［Ca2+］i对大鼠肺动脉平滑肌细胞膜钙激活氯离子通道的调节作用

目的： 探讨细胞浆内游离钙离子浓度（［Ca²⁺］_i）在常氧、急性和慢性低氧条件下对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)膜钙激活氯离子通道（Cl_Ca）的调节作用。 方法: 常规离体血管灌流法检测急性低氧时肺动脉环张力变化；钙荧光探针(Fura-2/AM)负载培养PASMCs，观察常氧和慢性低氧条件下［Ca²⁺］_i的变化并由此对Cl_Ca的影响；同时用四唑盐(MTT)比色法观察当［Ca²⁺］_i变化时Cl_Ca对PASMCs增殖的影响。 结果: (1) Cl_Ca阻断剂尼氟灭酸（NFA）和indaryloxyacetic acid (IAA-94)可以舒张急性低氧引起的肺动脉环收缩。(2) 慢性低氧时［Ca²⁺］_i升高：常氧状态下, PASMCs ［Ca²⁺］_i为(123.63±18.98)nmol/L，低氧时为(281.75±16.48)nmol/L (P<0.01)。(3) 常氧时，NFA和IAA-94对［Ca²⁺］_i 无明显影响(P>0.05)。(4) 慢性低氧时, NFA和IAA-94使PASMCs ［Ca²⁺］_i由(281.75±16.48)nmol/L降低到(117.66±15.36)nmol/L (P<0.01)。(5)MTT比色法中，慢性低氧状态下NFA和IAA-94引起升高的吸光度(A)值降低，由0.459±0.058到0.224±0.025 (P<0.01)。 结论: 低氧引起［Ca²⁺］_i升高，这可能激活Cl_Ca，对［Ca²⁺］_i起正反馈作用，Cl_Ca可能在低氧肺动脉高压中起作用；慢性低氧条件下Cl_Ca可能参与促进大鼠PASMCs的增殖。     

COX-2抑制剂通过非COX依赖性途径对抗心肌氧化损伤

目的： 研究环加氧酶2（COX-2）抑制剂尼美舒利和COX-1抑制剂比罗昔康在对抗心肌氧化应激损伤中的作用及其机制。方法: 离体大鼠心脏行Langendorff灌流，分别给予H₂O₂、pyrogallol（可产生超氧阴离子）或Vit C+Fe2+（可产生羟自由基），观察心脏收缩功能、心肌LDH和MDA含量。心肌COX的活性用PGI₂的稳定产物6-Keto-PGF_1α的含量表示。结果: 尼美舒利（3 mg/kg）可明显减轻H₂O₂引起的收缩功能下降（10 min 应激时LVDP为72%±10% vs 61%±11%，P<0.05），减少LDH释放［（5.5±2.5）U/L vs （8.0±2.1）U/L，P<0.05）］。而比罗昔康（3 mg/kg）虽然能抑制H2O2应激时LVDP的下降（73%±10% vs 61%±11%，P<0.05），却加重LVEDP的上抬［（29.00±5.61）mmHg vs（23.16±3.57） mmHg，P<0.01］。尼美舒利亦能减轻超氧阴离子和羟自由基引起的心肌损伤作用。尼美舒利和比罗昔康预处理对H₂O₂应激心肌6-Keto-PGF_1α含量无明显影响。线粒体ATP敏感性钾通道（mitochondrial ATP sensitive potassium channel，mitoK_ATP）的阻断剂5-HD可取消尼美舒利减轻H₂O₂引起的LVDP和±dp/dt_max降低作用（分别为53%±12% vs 69%±3%、58%±11% vs 72%±7%和37%±8% vs 51%±4%，P<0.01）。结论: COX-2抑制剂尼美舒利可以对抗心肌氧化损伤，其机制通过非COX依赖性途径发挥作用，而mitoK_ATP可能参与尼美舒利的保护作用。     

三氧化二砷诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体的变化

目的： 研究三氧化二砷（As₂O₃）诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体的变化特点。方法: 以As₂O₃诱导Jurkat细胞凋亡为模型，利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞凋亡和坏死，DiOC₆(3)/PI染色流式细胞术检测线粒体膜电势（△ψm），壬基酚丫啶橙(NAO)/PI染色流式细胞术检测线粒体质量，利用2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFH-DA)染色流式细胞术检测细胞内活性氧的变化。 结果: 在4×10^-6mol/L As₂O₃诱导下，Jurkat细胞在48 h凋亡比率为(18.98±1.40)%， 对照组为(5.17±0.80)%，组间差异显著（P<0.01）；As₂O₃组坏死比率为(8.56±0.70)%，对照组为(1.53±0.55)%，组间差异显著（P<0.01）。As₂O₃组在48 h时点的线粒体膜电势低于对照组（P<0.05）， 线粒体膜电势下降的Jurkat细胞比率分别为（23.07±3.62)%和（6.63±1.46)%。 同时Jurkat细胞As₂O₃组线粒体质量显著低于对照组（P<0.01），线粒体质量下降的细胞比率分别为（25.90±1.80)%和（6.37±1.04)%。As₂O₃组自由基产生明显高于对照组（P<0.01）， DCFDA平均荧光强度分别为24.41±0.75和17.06±0.48。结论: As₂O₃诱导Jurkat细胞凋亡过程中，线粒体膜电势和质量均下降，细胞内氧自由基水平升高。     

Smad2/3信号蛋白在大鼠梗阻性肾病肾组织中的表达

目的:探讨Smad2/3信号蛋白在大鼠梗阻性肾病模型肾组织中的表达及可能作用。 方法:采用单侧输尿管结扎（UUO）模型，分别于造模后1、3、7、14、21和28 d取肾组织，用免疫组化法检测TGFβ₁、磷酸化Smad2/3和α-SMA在梗阻肾肾组织中的表达；用原位杂交方法检测梗阻肾组织TGFβ₁ mRNA的表达。结果:正常大鼠肾组织具有基础的TGFβ₁(4.32%±1.72%)和磷酸化Smad2/3［(19.31±5.37）个/mm2］的表达，α-SMA只表达于血管平滑肌，肾小管-间质无表达。UUO术后1 d，TGFβ1的表达无明显增加(5.15%±2.08% vs对照组，P>0.05)，第3 d明显增加(13.55%±6.33% vs 对照组，P<0.01)，第7 d达高峰(26.78%±8.77% vs 对照组，P<0.01)，此后表达减少；磷酸化Smad2/3的表达在UUO术后3 d明显增加［(67.95±13.87）个/mm2 vs 对照组，P<0.01］，并持续增加到第7 d［（150.61±27.34）个/mm² vs 对照组，P<0.01］，此后表达减少；而UUO术后3 d肾组织α-SMA表达亦明显升高（5.58％±1.23％ vs 对照组，P<0.01），7 d达到高峰（13.43％±3.32％ vs 对照组，P<0.01），14 d表达开始下调；UUO术后肾间质细胞外基质的沉积随着疾病的进展而进行性增加，第28 d达到最高峰。梗阻肾肾组织中TGFβ₁、磷酸化Smad2/3以及α-SMA的表达时相一致并呈明显正相关（r₁=0.932, P<0.01；r₂=0.946, P<0.01），并与肾间质区域细胞外基质的积聚密切相关。 结论:磷酸化Smad2/3信号蛋白在大鼠梗阻性肾病肾组织中的表达明显增高，可能在肾间质纤维化的过程中起重要作用。     

丹酚酸B对缺血小鼠脑能量代谢和脑水肿的影响

目的： 通过探讨丹酚酸B（SalB）对缺血小鼠脑能量代谢的影响，研究其对脑水肿的作用。方法：将NIH小鼠分为假手术组、缺血组、SalB治疗组和尼莫地平（Nim）治疗组，测定缺血30 min时脑组织能荷（EC）、磷酸肌酸（PCr）、ATP酶活性、兴奋性氨基酸（EAA）含量以及脑含水量。结果：SalB治疗组EC（0.520±0.034）和PCr［（98.344±13.249）μmol/g］的含量、Na⁺-K⁺-ATPase［（0.593±0.013）×10³ U/g］和Ca²⁺-ATPase［（0.484±0.053）×10³ U/g］的活性明显高于缺血组EC（0.465±0.037）、PCr［（81.614±9.919）μmol/g］的含量、Na+-K+-ATPase［（0.244±0.065）×10³ U/g］和Ca²⁺-ATPase［（0.321±0.086）×10³ U/g］ 的活性，2者相比显著差异（P<0.01）；而SalB治疗组Glu［（0.405±0.110）μmol/g］和Asp［（0.141±0.020）μmol/g］的含量和脑含水量［（38.1±0.1）%］ 则明显低于缺血组Glu［（0.550±0.140）μmol/g］、Asp［（0.287±0.050）μmol/g］的含量和脑含水量［（44.1±0.1）%］，2者比较亦有显著差异（P<0.05,P<0.01）。结论：增强脑组织能量代谢和ATP酶活性，并降低脑组织中兴奋性氨基酸的含量，可能是SalB减轻小鼠缺血性脑水肿的作用机制。     

ERK1/2信号蛋白在糖尿病小鼠肾组织中的表达

目的： 研究细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠肾组织中的表达及活化情况，从分子信号角度探讨糖尿病肾病肾纤维化的发病机制。方法：采用STZ腹腔注射诱导小鼠糖尿病模型，并检测血糖、血肌酐、24 h尿白蛋白排泄率、肾重/体重、肾小球体积；用免疫组织化学方法检测糖尿病小鼠肾组织TGF-β₁、磷酸化ERK1/2和collagen Ⅲ的表达。结果： 腹腔注射STZ后，模型组小鼠均出现明显的多食、多饮、多尿和体重下降等糖尿病症状，血糖明显升高，血肌酐水平出现一过性增高，24 h尿白蛋白排泄率明显增加，肾重/体重比值增加，肾小球体积增大，肾小球细胞外基质明显增宽。正常肾组织有TGF-β₁和磷酸化ERK1/2的基础表达［分别为：5.26%±2.35%；（12.31±3.97）个/mm²］，糖尿病形成后，TGF-β₁、磷酸化ERK1/2水平在肾组织中的表达明显高于对照组，并持续增加到12周［分别为：15.63%±5.38% vs 对照组,P<0.01；（136.84±25.94）个/mm² vs 对照组,P<0.01］。正常肾组织有collagen Ⅲ的基础表达（1.58%±0.52%），糖尿病形成后collagen Ⅲ在肾组织中的表达均明显高于对照组，并持续增加到16周（15.28%±3.78% vs 对照组,P<0.01）。肾组织TGF-β₁、磷酸化ERK1/2的表达时相相似，并呈明显的正相关（r=0.87,P<0.01），并与肾组织collagen Ⅲ的表达相关（r=0.83,P<0.01）。结论： 细胞外信号调节激酶1/2的表达和活化可能参与小鼠糖尿病肾病肾纤维化的发病过程。     

可溶性CD40L在评价冠状动脉粥样硬化斑块易损伤中的意义

目的：探讨血清可溶性白细胞分化抗原40配体（sCD40L）在评价冠状动脉粥样硬化斑块易损性中的意义，并探讨sCD40L水平和冠状动脉狭窄程度及其与C-反应蛋白（CRP）和血沉（ESR）的相关性。 方法：按照WHO关于冠心病的诊断标准，并结合冠状动脉造影（CAG）结果，选择84例冠心病（CHD）患者和20例非冠心病患者（NCHD）作为研究对象。84例CHD分为3组：急性心肌梗死（AMI）30例， 不稳定心绞痛（UA）30例 ，稳定性心绞痛（SA）24例。4组患者均在入院当天采用双抗体夹心酶标免疫吸附法（ELISA）测定血清标本中的sCD40L水平（μg/L）。并进行CAG检查，确定冠状动脉病变支数和Jenkins评分。同时测定ESR、CRP。 结果：4组患者血清sCD40L水平存在明显差异（P<0.01）。AMI组sCD40L水平［（8.48±4.13) μg/L］明显高于SA组［（4.36±2.68) μg/L］（P<0.01）和NCHD组［（4.12±1.96) μg/L］（P<0.01）；UA组sCD40L水平［（8.72±4.26) μg/L］明显高于SA组和NCHD组（P<0.01）；UA组sCD40L水平轻微高于AMI组，但无显著差异（P>0.05）；SA组sCD40L水平轻微高于NCHD组，但无显著差异（P>0.05）。冠心病患者血清sCD40L水平与Jenkins评分呈显著正相关关系（r=0.524，P<0.01）。sCD40L水平与ESR和CRP显著相关（r=0.722，P<0.01和r=0.734，P<0.01）。 结论：AMI和UA组患者血清sCD40L水平明显高于SA和NCHD患者，提示sCD40L水平可能反映冠状动脉粥样硬化斑块的易损性。sCD40L水平随着冠脉病变支数和Jenkins积分的增加而升高，提示sCD40L可能有促进冠状动脉硬化的作用。sCD40L与ESR和CRP具有显著相关关系。     

急性冠脉综合征患者OX40配体表达的变化

目的： 探讨急性冠脉综合征（ACS）患者外周血单核细胞表达OX40配体（OX40L）及血清可溶性OX40L（sOX40L）水平变化的临床意义。方法: 应用流式细胞术和双抗夹心酶联免疫测定法（ELISA）分别对正常对照组30例、稳定心绞痛（SA）40例（包括20例PTCA）、不稳定心绞痛（UA）50例、急性心肌梗死（AMI）30例患者血单核细胞表达OX40L及血清可溶性sOX40L水平进行检测。结果: UA组［(67.1±12.3)MFI］及AMI组［(70.2±18.3)MFI］血单核细胞表达OX40L,血清sOX40L水平［(35.7±8.4)ng/L,(38.1±10.5)ng/L］明显高于SA组［(23.1±6.7)MFI, (13.6±4.1)ng/L］和对照组［(20.8±8.1)MFI,(12.8±3.6)ng/L］。AMI患者血清sOX40L水平与UA组无明显差异,但AMI发病后24 h sOX40L有一升高峰值。PTCA后血清sOX40L明显高于PTCA前, 但血单核细胞表达OX40L无差异。结论: OX40L表达可能参与ACS的发生机制,且可能是冠脉斑块不稳定的活动性标志物。     

C57BL/6哮喘小鼠细胞内镁含量与肺组织β2受体mRNA表达的相关性研究

目的：探讨细胞内镁含量对C57BL/6哮喘小鼠肺组织β₂受体mRNA表达的影响。方法:健康4－6周龄清洁级雌性C57BL/6小鼠96只，体重(12±2)g，随机数字表法分为A、B、C、D 4组，每组各24只。应用鸡卵蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型。A、B组予低镁饲料喂食，C、D组予正常镁饲料喂食。B、D组腹腔内注射沙丁胺醇诱导β₂受体低调节，A、C组腹腔内注射生理盐水作对照。第1 d、21 d、34 d各组分别随机抽取8只检测血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂受体mRNA及蛋白表达。 结果:1 d血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂AR mRNA及蛋白表达各组间差异无显著（均P>0.05）。21 d、34 d C组血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂AR mRNA及蛋白表达均显著高于A组［21 d：(0.84±0.09)mmol/L vs （0.57±0.10)mmol/L、(2.39±0.14)mmol/L vs （2.11±0.08)mmol/L、(0.75±0.09)mmol/L vs （0.59±0.06)pmol/g、（88.50±8.50)pmol/g vs （60.10±7.70)pmol/g，均P<0.05；34 d：(0.67±0.10)mmol/L vs (0.51±0.09)mmol/L、(2.17±0.08)mmol/L vs (2.05±0.09)mmol/L、(0.61±0.05)pmol/g vs (0.53±0.06)pmol/g、(76.60±7.10)pmol/g vs (58.00±7.60)pmol/g，均P<0.05］；21 d、34 d D组血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂AR mRNA及蛋白表达亦显著高于B组［21 d：(0.95±0.33)mmol/L vs (0.46±0.09)mmol/L、(2.32±0.18)mmol/L vs (1.87±0.14)mmol/L、(0.73±0.10)pmol/g vs (0.43±0.07)pmol/g、(96.90±8.00)pmol/g vs (47.90±4.90)pmol/g，均P<0.05；34 d：(0.71±0.10)mmol/L vs (0.31±0.08)mmol/L、(1.66±0.13)mmol/L vs (1.45±0.16)mmol/L、(0.40±0.07)pmol/g vs (0.33±0.05)pmol/g、(61.50±3.20)pmol/g vs (35.30±7.10)pmol/g，均P<0.05］。结论:细胞内镁缺乏的C57BL/6哮喘小鼠肺组织β₂受体表达减少，在激动剂作用下更易发生β₂受体低调节。     

脓毒症后leptin对肠道功能的影响及对肝肾功能的保护作用

目的： 研究脓毒症对肝、肾功能及肠道相关酶活性的影响，探讨瘦素（leptin）在急性炎症反应中的作用。方法： 建立小鼠盲肠结扎致脓毒症模型，采用96孔分光光度法检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、尿酸（UA）和肠组织匀浆液中髓过氧化物酶（MPO）、谷胱甘肽-S转移酶（GST）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、超氧化物歧化酶（SOD）等，同时以HE染色方法观察肠道组织病理学改变。结果： 脓毒症后6 h，血清UA水平［（521.92±91.86） μmol/L］明显高于假手术组［（330.12±94.15） μmol/L］，而12 h ALT［（83.55±40.44） U/L］和UA［（474.03±75.22）　μmol/L］均高于假手术组［（66.23±16.80） U/L］和［（320.95±99.14） μmol/L］。采用腹腔内注射leptin（0.1 mg/kg）和吲哚美辛（2 mg/kg），12 h时ALT和UA水平均明显低于脓毒症组（P<0.05）。此外，伴有肠道组织MPO、GST、XOD和SOD活性的改变。结论： 在脓毒症过程中，微量leptin体外注射可以发挥改善和稳定肝肾功能的明显作用，其机制可能同其影响肠道多种与自由基、巯基和嘌呤代谢相关酶的功能有关，而且吲哚美辛在一定程度上有类似的效应，但所用剂量明显高于leptin水平。     

大剂量血脂康在经皮冠状动脉介入术中的炎症抑制作用

目的： 研究不稳定型心绞痛(UA)患者在经皮冠状动脉介入(PCI)治疗前应用大剂量血脂康对炎症的抑制作用。 方法： 对196例临床确诊为高危UA（心绞痛Braunwald 分级为Ⅲ和ⅡB级,CRP＞3 mg/L）的患者按随机原则分别入选A组和B组,在相似常规治疗的基础上分别口服1.2 g/d和2.4 g/d血脂康治疗72 h。随后对所有病人进行冠状动脉造影和PCI治疗。测定在入院时、药物治疗3 d后（PCI术前）和PCI术后48 h的血浆CRP的水平，并随访半年内的冠脉事件和左室射血分数。 结果： 入院时2组血浆CRP水平无明显差别（P＞0.05）；治疗3 d后，两组血浆CRP水平明显低于入院时［A组：（5.44±1.57）mg/L vs （4.04±1.54） mg/L；B组： （5.42±1.36） mg/L vs （3.60±1.14） mg/L,P＜0.05］；PCI术后48 h，两组血浆CRP水平显著高于术前［A组升至 （9.22±5.03） mg/L；B组升至（4.97±1.75） mg/L，P＜0.05］。PCI术前及术后48 h，B组的血浆CRP水平明显低于同期A组(P＜0.05)。术后半年主要冠脉事件B组明显少于A组［21/104 (20.2%) vs 9/92 (9.8%)，P＜0.05］，左室射血分数B组明显高于A组(55.41％±10.93% vs 59.30％±9.99%,P＜0.05)。 结论： PCI术前大剂量血脂康治疗对PCI术引起的炎症具有抑制作用，抑制炎症可能是PCI术后冠脉事件减少和左室射血分数增加的重要因素。     

钙释放通道稳定蛋白过度表达对心力衰竭心室肌细胞肌浆网功能的影响

目的： 探讨钙释放通道稳定蛋白FKBP12.6过度表达对心力衰竭心室肌细胞肌浆网（SR）功能的影响。方法： 用携带FKBP12.6基因的重组腺病毒Ad.FKBP12.6-GFP感染分离的心力衰竭心室肌细胞，通过RT-PCR和Western blotting技术检测转基因的表达；通过局部场刺激诱发胞内钙瞬变，SR钙容量则由咖啡因诱发的钙释放估测；以X-rhod-1-AM作为Ca2+指示剂，采用激光共聚焦线扫描检测细胞内Ca²⁺ 浓度的变化。结果： Ad-FKBP12.6-GFP组的FKBP12.6 mRNA 和蛋白表达水平分别比对照组升高5倍和4倍；Ad-FKBP12.6-GFP感染细胞的钙瞬变幅度(F/F₀峰值，3.16±0.42 vs 1.43±0.38, P<0.01)和SR钙容量(F/F₀峰值, 4.15±0.54 vs 2.23±0.44, P<0.01)均显著高于Ad-GFP感染细胞。结论： 采用基因转移技术上调FKBP12.6的表达可能是心力衰竭治疗的一条新途径。     

血管生成素-1激活tyrosine kinase/PI3K增加血管内皮细胞［Mg2+］i

目的：探讨血管生成素-1（Ang-1）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）内游离镁离子浓度（［Mg²⁺］_i）的调节机制。方法:我们采用荧光指示剂mag-fura-2，运用PTi 阳离子测定系统动态测HUVECs的［Mg²⁺］_i。结果:Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加与细胞外Mg2+浓度无关。Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加与细胞内Ca2+浓度无关。经酪氨酸激酶阻断剂(tyrphostin A23 和 genistein), 磷脂酰3激酶阻断剂 (wortmannin和LY294002)预处理，均显著阻断Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加。但经活化丝裂原激活激酶阻断剂(SB202190和PD98059) 预处理，不能阻断Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加。结论:Ang-1通过酪氨酸激酶/磷脂酰3激酶信号传递途径使细胞内的Mg2+库释放Mg2+，从而增加HUVECs的［Mg²⁺］_i。     

丝瓜络对高脂血症小鼠LDL-R基因表达的影响

目的： 观察中药丝瓜络（RLF）对高脂血症小鼠低密度脂蛋白受体（LDL-R）基因表达的影响。方法：用高脂饲料喂养雄性昆明小鼠建立高脂血症模型,以血脂康作为阳性对照观察饲料中补充丝瓜络粉剂喂养对小鼠血清总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）的影响。按Trizol法提取小鼠肝脏总RNA,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定LDL-R mRNA的表达,观察其在正常、高脂和给药3种条件下的差异。结果：（1）高脂组小鼠的血清TC和LDL-C分别为（5.71±0.82）和（3.99±1.12）mmol/L,显著高于正常对照组的TC（2.31±0.21）mmol/L和LDL-C（1.72±0.28）mmol/L（P＜0.01）,而高脂+丝瓜络组、高脂+血脂康组的TC分别为（3.65±0.28）mmol/L、（3.94±0.65）mmol/L和LDL-C分别为（2.74±0.54）mmol/L、（3.00±0.23）mmol/L,显著低于高脂组（P＜0.01）;（2）与正常对照组比较,高脂组小鼠肝脏LDL-R mRNA的表达减弱（P＜0.01）;与高脂组比较,高脂+丝瓜络组、高脂+血脂康组小鼠肝脏LDL-R mRNA的表达增强（P＜0.01）。结论： 丝瓜络对实验性高脂血症小鼠有明显的降血脂效应,且能使实验性高脂血症小鼠肝组织的LDL-R mRNA表达增强。     

M-CSF和staurosporine促进小鼠腹腔巨噬细胞巨涎蛋白摄取ox-LDL

目的：探讨巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）和蛋白激酶C抑制剂(STA)对小鼠腹腔巨噬细胞（MPM）巨涎蛋白摄取氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的影响。 方法： M-CSF与蛋白激酶C抑制剂STA预处理MPM后制备膜蛋白，开展SDS-PAGE电泳及配体印迹试验，测定不同条件下巨涎蛋白结合［125I］ox-LDL的值。 结果： MPM膜蛋白经唾液酸酶预处理后，巨涎蛋白与［125I］ox-LDL的结合值为(2.45±0.46)μg/g细胞蛋白，显著低于对照组的(58.38±1.78)μg/g细胞蛋白。用M-CSF与STA预处理MPM后，处理组与对照组巨涎蛋白结合配体［125I］ox-LDL呈现一趋向饱和的浓度曲线，经线性回归得两类似平行的直线，M-CSF组Bmax(453.59±15.39)μg/g蛋白，显著高于对照组的Bmax(322.77±12.54)μg/g蛋白，而Kd值变化不大。STA处理组Bmax=(362.40±15.31)μg/g蛋白，Kd值为(15.10±2.67)mg/L，对照组Bmax为(264.76±11.29)μg/g蛋白，Kd值为(17.43±2.98)mg/L。 结论： 巨涎蛋白接受M-CSF和STA的上调作用，通过增加其在MPM表面数目而促进对ox-LDL的摄取，促进泡沫细胞的形成。     

钙调神经磷酸酶信号通路参与PGF2α诱导的心肌细胞肥大

目的： 研究前列腺素F₂α（PGF₂α）诱导心肌细胞肥大的作用及其细胞内信号转导通路。方法：利用乳鼠心肌细胞培养，以细胞直径、蛋白质含量和心房利钠因子（ANF）mRNA表达为心肌肥大反应指标，观察PGF₂α致心肌肥大效应。采用Fura-2/AM为荧光指示剂测定心肌细胞内钙浓度（［Ca²⁺］_i）；RT-PCR法半定量测定mRNA表达；Western blotting方法检测蛋白表达。结果：随着PGF₂α 浓度升高（10^-10-10^-5 mol/L），心肌细胞直径、蛋白含量和［Ca²⁺］_i均明显高于溶剂对照组（P﹤0.01）；PGF₂α 10^-7 mol/L使ANF mRNA表达明显高于对照组（P﹤0.01）；钙调神经磷酸酶（CaN）mRNA及CaN信号通路（含CaN及其下游因子NFAT₃和GATA₄）蛋白的表达亦明显高于对照组（P﹤0.05）。加入CsA（CaN阻断剂）后，PGF₂α诱导的心肌细胞肥大和［Ca²⁺］_i升高的作用明显降低（P﹤0.01），CaN mRNA和CaN信号通路蛋白的表达亦明显减少（P﹤0.05）。结论： PGF₂α诱导的心肌细胞肥大至少部分与其升高［Ca²⁺］_i从而激活CaN信号转导通路有关。     

食管癌细胞放射诱导前后化疗敏感性变化及相关机制研究

目的： 探讨食管癌细胞放射诱导前后对化疗药物敏感性及耐药基因ERCC1表达的变化，分析ERCC1的表达与化疗敏感性变化的关系。方法: 采用［60Co］-γ射线反复多次照射食管癌细胞株EC9706，建立放射抗拒食管癌细胞株EC9706-R。MTT法测定EC9706和EC9706-R对顺铂的IC₅₀,计算耐药指数。免疫细胞化学(SP)和RT-PCR法测定ERCC1蛋白和mRNA在2种细胞中的表达。结果: EC9706细胞对顺铂的IC50是(1.480±0.012) mg/L，EC9706-R细胞的IC₅₀是1.836±0.008 mg/L(P<0.05)，耐药指数为：1.240±0.015；ERCC1蛋白在2种细胞中染色强度指数分别为2.838±0.055和2.898±0.039，两者无统计学差异(P>0.05)。ERCC1在这2种细胞中mRNA表达的特异性基因条带与β-actin基因条带的密度比值分别为：1.168±0.068和1.143±0.089（P>0.05）。结论: 诱导建立的食管癌放射抗拒细胞较亲本细胞的化疗敏感性下降,而耐药基因ERCC1的表达水平不随细胞对放化疗敏感性的变化而变化。