二苯乙烯苷通过调节组蛋白去乙酰化酶1水平拮抗沙鼠脑缺血/再灌注损伤

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)水平改变在二苯乙烯苷（TSG）对沙鼠脑缺血/再灌注（I/R）损伤中的作用。方法 64只沙鼠随机分为假手术组、脑I/R模型对照组、TSG处理组和依达拉奉对照组。Morris水迷宫实验观察TSG对脑I/R鼠学习记忆功能的影响；神经功能评分、氯化三苯基四氮唑（TTC）染色观察TSG对经I/R脑组织的保护作用；免疫组织化学SP法观察脑组织中HDAC1蛋白的表达。Western blotting和RT PCR检测HDAC1蛋白和mRNA的水平。结果 与模型组比较，TSG对I/R鼠的脑组织有保护作用，能够改善模型鼠学习记忆能力，使模型鼠脑组织HDAC1蛋白和mRNA水平明显升高。 结论 TSG能够改善脑I/R损伤模型鼠认知功能，其作用机制与组蛋白乙酰化和去乙酰化动态平衡有关。     

低剂量木黄酮降低缺血后神经元损伤并改善学习记忆功能

目的探讨染料木黄酮(GEN)对全脑缺血(GCI)大鼠海马CA1区神经元的神经保护作用及其可能的机制。方法建立大鼠4动脉结扎全脑缺血模型,实验动物随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R)、GEN处理组、ICI 182,780组和溶剂对照组。采用Fluoro-Jade B和神经元特异性核蛋白(NeuN)染色观察海马CA1区神经元存活情况,TUNEL技术观察海马CA1区神经元的凋亡。Morris水迷宫观察大鼠的空间学习和记忆功能。结果 GEN发挥神经保护作用的最佳剂量为1.0 mg/kg;与sham组相比,I/R组和溶剂对照组海马CA1区TUNEL阳性神经元数量显著增多(P0.01),而1.0 mg/kg GEN可显著降低缺血后TUNEL阳性神经元数量(P0.01);与I/R组相比,GEN能明显改善缺血后大鼠的空间学习和记忆能力。缺血前侧脑室给予ICI 182,780可显著降低GEN的神经保护作用(P0.01)。结论低剂量(1.0mg/kg)GEN可显著降低缺血后大鼠海马CA1区神经元损伤,改善认知功能,其分子机制可能与雌激素受体活性密切相关。     

养血清脑颗粒对蒙古沙鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的治疗作用

目的 探讨蒙古沙鼠全脑缺血再灌注后养血清脑颗粒(Yangxueqingnaokeli,YXQNKL)的治疗作用.方法 采用蒙古沙鼠两侧颈总动脉结扎法,缺血30min再灌注5d模型(分为假手术组、缺血再灌注组、养血清脑颗粒治疗组).用Nissl染色法观察海马CA1区神经元的形态和数量,用免疫组织化学方法观察海马CA1区神经元神经钙离子感应蛋白1(NCS-1)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和谷氨酸盐合成酶(Glusyn)的表达情况.结果 与缺血再灌注组比较,缺血再灌注 0.4g/kg养血清脑颗粒治疗组和缺血再灌注 0.8g/kg养血清脑颗粒治疗组Nissl染色显示海马CA1区神经元数量明显增加(P＜0.05);免疫组织化学法显示海马CA1区神经元细胞NCS-1、caspase-3和Glusyn的阳性细胞数明显减少(P＜0.05).结论 全脑缺血再灌注后,给予养血清脑颗粒能显著增加海马CA1区神经元数量,这与其减少海马CA1区神经元NCS-1、caspase-3和Glusyn的表达有密切的联系.     

二苯乙烯苷对大鼠癫(癎)引发的学习记忆功能的影响及保护作用

目的:研究二苯乙烯苷(tetrahydroxy stilbene glucoside,TSG)对癫(癎)大鼠脑损伤的保护作用及可能机制.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、TSG干预组,应用立体定向脑室内微量注射的方法建立海人藻酸(KA)诱导的大鼠癫(癎)模型.5d后通过Morris水迷宫实验测定大鼠学习记忆功能;取脑行Nissl染色观察大鼠海马神经元的形态及数目改变.结果:与假手术组相比,模型组大鼠学习记忆能力明显降低,海马CA1区神经元大量丢失,结构紊乱.而TSG干预组可使癫(癎)引发的学习记忆能力降低的情况得到改善,抑制海马CA1区神经元的丢失,改善神经元结构.结论:TSG对癫(痫)引发的脑损伤,尤其是对海马区神经元迟发性凋亡具有明显的改善作用.     

异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠海马氨基酸递质水平变化及神经元凋亡的影响

目的： 观察异丙酚对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织氨基酸递质水平变化及神经元凋亡的影响。方法：雄性Wistar大鼠60只，随机等分为假手术（A）组、缺血再灌注对照（B）组和异丙酚处理（C）组，后者按异丙酚用量又分为50 mg/kg（C₁）、100 mg/kg（C₂）和150 mg/kg（C₃）3个亚组。全脑缺血10 min再灌注60 min时，各组断头处死大鼠6只，检测海马组织中氨基酸水平的变化；于再灌注72 h时，断头处死余下大鼠，用流式细胞仪检测海马组织神经细胞凋亡指数（AI），光镜检测海马CA1区神经元凋亡的密度。结果：与假手术组比较，各组海马组织谷氨酸（Glu）、天冬氨酸（Asp）含量有不同程度的增高，γ-氨基丁酸（GABA）、甘氨酸（Gly）的含量有不同程度的降低(P<0.05或P<0.01)。异丙酚组海马组织Glu、Asp含量低于对照组，GABA、Gly的含量高于对照组（P<0.05或P<0.01）。再灌注72 h时，各组海马组织神经细胞AI有不同程度的增高，海马CA1区神经元凋亡密度明显增加。异丙酚组海马组织神经细胞凋亡数量明显减少。结论：异丙酚对脑缺血再灌注损伤的拮抗作用可能与其抑制兴奋性氨基酸的释放、降低抑制性氨基酸的耗竭、继而减少神经元的凋亡、提高神经元的存活数目有关。     

全麻/控制性降压手术对海马神经元凋亡的影响

 目的：观察全麻/控制性降压手术对海马神经元损伤的影响及其可能的机制。方法：选用12只6～8月龄雄性健康比格犬,随机分为全麻组（A组,n=6）和控压组（C组,n=6）。全麻组采用丙泊酚注射及异氟醚吸入麻醉,控压组在麻醉基础上联合硝普钠行控制性降压,达到目的血压（基础平均动脉压的40％）后维持60 min（2组动物均在相应期间行剖腹探查术）,术毕使血压回升至基础水平72 h后取脑。采用免疫组织化学法检测海马CA1和CA3区白细胞介素 1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）以及凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax和活化型caspase-3)的表达;TUNEL法检测海马神经元凋亡情况。结果：(1)控压组动物海马CA1和CA3区IL-1β和TNF-α阳性细胞率均较全麻组升高（P＜0.01）;(2)控压组CA1和CA3区Bcl-2/Bax阳性细胞比值均较全麻组降低（P＜0.05）;与此相应,控压组海马各区caspase-3阳性细胞率均显著高于全麻组（P＜0.01）;(3)全麻组与控压组CA1和CA3区存在凋亡细胞,但控压组各区细胞凋亡指数均较全麻组显著升高（P＜0.01）。结论：全麻/控制性降压下的手术可诱导海马不同区域促炎细胞因子表达,降低Bcl-2/Bax比值,促进caspase-3的表达,进而导致海马神经元的凋亡。这种术后海马神经元损伤可能与全麻/控压手术诱导的海马炎症反应有关。     

人参皂苷Rg1对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对脑缺血-再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的影响。方法60只健康大鼠随机分为假手术组,模型组,人参皂苷Rg110、20、40mg/kg组,尼莫地平组,每组10只。采用线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。术后24h采用电镜及TUNEL法对海马CA1区的神经元凋亡情况进行检测。结果模型组部分神经元坏死,可见神经元凋亡,有时有凋亡小体形成。Rg1各组与模型组比较,Rg1各组海马CA1区粗面内质网肿胀及线粒体嵴断裂均有不同程度的减轻,凋亡细胞数量显著降低(P<0.05)。Rg140mg/kg组凋亡细胞数低于尼莫地平组(P<0.05),尼莫地平组凋亡细胞数低于10mg/kg组(P>0.05)与20mg/kg组相当。结论人参皂苷Rg1可以通过干预神经元凋亡过程发挥对脑缺血再灌注损伤的保护作用。     

异丙酚预处理对心肺复苏后大鼠学习记忆能力及海马神经元的保护作用

目的:观察异丙酚(propofol,PPF)预处理对心肺复苏后大鼠学习记忆能力的影响以及海马神经元的保护作用。方法:将80只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组、复苏+英脱利匹特对照组(R+intralipid)、复苏+异丙酚低剂量预处理组(R+PPF 10 mg/kg)、复苏+异丙酚高剂量预处理组(R+PPF 50 mg/kg)。实验组窒息前10 min腹腔注射10%异丙酚10 mg/kg或50 mg/kg。建立大鼠心肺复苏模型,并在复苏后3 d进行Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,海马Nissl染色观察神经元损伤情况,Western blot检测caspase-3的表达变化。结果:与正常对照组大鼠相比,复苏后大鼠出现明显的学习记忆能力的降低(P<0.05),异丙酚预处理则能显著改善复苏导致的行为学改变(P<0.05)。Nissl染色结果表明,心肺复苏后大鼠海马CA1区神经元排列稀疏、紊乱,细胞间隙增大。异丙酚预处理(10 mg/kg或50 mg/kg)后,神经元的数量和排列模式均有显著改善。Western blot结果显示心肺复苏后,海马caspase-3的表达显著升高。而异丙酚预处理(10 mg/kg或50 mg/kg)组caspase-3的表达与英脱利匹特对照组相比显著降低(P<0.05)。结论:异丙酚预处理可能通过改善心肺复苏后的神经元损伤而发挥脑保护作用。     

柴胡皂苷A减轻脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤

目的 探讨柴胡皂苷A（Saikosaponin A,SA）通过上调SIRT1水平减轻脑缺血再灌注（ischemia reperfusion,I/R）大鼠海马神经元损伤的作用。 方法 大鼠随机分为6组,每组9只,分别为假手术组（Sham）、模型组（I/R）、柴胡皂苷A 1 mg/kg组（I/R + SA 1 mg/kg）、柴胡皂苷A 5 mg/kg组（I/R + SA 5 mg/kg）、柴胡皂苷A 10 mg/kg（I/R + SA 10 mg/kg）和尼莫地平1 mg/kg组（I/R + NMDP 1 mg/kg）。双侧颈总动脉用微动脉夹夹闭法构建脑缺血再灌注模型,灌胃给药7 d。记录各组大鼠跳台实验犯错次数和Y迷宫实验检测新异臂进入次数,HE染色观察脑组织病理损伤,采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑法计算各组大鼠脑梗死率、脑组织含水量及脑指数,尼氏小体染色检测神经元凋亡,免疫印迹法检测Caspase3,Caspase9,Bax／Bcl-2和SIRT1的表达,试剂盒检测SOD、MDA、LDH的含量,RT-PCR检测SIRT1的表达。 结果 柴胡皂苷A能减少大鼠跳台实验犯错次数,增加新异臂进入次数,减少脑梗死率、脑组织含水量及脑指数,降低Bax/Bcl-2和Cleaved caspase3/caspase3、Cleaved caspase9/caspase9的比值,降低MDA和LDH的含量,升高SOD活性,上调SIRT1表达水平（P<0.05）。 结论 胡皂苷A能缓解缺血再灌注大鼠海马神经元损伤和氧化应激,这与SIRT1上调有关。     

乐尔脉对脑缺血再灌注损伤后期大鼠海马神经细胞凋亡的作用

 目的： 探讨乐尔脉胶囊（LEM）对脑缺血再灌注损伤后期大鼠海马神经细胞凋亡的作用与机制。方法: 采用大鼠左侧大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)造成局灶性脑缺血再灌注模型。缺血2 h再灌注30 d后,应用原位末端标记法（TUNEL）检测海马神经细胞凋亡,免疫组化、RT-PCR 法检测海马神经细胞Fas、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白及 mRNA的表达,并进行阳性细胞计数及Mias图像程序分析结果。结果: 大鼠缺血再灌注30 d后,模型组缺血侧海马CA1、CA2区凋亡细胞显著高于假手术组(P<0.05), Fas、Bax、 caspase-3、caspase-9蛋白表达明显增加,fas、bax、caspase-3、caspase-9 mRNA的表达上调(P<0.05)。LEM2.00 g/kg、0.87 g/kg和氟桂利嗪可显著减少海马神经细胞凋亡数,降低Fas、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白表达,fas、bax、caspase-3、caspase-9 mRNA的表达下调,LEM 0.87 g/kg作用次于2.00 g/kg。LEM对bax mRNA有显著抑制作用。结论: LEM抑制海马神经细胞的凋亡,明显地减轻缺血再灌注后期大鼠海马神经细胞的损伤,其作用机制与调节细胞凋亡信号转导通路及相关蛋白有关。     

Genistein attenuates oxidative stress and neuronal damage following transient global cerebral ischemia in rat hippocampus

Oxidative stress is believed to contribute to neuronal damage induced by cerebral ischemia/reperfusion (I/R) injury. The present study was undertaken to evaluate the possible antioxidant neuroprotective effect of genistein against neuronal death in hippocampal CA1 neurons following transient global cerebral ischemia in the rat. Transient global cerebral ischemia was induced in male Sprague-Dawley rats by four-vessel-occlusion for 10min. At various times of reperfusion, the histopathological changes and the levels of mitochondria-generated reactive oxygen species (ROS), malondialdehyde (MDA), cytosolic cytochrome c and caspase-3 activity in hippocampus were measured. We found extensive neuronal death in the CA1 region at day 5 after I/R. The ischemic changes were preceded by increases in ROS generation and MDA concentration and followed by increased cytosolic cytochrome c, and subsequently caspase-3 activation and apoptosis. Treatment with genistein (15mg/kg, i.p.) significantly attenuated ischemia-induced neuronal death. Genistein administration also decreased ROS generation, MDA concentration and the apoptotic indices. These results suggest that genistein protects neurons from transient global cerebral I/R injury in rat hippocampus by attenuating oxidative stress, lipid peroxidation and the signaling cascade leading to apoptotic cell death.     

浅低温对沙土鼠脑缺血再灌后能量代谢及羟自由基产生的影响

目的:研究浅低温对沙土鼠脑缺血再灌后海马三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、腺苷酸(AMP)含量和羟自由基(OH·)产生以及延迟性神经元死亡(DND)的影响。方法:沙土鼠前脑缺血再灌注模型,脑缺血10min。应用高效液相结合电化学检测器测定海马OH·含量,高效液相及紫外检测器测定ATP、ADP、AMP含量,组织学检查判断DND。结果:缺血再灌96h,浅低温+缺血再灌组DND数目明显少于缺血再灌组。缺血再灌6h,浅低温+缺血再灌组海马2,3-二羟基苯甲酸(2,3-DHBA)含量明显低于缺血再灌组(P＜0.01),但在缺血再灌48和96h,3组间2,3-DHBA含量相比差异无显著性。脑缺血再灌6h,3组间ATP、ADP、AMP含量相比差异无显著性。在再灌48和96h,浅低温+缺血再灌组海马ATP、ADP、AMP含量明显高于缺血再灌组。结论:浅低温可能通过改善脑缺血后细胞能量代谢而减少DND。     

Benzodiazepines protect hippocampal neurons from degeneration after transient cerebral ischemia: an ultrastructural study

The ability of full and partial benzodiazepine receptor agonists to prevent DNA fragmentation and neuronal death after transient cerebral ischemia was investigated in the Mongolian gerbil. Diazepam (10mg/kg, i.p.) or the partial agonist imidazenil (3mg/kg, i.p.) was administered 30 and 90min after transient forebrain ischemia produced by occlusion of the carotid arteries for 5min. Treatment with diazepam completely protected CA1b hippocampal pyramidal neurons in 94% of the animals and partially protected pyramidal neurons in 6% of the animals, as assessed with a standard Nissl stain three and four days after ischemia. DNA fragmentation was examined by the terminal dUTP nick-end labeling (TUNEL) reaction. Prior to cell death, there were no TUNEL-positive neurons in area CA1b. By three days after ischemia, when neuronal degeneration was nearly complete, 14 out of 16 gerbils exhibited a positive TUNEL reaction throughout area CA1b stratum pyramidale. In 13 out of 14 gerbils treated with diazepam, no TUNEL-positive neurons were observed in this region. Imidazenil was less effective than diazepam with respect to both neuroprotection and prevention of DNA fragmentation. Three days after ischemia, six out of eight gerbils treated with imidazenil showed partial to complete neuroprotection. Imidazenil completely prevented DNA fragmentation in only one of the animals; varying degrees of TUNEL reaction persisted in the remainder. To determine whether the neurons protected by diazepam had a normal ultrastructure, gerbils were killed two to 30 days after ischemia and the hippocampal neurons in area CA1b were examined by electron microscopy. Within the first 48h after ischemia, early cytoplasmic changes of varying degrees (e.g., vacuolation, rough endoplasmic reticulum stacking, swollen mitochondria) and electron-dense dendrites were observed in gerbils not treated with diazepam. Degeneration was nearly complete by three days after ischemia. In contrast, pyramidal neuron ultrastructure appeared normal in gerbils that exhibited complete area CA1b neuroprotection (defined at the light microscope level) by diazepam when studied two, seven or 30 days after ischemia. In gerbils with partial protection of area CA1b, most of the remaining neurons exhibited varying degrees of necrosis when studied 30 days after ischemia. No apoptotic bodies were observed.We conclude that: (i) diazepam can fully protect CA1 pyramidal cells from the toxic effects of transient cerebral ischemia; (ii) when diazepam affords only partial neuroprotection, the residual CA1 pyramidal cells exhibit ultrastructural abnormalities consistent with necrotic damage; and (iii) diazepam is a more efficacious neuroprotectant than the partial benzodiazepine receptor agonist, imidazenil.     

2-脱氧葡萄糖诱导的内质网应激预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究2-脱氧葡萄糖(2-DG)诱导内质网应激(ERS)预处理对大鼠脑缺血再灌注的保护作用。方法 64只雄性SD大鼠随机均分为假手术组(SH组)、缺血/再灌注组(I/R组)、2-DG诱导的ERS预处理组(IP组)、IP+I/R组。采用TUNEL法检测CA1区凋亡细胞,免疫组化法、Western-Blot法检测p-JNK蛋白在海马CA1区的表达变化。结果与对照组比较,I/R组海马CA1区锥体神经元排列紊乱及变性坏死,形态正常椎体细胞百分数减少,凋亡细胞数目明显增加,脑组织p-JNK表达水平增加;与I/R组相比,IP+I/R组形态正常锥体细胞明显增加,凋亡细胞数目明显减少,脑组织表达较I/R组明显减少。结论 2-DG诱导的ERS对脑缺血再灌注损伤有保护作用,可能与其抑制细胞凋亡和p-JNK表达相关。     

Genistein后处理介导eNOS激活及其对缺血后神经元的保护作用

 目的 研究Genistein后处理 (Genistein Postconditioning, GPC) 对脑缺血再灌注后大鼠海马CA1区神经元的神经保护作用,及其对eNOS磷酸化水平的影响,从而揭示GPC神经保护作用可能的分子机制。方法 建立大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,采用Western Blot技术检测大鼠海马CA1区eNOS、p-eNOS的表达;NeuN染色和TUNEL技术分别观察海马CA1区神经元的存活和凋亡样损伤。结果 1. Western Blot结果显示,与I/R组相比GPC后再灌注30min和3d p-eNOS水平显著升高,而eNOS蛋白表达在各个时间点没有明显变化。2. 激光扫描共聚焦显微镜技术结果显示,GPC组与对照组相比较,海马CA1区存活的神经元细胞明显增加,而凋亡样损伤的神经元显著减少;3. NOS抑制剂L-NAME不但有效降低p-eNOS水平,而且可显著减弱GPC诱导的神经保护作用。结论 Genistein后处理可抑制大鼠海马CA1区神经元凋亡,其机制可能与p-eNOS表达上调有关。     

降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和磷酸化CREB的上调作用

目的:探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和磷酸化CREB(p- CREB)表达的影响。方法:制作局灶性脑缺血再灌注模型实验组并给予CGRP,应用免疫组织化学、Western印迹和图像分析方法检测大鼠海马CA1区CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组CA1区CREB表达较假手术组减少,CGRP组CA1区的CREB表达高于缺血再灌注组。缺血再灌注组CA1区p-CREB表达高于假手术组,CGRP组p-CREB表达多于缺血再灌注组。结论:CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和p-CREB的表达,CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的。