肿瘤抗原MAGE-2 HLA-A2限制性CTL表位的预测

目的 预测黑色素抗原ＭＡＧＥ－２的ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位。方法 采用超基序法与量化基序法的联合应用。结果 发现８个ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位。结论 超基序法与量化基序法联合应用可以提高预测效率。     

肿瘤抗原MAGE-3 CTL预测表位的计算机分子模拟研究

目的 从理论上分析预测表位与ＨＬＡ－Ａ２分子的结合情况及其为ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位的可能性。方法 应用计算机分子模拟的方法,建立ＭＡＧＥ－３４个ＣＴＬ预测表位的ＨＬＡ－Ａ２结合三维结构和各多肽与ＨＬＡ－Ａ２分子所形成复合的三维结构。结果 ４个预测表位的三维结构完全符合ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位的结构要求,且都能与ＨＬＡ－Ａ２分子结合。结论 ４个ＣＴＬ预测表位为ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位的     

丙型肝炎病毒NS3区C末端HLA-11限制性CTL表位的作用

目的 研究丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ）非结构３区（ＮＳ３）Ｃ末端ＨＬＡ－１１限制的细胞Ｔ细胞（ＣＴＬ）表位在ＨＣＶ感染中的作用。方法 血清学方法检测３例患的ＨＬＡ分型,他们均存在ＨＬＡ－Ａ１１表型,以ＨＬＡ－１１结合基序为依据,预测了ＨＬＡ－１１限制的ＣＴＬ表位。２例慢性患５ａ内３个时间点和３ａ内２个时间点及转阴患的血清样本,用反转录ＰＣＲ扩增出ＨＣＶ基因片段,     

肿瘤抗原MAGE-3预测CTL表位的合成与鉴定

目的 合成并鉴定已预测出的４个ＭＡＧＥ－３ ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位多肽,为后续研究奠定基础。方法 采用固相合成法合成多肽,经ＲＰ－ＨＰＬＣ纯化、纯度分析,用质谱进行定性鉴定。结果 ４个合成肽的纯度都在９５％以上,经质谱分析,各肽的分子量测定值与理论值相符,结论 所得多肽为高纯度的目标肽,为后续研究提供了可靠的保证。     

O-糖基化HBV Pre-S(2)CTL表位分子模建及免疫学活性研究

目的 研究Ｏ－糖基化（Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）修饰对ＨＢＶ Ｐｒｅ－Ｓ（２）上ＣＴＬ表位结构及其免疫学活性的影响。方法 选择ＨＢＶ Ｐｒｅ－Ｓ（２）上公认的ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位４４～５３（ＳＩＬＳＫＴＧＤＰＶ）,以Ｓｅｒ４４为糖基化位点,进行计算机分子模建,并利用糖肽合成技术,固相合成α－ＧａＩＮＡｃ－糖基化可改变表位形态使之更适宜与ＨＬＡ－Ａ２类分子结合,糖基部分基团可从ＨＬＡ－Ａ２     

协同刺激分子CD28／CTLA—4,B7在实验性变态反应性神经炎发病中的动态 …

目的 探讨ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４，Ｂ７在小鼠实验性变态反应言神经炎（ＥＡＮ）中的变化规律及对发病的影响。方法 于小鼠双后肢足垫皮下注射兔坐骨神经匀浆，建立ＥＡＮ模型，用免疫组化观察外周淋巴细胞ＣＤ２８，ＣＴＬＡ－４，Ｂ７－１和Ｂ７－２蛋白的表达；用ＲＴ－ＰＣＲ检测外周淋巴细胞Ｂ７－１和Ｂ７－２ｍＲＮＡ的表达。     

肝癌相关肿瘤抗原HLA-A2限制性CTL表位的预测

目的：预测肝癌肿瘤抗原的HLA-A2限制性CTL表位。方法：选择与肝癌相关的肿瘤抗原MAGE-1，MAGE-3，MAGE-8，p53及AFP为研究目标，采用SYFPEITHI基序法远程预测系统和量化基序多项式法结合的预测方法进行HLA-A*0201限制性CTL表位预测。结果：共预测出与肝癌相关的肿瘤相关抗原的35个HLA-A2限制性CTL表位。结论：两种预测方法结果的一致性较好。所预测的35个肿瘤抗原HLA-A2限制性CTL表位经实验筛选，鉴定后，可望用于新型肝癌治疗性多肽疫苗的设计研究。为临床肝癌特异性治疗奠定基础。     

HL—60细胞降钙素基因高甲基化的发生机制

目的：探讨ＨＬ－６０细胞降钙素基因高甲基化的发生机制。方法：采用ＨＬ－６０细胞，以正常骨髓单个核细胞为对照，应用甲基化敏感的限制性内切酶消化，结合设有内外参照的ＰＣＲ技术，检测ＣＴ基因甲基化状态；应用同位素激量分析法检测ＤＮＡ－胞嘧啶－甲基转移酶（ＤＮＡ－ｃｙｔｏｓｉｎ－ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＭＴａｓｅ）活性；应用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测ＭＴａｓｅ基因表达水平。结果：ＨＬ－６０细胞经甲基化敏感的内切酶Ｈｐａ Ⅱ消化后仍可扩增出清晰的ＣＴ基因特异条带，提示ＣＴ基因５’端呈高甲基化状态；ＨＬ－６０细胞ＭＴａｓｅ活性平均测定值为５３９．９Ｂｑ，是正常骨髓单个核细胞（平均２１．８Ｂｑ）的２９．８倍；ＭＴａｓｅ基因的ｍＲＮＡ表达水平以ＭＴａｓｅ与β－ａｃｔｉｎ内参照ＲＴ－ＰＣＲ产物的比值表示，ＨＬ－６０细胞（０     

创伤多器官功能不全综合征与HLA—DRB1相关性研究

目的 研究创伤后ＭＯＤＳ与ＨＬＡ－ＤＲＢ１相关性。方法 对ＰＣＲ对３７例创伤对３７例创作后ＭＯＤＳ患者１８例对ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因引物进行扩增,用ＥＬＩＳＡ进行ＩＬ－１０测定。结果 创作后ＭＯＤＳ患者ＤＲ２（ＤＲＢ１＊１５０１－ＤＲＢ１～１５０２）基因频率显著升高。ＤＲ２＾＋较ＤＲ２＾－的ＭＯＤＳ患者血浆ＩＬ－１０水平和病死率显著升高（Ｐ〈０．０１）。结论 创伤后ＭＤＤＳ与ＨＬＡ－ＤＲ２（ＤＲＢ１     

急性白血病患者mdr—1基因与P—gp糖蛋白表达

目的：评价ｍｄｒ－１基因与Ｐ－ｇｐ糖蛋白在急性血病（ＡＬ）细胞中表达的相关性及其临床意义。方法：分别应用ＲＴ－ＰＣＲ及流式细胞术（ＦＣＭ）３２例ＡＬ患者白血病细胞中的ｍｄｒ－１ ｍＲＮＡ及Ｐ－ｇｐ糖蛋白表达率及表达水平，同时检测１４例正常人作为对照。结果：临床非耐药组ｍｄｒ－１阳性率为２２．２％，Ｐ－ｇｐ阳性率为３３．３％，而临床耐药组两者分别为７８．６％，８５．７％，均与临床治疗结果有极显著的一     

MART-1特异性治疗性多肽诱导CD8+ T细胞应答的研究

目的探讨基于黑色素瘤特异性抗原MART-127-35表位的治疗性多肽抗原组分、结构,及诱导抗原特异性CD8+ T细胞应答的关系.方法用蛋白质分子设计技术,设计基于黑色素瘤特异性抗原MART-127-35表位、HIV Tat49-57CCP序列及破伤风类毒素通用Th表位的治疗性多肽候选分子,经Merrifield固相多肽合成技术合成,HPLC纯化、鉴定.以黑色素瘤病人PBMC为实验对象,对其诱导T细胞增殖、Th1极化、抗原特异性CD8+ CTL效应进行研究.结果所设计治疗性多肽分子可在体外诱导Th1极化和抗原特异性CD8+T细胞应答,含Th、CTL表位的双表位肽抗原略优于单纯CTL表位肽,含Th、CTL表位和HIV Tat49-57CCP序列的肽抗原效应显著优于前二者(P<0.05).结论提示基于黑色素瘤特异性抗原优势CTL表位、HIV Tat49-57CCP序列及破伤风类毒素通用Th表位的治疗性多肽设计可显著提高肿瘤治疗性小分子肽的免疫原性.     

SARS冠状病毒E蛋白HLA-A*0201限制性CTL表位的预测

目的预测SARS冠状病毒E蛋白的HLA-A·0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位.方法联合应用超基序法和量化矩阵法.结果预测出13个九肽CTL表位.结论通过对SARS冠状病毒E蛋白抗原CTL表位进行预测,从而为SARS冠状病毒E蛋白CTL表位的实验探测和鉴定提供了线索,为认识CTL介导的细胞免疫机制以及基于CTL表位的疫苗研制提供了基础资料.     

肿瘤抗原MAGE-n HLA-A2限制性细胞毒性T细胞表位的预测及合成鉴定

目的　采用表位重建技术 ,对预测MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位结合活性进行研究。方法　用SYFPEITHI超基序法远程预测系统和量化基序多项式法结合的预测方法 ,筛选新的MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位作为候选表位。对预测的抗原表位进行多肽合成 ,并用HPLC进行纯化 ,质谱法 (MS)鉴定。候选表位与HLA A2位点的亲和力及结合稳定性用竞争结合抑制实验、T2结合稳定性实验及MHC 肽复合体稳定性实验测定。结果　用表位预测法筛选MAGE n抗原 5个HLA A2限制性CTL表位为候选表位。QLVFGIEVV(15 9 16 7)、IMPKTGFLI(195 2 0 3)和FLIIVLVMI(2 0 1 2 0 9) 3个表位具有较高的HLA A2结合力 (IC50 <15 μM)和结合稳定性 (DT5 0 >6h) ,可作为MAGE n抗原HLA A2限制性CTL候选表位进行进一步研究。结论　表位预测结合表位重建方法可提高肿瘤抗原CTL表位研究的效率。MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位经免疫学鉴定后 ,可望用于新型肝癌治疗性多肽疫苗的设计研究 ,为临床肝癌特异性治疗奠定基础。     

TAG1抗原HLA-A2限制性表位预测及Hsp70融合蛋白的表达纯化

目的: 对在恶性黑素瘤(MM)组织中表达率极高并具有强免疫原性的新型睾丸肿瘤(C/T)抗原TAG1表位的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位进行预测,并表达、纯化所预测表位与热休克蛋白70(Hsp70)融合蛋白,为特异性主动免疫治疗MM打下物质基础. 方法: 利用SYFPEITHI 法和多项式方案结合预测TAG1的HLA-A2限制性CTL表位,并将预测所得表位基因片断双串连后进行生物合成,克隆入带有GST标签并含Hsp70基因的原核表达载体,在IPTG诱导表达后,用GST蛋白纯化系统纯化. 结果: 预测并得到了三个TAG1的HLA-A2限制性表位,成功地构建了表位与Hsp70的原核表达质粒(PGEX-bw-HSP70);表达和纯化得到了三个表位与Hsp70的可溶性融合蛋白. 结论: 成功获得三个预测表位与Hsp70的融合蛋白,为进一步研究其免疫功能、研制TAG1对MM的特异性治疗肽疫苗奠定了基础.     

MAGE-12的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位肽的预测及其三维结构构建

[目的]从理论上分析预测肿瘤抗原MAGE- 12(melanoma antigen- 12)的HLA-A2(histocompatility leukocyte antigen-A2)限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位肽并构建其三维结构.[方法]以肿瘤特异性抗原MAGE-12为研究目标,采用超基序法、量化基序法、多项式法、延展基序法与三维结构构建相结合的CTL表位预测方法.[结果]预测出的MAGE-12的表位中有4个符合HLA-A2限制性CTL表位要求.[结论]预测出的4个HLA-A2限制性CTL表位为MAGE-12的表位的可能性较大,经后续实验筛选、鉴定后,可用于基于MAGE-12的肿瘤治疗性多肽疫苗的设计研究.     

肿瘤抗原MAGE-A亚家族HLA-A2限制性CTL表位的预测及分析

目的:预测肿瘤抗原MAGE-A亚家族的HLA-A2限制性CTL表位,为肿瘤治疗选择合适的CTL表位提供依据.方法:用SYFPEITHI超基序法远程预测系统和量化基序多项式结合的预测方法进行HLA-A2限制性CTL表位预测,采用DNAstar软件提供的蛋白质核酸序列编辑、分析工具,对MAGE-A亚家族成员进行CTL序列同源性分析.结果:共预测出了50个HLA-A2限制性CTL表位,且部分CTL表位高度相似或一致.结论:SYFPEITHI超基序法和量化基序多项式法结合的预测方法是一种高效、准确的表位预测方法,结合CTL表位的同源性分析,可为肿瘤治疗性疫苗的制备中选择合适的CTL表位提供依据.     

HPV18E7抗原HLA-A2限制性CTL表位的初步筛选

目的:初步筛选人乳头瘤病毒18型E7抗原的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位,为表位免疫原性鉴定提供靶肽.方法:采用超基序、多项式和量化基序方案相结合的方法,对靶抗原HPV18E7的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位进行预测,并应用固相合成法合成多肽,经RP-HPLC纯化及纯度分析,用质谱进行定性鉴定.结果:分别预测出5条、1条和6条九肽表位,综合三种预测方案确定其中1条为候选合成表位,合成肽的纯度大于95%,经质谱分析合成肽的分子量测定值与理论值相符.结论:超基序、多项式和量化基序方案联合应用提高预测效率,避免了在研究HPV18E7抗原表位时盲目合成多肽;所合成的多肽为高纯度靶肽,为后继的抗原表位的免疫原性的鉴定奠定了实验基础.