甲型肝炎减毒活疫苗及灭活疫苗灌胃免疫小鼠后的抗体应答

目的 :测定甲肝减毒活疫苗及灭活疫苗灌胃免疫小鼠后的抗体应答效应。方法 :将活或灭活的甲肝疫苗加或不加明胶 ,经胃免疫小鼠 ,于末次免疫后 2w取血清及肠液 ,用间接ELISA法分别检测其中的特异性IgG和IgA抗体水平 ,并与空白及肌注组比较。结果 :实验组特异抗体水平明显高于肌注组 (P <0 0 1) ;加明胶组的免疫效果较不加者好 (IgG :P <0 0 0 1,IgA :P <0 0 5 )。结论 :甲肝活疫苗及灭活疫苗经消化道免疫小鼠后 ,均可诱导全身及局部的抗体应答 ;明胶有增强抗体产生的作用 ,可作为一种安全、廉价的粘膜佐剂被进一步开发与利用。     

rIL-18对肺炎链球菌肺炎小鼠Th1/Th2免疫应答的影响

目的 研究重组白细胞介素18(rIL-18)对肺炎链球菌肺炎小鼠Th1/ Th2免疫应答的影响.方法 鼻腔接种肺炎链球菌建立小鼠肺炎链球菌肺炎模型,将Balb/c小鼠24只随机分为3组,分别为对照组,肺炎组和肺炎rIL-18干预组(n=8 ),RT-PCR法检测各组小鼠肺组织中IFN-γ、IL-4 mRNA 的表达,同时支气管肺泡灌洗液(BALB)进行活菌计数,有核细胞分类计数.结果 ①肺炎rIL-18干预组BA LF中性粒细胞和巨噬细胞计数显著高于肺炎组和对照组(P＜0.001);②肺炎rIL-18 干预组BALF活菌计数显著低于肺炎组(P＜0.001);③肺炎rIL-18干预组肺组织IFN- γ mRNA表达上调而IL-4 mRNA表达下调(P＜0.001).结论 在小鼠肺炎链球菌肺炎早期给予rIL-18可诱导IFN-γ的合成,促进Th1免疫应答,使Th1/ Th2免疫平衡向Th1免疫偏移、促进宿主对肺炎链球菌的防御.     

甲型肝炎减毒活疫苗免疫小鼠后的体液和细胞免疫应答

减毒活疫苗进入体内在增殖的过程中，可以刺激T淋巴细胞分化，产生细胞免疫；使用甲型肝炎减毒活疫苗后发现，诱发的抗体阳转率往往低于疫苗保护率，推测疫苗引起的抗体应答是疫苗保护机制的一部分，而另外重要的一部分应该是细胞免疫。本研究拟在检测抗体反应的同时，观察疫苗免疫后T淋巴细胞免疫应答，探讨接种甲型肝炎减毒活疫苗后产生免疫保护的机制。     

甲肝减毒活疫苗口服免疫动物后的抗体反应

用PLAG微粒包裹甲肝减毒活疫苗制成微球口服免疫恒河猴及昆明种小鼠,用EIA法对HAV-IgM、HAV-IgG、HAV-IgA等抗体进行检测,以筛选一种方便易行的免疫途径。结果表明:恒河猴抗体应答于第3周出现,高峰期在5~6周,达1261mIU/mL,随后逐渐下降,口服加强免疫后,抗体回升,野毒株攻击后,抗体再度回升达1244mIU/mL。初次免疫HAV-IgM滴度为1∶4000,加强免疫后滴度为1∶1000,野毒株攻击后下降为1∶100。对照组仅在野毒株攻击后测到HAV-IgM。小鼠免疫2周后有HAV-IgG抗体产生,4周达高峰,S-IgA抗体1周开始测到,4周达高峰并持续两周后开始下降。微粒包裹疫苗免疫灵长类动物后所诱导产生的抗体应答,对野毒株攻击的保护效果明显。小鼠免疫结果与报道相似,但抗体反应出现的时间较免疫恒河猴的时间有所提前。     

肺炎链球菌重组自溶酶(Re-LytA)滴鼻免疫小鼠的实验研究

目的 评价重组肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)自溶酶(autolysin,LytA)滴鼻免疫诱导小鼠抗Sp感染的保护性效果.方法 用亲和层析的方法纯化出重组Sp LytA蛋白,以CpG作佐剂,对小鼠进行滴鼻免疫(A组).对照组(B组)用无菌盐水滴鼻;多糖疫苗组(C组)用23价多糖疫苗肌肉注射.于末次免疫后2周,用Sp分别以滴鼻和腹腔注射两种方式进行攻击感染.攻击之前采集血清和鼻咽灌洗液等样品,采用ELISA测试其抗体水平.滴鼻攻击后4 d,采集小鼠鼻咽灌洗液和肺灌洗液,进行Sp细菌计数;腹腔注射攻击后7 d内观察各组小鼠死亡情况.结果 B组未检测到LytA抗体和多糖抗体,C组多糖抗体阳性;A组LytA抗体(包括tgG、IgA、sIgA)均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).腹腔注射攻击后,A、C组小鼠的存活率明显高于B组(P<0.05),A组和C组之间没有明显区别(P>0.05).滴鼻攻击后,A组鼻咽部灌洗液Sp细菌计数明显低于B组和C组(P<0.05).结论 Re-LytA滴鼻免疫可诱导实验小鼠产生一定的抵抗Sp感染的保护性免疫力,这种保护性的免疫力可能与sIgA相关.     

肺炎链球菌核酸疫苗在恒河猴体内的免疫原性研究

目的 研究肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,PN)核酸疫苗在恒河猴体内的免疫原性.方法 将肺炎链球菌溶血素全长基因和切去羧基端33个核苷酸的基因分别插入到质粒pVAX1载体中,构建成Ppn和Ppnd两种核酸疫苗.采用体内电转染初免结合相应蛋白质抗原加强的策略免疫恒河猴.结果 切去肺炎链球菌溶血素基因羧基端33个核苷酸.表达的重组截短溶血素蛋白保留了抗原性但去除了溶血活性,从而保证了疫苗的安全性.给恒河猴肌肉内注射500μg核酸疫苗加电转染能诱导出特异性抗体免疫应答,用相应蛋白质加强免疫后血清抗体几何平均滴度提高了约4倍.结论 采用电转染技术结合蛋白质加强免疫的策略,能增强肺炎链球菌溶血素核酸疫苗在恒河猴体内的特异性抗体水平.     

肺泡巨噬细胞诱导免疫应答对肺组织炎性损伤作用机制的研究进展

肺泡巨噬细胞作为专职性抗原提呈细胞,在宿主免疫防御及适应性免疫应答中发挥重要作用。病原体在肺组织定植引起局部感染后,肺泡巨噬细胞可通过其表面的模式识别受体识别并吞噬病原体,严重者可进一步活化,将摄取的抗原物质提呈给适应性免疫细胞,并可根据组织微环境的变化,转化为促炎或抗炎表型,通过释放相关信号因子,促使机体产生一系列免疫应答,诱导肺部炎性损伤及组织的修复。     

皮下免疫锚定蛋白Z抵抗小鼠肺炎链球菌感染的作用研究

为探究锚定蛋白Z(midcell anchored protein Z,MapZ)皮下免疫小鼠后对肺炎链球菌感染模型的免疫保护作用,通过大肠埃希菌原核表达系统表达MapZ后用Ni柱纯化并去除LPS,经皮下注射免疫C57BL/6小鼠制备MapZ特异性抗血清.通过ELISA和Western blotting分析MapZ抗血...     

Notch信号通路在感染过程中对免疫应答的调控作用

感染启动的先天性和适应性免疫应答依赖于巨噬细胞、树突状细胞以及T细胞等对病原体的识别与控制。Notch信号是一种高度保守的信号通路,通过相邻细胞间配受体结合被激活,进而协调细胞的重要生命过程。目前已证实Notch信号通路参与多种免疫细胞发育、分化、成熟和激活,并在感染性疾病中发挥重要作用。本文综述Notch信号通路在不同病原体感染过程中的免疫调控作用及其与其他通路的相互作用,并讨论在感染性疾病中以Notch信号为靶点的治疗方法及面临的挑战。     

布鲁氏菌引起的巨噬细胞依赖性树突状细胞迁移与免疫应答

目的: 研究阴道巨噬细胞清除后小鼠对布鲁氏菌疫苗的免疫应答机制.方法: BALB/c小鼠60只随机分为3组, 每组20只, 实验组小鼠阴道内滴注脂质体包裹的clodronate以清除阴道巨噬细胞, 3 d后阴道滴注10 μL布鲁氏菌疫苗(含6×108个布鲁氏菌).同时设空脂质体对照组(不含clodronate)和PBS对照组.依次在12、 24、 36、 72 h收集小鼠阴道、髂内淋巴结和血液.采用免疫组织化学染色法观察阴道巨噬细胞清除效果和树突状细胞(DC)的迁移, 并用ELISA法检测血清中IFN-γ和IL-4的含量.收集小鼠腹腔液制备巨噬细胞进行细胞培养, 1.2×106个巨噬细胞中加入布鲁氏菌疫苗10 μL, 于不同时间点对巨噬细胞进行姬姆萨染色, 观察巨噬细胞的变化.结果: 清除巨噬细胞组小鼠接种布鲁氏菌疫苗后, 髂内淋巴结中S-100阳性DC数量没有明显的变化, IFN-γ和IL-4的含量也没有明显的升高.非清除组中, 不同的时间点, 髂内淋巴结中S-100阳性DC明显增多, 与PBS对照组相比, IFN-γ含量显著增高, 而IL-4则没有明显变化.体外巨噬细胞负载布鲁氏菌疫苗发现, 随着时间的延长, 巨噬细胞吞噬布鲁氏菌逐渐增多, 在12 h, 巨噬细胞开始出现坏死性凋亡.结论: 小鼠在对布鲁氏菌疫苗的免疫应答中, DC的迁移是巨噬细胞依赖性的, 并且这种依赖性有可能是由布鲁氏菌抗原成分在细胞间间接传递引起的.     

淋球菌重组与减毒鼠伤寒沙门氏菌活疫苗口服免疫的初步研究

在克隆淋球菌膜抗原CppB基因并在大肠杆菌和减毒鼠伤寒沙门氏菌中获得高效表达的基础上,用表达CppB-LacZ融合蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌口服免疫Balb/c小鼠。ELISA检测表明被免疫小鼠血清中特异性抗体滴度可达1:160,并诱发了DTH反应,说明产生了特异的免疫反应。重组菌可在肠道中较持久地寄生,对小鼠未见有明显的毒副反应。     

肺炎链球菌自溶酶（LytA）黏膜免疫小鼠的生物安全性评价

目的开展肺炎链球菌自溶酶（LvtA）生物安全性的动物实验研究,为其申报生物制品鉴定提供实验数据。方法制备纯化的重组表达LytA蛋白,以6．5μg、13．0μg和19．5μg3种剂量黏膜免疫BALB／c小鼠,根据《中华人民共和国国家标准食品安全性毒理学评价程序》（GB15193．1—1994）进行LytA的90d喂养试验、传统致畸试验及遗传毒性试验检测,以分析其生物安全性。结果90d喂养试验结果显示各实验组小鼠与对照组小鼠的体重增长趋势一致,且各时间点检测的小鼠体重均无显著性差异（P〉0．05）。传统致畸试验检测发现各实验组小鼠与对照组小鼠心脏、肺、肝脏、肾、脾、胃、子宫重量、红细胞和白细胞数目、谷丙转氨酶、尿素氮、总胆固醇、甘油三脂、血糖、总蛋白、自蛋白及球蛋白等指标均元明显差异（P〉0．05）。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果显示LytA经鼻腔黏膜免疫小鼠无遗传毒性。结论利用90d喂养试验、传统致畸试验及遗传毒性试验证明LytA鼻腔黏膜免疫BALB／c小鼠安全、毒副作用不明显,有良好的生物安全性,值得进一步研究。     

免疫应答中非对应性激发现象的研究

目的　观察机体的特异性免疫细胞克隆 ,在受到非对应性抗原刺激后的反应情况。方法　首先用定量的卵白、牛乳和牡蛎提取液 (依次简称为EW、MI、OE抗原 ) ,分别对家兔做基础免疫 ,再分别用EW、MI、OE 3种抗原对家兔做交叉免疫。采用酶联免疫法 ,定量检测各组交叉免疫前、后的基础抗体的变化。结果　采用与基础免疫不同的抗原做交叉免疫的各组家兔 ,其基础抗体均有 10 %～ 2 5 %的提高 ,较对照组有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论　免疫特异性反应细胞克隆可被非对应抗原激活     

白色念珠菌感染免疫应答的研究进展

白色念珠菌的致病是其与机体免疫系统相互作用的结果.研究发现,白色念珠菌感染人体时,刺激机体产生固有免疫及特异性细胞免疫和体液免疫应答.其中特异性细胞免疫占主导地位.了解认识白色念珠菌感染的免疫应答对诊断、预防及治疗白色念珠菌感染具有重要意义.     

肺炎链球菌溶血素黏膜免疫抗定植保护作用的研究

目的 原核表达ΔA146 Ply蛋白,评价ΔA146 Ply黏膜免疫对肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)在宿主鼻咽部定植的保护作用.方法 IPTG诱导、Ni-NTA树脂纯化获得纯化的ΔA146 Ply蛋白,经黏膜免疫BALB/C小鼠,制备其特异性抗血清;进行体内抗定植实验,观察小鼠...     

链球菌组蛋白样蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1的影响

目的　研究链球菌HlpA对小鼠腹腔巨噬细胞 (MΦ)产生IL 1的作用。方法　用RINm5F细胞产氮量测定IL 1活性。结果　链球菌HlpA(0～ 10 0 μg mL)在体外以剂量和时间依赖方式促进MΦ产生IL 1(P <0 .0 0 1)。LTA和HlpA的混合物对IL 1的产生呈协同增强作用 (P <0 .0 0 1) ;肝素则起抑制作用 (P <0 .0 0 1)。结论　纯化的链球菌HlpA在体外刺激小鼠腹腔MΦ产生IL 1;HlpA和LTA对MΦ的IL 1产生呈协同增强作用。     

肺炎链球菌溶血素减毒突变体免疫小鼠可诱导抗体依赖的保护效应

目的 优化肺炎链球菌溶血素减毒突变体(△A146 Ply)蛋白小鼠免疫方案,评价其保护效果,并揭示△A146 Ply特异性抗体在保护中的作用.方法 分别使用△A146 Ply免疫小鼠1、2、3次,利用ELISA分析血清内特异性IgG滴度,效价测定1周后,使用肺炎链球菌D39菌株鼻腔攻毒评价3种免疫方式保护效力.通过肺内定植模型和败血症模型分析△A146 Ply对肺炎链球菌感染的保护效果.利用抗体吸附试验和模拟被动保护试验分析Ply特异性抗体的保护作用.结果 随着免疫次数的增加,小鼠血清内的IgG滴度显著升高.相比免疫两次的小鼠,3次免疫后的小鼠其体内的IgG升高超过20倍.在攻毒试验中,免疫3次后的小组接受同等剂量的D39攻毒,存活率最高,保护效率为50%.在定植模型中,△A146 Ply免疫后的小鼠,其肺内肺炎链球菌血清型19F的细菌量减少约50倍,14血清型菌减少超过20倍.在败血症模型中,使用1200 CFU的D39腹腔注射到免疫组及对照组小鼠体内,△A146 Ply免疫组有60%的小鼠能够抵抗这种致命剂量的D39感染,对照组小鼠全部死亡(P=0.0018).在被动保护试验中,Ply特异性抗体被吸附完全后的抗血清完全不能保护小鼠抵抗致死剂量的D39感染,60%的小鼠在接受抗体特异的抗血清后存活,两组存活率差异有统计学意义.结论 △A146 Ply能有效抵抗肺炎链球菌的感染,证实保护作用与其特异性抗体密切相关.     

气道上皮细胞在过敏性哮喘固有免疫应答中的作用研究进展北大核心CSCD

过敏性哮喘是一种发病率逐年升高的慢性疾病,典型表现是气道炎症和气道高反应性。气道上皮细胞(AEC)作为抵御多种过敏原的第一道屏障,能够率先启动固有免疫应答参与过敏性哮喘,AEC通过分泌抗微生物物质、表达模式识别受体、分泌固有免疫因子、参与固有免疫记忆的方式调节适应性免疫应答,影响过敏性哮喘的进程。因此AEC被认为是过敏性哮喘中肺部炎症和免疫应答的调节枢纽。另外,针对AEC固有免疫功能的靶向治疗药物也得到了快速发展,为临床治疗过敏性哮喘提供了更多选择。     

NOD1和NOD2介导的信号通路及其抗病毒免疫应答研究进展

NOD1和NOD 2蛋白为胞浆内模式识别受体,其识别进入胞内的细菌胞壁及其降解产物,介导NF-κB和MAPKs信号途径,产生相关效应分子,介导了抗病原微生物免疫应答.近年来的最新研究发现,NOD1受体还通过ISGF3信号途径诱导产生1型干扰素,NOD2受体能识别ssRNA和病毒基因组ssRNA,通过MAVs信号途径激活IRF3,诱导产生1型干扰素,1型干扰素又可正向调控NOD1和NOD2功能性表达.NOD1和NOD2通过介导新的信号途径诱导产生大量的1型干扰素,并参与抗病毒固有免疫应答.因而,对NOD1和NOD2介导的抗病毒免疫应答新认识,将为防治病毒感染性疾病的研究提供新策略.     

变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白诱导SD大鼠产生免疫应答

目的 研究变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(glucan binding protein-A，GbpA)的GBD融合蛋白免疫SD大鼠时，其所诱导的血清和唾液特异性免疫反应。方法 用纯化的变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白皮下免疫SD大鼠，免疫后间隔一定的时间收集大鼠的血清及唾液，间接ELISA检测血清及唾液中特异性抗GBD抗体。结果 GBD融合蛋白免疫大鼠，可引起血清中IgG及唾液中IgA的显著提高。另外，GBD融合蛋白免疫大鼠，38d采血，血清中抗GBD抗体效价最高，后逐渐降低。结论 变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白具有免疫原性，可供研制防龋疫苗参考。