法】7日龄(spraqut Dawley,SD)大鼠90只随机分为对照组(n=30,假手术处理),缺氧缺血性脑损伤(hy-perxic-ischemic brain damage,HIBD)组(n=30),NGF组(n=30),HIBD模型后即刻开始NGF治疗,每次1 000 U/kg,间隔24 h,连续7次。以近期海马形态组织学及细胞凋亡数和远期学习记忆功能判断干预效果。【结果】HIBD组大鼠近期海马区细胞形态变化明显,结构严重受损,远期学习记忆功能不良。与对照组比较,凋亡细胞增加,水迷宫实验中潜伏期延长(P均<0.01)。与HIBD组比较,NGF组治疗后凋亡细胞于各时间点明显减少,潜伏期缩短,站台停留时间延长(P均<0.01)。【结论】早期NGF治疗可减轻HIBD程度,改善HIBD引起的远期学习记忆功能障碍。     

单核细胞趋化蛋白1 mRNA在新生鼠实验性缺氧缺血损伤脑组织中的表达

目的观察新生鼠实验性缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后脑组织趋化因子单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）mRNA的表达，探讨其在HIBD中的作用。方法采用结扎7d龄SD大鼠右侧颈总动脉并暴露于8％氧气环境2．5h，制作HIBD模型。采用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应，动态定量监测大脑皮质、海马区脑组织中MCP—1在HIBD后不同时间点表达的变化。假手术组为对照组。结果HIBD后6h右侧脑组织MCP-1 mRNA表达至高峰，显著高于对照组（P〈0．05）。12h组仍高于对照组（P〈0．05）。24h～72h降至接近对照组水平（P〉0．05）。结论HIBD后MCP-1 mRNA表达显著升高，推测MCP-1参与了缺氧缺血脑组织损伤的过程。     

缺氧缺血脑损伤新生鼠脑组织AQP-4表达的研究

目的:探讨水通道蛋白-4(AQP-4)在缺氧缺血脑损伤(HIBD)新生鼠脑组织表达的变化。方法:选取7日龄SD新生大鼠80只,随机分为对照组40只、HIBD组40只,以结扎左侧颈总动脉后置于低氧环境建立新生鼠HIBD模型。在模型建成后6 h、24 h、48 h和72 h分别处死动物。采用实时定量PCR(RT PCR)技术及免疫蛋白印迹(western blot)技术分析缺氧后不同时间点AQP-4的表达情况,并与对照组相比较。结果:采用两种技术得到的结果具有一致性。HIBD组不同时间点与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05),即从6 h开始HIBD组AQP-4表达较对照组增加,24 h达高峰,48 h开始下降但仍高于对照组,至72 h降至最低,且低于对照组。结论:HIBD组AQP-4的动态表达趋势与新生儿缺氧缺血脑病时脑水肿形成具有相关性,有望成为治疗新生儿缺氧缺血脑病的新靶点。     

不同剂量左甲状腺素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织HIF-1α表达的调节

目的 探讨不同剂量左甲状腺素(L-T4)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage, HIBD)新生大鼠脑组织缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α, HIF-1α)的调节作用。方法 7日龄SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血组(HI)、溶剂组及L-T4低、高剂量组。低、高剂量L-T4干预组及溶剂对照组分别于HIBD后当日起腹腔注射2 μg/100 g L-T4、3.5 μg/100 g L-T4及等体积溶剂, 每日1次, 共5 d。应用免疫组化法检测鼠脑HIF-1α蛋白, RT-PCR法检测HIF-1αmRNA。结果 缺氧缺血组缺血侧大脑皮质HIF-1α蛋白(72.795±6.121)及HIF-1αmRNA(0.448±0.035)表达较假手术组(依次为38.581±2.846, 0.174±0.015)增高, 差异有统计学意义(P＜0.05);L-T4低、高剂量干预组缺血侧大脑皮质HIF-1α蛋白(依次为117.350±9.374, 142.842±8.948)及HIF-1αmRNA(依次为0.618±0.042, 0.711±0.049)表达较缺氧缺血组增高, 差异有统计学意义(P＜0.05), 且L-T4对HIF-1α的影响具有剂量依赖性, 即随剂量增加, HIF-1α蛋白及HIF-1αmRNA表达增加, 两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 在新生大鼠HIBD时, L-T4可上调HIF-1α蛋白及其mRNA表达, 从而对HIBD起保护作用, 且具有剂量依赖性。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠胎盘生长因子的表达及参附注射液的干预作用

目的 通过分析胎盘生长因子(PLGF)在缺氧缺血性新生大鼠病侧大脑表达,探讨其改善脑缺血、促进脑内血管再生以及参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用。方法 新生7 d SD大鼠随机分为三组:假手术组(S)、生理盐水对照组(C)、参附治疗组(SF)。 按观察时间可依次分为6 h、12 h、1 d、3 d、7 d五个亚组,每个亚组8只。用Rice法制备新生大鼠HIBD模型。SF组在缺氧缺血性脑损伤后即刻以腹腔注射注射,其剂量为10 ml/kg,每日1次,连续3日同一时间点用药。C组则按照相同的注射方式及注射剂量,给予生理盐水。S组未给予药物治疗。其后以RT-PCR和免疫组织化学的方法检测大鼠右侧大脑皮层PLGF的表达变化。结果 S组各个时间点PLGF均有表达,无明显差异(P>0.05);C组在6 h时PLGF表达量开始增加,于1 d时达到高峰期,明显高于S组(P<0.05);SF组在6 h前PLGF表达量开始增加,整体表达趋势类似于C组,3 d时下降趋势更明显,但各时间表达量明显高于S组及C组(P<0.05)。结论 缺氧缺血性脑损伤后,PLGF表达量明显增加,参附注射液能促进PLGF大量表达,对缺氧缺血性脑损伤后的新生大鼠起到保护作用。     

孕酮对新生鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用

目的探讨孕酮对缺氧缺血性脑损伤新生鼠神经细胞凋亡及自由基变化的影响。方法90只7日新生Wistar大鼠随机分成3组:假手术组、缺氧缺血组、药物预防组。观察脑组织缺氧缺血性损伤后6,24,48,72 h,5 d细胞凋亡情况,超氧化物歧化酶(SOD)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性与丙二醛(MDA)含量的变化。结果缺氧缺血组新生鼠脑细胞凋亡率和MDA含量于缺血缺氧后6 h显著高于假手术组(P<0.01),24 h达高峰,以后逐渐降低,72 h仍明显高于假手术组,至5 d时,2组差异无统计学意义。药物预防组神经元凋亡率和MDA含量于缺血缺氧后6,24,48,72 h明显低于缺氧缺血组(P<0.05);而SOD含量和GSH-PX酶活力于缺血缺氧后5 h显著低于假手术组大鼠(P<0.01),24 h下降至最低点,以后逐渐回升,72 h仍明显低于缺氧缺血组(P<0.05)。结论孕酮通过降低新生鼠缺氧缺血时脑细胞凋亡率和MDA含量,升高SOD含量和GSH-PX酶活力,拮抗细胞凋亡和自由基的产生,发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

早期干预对宫内缺氧缺血大鼠脑电波及存活神经元数目的影响

目的探讨早期干预对促进宫内缺氧缺血（HIBD）大鼠脑损伤的修复作用。方法建立HIBD脑损伤大鼠动物模型，随机分为HIBD干预组、HIBD非干预组，以及正常干预组、正常非干预组。干预组采用早期视、触、听觉刺激和丰富环境的早期干预方法（术后24h至生后28d）。而后，采用脑电图检测大鼠脑功能。尼氏染色观察脑组织病理学变化。结果经过干预后，检测大鼠脑电图发现，HIBD干预组背景节律紊乱轻于HIBD非干预组，异常波形出现频率也较HIBD非干预组少见；尼氏染色结果显示，HIBD干预组海马存活神经元数目较HIBD非干预组多，正常干预组存活神经元数目较正常非干预组多。结论通过脑电波，以及存活神经元数目的比较结果表明，早期干预可能促进宫内HIBD大鼠脑损伤的修复。     

白藜芦醇甙对HIBD新生大鼠皮层BDNF表达影响

目的了解白藜芦醇甙(PD)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大脑皮层脑源性神经营养因子(BD-NF)表达的影响。方法 52只新生7日龄SD大鼠随机分为假手术对照组(NS组)、阴性对照组(NG组)、缺氧缺血组(HI组)、白藜芦醇甙干预组(PD组);通过结扎左颈总动脉及通入8%的氧气2 h制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型;各组按照造模后24 h、10 d分为2个亚组,免疫组化法测定各组大鼠大脑皮层BDNF的表达。结果免疫组化结果显示24 h、10 d HI组大鼠皮层BDNF表达(0.144±0.011,0.105±0.011)较NS(0.069±0.005,0.068±0.005)和NG组(0.070±0.003,0.069±0.007)增高(P<0.01),10 d PD组皮层BDNF表达(0.131±0.009)较HI组(0.105±0.011)明显增加(P<0.01)。结论白藜芦醇甙能上调HIBD新生大鼠大脑皮层BDNF的表达,对缺氧缺血后的神经元有保护作用。     

人脐带间充质干细胞联用神经节苷酯GM1治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的 观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs)移植及联用神经节苷酯GM1治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)的效果。方法 RICE法制备七日龄新生大鼠HIBD模型, 随机分为hUCMSCs移植组(n=15)、hUCMSCs+GM1组(n=15), 72 h后经颈静脉移植等量的hUCMSCs, hUCMSCs+GM1组再腹腔注射GM1, 两组均在移植后第31、32、33、34、35天用Morris水迷宫对两组大鼠行为学测试, 比较两组大鼠脑功能恢复情况。免疫荧光染色观察DiI标记的hUCMSCs移植后在两组大鼠脑中的分布情况;神经元前体细胞标记DCX特异性染色观察hUCMSCs移植后分化成神经元前体细胞的情况。结果 Morris水迷宫测试:hUCMSCs+GM1组逃避潜伏期明显短于hUCMSCs移植组, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。移植后hUCMSCs能迁徙到脑组织中, 并分布于缺血区的小血管旁, 能分化成神经元前体细胞。hUCMSCs+GM1组大鼠脑片干细胞分布明显多于hUCMSCs移植组(P＜0.05)。结论 hUCMSCs移植对HIBD新生大鼠脑功能有修复作用, 联用GM1, 有协同作用。     

围生期缺氧缺血性脑损伤患儿医学按摩的康复效果分析

目的 探讨围生期缺氧缺血性脑损伤（hypoxic—ischemic brain damage，HIBD）患儿医学按摩康复治疗效果。方法 选取1998年至2005年140例HIBD患儿，分成医学按摩组和对照组。待患儿病情稳定后，按摩组采用全身皮肤按摩和8个保健穴位按摩的方法治疗1年。用生长发育指标和发育商（DQ）、智力指数（MI）评价治疗效果。结果 比较两组患儿生后1年的生长发育指标、DQ值及肘，值，按摩组明显高于对照组，差异有显著意义（P〈0．01）。按摩组的预后不良率明显低于对照组，差异有显著意义（P〈0．05）。结论 医学按摩能促进HIBD患儿康复，对改善预后具有价值。     

大剂量肌苷对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的治疗作用研究

目的 通过建立新生鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxic—ischemic brain damage，HIBD）模型，探讨肌苷对新生鼠HIBD的治疗效果。方法 将54只日龄为1周的新生鼠随机分为假手术组、对照组和肌苷组。造成新生鼠急性HIBD模型。肌苷组大鼠造模后立刻给予0．1％肌苷注射液（0．05mg／g），每日2次。假手术组和对照组给予相同剂量生理盐水。定时取标本，测定脑组织中水、钙含量及脑细胞凋亡率。结果 ①随着时间延长，脑组织水含量逐渐增加，5d达高峰，然后下降。与假手术组比较，对照组于3d和5d、肌苷组于5d皆有显著增高（P〈0．05）；与同时间点对照组相比，肌苷脑组织水含量于3d和5d皆有明显降低（P〈0．05）。②脑组织中钙的含量24h最高，随着时间延长，逐渐下降，与假手术组比较，对照组于24h，3d和5d，肌苷组于24h和3d皆有显著增高（P〈0．05）；与同时间点对照组相比，肌苷组脑组织钙含量于24h，3d和5d皆有明显降低（P〈0．05）。③随着时间延长，对照组和肌苷组脑细胞凋亡率逐渐增加（P〈0．05）；与假手术组相比，对照组和肌苷组各时间点的凋亡率皆有明显增高（P〈0．05）；与同时间点对照组相比，肌苷组的凋亡率明显降低（P〈0．05）。结论 肌苷能显著减轻由缺氧缺血所导致的神经细胞损伤和破坏，保护脑组织。