沿海地区11例手部分枝杆菌感染分析

目的探讨沿海地区手部非结核分枝杆菌感染的体外培养技术和要领，为临床确诊，治疗提供直接证据。方法对2001年6月－2004年9月收治的28例可疑手部分枝杆菌感染作组织块匀浆后的涂片抗酸染色，分枝杆菌培养，分枝杆菌生化分型，分枝杆菌的核酸测序分型。结果分枝杆菌培养阳性11例，具体为海分枝杆菌占8例，偶发1例，鸟1例，结核1例，其中直接抗酸染色检查阳性2例。结论手部慢性可疑分枝杆菌感染患者应同时做抗酸染色及分枝杆菌培养。非结核分枝杆菌感染尤其是海分枝杆菌远比结核分枝杆菌常见，是沿海地区手部非典型感染的主要致病因素。在分枝杆菌培养时必须同时在30℃、35℃两种温度下进行培养。     

BACTEC MGIT 960和BACT/ALERT 3D系统快速培养和鉴定痰中抗酸杆菌

目的对抗酸染色阳性痰行分枝杆菌培养和鉴定。方法采用萋一尼氏抗酸染色法对临床诊断肺结核患者的晨痰涂片直接镜检,抗酸染色阳性痰经BACTEC960和BACT/ALERT3D系统进行分枝杆菌培养,分别经对硝基苯甲酸（PNB）和噻吩-2-羧基肼（TCH）培养基生长试验行分枝杆菌菌群和结核分枝杆菌复合群菌种鉴定。结果抗酸染色阳性痰标本的分枝杆菌培养阳性率100％,大多数为结核分枝杆菌（9／10）,少数为非结核分枝杆菌（1／10）,最快6天即可报告分枝杆菌阳性培养。结论BACTEC 960和BACT／ALERT3D系统具有快速培养分枝杆菌作用,抗酸染色阳性痰有必要行分枝杆菌培养和鉴定,有利于肺结核与非结核分枝杆菌病的鉴别诊断、结核分枝杆菌菌种鉴定和抗结核药物敏感性试验。     

体液标本经消化液处理在结核病发现中应用评价

目的了解消化液处理标本抗酸染色在提高结核分枝杆菌检出率方面的价值。方法以BACTECMGIT960检出阳性样本为参照,消化液处理标本抗酸染色比较直接涂片抗酸染色和L—J培养这两种方法,对消化液处理标本抗酸染色的阳性检出率做出评价。结果MGIT960检出的阳性样本共635例,经消化液处理直接涂片的阳性检出率为48．03％（305／635）,与直接涂片抗酸染色阳性检出率（62．20％（395／635））比较,两者无统计学差异;较L—J培养管87．55％（556／635）的阳性检出率,两者有显著的统计学差异。结论消化液处珲后的抗酸涂片并不比多次直接涂片抗酸染色对结核分枝杆菌的阳性检出率高。     

Xpert MTB/RIF对结核性胸膜炎的诊断价值研究

目的探讨Xpert MTB/RIF对胸水中结核分枝杆菌的检出情况,评价其在结核性胸膜炎早期诊断中的应用价值。方法对102例结核性胸膜炎患者和50例恶性胸水患者的胸水进行Xpert MTB/RIF检测,同时行胸水抗酸染色及结核分枝杆菌快速培养和药敏试验(BACTECT MGIT 960),比较Xpert MTB/RIF与抗酸染色、结核分枝杆菌快速培养在敏感性及特异性上的差异,评价Xpert MTB/RIF在结核性胸膜炎诊断中的应用价值。结果 102例结核性胸水标本中,4例抗酸染色阳性,阳性率为3.92%(4/102);18例BACTECT MGIT 960培养阳性,阳性率为17.65%(18/102);24例Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌阳性,阳性率为23.53%(24/102),其中,3例存在利福平耐药突变基因,耐药突变率为12.50%(3/24)。Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的阳性率高于抗酸染色法,差异有统计学意义(P0.05),与结核分枝杆菌快速培养阳性率及利福平药敏结果差异无统计学意义(P0.05)。50例恶性胸水标本抗酸染色及结核分枝杆菌快速培养均为阴性,特异性均为100%,1例Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌阳性,特异性为98.00%,其特异性与抗酸染色及结核分枝杆菌快速培养差异无统计学意义(P0.05)。结论 Xpert MTB/RIF系统在结核性胸膜炎的快速诊断中具有较高的诊断能力,是一种省时、敏感性和特异性均高的结核分枝杆菌检测方法。     

2月末结核分枝杆菌阳性初治肺结核患者菌型鉴定结果分析

目的分析深圳市南山区2月末结核分枝杆菌阳性肺结核患者的分枝杆菌分布情况,为诊断与治疗分枝杆菌感染提供参考依据。方法 2013年1月至2015年12月深圳市南山区痰结核分枝杆菌阳性的初治肺结核患者治疗2月末仍结核分枝杆菌阳性患者进行菌型鉴定并进行结果分析。结果 617例结核分枝杆菌阳性肺结核患者经2个月强化期治疗后,46例患者出现2月末结核菌阳性,其中涂片阳性为33例,涂片阴性而培养阳性为13例;涂片阳性患者中19例培养阴性,10例为结核药物敏感菌,4例为非结核分枝杆菌;涂阴培阳患者中1例为结核药物敏感菌,12例为非结核分枝杆菌;16例非结核分枝杆菌经分型鉴定后,7例脓肿分枝杆菌,9例戈登分枝杆菌。结论肺结核患者可能继发非结核分枝杆菌感染,抗结核治疗2月末肺结核病人应及时留取痰标本做结核菌涂片,培养和菌种鉴定,为进一步诊断和制定个体化疗方案提供依据。     

BACTEC960培养阳性530株分枝杆菌的形态学特征探讨

目的探讨分枝杆菌在BACTEC960中的生长特点和涂片抗酸染色形态特征,为菌群鉴定提供初步意见。方法收集福州肺科医院临床标本经BACTEC960培养阳性530例,进行直接涂片抗酸染色、菌群鉴定和药敏试验。结果结核分枝杆菌在MGIT培养管中呈絮状沉淀生长,镜检呈绳索状排列。非结核分枝杆菌（NTM）呈混浊生长,镜检呈散在、团粒状、块状、碎片状和松疏束状等不规则排列。结论结核分枝杆菌在BACTEC960中培养形成有特点的缠结,在显微镜下很容易识别,对鉴定分枝杆菌有初筛作用。     

云南省AIDS合并TB病原学诊断与耐药性

目的提高艾滋病（AIDS）合并结核病（TB）的病原学诊断的阳性率,获得AIDS合并TB临床分离结核分枝杆菌菌株对一线抗结核药物的耐药率。方法采用萋-尼抗酸染色、BacT/ALERT3D360MP结核分枝杆菌培养和实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）,对AIDS合并疑似结核分枝杆菌感染病人不同时段的样本同时进行检测;对结核分枝杆菌培养阳性物,经抗酸染色和TB-DNAPCR确认为结核分枝杆菌的进行抗结核药敏试验。结果涂片萋-尼抗酸染色阳性率为11.69%（18/154）;样本直接进行TB-DNAPCR扩增的阳性率18.18%（28/154）;MP培养阳性经抗酸染色和TB-DNAPCR确认结核分枝杆菌的阳性率20.13%（31/154）。临床分离株对抗结核一线药物的敏感试验结果显示,异烟肼的耐药率高达81.48%,其次是链霉素37.04%,乙胺丁醇和利福平分别为25.93%、18.52%。结论云南省AIDS合并结核分枝杆菌临床分离率为20.13%（31/154）,AIDS合并非结核分枝杆菌的临床分离率为16.23%（25/154）。实时荧光PCR扩增TB-DNA能为临床提供早期病原学诊断依据,而结核分枝杆菌培养在提供病原学诊断＂金标准＂的同时,可为进一步检测其耐药性准备菌株。鉴于AIDS病人免疫缺陷的特殊性,需要采用多种方法对多份样本和多种类样本同时检测,提高检测的特异性和敏感性。     

细针吸取细胞学联合荧光定量聚合酶链反应在诊断淋巴结结核中的作用

目的 比较细针吸取细胞学联合荧光定量PCR检测结核分枝杆菌DNA与抗酸染色法对淋巴结结核的诊断价值.方法 选取合肥市第一人民医院2004年6月至2008年6月的72例患者,均为体表有肿块、针吸活检为肉芽肿性改变、随访抗结核治疗有效的病例,其中男22例,女50例,年龄1～83岁,中位年龄48岁.用细胞学剩余材料或重新取材进行荧光定量PCR检测结核分枝杆菌DNA(TB-DNA),直接涂片抗酸染色,同时对病例的细胞学表现进行分型,分别计算不同类型病例的TB-DNA和抗酸染色检测结果.不同细胞学类型及抗酸染色结果TB-DNA拷贝数比较采用Wilcoxon法进行秩和检验.结果 72例标本中46例TB-DNA为阳性(46/72,64%);细胞学分型为1型、2型、3型的患者分别有7、34和31例,其中TB-DNA阳性分别为0/7、21/34(61%)和25/31(81%).72例中有64例进行抗酸染色(14/64,22%),且此14例TB-DNA均为阳性.2型和3型之间TB-DNA的拷贝数比较差异有统计学意义(z=-2.514,P<0.05).抗酸染色阳性和阴性组TB-DNA拷贝数比较差异有统计学意义(z=-4.778,P<0.05).结论 细针吸取细胞学联合荧光定量PCR检测TB-DNA,较抗酸染色法可更加准确、快速地诊断淋巴结结核引起的体表肿块.     

MPB64抗原检测快速诊断结核分枝杆菌的临床价值

目的比较痰涂片抗酸染色、改良酸性罗氏培养、MPB64的免疫胶体金法用于检测结核分枝杆菌特异性的分泌蛋白质MPB64,评价MPB64的免疫胶体金法在结核分枝杆菌快速检测中的应用价值。方法选取438例确诊肺结核患者痰液,进行痰涂片抗酸染色、7H9液体培养基和改良酸性罗氏培养基培养、基于MPB64的免疫胶体金法检测,对结果进行比较分析。并选取痰涂片确认为阳性的标本33例,用米氏7H9液体培养和基于MPB64的免疫胶体金法进行检出时间对比。结果痰涂片阳性率为14.8%,罗氏培养阳性率为20.7%,7H9液体培养阳性率24.8%,MPB64的免疫胶体金法阳性率为25.1%。基于MPB64的免疫胶体金法在培养的第15天检出32例阳性;而单纯的7H9液体培养加抗酸染色检测法在第15天只检出11例阳性。结论7H9液体培养配合基于MPB64的免疫胶体金法可以作为一种较为敏感和特异的检测结核分枝杆菌感染的方法,并可以有效的区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌。     

应用磁纳米捕获-PCR技术检测痰液结核分枝杆菌的研究

目的采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,以提高PCR检测的灵敏度,快速诊断结核病。方法以普通PCR为对照,采用磁纳米捕获技术富集187份结核和非结核呼吸系统疾病患者痰标本中的结核分枝杆菌,进行PCR检测。结果 152份肺结核患者痰标本41份(27.0%)涂片抗酸染色阳性,72份(47.4%)普通PCR检测阳性,126份(82.9%)磁纳米捕获-PCR检测阳性。35份非结核呼吸系统疾病患者,痰标本中抗酸染色均为阴性,1份普通PCR和磁纳米捕获-PCR检测均阳性,该患者临床诊断肺部感染合并陈旧性肺结核。结论采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,可显著提高PCR检测的灵敏度。     

66例非结核分支杆菌肺病的临床分析

目的　了解非结核分支杆菌 (NTM)肺病的临床特征。方法 对 1998—2002年 4年间广州地区 4129例分支杆菌培养阳性的病例中,经菌型鉴定而确诊为NTM肺病的资料完整的 66例病例进行分析。结果 66例NTM肺病中,快速生长型感染的有 40例,其中脓肿分支杆菌 29例,龟分支杆菌 7例,耻垢分支杆菌 3例和偶然分支杆菌 1例;慢速生长型感染的有 26例,其中鸟分支杆菌 18例,胞内分支杆菌 6例,蟾分支杆菌和海分枝杆菌各 1例。分枝杆菌混合感染的有 10例;新发现病例16例,病程在 1～10年的有 31例,11～25年 11例,30年以上的有 8例;主要症状依次为咳嗽、咳白粘痰、咯血和发热;X线胸片示两侧受累者达 69.7%,右侧 21.2%,左侧仅有 4.5%,无病灶者占4.5%;出现胸腔积液的有 7例;NTM对抗结核药物呈现高度的原始耐受性,但对喹诺酮类、大环内脂类和氨基糖甙类的耐药率相对较低。结论 NTM肺病的临床特征无特异性,病程长,常规的抗结核治疗效果差。     

应用rpoB基因PCR反向斑点杂交快速鉴定分枝杆菌菌种的研究

目的根据分枝杆菌rpoB基因序列建立一种准确、快速的分枝杆菌菌种鉴定方法。方法以分枝杆菌rpoB基因编码序列为靶基因,用聚合酶链反应(PCR)反向斑点杂交技术检测24种分枝杆菌标准株、8种非分枝杆菌标准株、37株分枝杆菌临床分离株。结果分枝杆菌与非分枝杆菌标准株经PCR扩增后,分枝杆菌标准株均扩增出360 bpDNA片段,非分枝杆菌除甲型溶血性链球菌和假白喉棒状杆菌出现同样片段外,其它菌种均未见扩增。敏感性试验可检测出1 pg结核分枝杆菌DNA。探针特异性试验表明,21种寡核苷酸探针除海分枝杆菌与偶然分枝杆菌的探针有交叉杂交,其余均为特异性杂交。应用该方法对37株分枝杆菌临床分离株进行鉴定,结果与常规方法鉴定结果相符。结论应用rpoB基因序列和PCR反向斑点杂交技术鉴定分枝杆菌菌种快速、准确,具有较高的应有价值。     

结核分支杆菌镜检、培养和PCR技术诊断结核病的临床评估

目的　评估结核分支杆菌PCR、培养、镜检对结核病诊断的临床效果。方法 对1217例临床可疑结核病人用PCR、培养和镜检三种方法的阳性检出率进行比较。结果 不同临床标本用PCR技术诊断结核病,其敏感性高于培养和涂片镜检,阳性检出率分别为:88.7%,43.4%,26.5%。结论 通过三种方法比较分析,说明PCR技术是一种速度快、检出率高的检测结核分支杆菌的重要方法,对结核病的诊断有重要的参考价值。     

游泳池肉芽肿皮损中分离出海分支杆菌的报告

目的　报告一例从游泳池肉芽肿患者皮肤组织标本中分离出一株海分支杆菌。方法 标本的分离培养采用碱处理后接种酸L—J培基,置28℃和37℃两种条件下培养;药物敏感性测定采用绝对浓度法;菌种鉴定采用形态学观察、鉴别培基(PNB、TCH、5%NaCl、葡萄糖琼脂、麦康盖琼脂)的鉴别及细胞生物化学反应的方法进行鉴定。结果 该菌株在28℃中的生长明显优于37℃培养;并对INH、SM耐药,对RFP、EM敏感;经光照后可产生明显的黄色色素,耐热触酶(+),硝酸还原(-)。结论 根据鉴定结果,确定其为海分支杆菌。     

空调对结核分枝杆菌医院内传播的影响

目的　探索医院空调对结核分枝杆菌院内传播的影响。方法 用罗氏固体平板培养基,分别采集医院内中央空调控温区、分体空调控温区和无空调区的空气标本,经36.5℃培养28d。根据菌落形态、抗酸染色特性作出初步鉴别,然后经一系列生化试验确定结核分枝杆菌。结果 结核分枝杆菌检出率中央空调控温区为31.1%;分体空调控温区为15.6%;不用空调控温区为4.4%,相互间有明显差异。结论 医院空调特别是中央空调对结核分枝杆菌院内传播有一定的促进作用,应该引起必要的重视。     

聚合酶链反应-增强化学发光法快速检测结核杆菌的研究

目的　建立聚合酶链反应 -增强化学发光法 (polymerase chain reaction-enhanced chemilumine cence ,PCR-ECL)快速高灵敏度和高特异性检测结核杆菌的方法。方法 以结核分支杆菌、牛分支杆菌特异性抗原Pab基因的419bp片段为靶序列,PCR体系经优化,直接酶标法标记探针 ,增强化学发光检测(ECL)进行分子杂交。结果 PCR体系对结核分支杆菌、牛分支杆菌、卡介苗的扩增为阳性,PCR体系灵敏度为5fgDNA分子。ECL体系灵敏度为0.5pgDNA分子。采用模拟痰样,可检至10个以下结核杆菌。结论 建立了结核杆菌的PCR-ECL快速检测方法,整个过程可在一天半内完成。     

联合应用表型分析、热休克蛋白65限制性片段长度多态性分析和测序鉴定养鱼水中的非结核分枝杆菌

目的了解养鱼水中非结核分枝杆菌(NTM)的分布情况。方法采集30份市售养鱼水标本,通过分离培养和生化反应初步鉴定,然后从培养菌落中提取DNA,PCR扩增65kD分枝杆菌抗原,扩增产物:(1)分别应用两种限制性内切酶BstEⅡ和HaeⅢ酶切,然后进行琼脂糖凝胶电泳和限制性片段长度多态性分析(PRA);(2)直接测序。结果30份市售养鱼水中29份样本分枝杆菌培养阳性,其中6份样本分别生长出两种形态性状完全不同的菌落,共分离出35株分枝杆菌,表型特征均符合NTM。理化性质、PRA和测序鉴定发现,戈登分枝杆菌8株(23%)、龟-偶然分枝杆菌复合群8株(23%)、日内瓦分枝杆菌9株(26%)、不产色分枝杆菌1株,其余9株未鉴定到种。结论NTM广泛存在于市售养鱼水中,分子生物学方法与常规细菌学鉴定可互相补充,提高鉴定的正确性。     

2012—2017年湖南省非结核分枝杆菌感染的特征分析

目的 分析湖南省2012—2017年非结核分枝杆菌(NTM)的感染趋势、分布特征、流行状况,为湖南省NTM感染的防治提供参考依据。方法 收集2012—2017年来自湖南省14个地级市、在湖南省胸科医院经BACTEC MGIT 960 法确诊为分枝杆菌感染的患者15576例,其中男性11126例,女性4450例。分离出分枝杆菌菌株15576株(每例患者1株)。采用MPB64蛋白免疫胶体金法、对硝基苯甲酸(PNB)生长试验进行结核分枝杆菌复合群(MTBC)与NTM的初步鉴别,应用16S rRNA、Hsp65测序法对初步鉴定为NTM的菌株进行菌种鉴定,并对NTM感染者的相关临床资料进行分析。结果 2012—2017年NTM检出率为10.17%(1584/15576);男性NTM感染者占62.06%(983/1584),女性占37.94%(601/1584);年龄分布中,40~岁的中老年患者最多,占39.02%(618/1584);职业分布以农民为主,占66.67%(1056/1584)。2016年NTM菌种分布达24种,位列前4者分别为:胞内分枝杆菌[25.23%(84/333)]、脓肿分枝杆菌[24.62%(82/333)]、戈登分枝杆菌[18.62%(62/333)]、鸟分枝杆菌[16.82%(56/333)];2017年NTM菌种分布达21种,位列前4者分别为:胞内分枝杆菌[27.15%(104/383)]、脓肿分枝杆菌[22.46%(86/383)]、戈登分枝杆菌[21.15%(81/383)],鸟分枝杆菌[17.49%(67/383)]。结论 2012—2017年湖南省NTM检出率处于较高水平,感染人群以男性、中老年、农民为主,以致病NTM菌居多。     

129株非结核分枝杆菌采用两种分子检测技术行菌种鉴定的结果分析

目的 分析北京地区3个单位非结核分枝杆菌 (NTM)临床分离株采用芯片杂交法(简称“芯片法”)和16S rRNA基因测序(简称“基因测序”)进行菌种鉴定的结果,为临床分枝杆菌病的快速准确诊断提供科学依据。方法 用芯片法和基因测序进行北京地区3个单位129株NTM临床分离株的菌种鉴定,实验操作者之间采用双盲法,对两种鉴定方法的结果进行比较和评价。结果 129株NTM菌株中,有107株进行分枝杆菌基因测序,其中59株为胞内分枝杆菌(55.1%);29株为堪萨斯分枝杆菌(27.1%);5株为龟分枝杆菌/脓肿分枝杆菌(4.7%);3株为鸟分枝杆菌(2.8%);2株为偶发分枝杆菌(1.9%);2株为戈登分枝杆菌(1.9%);1株为蟾蜍分枝杆菌(0.9%);1株为草分枝杆菌(0.9%);1株为瘰疬分枝杆菌(0.9%);4株为其他NTM(3.7%)。有116株进行芯片法分枝杆菌菌种鉴定,且有96株同时进行芯片法和基因测序法检测,两种方法进行菌种鉴定的符合率为88.5%(85/96)。基因测序发现有3株外来菌株,分别为明尼苏达分枝杆菌、熊本分枝杆菌、提门分枝杆菌(M.temen)。结论 北京3家机构NTM菌种以胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和龟分枝杆菌/脓肿分枝杆菌为主。用芯片法和基因测序对NTM临床分离株进行菌种鉴定的一致率较高。     

康乐霉素A体外抗结核活性的初步研究

目的发现新安莎类抗生素,康乐霉素A体外抗结核活性。方法应用色谱技术从地中海诺卡氏菌康乐变株1747-64发酵液中分离康乐霉素A,并采用试管二倍稀释法,进行康乐霉素A对耻垢分枝杆菌（ATCC14468）,结核分枝杆菌H₃₇Rv（ATCC27294）,H₃₇Ra（ATCC25177）,临床分离的氧氟沙星（OFLX）敏感结核分枝杆菌以及临床分离的耐氧氟沙星结核分枝杆菌最低抑制浓度（Minimal Inhibitor Concentration,MIC）的试验。结果康乐霉素A对耻垢分枝杆菌活性弱,MIC为64μg/ml,对结核分枝杆菌H₃₇Rv,H₃₇Ra的MIC为8μg/ml,对临床分离的氧氟沙星敏感结核分枝杆菌菌株的MIC范围为18μg/ml,临床分离的耐氧氟沙星结核分枝杆菌菌株的MIC范围为116μg/ml。结论新安莎类抗生素,康乐霉素A体外具有明显的抗结核活性,有望成为新抗结核药物或先导化合物。