噬菌体裂解法与TaqMan-PCR法检测结核分支杆菌的比较

目的 :比较研究噬菌体裂解法与 Taq Man- PCR法在结核分支杆菌快速检测中的价值。方法 :用噬菌体裂解法和 Taq Man- PCR法检测 3株结核分支杆菌标准株、1 3株非结核分支杆菌和 7株非分支杆菌以及 2 4 5份肺结核患者的痰标本、1 2 8例结核性胸膜炎胸腔积液、4 9例非结核性痰标本。结果 :噬菌体裂解法 :3株结核分支杆菌标准株均为阳性 ,而 1 3株非结核分支杆菌和 7株非分支杆菌、4 9例非结核性痰标本均为阴性 ;应用噬菌体裂解法和 Taq Man- PCR法检测 2 4 5份肺结核患者的痰标本的阳性率分别为 4 6 .9%和 5 1 .0 %,二者差异无显著性 (P>0 .0 5 )。两种方法检测 1 2 8例结核性胸膜炎胸腔积液阳性率分别为 4 0 .6 %和 4 2 .2 %,二者差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :噬菌体裂解法简便、快速 ,具有较高的敏感性和特异性 ,是一种崭新的结核分支杆菌快速检测方法。     

菌阴肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌rpoB耐药基因突变的检测

目的应用套式PCR-DNA测序方法直接检测菌阴肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌相关的rpoB基因突变,以期建立一种判定菌阴肺结核患者是否对利福平有无耐药性的方法。方法采用套式PCR-DNA测序方法直接检测112例活动性肺结核患者和20例非结核性肺部疾病患者痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变情况。同份痰标本同时做涂片抗酸染色、罗氏培养。结果112例活动性肺结核患者痰标本39例为菌阴(涂阴培阴),39例菌阴痰中套式PCR扩增18例呈阳性,产物DNA测序2例有rpoB基因突变,位点为第526发生了CAC→GAC突变和第531发生了TCG→TTG突变。20例非结核性肺部疾病患者标本套式PCR扩增均为阴性,特异性100%。结论套式PCR-DNA测序可望为直接检测菌阴肺结核患者临床痰标本中结核分枝杆菌耐利福平的准确、特异、快速的方法。     

菌阴肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌rpoB耐药基因突变的检测

目的 应用套式PCR-DNA测序方法直接检测菌阴肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌相关的rpoB基因突变,以期建立一种判定菌阴肺结核患者是否对利福平有无耐药性的方法.方法 采用套式PCR-DNA测序方法直接检测112例活动性肺结核患者和20例非结核性肺部疾病患者痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变情况.同份痰标本同时做涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 112例活动性肺结核患者痰标本39例为菌阴(涂阴培阴),39例菌阴痰中套式PCR扩增18例呈阳性,产物DNA测序2例有rpoB基因突变,位点为第526发生了CAC→GAC突变和第531发生了TCG→TTG突变.20例非结核性肺部疾病患者标本套式PCR扩增均为阴性,特异性100%.结论 套式PCR-DNA测序可望为直接检测菌阴肺结核患者临床痰标本中结核分枝杆菌耐利福平的准确、特异、快速的方法.     

结核分枝杆菌荧光定量聚合酶链反应对结核性脑膜炎的早期诊断价值

目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(荧光定量PCR)检测技术对诊断结核性脑膜炎的应用价值。方法:对165例确诊为结核性脑膜炎患者和38例非结核性脑膜炎患者行腰椎穿刺术,标本送检结核分枝杆菌的荧光定量PCR、结核分枝杆菌培养、涂片找抗酸杆菌,比较各种检测方法的敏感性和特异性。结果:荧光定量PCR反应检测阳性率52.7%,明显高于脑脊液涂片找抗酸菌(1.2%)及结核分枝杆菌培养(11.5%)。荧光定量PCR与抗酸杆菌培养方法对比,P<0.01,差异有统计学意义,PCR检测明显优于细菌学培养。结论:结核分枝杆菌的荧光定量PCR对结核性脑膜炎诊断特异性高,分析周期短,在早期诊断结核性脑膜炎方面有重要的参考价值。     

结核分枝杆菌检测方法临床应用的对比研究

目的用涂片、聚合酶链反应(PCR)法检测结核分枝杆菌,探讨其临床应用价值。方法对169例临床确诊的肺结核患者、可疑肺结核患者和非结核患者痰标本用涂片、PCR两种方法进行检测,对结果进行对比分析。结果 169例痰标本中,痰涂片检查阳性率为7.1%(12/169),PCR检测阳性率为32.54%(55/169);痰涂片、PCR法检测42例临床确诊的肺结核患者痰标本阳性率分别为11.9%(5/42)、57.1%(24/42);检测82例临床可疑肺结核患者痰标本阳性率分别为8.54%(7/82)、37.8%(31/82)。比较两种方法的阳性检测率,差异有统计学意义(χ2=19.729,P<0.01),检测45例非结核患者痰标本,涂片及PCR检测均为阴性。结论 PCR法检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核病检测诊断的有效方法之一。     

聚合酶链反应与抗结核抗体联合检测在结核性胸膜炎诊断上的意义

结核分支杆菌的细菌学检查是结核病病原学诊断的直接证据。但由于检出率低 ,远不能满足临床需要。而聚合酶链反应(Polymerase chain reacition,PCR)技术对诊断结核病具有敏感、特异和快速的优点 ,但也有一定的局限性。结核性胸膜炎是以痰菌阴性为主 ,依赖胸积液的生化及细胞学的诊断。为了进一步提高结核性胸膜炎的诊断率 ,探讨 PCR与抗结核抗体(Against tuberculosis antigen,ATA)联合检测在结核性胸膜炎诊断上的意义 ,我们对 6 1例结核性胸膜炎的胸水标本和 34例非结核性胸膜炎的胸水标本采用 PCR方法及 ATA检测进行对比研究 ,现将…     

三种检测方法在肺外结核病诊断中价值的探讨

目的探讨结核分枝杆菌DNA检测、血清结核抗体检测及结核菌素试验3种方法在肺外结核诊断中的价值。方法采用病例对照研究方法,将所观察对象分为两组,非结核病组121例及肺外结核病组132例,各组诊断采用双盲法,且有可比性。对非结核病组的血标本或痰标本及肺外结核组血标本或/和结核性胸膜炎的胸水标本、结核性腹膜炎的腹水标本、结核性脑膜炎的脑脊液标本和泌尿系结核的尿液标本、部分颈淋巴结结核干酪坏死分泌物标本进行PCR扩增及ABI-7 300仪器荧光检测结核分枝杆菌DNA定量。应用统计学分析敏感性、特异性。对所选病例均同时做血清抗结核抗体检测及结核菌素试验。结果结核杆菌DNA检测肺外结核病的敏感性34.85%、特异性85.12%;血清抗结核抗体敏感性62.88%、特异性52.07%;结核菌素试验敏感性65.15%、特异性65.15%。结论结核分枝杆菌DNA分子生物学检测技术快速准确、特异性高、假阴性低、需时短,缩短了肺外结核诊断的检测时间,为早期诊断、早期治疗提供有效支持。血清结核抗体检测及结核菌素试验的敏感性和特异性均较高,阳性结果提示感染结核分枝杆菌。3种方法是诊断肺外结核病必要的辅助方法。     

迪比多检测结核分枝杆菌抗体在肺结核诊断中的应用

目的探讨斑点金免疫渗滤试验(D IFGA商品名:迪比多)检测结核分枝杆菌抗体对肺结核的诊断价值。方法采用迪比多试剂盒对包括104例肺结核患者、144例非结核性肺病患者和65例正常人共313例血清进行结核分枝杆菌抗体检测,同时用涂片法、培养法和聚合酶链法(PCR)检测痰液进行方法学比较。结果迪比多检测肺结核患者阳性率80.77%,非结核性肺病患者阳性率7.64%,正常人阳性率3.08%。结论迪比多敏感性高,特异性好,对肺结核诊断有参考价值;操作简便、快速,与涂片法、培养法和PCR相比有明显优势,适合基层医院推广使用。     

荧光定量PCR在脑脊液结核分枝杆菌DNA检测中的应用

目的应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测结核性脑膜炎患者脑脊液结核分枝杆菌(MTB)DNA,探讨其对结核性脑膜炎的诊断价值。方法选取108例临床确诊或疑似的结核性脑膜炎患者和50例非结核性脑膜炎患者脑脊液样本,采用抗酸染色涂片法、MTB培养法及荧光定量PCR进行检测,对不同组间的检测结果进行对比分析。结果 108例脑膜炎患者中,确诊结核性脑膜炎72例,抗酸染色涂片法、MTB培养法及荧光定量PCR的阳性率分别为9.72%(7/72)、16.67%(12/72)及76.39%(55/72);疑似结核性脑膜炎36例,抗酸染色涂片法、MTB培养法及荧光定量PCR的阳性率分别为5.55%(2/36)、11.11%(4/36)及25.00%(9/36),2个组间阳性率差异有统计学意义(P0.05)。50例非结核性脑膜炎患者脑脊液样本抗酸染色涂片法、MTB培养法及荧光定量PCR检测均为阴性。结论荧光定量PCR检测脑脊液中的MTB DNA对诊断和鉴别诊断结核性脑膜炎具有较高的临床价值。     

荧光定量PCR技术检测结核分支杆菌DNA的应用价值

目的评价荧光定量PCR技术检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法应用荧光定量PCR法及抗酸染色、结核杆菌培养法,对179例活动性肺结核患者晨痰、123例活动性肺结核患者外周血、34例结核性胸膜炎患者胸水、20例非结核性呼吸系统疾病患者的晨痰标本进行检测。结果179例活动性肺结核患者晨痰、123例活动性肺结核患者外周血、34例结核性胸膜炎患者胸水,涂片抗酸染色阳性率分别为20．67％（37／179）、0．00％、0．00％;细菌培养阳性率分别为41．34％（74／179）、0．00％、2．94％（1／34）;荧光定量PCR技术阳性率分别为64．25％（115／179）、38．21％（47／123）、44．12％（15／34）。3种标本荧光定量PCR技术阳性率高于抗酸染色和结核杆菌培养,经统计学处理发现,差异有统计学意义。用荧光定量PCR技术检测临床标本特异性为95．00％。结论荧光定量PCR技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性高等优点,是结核病诊断的有效方法之一。     

PCR—ELISA测定结核分枝杆菌DNA临床应用评价

目的　评价聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验 (PCR ELISA)测定结核分枝杆菌DNA临床应用价值。方法　用PCR ELISA测定 436例肺结核、172例非结核病人痰标本中的结核分枝杆菌DNA ,并结合临床诊断和痰菌检查对实验结果进行分析。结果　 436例活动性肺结核病人本法最终阳性 341例 ,阳性率 78.2 1% ,其中痰菌阳性病人本法阳性率为 97.0 7% ,痰菌阴性病人阳性率为 5 5 .33 % (10 9/ 197) ;而 172例对照患者只有 3例假阳性 ,假阳性率 1.74%。结论　本法测定痰液结核分枝杆菌DNA对肺结核的诊断具有很高的敏感性和特异性 ,尤其对痰菌阴性的活动性肺结核病人具有重要辅助诊断价值     

两种脑炎患者脑脊液酶水平观察与分析

目的　观察结核性和病毒性两种脑炎患者脑脊液酶水平的改变。方法　在治疗前采集结核性脑膜炎患者脑脊液标本 4 0例 ,病毒性脑膜炎患者脑脊液标本 6 0例 ,正常人群脑脊液标本2 0例 ,用酶速率法测定AST、ALT、γ GT、ALP、LDH、α HBDH、CK、CK MB 8种酶水平。结果　结核性脑膜炎组LDH、AST酶水平分别为 (180 9± 112 2 )U/L、(4 2 2± 11 8)U/L ,显著高于病毒性脑炎组 (P <0 .0 1)和正常对照组 (P <0 .0 1)。结论　对脑脊液进行LDH、AST检测 ,有助于诊断和鉴别诊断结核性脑膜炎和病毒性脑膜炎。     

实时荧光定量聚合酶链反应技术在结核性脑膜炎中的诊断价值

目的 用涂片、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结核分枝杆菌,探讨其临床应用价值.方法 对临床确诊的结核性脑膜炎(n =110)、可疑结核性脑膜炎(n=205)和非结核性脑膜炎(n=100)患者的脑脊液标本分别采用涂片、RT-PCR两种方法进行检测,对结果进行对比分析.结果 415例脑脊液标本中,脑脊液涂片检查阳性率为2.4％(10/415),PCR检测阳性率为12.5％(52/415);脑脊液涂片、PCR法检测110例临床确诊的结核性脑膜炎患者脑脊液标本阳性率分别为6.4％(7/110)、26.4％(29/110);检测205例临床可疑结核性脑膜炎患者脑脊液标本阳性率分别为1.5％(3/205)、11.2％(23/205).比较两种方法的阳性检测率,差异有统计学意义(P＜0.05),检测100例非结核患者脑脊液标本,涂片及PCR检测均为阴性.结论 RT-PCR法检测脑脊液中TB-DNA对结核性脑膜炎的诊断有决定意义,具有较高临床应用价值.     

痰液结核杆菌的检查方法结果比较

目的：探讨不同方法结果比较痰液结核杆菌(TB)阳性率。方法：痰直接涂片和浓集涂片找抗酸杆菌；痰培养；实时动态荧光定量PCR(FQ—PCR)检测痰液TB—DNA。结果：浓集法较直接法阳性率有大幅提高，培养法阳性率较低。对50份来自临床诊断肺结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，FQ—PCR检出28份阳性，直接法检出6份阳性，浓集法检出16份阳性，培养法检出12份阳性，其中1例假阳性，其余证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论：涂片检查结核杆菌应提倡用浓集法，FQ—PCR法检测TB—DNA可列入TB实验诊断常规项目，涂片。培养，及FQ—PCR同时检测可从不同方面满足临床需要。     

噬菌体生物扩增法对结核病临床诊断的意义

目的 探讨噬蒲体生物扩增法技术检测临床标本对结核病临床诊断的应用价值.方法 采用噬菌体生物扩增法技术对86例活动性肺结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液,共计189份临床标本进行检测;对非结核病患者痰标本10例、胸水5例、灌洗液5例共计20份标本进行检测.同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 86例活动性结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液噬菌体生物扩增法检测阳性率分别为53.49%(46/86)、49.32%(36/73)、60.00%(18/30);涂片抗酸染色阳性率分别为24.42%(21/86)、2.74%(2/73)、20.00%(6/30);罗氏培养阳性率分别为44.19%(38/86)、4.11%(3/73)、36.67%(11/30).20份非结核患者标本,噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性.结论 噬菌体生物扩增法检测结核病标本的阳性率高于涂片法和罗氏培养,该方法 敏感性高、特异性强、操作简便,对结核病临床诊断有较高的应用价值.     

联合检测胸水中TB-Ab和TB-DNA对诊断结核性胸膜炎的应用价值

目的 评价检测胸水中结核抗体(TB-Ab)和TB-DNA对诊断结核性胸膜炎的应用价值.方法 以胸水为标本,用斑点免疫金渗试验检测结核抗体,用荧光探针PCR(TaqManPCR)技术检测TB-DNA,同时对胸水进行涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 179例结核性胸膜炎胸水,结核抗体阳性率为60.89%(109/179)、TB-DNA阳性率为63.13%(113/179),TB-Ab阳性及/或TB-DNA阳性共135例(75.4%),涂片抗酸染色阳性率为1.1%(2/179)、罗氏培养阳性率为1.68%(3/179).30例非结核性胸膜炎胸水,结核抗体阳性率为6.67%(2/30),TaqManPCR、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性.结论 结核抗体和TB-DNA均是诊断结核性胸膜炎的较好指标,两者联检可进一步提高检测敏感性.     

PCR在组织细胞坏死性淋巴结炎与结核性淋巴结炎鉴别诊断中的价值

目的 选取30例组织细胞坏死性淋巴结炎活检标本为对象,评价PCR在组织细胞坏死性淋巴结炎与结核性淋巴结炎鉴别诊断中的意义.方法 对30例组织细胞坏死性淋巴结炎活检标本,选用结核分支杆菌DNA特异性插入序列IS6110为引物,采用巢式聚合酶链反应(N-PCR)及凝胶电泳检测组织细胞坏死性淋巴结炎中是否感染结核杆菌.结果 30例组织细胞坏死性淋巴结炎活检标本中8例结核杆菌阳性.结论 PCR可以作为鉴别组织细胞坏死性淋巴结炎与结核性淋巴结炎,尤其是不典型结核性淋巴结炎的重要指标.     

噬菌体生物扩增法检测不同标本对结核病临床诊断的意义

目的探讨噬菌体生物扩增法技术检测不同标本对结核病临床诊断的应用价值。方法采用噬菌体生物扩增法技术对86例活动性肺结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液、7例结核性脑膜炎患者脑脊液,共计196例结核标本进行检测;对非结核病患者痰标本10例、胸水5例、灌洗液5例,共计20例标本进行检测。每例标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果86例痰标本、73例胸水、30例肺泡灌洗液、7例脑脊液噬菌体生物扩增法检测阳性率分别为53．49％（46／86）、49．32％（36／73）、60．00％（18／30）、0（0／7）,涂片抗酸染色阳性率分别为24．42％（21／86）、2．74％（2／73）、20．00％（6／30）、0（0／7）,罗氏培养分别为44．19％（38／86）、4．11％（3／73）、36．67％（11／30）、0（0／7）。20例非结核患者标本,噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论噬菌体生物扩增法检测结核病标本的阳性率高于涂片和罗氏培养,该方法敏感性高、特异性强、操作简便,对结核病临床诊断有较高的应用价值。     

聚合酶链反应诊断肺结核的临床价值

为提高肺结核病原学的诊断水平,我们采用聚合酶链反应(PCR)技术检测了36例肺结核患者痰标本中的结核菌,并同涂片法、培养法检查结核菌及与非结核患者进行对照分析研究,以评价PCR诊断肺结核的临床价值。 1 对象与方法①研究对象:36例肺结核患者均为本院呼吸内科及门诊患者。诊断系根据临床表现、胸部X线、细菌学或病理学检查,并结合抗结核治疗有效而确诊。20例非结核患者亦取自本院患者,其中肺癌9例,肺炎5例,慢性阻塞性肺病和支气管扩张各3例。②标本收集:晨起清洁口腔后,深部咳出2～3口痰,留入无菌容器中。每份标本同时分送涂片找抗酸杆菌、结核菌培养及PCR     

联合检测血结核抗体和胸水TB-DNA对结核性胸膜炎的诊断价值

目的 探讨血抗结核抗体和胸水TB-DNA对诊断结核性胸膜炎的价值.方法 对90例结核性胸腔积液和40例非结核性胸腔积液患者,分别以血和胸水为标本,用结核蛋白芯片检测结核抗体,用PCR技术检测TB-DNA,观察2种方法检测的灵敏性、特异性、检测的一致性和联合检测阳性率.结果 TB-DNA对结核性胸膜炎诊断的敏感性、特异性分别为68.89%、55.00%,血结核抗体对结核性胸膜炎诊断的敏感性、特异性分别为53.33%、60.00%,两者联合检测的敏感性和特异性分别为83.33%、70.00%.联合检测的敏感性和特异性明显高于单独血结核抗体和结核抗体和胸水TB-DNB检测(均P＜0.05).结论 血结核抗体检测对结核性胸膜炎患者具有较好的诊断价值,联用TB-DNA检测可提高结核性胸膜炎患者检出率.