牛胎盘中肝细胞生长因子的纯化

用高速离心、分段盐析、亲和层析、超滤和阴离子交换层析法，从牛胎盘中分离纯化出一种肝细胞生长因子。结果表明，此因子的最终得率为０．００５ｍｇ／ｇ牛胎盘，其分子量约为９９ ０００ｕ，它能强烈刺激原始培养大鼠肝细胞的ＤＮＡ合成。提示利用自制的亲和层析凝胶，通过此提纯流程可以得到一种肝细胞生长因子。     

人胎盘肝细胞生长因子的提纯及其特性

①目的研究从人胎盘中提纯一种低分子量的肝细胞生长因子的实验方法及该因子的某些特性。②方法人胎盘匀浆液经高速离心后，上清液经分段盐析、阴离子交换层析、超滤和肝素亲和层析，纯化约６００～８００倍。③结果该生长因子是一种对热稳定、亲和肝素的蛋白质，分子量为１６．８７ｋｕ，能促进原代培养的成年大鼠肝细胞的ＤＮＡ合成，其作用有剂量依赖关系，并能抑制小鼠Ｓ１８０细胞的ＤＮＡ合成。④结论人胎盘中存在一种特殊的肝细胞生长因子。     

人胎盘肝细胞生长因子的提纯及其特性

（１）目的研究人胎盘中提纯一种低分子量的肝细胞生长因子的实验方法及该因子的某些特性。（２）方法人胎盘匀浆液经高速离心后，上清液经分段盐析，阴离子交换层析，超滤和肝素亲和层析，纯化约６００～８００倍。（３）结果该生长因子是一种对热稳定，亲和肝素的蛋白质，分子量为１６．８７ｋｕ，能促进原代培养的成年大鼠肝细胞的ＤＮＡ合成，其作用有剂量依赖关系，并能抑制小鼠Ｓ１８０细胞的ＤＮＡ合成。（４）结论人胎盘中存     

肝细胞生长因子和肝细胞生长抑制物质的分离

①目的用改良亲和层析法从人胎盘中分离肝细胞生长因子和肝细胞生长抑制物质。②方法取３０ｇ人胎盘加４倍体积（Ｗ／Ｖ）的缓冲溶液，匀浆，４℃，离心（１１０００ｒ／ｍｉｎ）３０ｍｉｎ，收集上清液；用４５％饱和度硫酸铵进行盐析。沉淀复溶后对洗脱缓冲溶液透析２０ｈ，再进行Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ凝胶过滤柱层析。最后，将层析第２峰过肝素－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ亲和层析柱，用改良的洗脱方法进行亲和层析。③结果在分离肝细胞生长因子的同时，还分离得到一种肝细胞生长抑制物质。肝细胞生长因子可明显刺激原代培养的大鼠肝细胞ＤＮＡ的合成（ｔ＝６４８．３９，Ｐ＜０．０１），而肝细胞生长因子则抑制原代培养的大鼠肝细胞的ＤＮＡ合成（ｔ＝－１０．４４，Ｐ＜０．０１）。④结论改良亲和层析法在分离效率方面比传统方法有明显提高，而用该法分离到的肝细胞生长抑制物质可能参与了肝细胞的发育调节。     

肝细胞生长因子与肾脏细胞凋亡

肝细胞生长因子是一种肾营养因子，具有诱导有丝分裂、促肾小管形态发生、抑制肾间质纤维化等作用，并证实其具有显著的抗细胞凋亡作用，能增加细胞增殖，促进受损肾脏的再生和肾功能的恢复。本文综述了肝细胞生长因子生物学特性、肾脏细胞凋亡特点及肝细胞生长因子对肾脏细胞凋亡的调控及具体机制。提示肝细胞生长因子可能是一种有潜力的治疗急慢性肾脏损伤的新型方法。     

肝细胞生长因子和肝细胞生长抑制物质的分离

用改良亲和发愤以析法从人胎盘中分离肝细胞生长因子和肝细胞生长抑制物质方法 取３０ｇ人胎盘加４倍体积的缓冲溶液，匀浆，４℃，离心３０ｍｉｎ，收集上清液；用４５％饱和度硫酸铵进行盐析，沉淀复溶后对洗脱缓冲溶液透析２０ｈ，再进行Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ凝胶过滤柱层析。     

肝细胞生长因子对肝细胞酪氨酸蛋白激酶内源性底物的磷酸化作用

肝细胞生长因子对肝细胞酪氨酸蛋白激酶内源性底物的磷酸化作用侯伟健，王殿鸿（基础医学院生物化学教研室）关键词肝细胞生长因子，受体，酪氨酸，磷酸化作用肝细胞生长因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＨＧＦ）是一种无种属特异性，对肝细胞增殖和...     

血管内皮生长因子、一氧化氮与妊娠期高血压疾病的关系

1血管内皮生长因子与妊娠期高血压疾病的关系 1．1血管内皮生长因子的结构、生物学性质和表达调控血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），是1989年Gospodarowicz等从牛垂体腺泡星状细胞培养液中纯化分离到的一种同型二聚体。其家族包括VEGF—A，VEGF—B，VEGF—C，VEGF—D和胎盘生长因子。研究最多的是VEGF—A。因VEGFmRNA剪接不同，VEGF—A至少形成五种不同长度的多肽：121、145、165、189、206，5种异构体中，以VEGF165在体内表达最丰富。VEGF高亲和力地结合于二种酪氨酸激酶受体。VEGFR-1为fms样酪氨酸激-1（fms—like tyrosine kinase，FLT-1）；VEGFR-2为含有激酶插入区的受体（kinase domain receptor，KDR）。     

新生牛促肝细胞生长因子的理化性质及生物学特性

确诊新生牛促肝细胞生长因子的理化性质及生物学特性。方法：采用高效液相色谱法、ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外扫描，同位素＾３Ｈ０胸苷掺入法ＤＮＡ合成，促进肝细胞再生的功能。结论ＨＧＦ具有良好的肝脏保护与治疗作用。     

重组人肝细胞生长因子的纯化及鉴定

目的：对重组人肝细胞生长因子（Recombinant human hepatocyte growth facor,rhHGF）进行初步纯化及鉴定。方法：培养上清液经过离心、超滤,在FPLC系统上经肝素亲和层析分离纯化,用ELISA法检测、收集rhHGF。SDS-PAGE电泳鉴定纯度和相对分子质量,大鼠原代肝细胞培养法检测rhHGF的生物学活性。结果：rhHGF主要在0.9-1.3mol/L NaCl范围内被洗脱,由约62000和34000两个亚基组成,明显促进大鼠肝细胞DNA合成。结论：经肝素亲和层析分离,从表达rhHGF的CHO细胞培养上清液中纯化出有活性的rhHGF。     

妊娠期糖尿病患者胎盘组织中miRNA-508-3p和HGF表达水平及其对滋养细胞胰岛素抵抗的影响

目的:探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者胎盘组织中微小RNA-508-3p(miR-508-3p)与肝细胞生长因子(HGF)的表达及两者的相互作用,初步阐明miR-508-3p介导滋养细胞胰岛素抵抗(IR)的相关分子机制.方法:选取GDM患者及正常妊娠孕产妇各15例,分别为GDM组和正常对照组.采用实时定量PCR(RT-P...     

肝细胞生长素治疗活动性肝硬化近期临床疗效观察

采用肝细胞生长素（ＨＧＦ）治疗活动性肝硬化病人４２例，并与４０例同期同类型患者作对照，两组均采用传统综合护肝治疗，治疗组加用ＨＧＦ。结果发现治疗组有效率及症状、体征恢复时间肝功能指标变化都明显优于单用传统疗法。提示ＨＧＦ对活动性肝硬化确有良好疗效。     

人肝细胞生长因子β链基因的克隆及表达载体的构建

目的 构建重组人肝细胞生长因子－β（rhHGF-β)的克隆表达体系。以期进一步研究HGF基因的表达调控及HGF的生物学、医学作用。方法 从人胎肝细胞中提取总RNA,运用RT－PCR技术,对HGF－β基因转录前加工修饰,与载体重组,构建rhHGF-β的克隆,并对克隆进行限制性内切酶酶切图谱分析,对重组体中插入的外源基因进行序列分析。结果 获得了rhHGF-β完整的cDNA序列,重组体克隆的酶切结果与设计一致。结论 首次成功地构建了人肝细胞生长因子－β（rhHGF-β）的克隆表达体系。     

肝细胞生长素治疗重症肝炎及其机理的研究

作者用肝细胞生长素(HGF)治疗重症肝炎44例,并以胸腺肽,胰高血糖素-胰岛素为对照观察。结果,治疗组病死率为31.8％。对照组病死率为47％及44.4％。HGF可降低重症肝炎的病死率。同时发现,HGF可增强重症肝炎血清再生因子的活性,降低血中肿瘤坏死因子的活性,减轻对Na~ —K~ ATP酶的抑制,促进肝细胞再生,减轻脑水肿。     

重组肝细胞生长因子质粒的构建及对内皮祖细胞增殖的影响

目的构建一种携带人肝细胞生长因子（HGF）基因的表达质粒（pUDKH）,探讨重组质粒对体外培养的成人外周血中内皮祖细胞（endothelial progenitor cell,EPC）增殖的影响。方法用PCR方法从人胎盘cDNA文库扩增HGF基因,并将其克隆至病毒表达载体pLenti6/V5-Dest,获得表达质粒pLenti-HGF。制备病毒,感染原代培养的内皮祖细胞,免疫组化分析其感染效率及上清中HGF的表达水平。MTT法检测感染病毒后对细胞增殖的影响。结果 pLenti-HGF病毒可有效感染体外培养的内皮祖细胞,表达HGF,并能促进内皮祖细胞的增殖。结论内皮祖细胞经病毒感染后可以表达hHGF,外源性hHGF基因能够刺激内皮祖细胞增殖。     

促肝细胞生长素对重症肝炎治疗效果的临床对照观察

目的观察促肝细胞生长素对重症肝炎的疗效,关注患者血清中C反应蛋白（CRP）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量变化,以积累经验,为临床治疗提供理论帮助。方法收集126例重症肝炎的患者,依患者入院顺序分为观察组与对照组各63例,对照组患者采用常规治疗,观察组在常规治疗的基础上加用促肝细胞生长素治疗,比较两组患者治疗的效果及对血清中CRP和TNF—α的影响。结果治疗4周后,观察组患者的总有效率明显高于对照组,两组治疗后血清中CRP和TNF—α均下降,但是观察组的下降值更明显。结论促肝细胞生长素对重症肝炎的疗效明显,并能有效下调患者血清中CRP和TNF—α的表达,临床治疗中可以积极应用。     

重组人肝细胞生长因子重链（rhHGF—α）蛋白的表达与纯化

大肠杆菌中表达的rhHGF-α以包涵体形式存在，表达量约占菌体总蛋白的25％。为了建立一条简便的分离纯化生产工艺，我们研究了包涵体溶解及复性条件，并进行了活性测定。结果表明，用含有4mol/L尿素的缓冲液洗涤包涵体，8mol/L尿素溶解包涵体后的上清，经过SephacrylS-200凝胶过滤，复性后，得到纯度达９０％的rhHGF-α、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定相对相对分子质量为52000。与rhHGF-β体外共复性后，完整的rhHGF具有明显刺激原代培养大鼠肝细胞生长的活性。     

TGFβ1和HGF以及bFGF在妊娠期高血压疾病中的表达及意义

目的：研究转化生长因子β1（TGFβ1）、肝细胞生长因子（HGF）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在妊娠期高血压疾病（HDCP）中的变化,探讨三者与妊娠期高血压疾病发生、发展的关系。方法：运用免疫组化链霉素抗生物蛋白—过氧化酶连接法（SP法）对60例妊娠期高血压患者及20例正常妊娠产妇胎盘组织中TGFβ1、HGF及bFGF的表达进行研究。结果：①胎盘内的TGFβ1主要位于绒毛小叶的合体滋养细胞、细胞滋养细胞和蜕膜细胞,阳性着色部位均位于胞浆,轻、重度子痫前期TGFβ1表达较对照组明显增高,有非常显著性差别（P〈0.01）,妊娠期高血压组与对照组比较变化不明显（P〉0.05）。②胎盘内的HGF主要位于绒毛间质细胞的胞浆内,蜕膜细胞也有少量表达,阳性着色部位均位于胞浆,妊娠期高血压组和轻度子痫前期组HGF的表达较对照组比较差异无显著性（P〉0.05）,重度子痫前期患者组较对照组差异有显著性（P〈0.05）,且显著降低。③胎盘内的bFGF主要位于滋养细胞、蜕膜细胞、血管内皮细胞和间质细胞胞浆中。阳性着色部位均位于胞浆,重度子痫前期显著高于其他各组（P〈0.05）,轻度子痫前期与妊娠高血压组比较无显著差异（P〉0.05）,轻度子痫前期组与正常妊娠组比较有显著差异（P〈0.05）,妊娠期高血压组明显高于正常妊娠组（P〈0.05）。结论：研究表明TGFβ1、HGF及bFGF三者共同参与了妊娠期高血压疾病的发生与发展,通过多种机制引起滋养细胞侵入不足,影响了子宫胎盘血管床的发育和重塑,导致胎盘缺血缺氧,胎盘发育不良,最终引起妊娠期高血压疾病的发生。     

胎盘组织造血相关因子的表达

目的 :证实胎盘组织表达造血相关因子及胎盘与造血之间的相关性。方法 :通过 RT- PCR方法检测胎盘组织中造血相关因子的表达情况。结果 :胎盘组织中表达 SCF、FL、GM- CSF、G- CSF、M- CSF及 IL- 6等多种造血相关因子 ,证实了胎盘表达分泌造血相关因子。结论 :证实了胎盘组织与造血之间的相关性 ,为进一步研究胎盘组织在脐血造血支持和促进移植方面奠定基础