羊红细胞铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

目的：从羊红细胞中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶(Cu，Zn—SOD)．并对其部分理化性质进行研究．方法：采用有机溶剂去除血红蛋白，热变性，超滤浓缩，丙酮沉淀、DF—FF柱色谱的方法．对羊红细胞Cu．Zn-SOD进行分离纯化。结果：羊红细胞520g得Cu，Zn—SOD总活力为467000IU．比活为8126μ／mg.pro，纯化倍数为26．2，活性回收率为61％，理化性质分析表明，该酶的最大紫外吸收波长为285nm，亚基相对分子量为16．1ku，每个亚基含1个铜原子和1个锌原子，pH在6-11范围内该酶稳定性很好，在35℃-75℃范围内，保温20min，酶活基本没有损失。2mmol／L的SDS对Cu，Zn—SOD没有明显的抑制作用，而2mmol／L的H2O2对该酶表现出较强的抑制作用，结论：采用此方法分离纯化的Cu，Zn—SOD达到电泳纯，其理化性质与其它动物血液来源的Cu，Zn—SOD一致。     

柞蚕幼虫铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

目的从柞蚕幼虫分离铜锌超氧化物歧化酶 (Cu ,Zn SOD) ,并对其部分性质进行研究。方法用氯仿 乙醇除杂蛋白质、丙酮沉淀、热变性、DE 32柱色谱等方法 ,对柞蚕幼虫Cu ,Zn SOD进行分离纯化。结果得Cu ,Zn SOD干粉 9.5 3mg ;比活 10 116 .5 8u/mgpro ;活力回收 5 5 .87% ;纯化倍数为 36 0 .6 7。该酶相对分子质量 (Mr)约为 310 0 0 ;亚基Mr 约为 15 5 0 0 ;最大吸收波长 2 5 8nm ;pH在 5～ 9范围内基本稳定 ;在 4 0℃～ 6 0℃内保温 30min酶活基本不变 ;2mmol/L十二烷基硫酸钠对此酶没有明显的抑制 ;该酶对KCN和H2 O2 敏感。结论柞蚕幼虫含有丰富的Cu ,Zn SOD。     

酵母SOD分离纯化及其酶学性质的研究

目的发酵培养Y12 酵母菌分离制备酵母SOD并研究其部分酶学性质。方法用已筛选出的一株Y12 酵母菌对其在优化培养条件下发酵培养得到湿菌体 ,破壁抽提得SOD粗酶液 ,采用硫铵盐析、丙酮沉淀、SephadexG 10 0凝胶过滤和QAE SephadexA 5 0离子交换柱层析 ,分离得到酵母SOD并测定其部分酶学性质。结果Y12 酵母菌SOD产量达 12 6 3u·g-1湿菌体 ,分离得到酵母SOD ,该酶属Cu、Zn SOD ,比活力为 10 73 5u·mg-1,活力回收率为 5 4 1% ,紫外吸收峰在2 5 7 2nm ,分子质量为 32 4 5 6u ,亚基分子质量为 16 2 2 7u。结论此酵母SOD与文献中报道的动物血红细胞Cu、Zn SOD基本相近。     

重组人铜锌SOD的部分理化性质研究

对rhCu，Zn-SOD进行SDS-PAGE测定该SOD的亚基分子质量为19ku，该酶对热稳定，在pH5左右的活力最高，对乙腈、EDTA等抑制剂敏感，但是对SDS、尿素等变性剂表现出很好的稳定性。对该酶进行光谱分析表明，在265nm和673nm具有吸收峰，原子吸收光谱分析表明每分子SOD含有2个铜原子和2个锌原子，ESR表明铜原子价态为2价。可认为该重组酶与天然Cu，Zn-SOD在理化性质和结构上基本相同。     

苦瓜籽核糖体失活蛋白的分离纯化及抗氧化活性的研究

目的改进苦瓜籽核糖体失活蛋白的提取工艺 ,并对其抗氧化活性进行研究。方法苦瓜籽经粉碎 ,50mmol/L乙酸抽提 ,硫酸铵沉淀 ,经阳离子交换及凝胶柱色谱等步骤进一步纯化后 ,测定所得两种核糖体失活蛋白的理化性质。结果纯化后得到一种分子量为 2 9.6kD的蛋白质和一种小分子量蛋白质 ,两者在无细胞系统中抑制50 %蛋白质合成浓度分别为 4 .3× 1 0 - 6 、1 .4× 1 0 - 6 mol/L ,含糖量分别为 4 .83 %、1 .82 % ,类超氧化物歧化酶 (SOD)活性分别为 79.0 5、1 7.2 5u/mg。阳性对照纯品SOD活性为 1 2 67u/mg。结论从苦瓜籽中分离纯化出两种不同分子量的核糖体失活蛋白均为糖蛋白质 ,且具有一定的抗氧化活性     

铜螯合亲和层析对重组人铜锌超氧化物歧化酶的纯化

<正> 铜锌超氧化物歧化酶(Copper-Zinc Su-peroxide Dismutase,Cu/Zn SOD)是机体内超氧自由基的清除剂。大量实验巳证明SOD能防止脂质过氧化,对再灌流损伤,关节炎,自家免疫,放射病等均有明显的治疗效果。传统生化制药的材料来源受限而且价格昂贵,目前许多国家开展SOD基因工程研究。美国Chiron公司的重组SOD已进入临床第三期的开发阶段。基因工程生产大量廉价SOD对今后临床应用具有非常实际的意义。从红细胞中分离纯化Cu/Zn SOD的传统方法比较繁锁,而且是否适用于基因工程生产的重组人Cu/Zn SOD的分离纯化?近年来有     

儿童红细胞超氧化物歧化酶活性与血清铜锌分析

超氧化物歧化酶(SOD)是生物细胞内天然的自由基清除剂,其生物学意义已受到医学界的广泛关注。人类红细胞SOD有数种,其主要形式是铜锌SOD(CuZn-SOD)。微量元素Cu、Zn对维持CuZn-SOD的结构及其催化活性起着重要作用,且血清中Cu、Zn水平与CuZn-SOD活性亦存在一定的关系。我们对35例4～6岁学龄前儿童血清Cu、Zn、Cu/Zn比值及红细胞活性进行了测定分析,现报告如下。 1 材料与方法 1.1 研究对象 某幼儿园4～6岁学龄前儿童     

影响铜锌超氧化物歧化酶活性的几个因素

影响铜锌超氧化物歧化酶(简称Cu·Zn-SOD)活性的因素很多。溶液介电常数的增加减弱了酶分子活性中心附近ε-NH3_ 对O_2_-的静电吸引力,从而导致酶活的降低。CI_-浓度对Cu·Zn-SOD有明显的抑制作用是由于CI_-引起活性部位构象的变化。H_2o_2作用于Cu·Zn-SOD造成铜锌的脱落,从而影响酶结构的稳定性,造成酶结构损伤。H_2O_2是活性氧的一种,它的存在会引起酶二级结构的改变和导致SOD肽链的“随机”断裂,继而影响SOD的活性。     

重组人超氧化物歧化酶的复性

目的将E .coli以包含体形式表达的重组人超氧化物歧化酶 (rhSOD)恢复天然活性。方法分离包含体 ,用 6mol/L尿素处理 ,透析 ,添加Cu2 + 、Zn2 + ,温浴。结果Cu2 + 、Zn2 + 的加入对于恢复SOD的活性和稳定性是必需的 ,适当提高温度将大大缩短复性时间 ,获得的rhSOD比活可达到 6 0 0 0u/mg以上。结论恢复重组蛋白的天然构型是rhSOD有效结合Cu2 + 、Zn2 + 和完全复性的必要条件     

一种分离纯化Cu、Zn-SOD的方法——兼介从血红细胞中分离Cu、Zn-SOD

<正> 过氧化氢酶、碳酸酐酶的过程本专利介绍了一种分离纯化Cu、Zn-SOD的方法,并给出了从血红细胞中分离Cu、Zn-SOD、过氧化氢酶、碳酸酐酶的实例。 SOD是催化超氧离子(O_2-)歧化反应的酶。1969年以来,SOD已从多种生物体中提取分离。SOD有两类。活性部位含有Cu和Zn的一类存在于真核生物的细胞质中,它们都是二聚体,一级结构具有高度的同源性,理化性质相似。活性部位含有Fe或Mn的另一类存在于原核生物、真核生物的线粒体中,它们的氨基酸组成和N-末端氨基酸顺序也很相似。然而,两     

软枣猕猴桃超氧化物歧化酶的分离纯化与特性研究

目的从软枣猕猴桃果实中提取纯化超氧化物歧化酶 (SOD) ,并对其特性进行研究。方法先以硫酸铵分级沉淀 ,后经DE 5 2纤维素柱色谱 ,磷酸缓冲液进行梯度洗脱。结果得SOD干粉 0 .918mg ,其分子量约为 30 6 0 0D ,亚基分子量约为 15 2 0 0D ,最大紫外吸收波长为 2 5 4nm。结论软枣猕猴桃果实含丰富的SOD。     

金针菇固态发酵产木聚糖酶的纯化及其性质研究

金针菇固态发酵产生木聚糖酶经硫酸铵盐析、透析、浓缩、Sephadex G-75分子筛层析等分离与纯化步骤,得到了一种相对分子质量约为59.7k的电泳纯木聚糖酶,其最终的活性收率为23.3%,纯化倍数为9.4。该木聚糖酶在pH值为6.0,50℃下的酶解效果最佳。酶的pH稳定性及热稳定性都比较好,在pH 4.0～8.0时基本稳定,80℃时相对酶活力仍保持在55.81%。Ca2+、Zn2+对该酶活性有一定的激活作用,而Hg2+、Cu2+则有较强的抑制作用。     

一种具有纤溶活性的蛋白酶的分离纯化及性质

目的分离纯化BacillussubtilisJin2 1发酵产生的具有纤溶活性的蛋白酶 ,并对其性质进行研究。方法通过硫酸铵分级盐析 ,SerineSepharose 2B和SephacrylS— 2 0 0色谱柱进行分离纯化 ,用SDS PAGE测定纯度 ,SDS PAGE和凝胶层析测定相对分子质量 ,纤维蛋白平板法测定酶活力。结果分离得到了电泳纯的酶 ,该酶的相对分子质量为 2 8kD ,等电点约为 8 6 ,最适 pH为 7 5 ,最适温度为 4 0℃ ,在 4 0℃以下较稳定 ,超过 5 0℃时酶活力开始下降 ;金属离子Mn2 + 对酶有明显的激活作用 ,而Zn2 + 对酶有抑制作用 ,二异丙基磷酰氟 (DFP)和苯甲基磺酰氟 (PMSF)完全抑制酶活性。结论该酶是一种丝氨酸蛋白酶 ,与纳豆激酶相似 ,有望开发成为一种新型口服溶栓药物     

蛋清溶菌酶部分酶学性质及酶活性的影响因素研究

目的探讨将蛋清溶菌酶制成液体制剂的可行性。方法通过改变不同影响因素测定蛋清溶菌酶的活性,观察几种常用辅料对蛋清溶菌酶活性的影响。结果酶活性在pH 6.0~6.5最强,且在pH 5~7范围内较稳定;在25~65℃范围内随着作用温度的升高酶的活性增强,但温度太高则变性失活;Na+、K+对其活性有轻微激活作用,Mn2+、Mg2+对溶菌酶活性无明显影响,Co2+、Ca2+、Cu2+、Fe2+、Zn2+使溶菌酶的活性下降;吐温20、吐温80、甘油溶液对酶活有抑制作用;EDTA-2Na在0.000 5%~0.300 0%浓度范围内对溶菌酶活性具有激活作用,浓度继续增加反而有抑制活性作用。结论初步试验结果表明溶菌酶可以制成合适的液体制剂。     

毛蚶超氧化物歧化酶的纯化、部分性质与修饰

经热变性 硫酸铵分级沉淀,微量铜离子溶液秀析,Sephadex G-100凝胶过滤和DE－52柱层析,从毛蚶中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶（Cu,Zn-SOD),并对其是化性质进行分析鉴定,实验结果获得该 比活力为5294．1U／mg,提纯倍数为885．9,该酶对KCNM和H2O2敏感,而suchihashi液对酶活性没影响,对热较稳定,紫外吸收峰城260nm处,聚丙烯酰凝胶电泳蛋白带与活性带相对应,该酶是由2个相同亚基组成的二聚体,分子量为28．8kD,每个亚其含有一原子铜和一原子锌,经右旋糖甙修饰后抗胃蛋白酶水解的能力增强。     

Kininase activity in human platelets: cleavage of the Arg1-Pro2 bond of bradykinin by aminopeptidase P.

A proline-specific peptidase aminopeptidase P (APP, EC 3.4.11.9) that cleaves the Arg1-Pro2 bond of bradykinin was isolated from human platelets by liquid chromatography. The enzyme was purified 557 times. The native molecule has a M(r) of 223,000. Human platelet APP exists as a trimer with a subunit M(r) of 71,000. The apparent Km of platelet APP is 66 mumol/L for bradykinin and 47 mumol/L for the internally quenched fluorogenic substrate Lys (2,4-dinitrophenyl)-Pro-Pro-NH-CH2-CH2-NH-2-aminobenzoyl. 2HCl which is used for the routine determination of the enzyme activity. The optimum pH for hydrolysis of the fluorogenic substrate is 8.0, and the optimum temperature is 43 degrees. Platelet APP is inhibited by 1,10-phenanthroline and activated by Mn2+, thus confirming its metalloprotease nature. Cu2+, Zn2+ and Hg2+ are strongly inhibitory. Inhibition by cysteine protease inhibitors suggests the presence of a thiol group essential for enzymatic activity. Serine protease inhibitors do not affect the enzyme activity.     

火焰原子吸收光谱法测定附子中微量元素的含量

目的:建立以空气-乙炔火焰原子吸收光谱法测定附子中铜(Cu)、铁(Fe)、锰(Mn)、铅(Pb)、镉(Cd)、铬(Cr)、锌(Zn)、镍(Ni)、钙(Ca)、镁(Mg)10种微量元素含量的方法。方法:样品经硝酸-高氯酸(4∶1)浸泡,置电热板上140℃消解处理。结果:测得各线性范围(μg·mL-1):Cu为0～3.0,Fe为0～4.0,Mn为0～1.0,Pb为0～5.0,Cd为0～0.25,Cr为0～4.0,Zn为0～2.0,Ni为0～5.0,Ca为0～4.0,Mg为0～4.0;相关系数均>0.9926;回收率在100.11%～102.62%之间;方法精密度的RSD在0.16%～2.2%之间。结论:该方法适合中药附子的Cu、Fe、Mn、Pb、Cd、Cr、Zn、Ni、Ca、Mg的含量测定,可为进一步研究附子中微量元素与其临床疗效关系提供有益依据。