CIK细胞对G0 期急性髓系白血病细胞的杀伤作用

对于血液系统恶性肿瘤,化疗缓解后的微小残留病是患者长期生存的主要障碍。由于只有处于细胞周期白血病细胞对化疗敏感,有研究^[1]表明残留白血病细胞多为G₀期细胞。近年来诸多研究表明细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞对多种肿瘤细胞均有杀伤作用,但CIK细胞对急性髓系白血病(AML)中G₀期白血病细胞杀伤作用的研究尚未见报道。本实验从完全缓解的白血病患者外周血中诱导培养CIK细胞,测定其扩增数量,观察其对自体G₀期CD34+白血病细胞的细胞毒作用,为临床应用自体CIK细胞清除残存白血病细胞提供了理论依据。     

自体CIK细胞治疗对卵巢癌调节性T细胞的影响

目的  观察细胞因子激活的杀伤细胞（CIK）对卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞及T细胞亚群变化的影响。方法  对30例经病理确诊为卵巢癌的患者,取其自体外周血单个核细胞,通过培养将其诱导为CIK细胞,然后将细胞进行自体回输。2周后采用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞、T细胞亚群及NK细胞的变化。结果  CIK细胞输注后,患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞减少(P＜0.01),CD8+下降(P＜0.05),CD3+、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值及NK细胞较治疗前显著升高。结论   卵巢癌患者经自体CIK细胞回输治疗后,外周血调节性T细胞的数量降低,T细胞亚群比例失调和功能低下的状况得到不同程度的改善。     

应用四色荧光分析技术测定造血干细胞移植后患者CD45RA+细胞的变化

目的探讨流式细胞技术测定造血干细胞移植(HSCT)后患者外周血中初始T细胞CD45RA 的变化与临床意义。方法收集来自南方医院的49例造血干细胞移植病人的移植前、移植之后15、30、90和180 d不同时间点的90份肝素抗凝外周血标本。应用流式细胞技术测定外周血CD4 CD45RA /CD8 CD45RA 细胞数的动态变化。结果在49名造血干细胞移植患者外周血标本中选择90份样本进行检测,移植后30 d,CD8 CD45RA 细胞即能恢复到正常水平,而CD4 CD45RA 细胞产量半年之内仍低于正常并持续缓慢增长。经HSCT患者的胸腺再生输出功能明显低于自体干细胞移植患者(P<0.01)。异体外周血干细胞移植患者的胸腺恢复能力显著比异体骨髓移植患者更快(P<0.05)。结论通过流式细胞仪检测患者外周血中CD4 CD45RA / CD8 CD45RA 细胞的变化,可以相对定量地检测患者的胸腺再生输出功能,并通过测量新生T细胞的合成来监视胸腺功能在免疫重建中的作用,为临床干细胞移植治疗提供有力的数据。     

肝癌患者自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗后免疫活性细胞的检测及其临床意义

目的　观察肝癌患者自体细胞因子诱导杀伤细胞 (CIK细胞 )回输后 ,外周血中T细胞亚群及树突状细胞亚群的变化 ,评价CIK细胞治疗肝癌的临床效果。方法　采用成份血采血机采集13例肝癌患者的外周血单个核细胞 (PBMC) ,经多种细胞因子诱导后 ,于培养的第 4、7、10、13、15天流式细胞仪检测细胞表型 ;CIK细胞回输前及回输后取病人外周血 ,流式细胞仪测定Ⅰ型树突状细胞(DC1)和Ⅱ型树突状细胞 (CD2 )的比例。结果　诱导培养后 ,CD3+ CD8+ ,CD3+ CD5 6 + ,CD2 5 + 效应细胞的比例明显升高 ,分别由最初的 33 5 %± 10 1%、7 7%± 2 8%和 12 3%± 4 5 % ,上升至 36 6 %±9 0 %、18 9%± 6 9%和 16 4 %± 5 9% ,其中CD3+ CD8+ 可维持较高水平 ,CD2 5 + 和CD3+ CD5 6 + 比例分别于培养后的第 7天和第 13天开始下降。CD3+ CD4 + 和NK细胞比例略有下降 ,但差异无显著意义。CIK细胞回输后DC1和CD2细胞亚群的比例明显升高 ,分别由回输前的 0 5 9%± 0 2 3%和0 2 6 %± 0 12 %上升至回输后的 0 85 %± 0 2 7%和 0 4 3%± 0 2 0 %。CIK细胞治疗后患者临床症状明显改善 ,无明显副作用。结论　CIK细胞治疗可以提高肝癌患者的细胞免疫功能 ,提高对肿瘤细胞的杀伤作用。     

骨髓自然杀伤细胞水平对急性髓细胞性白血病患者预后的影响

目的：探讨骨髓自然杀伤（naturalkiller,NK）细胞水平对急性髓细胞性白血病（acutemyeloidleukemia,AML）患者预后的影响。方法：研究分成AML初治组40例,缓解组20例,正常对照组20例。均抽取骨髓液2ml,采用直接免疫荧光标记法对骨髓有核细胞进行单克隆抗体（CD16＋／CD56＋）标记,应用流式细胞仪进行NK细胞数量的检测。结果：初治组患者骨髓NK细胞表达水平较缓解组显著降低（P〈0．01）。缓解组患者骨髓NK细胞表达水平仍低于对照组（P〈0．05）。不同骨髓NK细胞表达水平间原始细胞数量和AML患者疗效差异均有统计学意义（P〈0．01和P〈0．05）。结论：骨髓NK细胞表达水平可以作为AML的预后指标,亦有助于指导治疗。     

G-CSF对不同人群CD34+细胞及T细胞亚群影响的动态变化研究

目的探讨应用G-CSF动员外周血干细胞时,异体/自体造血干细胞移植供/受者的骨髓及外周血CD34 细胞和T细胞亚群的动态变化特点及最佳外周血干细胞采集时间.方法对12例健康供者和16例化疗7 d后的恶性血液病患者,以G-CSF 150 μg/12 h,皮下注射,连用5 d.应用流式细胞仪测定骨髓及外周血CD34 细胞和T细胞亚群.结果①应用G-CSF前,两者骨髓CD34 细胞有显著差异(P<0.01).应用48 h后,两者的骨髓CD34 细胞均较前有明显增加(P<0.01),两者之间仍存在明显差异(P<0.01).两者的骨髓CD34 细胞高峰值出现在96 h后,较应用前差异显著(P<0.01),两者之间无差异(P>0.05).②应用G-CSF前,两者的外周血CD34 细胞无明显差异(P>0.05).应用72 h后,两者外周血中CD34 细胞均较前有明显增加(P<0.01),两者之间无明显差异(P>0.05).96 h后,两者的CD34 细胞达高峰,较应用前差异显著(P<0.01).两者之间无明显差异(P>0.05).③应用G-CSF对两者的T淋巴细胞亚群无明显影响.结论应用G-CSF动员外周血干细胞96 h后,异体/自体造血干细胞移植供/受者的骨髓及外周血CD34 细胞均达到高峰,可适时采集外周血干细胞.     

GIK细胞在肿瘤免疫治疗中的作用

目的 研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK cells)的体外扩增特性及其在抗肿瘤免疫治疗中的作用.方法通过提取健康供血者的PBMNC,培养诱导CIK细胞,显微镜下观察其扩增倍数、增殖速率,流式细胞仪分析细胞免疫表型,用MTT法观察其对K562细胞的体外杀伤效应,并通过流式细胞仪进一步分析30例实体瘤患者CIK细胞输注前后外周血免疫活性细胞表型的改变.结果 经2周培养,CIK细胞平均增加了30倍,总数达(4.8～5.0)×109,活性细胞比例>90%;体外杀伤率约50%,表型检测效应细胞CD3+,CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+亚群比例显著升高,差异有高度统计学意义(P<0.01).实体瘤患者CIK细胞输注后外周血中免疫活性细胞比例也明显升高,差异也有统计学意义(P<0.05).结论 CIK细胞在体内外能明显抑制肿瘤生长,有效改善患者的免疫功能,为晚期肿瘤治疗提供了新的方法.     

抗CD3／CD45双特异抗体激活的效应细胞对白血病细胞的杀伤效应

目的 探讨双特异性抗体用于白血病自体干细胞移植体外净化的可能性。方法 以抗CD3/CD45双特异性抗体激活外周血单个核细胞。以HL60为靶,用LDH方法测定杀伤效应。结果 靶效比例不同时,抗CD3/CD45激活的效应细胞对HL60细胞都表现出杀伤效应。结论 抗CD3/CD45可能用于骨髓/造血干细胞移植的体外净化。     

健康人和肿瘤患者CIK细胞的生物学特性

目的 比较健康人和肿瘤患者CIK（Cytokine—induced kiuer）细胞的体外扩增速度、细胞表型和杀伤活性,以期为临床应用中效应细胞的选择提供提供实验数据。方法健康人和肿瘤患者外周血各10例,经密度梯度离心获得单个核细胞（PBMC）,以干扰素-γ、CD3MAb、IL-2和IL-1为诱导剂制备CIK细胞,直接活细胞计数法比较两者的扩增速度。流式细胞杈检测比较两者细胞表型,MTT法比较两者对K562和LOVO细胞株的杀伤活性。结果健康人外周血CIK细胞的扩增速度、对K562和LOVO细胞株杀伤活性均显著高于肿瘤患者外周血CIK细胞,（P〈0．01）;流式细胞仪检测显示健康人外周血CIK细胞CD3^＋CD56^＋百分比显著高于肿瘤患者外周血CIK细胞,（P〈0．01）。结论健康人较肿瘤患者外周血CIK细胞体外扩增快,CD3^＋CD56^＋比例高,杀伤活性强。为临床应用CIK细胞进行过继性免疫治疗提供了实验依据。     

IL-24联合CIK细胞体外杀伤黑色素瘤A375细胞的研究

目的 探讨重组人IL-24联合CIK细胞体外杀伤黑色素瘤A375细胞的效果及其相关作用机制.方法 从黑色素瘤患者外周血分离外周血单个核细胞（PBMC）,通过IFN-γ、IL-2、IL-1α、CD3 McAb诱导培养获得CIK细胞.流式细胞仪检测CIK细胞免疫表型,LDH释放法检测IL-24联合CIK细胞对黑色素瘤A375细胞的杀伤效果.进一步通过检测CIK细胞NKG2D、穿孔素表达和IFN-γ分泌情况,以及A375细胞表面MICA/B的表达水平的,分析IL-24联合CIK细胞对A375细胞杀伤作用机制.结果 流式细胞仪检测结果示CIK细胞中主要效应细胞CD3＋ CD8＋双阳性细胞占（53.0±4.6）％、CD3＋ CD56＋双阳性细胞占（21.5±5.2）％.LDH释放法检测结果示IL-24联合CIK细胞对黑色素瘤A375细胞的杀伤作用最强,20∶1的效靶比时杀伤率达55％.IL-24与CIK细胞联合作用后,CIK细胞表达NKG2D和穿孔素水平提高,IFN-γ的分泌增多;同时IL-24能够提高A375细胞MICA/B的表达.结论 IL-24和CIK细胞联合作用明显增强了CIK细胞对黑色素瘤A375细胞的杀伤能力,其作用机制与IL-24促进CIK细胞分泌IFN-γ和上调NKG2D和穿孔素表达、同时上调A375细胞MICA/B的表达等密切相关。     

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗妇科恶性肿瘤的近期疗效观察

目的 观察回输体外培养的自体细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer cells, CIK）治疗妇科恶性肿瘤的近期临床疗效。方法 取8例妇科恶性肿瘤患者外周血,体外培养诱导出CIK细胞,将CIK细胞回输给患者,对比其回输前及回输后2个月的免疫功能、血清CA-125值、卡氏评分及临床症状变化,评价其近期临床疗效。 结果 回输后,外周血CD4+/CD8+比值增加(P<0.05), CD3-CD16+CD56+ 细胞所占百分比增加(P<0.05), CD4+CD25+细胞所占百分比降低(P<0.05);5例患者血清CA-125值下降;1例患者卡氏评分上升;5例患者自觉有临床症状缓解;无一例出现回输不良反应。结论 回输自体CIK细胞对治疗妇科恶性肿瘤有一定的近期疗效。     

高三尖杉酯碱对人急性髓系白血病干细胞的杀伤作用

目的:观察高三尖杉酯碱(HHT)对人急性髓系白血病(AML)干细胞的杀伤作用,探讨其分子学机制。方法:用流式细胞仪(FACS)分析AML细胞株白细胞干细胞(LSC)的表型特征,用MTT法检测HHT对具有LSC特征的KG-1细胞的生长抑制作用,用FACS观察HHT对CD34+CD38-CD96+的KG-1细胞数量的影响,Western blot法检测药物处理后Caspase途径和凋亡相关蛋白的改变。结果:KG-1和Kasumi-1细胞CD34+CD38-CD96+分别为69%和26.7%,U937细胞不表达CD96。HHT能显著抑制KG-1细胞的生长,并呈剂量依赖性(r2=0.9971,P<0.05)。48 h的半数抑制浓度为16.9 ng/ml。HHT作用KG-1细胞后,CD34+CD38-CD96+细胞的比例从63.6%下降到17.1%。HHT能显著激活Caspase-3、Caspase-9和PARP,抑制磷酸化Akt和Bcl-2的表达。结论:HHT能显著抑制人AML细胞KG-1的增殖,减少CD34+CD38-CD96+白血病干细胞数量;对Akt活性和Bcl-2的调控可能是其重要的作用机制。     

Treg和淋巴细胞亚群在急性髓系白血病中的意义

目的：研究 CD4+CD25+CD127 low/-调节性 T 细胞(Treg)和淋巴细胞亚群在急性髓系白血病(AML)患者外周血中的变化、相互关系及临床意义。方法采用流式细胞仪对初治组和完全缓解( CR)组外周血Treg及淋巴细胞亚群水平进行检测,并与正常对照组进行对比。结果初治组和CR组AML患者外周血中Treg水平均高于正常对照组( P<0．05),初治组高于CR组(P<0．05)。初治组和CR组AML患者外周血的NK( CD3-CD16+CD56+)细胞占淋巴细胞的比例均低于正常对照组(P<0．05),初治组低于CR组(P<0．05)。初治组 CD3+ T 细胞、CD4+ T 细胞含量和 CD4+/CD8+比值均低于正常对照组( P<0．05),但初治组CD8+T细胞含量却明显高于正常对照组( P<0．05);CR组CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞含量及CD4+/CD8+比值接近正常对照组,与初治组比较差异有统计学意义(P <0．05)。结论 AML患者外周血中Treg及CD8+T细胞比例明显升高, NK 细胞、CD3+ T 细胞、CD4+ T 细胞含量和CD4+/CD8+比值降低,表明AML患者免疫功能处于抑制状态。 Treg控制CD8+T细胞免疫应答,同时抑制NK细胞的天然免疫反应,在CD4+T细胞与CD8+T细胞平衡的失调中起主要作用,与 AML 疾病发生发展密切相关。通过下调Treg的数量或去除其抑制功能,优化AML患者的免疫治疗。     

FLT3-ITD 突变的急性髓系白血病免疫表型 及临床特征分析

目的 讨论FLT3-ITD 突变的急性髓系白血病（AML）的免疫表型及临床特征。方法 回顾性 分析2015 年6 月—2017 年6 月中国医科大学附属第四医院收治的FLT3-ITD+ 及FLT3-ITD- AML 组患者的 免疫表型、临床资料,并对两组患者化疗后临床结局及生存状况进行比较。结果 FLT3-ITD+ AML 组患者 CD56、CD33、CD11b 及CD7 表达高于FLT3-ITD- AML 组（P <0.05）,而CD34、CD117 表达低于FLT3- ITD- AML 组（P <0.05）。与FLT3-ITD- AML 组患者比较,FLT3-ITD+ AML 组患者外周血白细胞计数及骨 髓原始细胞比例升高（P <0.05）,而血红蛋白及血小板计数比较,差异无统计学意义（P >0.05）;FLT-ITD- AML 组患者总反应率高于FLT3-ITD+ AML 组（P <0.05）;FLT3-ITD- AML 组患者无病生存率和总生存率 高于FLT3-ITD+ AML 组（P <0.05）。FLT3-ITD+ AML 组患者完全缓解患者CD56、CD34、CD11b、CD7、 CD33 及CD117 的表达水平低于未缓解患者（P <0.05）。结论 FLT3-ITD+ AML 患者白血病细胞抗原表达 紊乱,外周血白细胞及骨髓原始细胞高,完全缓解率低,预后差,是AML 预后不良因素。AML 患者早期检测 FLT3-ITD 突变及免疫分型对于指导治疗、判断预后具有重要临床意义。     

106例成人急性白血病流式细胞术免疫分型分析

OBJECTIVE: To study the immunophenotyping of adult patients with acute leukemia and its association with the prognosis. METHODS: Immunophenotyping was performed in 106 adult patients with acute leukemia by three-color flow cytometry analysis using CD34/SSC gating. RESULTS: The antigens expressed in 71 patients with acute myeloid leukemia (AML) were mainly CD13, CD33, HLA-DR, CD34 and CD117. Lymphoid antigen expression was identified in 23.9% adult AML patients and CD56 antigen expression in 15.5% of the AML patients. In 29 patients with acute lymphoblastic leukemia (ALL), the expressed antigens were mainly HLA-DR, CD10, CD19, CD34 and CD7, and 34.5% of these patients were found to be positive for myeloid antigen expression. Complete remission (CR) rate in AML patients with lymphoid antigen expression after chemotherapy was lower than that in AML patients without lymphoid antigen expression (52.9% vs 77.8%, P<0.05), and no significant impact was noted of myeloid antigen expression in ALL on the CR of the patients (70.0% vs 94.7%, P>0.05). The CR rate in AML with CD56 antigen expression was lower than that in AML without CD56 expression (36.4% vs 78.3%, P<0.025), and the CR rate in CD34+ AML was lower than that in CD34- AML (56.0% vs 80.4%, P<0.05). CONCLUSIONS: Gating of CD45/SSC can eliminate the interference of normal cells to render more reliable immunophenotyping results. The expressions of CD56+, CD34+, lymphoid antigen in adult AML patients, who have lower CR rate, often signify poor prognosis.     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34+细胞亚群及其表面造血因子受体的表达

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓CD34+细胞亚群及其表面干细胞因子受体(SCF-R)、红细胞生成素受体(EpoR)、粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)及血小板生成素受体(TpoR)的表达情况及其意义.方法 采用流式细胞术检测2008年7月至2010年3月天津医科大学总医院新诊断的45例MDS患者(17例低危患者、28例高危患者)及30名对照组原代骨髓CD34+CD38+及CD34+CD38-细胞亚群及其表面SCF-R、EpoR、G-CSFR及TpoR的表达率.结果 高危组CD34+细胞比例[0.53%(0.10%～1.68%)]明显高于对照组[0.13%(0.08%～0.32%),P＜0.01],其他2组间比较差异无统计学意义.低危组和高危组CD34+CD38+细胞比例(86.3%±8.5%、82.6%±11.1%)显著低于对照组(92.3%±3.4%,均P＜0.05),而CD34+CD38-细胞比例(13.7%±8.5%、17.4%±11.0%)显著高于对照组(7.7%±3.4%,均P＜0.05).对照组骨髓CD34+CD38+细胞亚群EpoR表达率(18.7%±18.3%)显著低于CD34+CD38-细胞亚群(63.6%±20.0%,P＜0.01),两亚群之间SCF-R、G-CSFR及TpoR表达率差异无统计学意义.在CD34+CD38+细胞亚群中,3组间SCF-R和TpoR表达率差异无统计学意义,而低危组和高危组EpoR的表达率[9.0%(1.4%～12.7%)、5.2%(1.1%～14.1%)]明显低于对照组[9.6%(5.1%～30.1%),均P＜0.05],G-CSFR的表达率(29.8%±19.1%、28.7%±21.1%)明显低于对照组(44.4%±23.4%,均P＜0.05);在CD34+CD38-细胞亚群中,3组间SCF-R和G-CSFR表达率差异无统计学意义,低危组和高危组EpoR的表达率(42.2%±21.9%、25.7%±15.6%)明显低于对照组(63.6%±20.0%,均P＜0.01),TpoR的表达率(5.4%±4.7%、4.1%±4.0%)明显低于对照组(10.1%±8.3%,均P＜0.05).MDS患者骨髓CD34+CD38+和CD34+CD38-细胞亚群表面受体表达率低的患者其外周血血红蛋白水平、中性粒细胞及血小板计数减低的发生率明显高于受体表达率不低的患者(均P＜0.05).结论 MDS患者的原代骨髓CD34+细胞亚群分化异常,膜表面部分造血细胞因子受体表达减低,这可能与MDS患者血细胞减少有关,有望用于辅助诊断MDS.

Abstract：

Objective To detect the abnormalities of differentiation and expression of membrane hemopoietic cytokine receptors on CD34 + bone marrow cells in patients with myelodysplastic syndromes (MDS). Methods Forty-five newly diagnosed MDS cases from July 2008 to March 2010 in our hospitaland 30 normal controls were enrolled. There were 17 low-risk and 28 high-risk patients. The CD34 + CD38 +and CD34 + CD38- bone marrow cells and the expressions of stem cell factor receptor (SCF-R),erythropoietin receptor (EpoR), granulocyte colony-stimulating factor receptors (G-CSFR) and thrombopoietin receptor (TpoR) on those cells were measured by flow cytometry. Results The mean percentage of CD34+ in karyocyte of MDS cases in high-risk patients [0. 53% (0. 10% - 1.68% )] was significantly higher than that of control group [0. 13% ( 0. 08% - 0. 32% ), P ＜ 0. 01] . The mean percentages of CD34 + CD38 + cells were significantly lower in low and high-risk groups (86. 3% ± 8.5% and 82. 6% ± 11.1% ) than those in control group (92. 3% ± 3.4% ). And the percentage of CD34+ CD38-cells was significantly higher in either low-risk or high-risk group ( 13.7% ±8. 5% and 17.4% ± 11.0% )than that in control group (7.7% ± 3.4%, both P ＜ 0. 05 ). In control group, the mean percentage of antigen expression of EpoR was significantly lower in CD34 + CD38 + cells than that in CD34 + CD38 - cells ( 18.7% ± 18. 3% vs 63. 6% ±20. 0%, P ＜0. 01 ). The expressions of SCF-R, G-CSFR and TpoR were not significantly different between two cell populations. The expressions of EpoR on CD34 + CD38 + cells of low and high-risk MDS groups [9.0% ( 1.4% - 12. 7% ), 5. 2% ( 1.1% - 14. 1% )] were significantly lower than those of control group [9. 6% (5.1% - 30. 1% ), both P ＜ 0. 05]. The expressions of G-CSFR on CD34+CD38+ cells of low and high-risk MDS groups (29.8% ± 19. 1%, 28.7% ± 21.1%) were significantly lower than those of control group (44.4% ± 23.4%, both P ＜ 0. 05 ). The quantities of EpoR on CD34 + CD38 - cells of low and high-risk MDS groups ( 42. 2% ± 21.9%, 25.7% ± 15. 6% ) were significantly lower than those of control group ( 63. 6% ± 20. 0%, both P ＜ 0. 01 ). The expressions of TpoR on CD34+ CD38- cells of low and high-risk MDS groups (5.4% ± 4.7%, 4.1% ± 4.0%) were significantly lower than those of control group ( 10. 1% ± 8. 3%, both P ＜ 0. 05 ). The incidence of cytopenia with low expression rates of hemopoietic cytokine receptors on CD34 + cells was higher than that of MDS with high expression rates. Conclusion The abnormalities of differentiation and membrane hemopoietic cytokine receptors expression of CD34 + bone marrow cells in MDS are associated with MDS cytopenia and may be useful for the diagnosis of MDS.     

小儿急性白血病CD34抗原表达的临床意义

目的探讨儿童急性白血病CD34抗原表达的临床意义。方法采用流式细胞术对78例急性淋巴细胞白血病(ALL)及27例急性髓系白血病(AML)进行免疫表型分析。结果 78例ALL患儿CD34阳性率为43.6%,27例AML患儿CD34阳性率为29.6%,CD34+组与CD34-组在性别和初诊时白细胞计数比较差异无统计学意义(P>0.05);CD34+组与CD34-组在肝脾淋巴结肿大等髓外浸润表现、诱导治疗4周的缓解率上差异有统计学意义。结论 CD34抗原表达在临床特征上主要表现在髓外浸润,为化疗反应差的影响因素。     

脐血清用于CIK诱导及细胞培养的观察

目的 :观察脐血清能否替代正常人AB血清用于人PBMC体外诱导CIK的细胞培养过程。方法 :①按照本室的方法体外分别用含正常人AB血清或脐血清的培养基诱导正常人 (脐血组和正常组各 10例 )CIK ,比较不同血清诱导CIK的扩增差异 ;②流式细胞仪检测CIK细胞表面标志CD3、CD56;③ 3H -TdR释放法检测CIK对肝癌细胞系SMMC -772 1、Bel-740 2、Hep -3b ,肠癌细胞系HIC -2 51,正常胎肝细胞系L -0 2 ,红白血病细胞系K562及经阿霉素诱导的耐药K562细胞毒作用。结果 :①不同血清诱导的CIK在细胞扩增曲线及细胞表面标志上无差异 ,细胞扩增倍数达 64.3倍和 67.4倍 (t =1.0 0 3 ,P >0 .0 5) ,CD3 + CD56+ 细胞扩增倍数达 80 0倍以上 ;②脐血组CIK对肝癌细胞SMMC -772 1、Bel-740 2、Hep -3b、HIC -2 51杀伤能力达 70 %～ 80 % ,与正常组相同 ,杀伤能力无差异 ;③对正常胎肝细胞系L -0 2的细胞毒作用 <5% ;④二组CIK对已诱导耐药的K 562细胞和未诱导耐药的K562细胞细胞毒作用均达到 70 %左右。结论 :脐血清组和正常人组CIK一样对肝癌细胞有很强的细胞毒作用 ,对正常肝细胞无损伤 ,并且对耐药肿瘤同样有效 ,具有临床应用前景     

粒单系白血病原始细胞表达血小板特异性抗原与周期蛋白D3异常表达关系的研究

目的 :探讨急性单核细胞白血病原始细胞表达血小板特异性抗原的机制。方法 :分离外周血或骨髓单个核细胞 ,采用常规染色和普通细胞化学染色观察其形态学特性 ,采用流式细胞仪双荧光分析免疫表型 ,单荧光胞浆蛋白标记分析周期蛋白表达和免疫印迹进一步证实周期蛋白 D3的表达情况。采用周期蛋白和 DNA双标记分析周期蛋白 D3表达与细胞周期的关系。结果 :白血病原始细胞中 CD1 3 HL A- DR 细胞为 94.6 9% ,CD1 3 CD34 细胞为 96 .86 % ,CD41 a CD34 细胞为 41.6 0 % ,CD1 3 CD41 a 细胞为 40 .0 0 % ,免疫印迹和流式细胞仪单参数分析证实周期蛋白 D3表达明显升高 ,周期蛋白 D3阳性细胞在细胞周期各时段所占的比例分别为 :G1 期 5 2 .10 % ,S期9.90 % ,G2 M期 38.0 0 %。结论 :周期蛋白 D3的异常表达导致单核系白血病细胞表达血小板特异性抗原 ,同时也可能在白血病的发生中起重要作用。     

STUDIES ON CFU-MIX OF 47 PATIENTS WITH LEUKEMIA AND MYELODYSPLASTIC SYNDROME

By limiting dilution assay, CFU-Mix of 47 cases of untreated leukemia, myelodysplastic syndrome and 30 cases of normal adults were studied. It is suggested that most cases of acute nonlymphocytic leukemia, like chronic myelogenous leukemia (CML) and myelodysplastic syndrome should have defect in pluripotent hemopoietic stem cell. The CFU-Mix of acute myelogenous leukemia (AML) and CML were obviously lower than that of normal adults (p less than 0.001). By light microscopy, scanning and transmission electron microscopy, it was confirmed that the CFU-Mix colonies, of leukemic patients were chiefly composed of leukemic cells. Their incorporating rate of 3H-TdR was high in the early stage of culture, but that of 55 + 59Fe was low in the whole course. This phenomenon was quite different from that of the normal adults in that the CFU-Mix of the patients showed distinctive proliferation and differentiation into the leukemic progenitor cells.