转录因子Sp1在肝细胞癌中的表达

目的通过研究转录因子Sp1在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及转化生长因子（TGF）B1对肝癌细胞中Sp1mRNA转录表达的影响,探讨Sp1在HCC中表达的意义及其在细胞凋亡中的作用。方法免疫组织化学方法对51例HCC组织与10例良性病变而切除的正常肝组织中转录因子Sp1进行蛋白检测;体外培养肝癌细胞株HepG2,施加外源性TGFβ1,逆转录一聚合酶链反应方法检测HepG2细胞中Sp1mRNA的表达,并用流式细胞仪检测细胞受到干预后的凋亡情况。结果Sp1蛋白在HCC组织中的表达率明显高于正常肝组织（P〈0．01）;施加外源性TGFβ1与对照组相比HepG2细胞Sp1mRNA的表达显著降低（P〈0．01）,且HepG2细胞凋亡率随着TGF[31浓度的增高而上升。结论Sp1蛋白在HCC中的过表达在肿瘤发生发展中起一定作用;TGFβ1诱导肝癌细胞凋亡,而Sp1基因的抑制在TGFβ1诱导肝癌细胞凋亡中可能起一定作用。     

人肝细胞系5-羟色胺自分泌系统的研究

目的通过对人肝癌细胞系和人正常肝细胞系的研究,探讨肝细胞是否具有合成5-HT的功能。方法以人肝癌细胞系HepG2和人肝细胞系7702为研究对象,采用ELISA方法检测细胞培养上清液中的5-HT水平,采用荧光定量PCR法检测细胞表达5-HT合成的关键酶及5-HT受体。结果两种细胞系细胞上清液均可检测到5-HT;均可表达多种类型的5-HT受体,均表达合成5-HT的关键酶色氨酸羟化酶（TPH）及运载体（SERT）。结论人肝癌细胞系HepG2和人肝细胞系7702均表达合成5-HT的关键酶和受体,说明肝细胞具有5-HT自分泌系统,5-HT可能以自分泌或者旁分泌的形式发挥作用。     

蛋白翻译起始因子C2在肝癌、胃癌中的表达与分布

目的 研究C2基因在肝细胞癌（HCC）、胃癌中的表达、分布及意义。方法 利用免疫组化法检测C2蛋白在60例HCC、58例胃癌组织中的表达，Western blot法检测C2蛋白在10例HCC及其癌旁组织中的表达。结果 60例HCC及42例癌旁组织中，C2蛋白阳性率分别为27．3％（17／60例）和83．3％（35／42例），C2蛋白在HCC癌组织中表达明显低于其癌旁组织（P＜0．001）；C2的表达与病人年龄、HBsAg及AFP明显关系（P＜0．05）。Western blot结果与免疫组化一致。在HBXAg阳性的49例HCC中，C2蛋白阳性率为20．4％，在HBXAg阴性的11例HCC中，C2蛋白阳性率为63．6％。C2在HBXAg阳性的HCC中的表达明显低于HBXAg阴性者（P＜0．05）。58例原发性胃癌及44例癌旁组织中，C2蛋白阳性率分别占41．4％（24／58例）和77．3％（34／44例）。C2蛋白在胃癌组织中表达明显低于其癌旁组织（P＜0．05），且与胃癌组织的分化程度、浆膜浸润、肿瘤大小有明显的关系（P＜0．05）。结论 C2基因表达下调可能与HCC、胃癌的发生、发展有关。HBXAg对C2的抑制作用可能与HCC的发生，发展有关。C2可能是一潜在的抑癌基因。     

原发性肝细胞癌及癌旁组织中环氧合酶-2的表达及其意义

目的：研究人原发性肝细胞癌（HCC）组织和癌旁非瘤组织中的环氧合酶－2（COX－2）蛋白及基因表达情况,方法：采用免疫组织化法和原位分子杂交法,研究27对原发性肝细胞癌及癌旁非肿瘤组织,5例正常肝组织中COX－2的蛋白和基因表达,结果：高分化HCC中COX－2蛋白表达显著高于中分化和低分化HCC（P分别＜0．05）以及癌旁组织和正常组织（P分别＜0．01）,癌旁组织的COX－2表达显著高于正常组织（P＜0．05）,癌旁组织,中分化和低分化HCC之间COX－2的表达强度差异无显著性（P＞0．05）,在COX－2蛋白阳性的肝癌细胞和癌旁肝细胞胸胞胞质中可见到COX－2mRNA呈阳性表达,结论：COX－2的过度表达可能参与了高分子HCC的致癌过程。     

单链远侧上游因子结合蛋白1在肝癌发病机制中的作用

单链远侧上游因子结合蛋白1 (FUBP1)是新近发现的转录因子，又名FUSE结合蛋白、DNA解螺旋酶V，在体内外均能与单链DNA上的远侧上游元件结合，促进含FUSE的各种基因（尤其是c-myc基因）的转录[1]。国外研究结果表明FUBP1在包括肝细胞癌(HCC)在内的多种恶性肿瘤细胞中表达，且表达水平升高[2-4]。我们用免疫组织化学及荧光定量RT-PCR检测FUBP1、c-myc在HCC中蛋白及mRNA表达水平，以探讨FUBP1在HCC发病机制中的作用。     

LZTS1蛋白在肝组织及HepG2细胞中的表达

目的探讨LZTS1蛋白在正常肝、肝细胞癌组织及癌旁慢性肝纤维化、肝硬化组织中的表达,以及在人肝癌细胞系HepG2中的表达。方法选择我院正常人肝组织、原发性肝细胞癌和癌旁慢性肝纤维化、肝硬化组织标本共50例,采用免疫组化方法检测不同肝组织样本中LZTS1蛋白,光镜下观察LZTSI阳性细胞表达定位和分布,按表达面积和表达强度半定量计分。同时培养HepG2人肝癌细胞系,免疫印迹和细胞免疫组化方法检测HepG2细胞中内源性LZTS1的表达,并以正常肝细胞L02为对照。SPSS统计分析各组间的表达差异。结果LZTSI蛋白在正常胆管上皮胞浆中表达。肝细胞包膜和胞浆中均表达,且阳性细胞呈规律性分布。LZTS1蛋白在肝细胞癌组织中14／20例（70％）表达强阳性,5／20例（25％）中等表达;癌旁肝硬化结节中10／17例（58．8％）强阳性表达,6／17（35．3％）例中等阳性表达;慢性肝纤维化组织中1／3（33．3％）例弱阳性,2／3例（66．7％）中等阳性。20例HCC组织中有17例为HBV—HCC,其中13例（76．5％）LZTSI蛋白呈强阳性表达。结论LZTS1蛋白主要表达于正常胆管上皮和肝细胞胞浆,且在肝腺泡中呈规律性分布。在肝癌、肝硬化组织和HepG2细胞中表达增高。     

Shh信号通路在肝癌中的表达及与β-catenin的关系

目的探讨原发性肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）中Sonic Hedgehog（Shh）信号通路基因和15-catenin的表达情况及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法对49例HCC和相应癌旁肝组织中Glil和β-catenin蛋白表达。荧光定量PCR检测2个肝癌细胞系和正常肝细胞中相应基因mRNA的表达情况。结果免疫组化染色与RT-PCR示Glil在HCC组织中的阳性表达率为77．56％,而癌旁肝组织为40．82％,两者差异具有显著意义（P〈0．05）。β-catenin蛋白在HCC中的表达显著高于癌旁肝组织（P〈0．05）,且与Glil的表达呈正相关（r=0．594,P=0．000）。Glil和β-cateninmRNA在肝癌细胞株中高表达,在正常肝细胞中低表达（P〈0．05）。结论Glil和β-catenin在肝癌细胞中均过度表达,可能协同作用促进肝癌细胞异常增殖,参与HCC的发生和发展。     

束缚应激对大鼠主动脉5-HT_(1D)和5-HT_(2A)受体表达的影响及通心络、薤白提取物的干预作用

目的观察束缚应激对大鼠主动脉5-HT1D和5-HT2A受体表达的影响及通心络和薤白提取物的干预作用。方法健康W istar大鼠60只,随机分为对照组、束缚应激组、薤白组、通心络组。观察大鼠一般状况、主动脉内皮细胞形态和结构,检测血中ET-1和NO水平,采用Real Time PCR和Western印迹检测主动脉5-HT1D和5-HT2A受体基因和蛋白表达。结果束缚应激所致抑郁状态可导致血管内皮结构和分泌功能损伤,同时5-HT1D mRNA和蛋白表达降低,5-HT2A mRNA和蛋白表达升高;通心络和薤白提取物可有效保护血管结构和功能,调节主动脉5-HT1D和5-HT2A受体基因和蛋白表达。结论通心络和薤白提取物可通过增强介导舒血管作用的5-HT1D mRNA和蛋白表达,抑制介导缩血管作用的5-HT2A mRNA和蛋白表达,从而对抑郁状态大鼠血管内皮功能发挥保护作用。     

Runx3、Sp1、Bcl-2在胃腺癌中的表达及对预后的影响

目的探讨Runx3、Sp1、Bcl-2在胃腺癌中的表达,为评估患者预后提供实验依据。方法采用免疫组织化学SP法检测Runx3、Sp1、Bcl-2蛋白在63例胃腺癌、19例低级别上皮内瘤变及10例正常胃黏膜组织中的表达。结果胃腺癌组织中Runx3表达降低,Sp1和Bcl-2蛋白表达增高。Runx3低表达与肿瘤细胞的分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关（P〈0.05）;Sp1高表达与肿瘤细胞浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关（P〈0.05）;Bcl-2高表达与肿瘤细胞分化程度有关（P〈0.05）。胃腺癌组织中Runx3与Bcl-2阳性表达呈负相关（P〈0.01）;Sp1与Bcl-2阳性表达呈正相关（P〈0.01）;Runx3与Sp1的表达无明显相关性。Runx3及Sp1阳性表达率与患者总生存率关系密切。结论 Runx3蛋白低表达及Sp1蛋白高表达与胃腺癌的发生、发展及预后密切相关。     

肝细胞癌组织细胞因子信号转导抑制因子-1表达的研究

目的探讨细胞因子信号转导抑制因子(SOCS1)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)-2和表皮生长因子受体(EGFR)在肝硬化、肝细胞癌组织中的表达变化。方法采用免疫组化法检测63例HCC组织、51例癌周肝组织、11例肝硬化组织及11例正常肝组织SOCS1蛋白的表达;另分别检测VEGFR2和EGFR在27例和41例HCC组织中的表达情况。结果癌周肝组织中SOCS1蛋白表达为阴性1例,弱阳性15例,阳性30例,强阳性5例,HCC组织中SOCS1蛋白表达为阴性11例,弱阳性38例,阳性14例,癌周肝组织中SOCS1蛋白表达强度显著高于HCC组织(P0.01);SOCS1蛋白在肝硬化组织和正常肝组织中无表达;SOCS1表达在瘤体大小间(瘤体5cm和≥5cm)有显著性差异(P0.001);SOCS1蛋白在HCC组织中的表达与VEGFR2和EGFR的表达无显著相关性(P0.05)。结论 SOCS1蛋白表达与HCC的发生发展密切相关。     

原发性肝细胞癌组织中Kiss-1、NF—κB p65的表达变化及意义

目的观察原发性肝细胞癌（HCC）组织中Kiss-1、NF-κBp65的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化Envision法检测40例HCC及癌旁肝组织和10例正常肝脏组织中的Kiss-1、NF-κBp65。结果正常组织、癌旁肝组织、HCC组织中,Kiss—1蛋白阳性率分别为90．0％、80．0％、47．5％,NF-κBp65蛋白阳性率分别为10．0％、37．5％、65．0％,三者相比,P〈0．01;Kiss-1蛋白表达与HCC的临床分期、病理学分级、门静脉癌栓及淋巴结转移有关（P均〈0．05）,NF-κBp65蛋白表达与HCC的临床分期、病理学分级及淋巴结转移等有关（P均〈0．05）;HCC中Kiss-1、NF-κBp65蛋白表达呈负相关（r=-0．415,P〈0．01）;结论HCC组织中Kiss-1低表达及NF-κBp65高表达可能在HCC侵袭与转移中发挥重要作用。     

5-羟色胺与胃肠运动和感知

5-羟色胺（5-HD既是一种单胺类神经递质．又是血管活性物质，具有多种生物学功能。5-HT及其受体广泛分布于中枢神经系统、周围神经系统和胃肠道，参与心理、神经和胃肠道功能的调节。5-HT所呈现的生物学效应需通过与效应组织或细胞上的不同受体结合才能启动，其作用因不同种属、组织而异，与5-HT受体的多型性有关。目前已知5-HT受体至少存在7种类型，与胃肠道功能密切相关的是5-HT1、5-HT2、5-HT3、5-HT4和5-HT7受体。     

原发性肝癌中FADD蛋白表达及其与细胞凋亡关系研究

研究Fas相关死区蛋白在肝癌中的表达 ,并探讨其与HCC中细胞凋亡的关系。免疫组织化学方法检测FADD蛋白表达 ,原位末端标记检测HCC细胞凋亡。 2 0例 (2 5 6 % )HCC表达FADD蛋白。与癌旁非癌肝组织相比(10 / 16 ,6 2 5 % ) ,HCC中FADD阳性率显著降低 (P <0 0 5 )。 36例分化中等良好的HCC中 ,12例 (33 3% )表达FADD ,略高于分化差的HCC中的阳性率 (8/ 4 2 ,19 0 % ) ,但差别没有显著性意义。Ⅰ /Ⅱ级HCC中 ,16例为FADD阳性 (16 / 4 2 ,38 1% ) ,而Ⅲ /Ⅳ级HCC中的阳性率仅为 11 1% ,差别有显著性意义 (P <0 0 5 )。所有标本中均可检测到凋亡的细胞 ,FADD蛋白中等至强阳性的HCC中 ,细胞凋亡程度较高 ,与FADD表达弱阳性或阴性的HCC相比 ,差别有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,而癌旁非癌肝组织中 ,FADD蛋白表达细胞凋亡程度无关 (P >0 0 5 )。FADD蛋白表达减少在HCC的发生中起重要作用 ,FADD蛋白表达强度与HCC细胞凋亡密切相关     

Caspase-9和Survivin在肝细胞癌患者癌组织中的表达

目的：探讨Survivin和caspase-9在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者癌组织中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法2013年1月至2013年5月住院治疗的HCC患者53例,应用免疫组织化学方法分析Survivin和caspase-9蛋白在HCC组织中的表达,对应的癌旁正常肝组织作为对照。结果Survivin蛋白表达在HCC组织中阳性率为66．04％（35/53）,明显高于正常肝组织的7．55％（4/53）。相反,caspase-9蛋白表达在HCC组织中阳性率仅为35．85％（19/53）,显著低于正常肝组织的64．15％（51/53）,差异具有统计学意义（P＜0．05）。T期、N期、M期患者HCC组织中Survivin蛋白表达阳性率呈现不断攀升趋势,而caspase-9蛋白表达阳性率则呈逐渐下降趋势。结论Survivin在HCC组织中高表达,并有可能通过抑制caspase-9蛋白来抑制组织细胞的凋亡。     

结肠腺瘤患者结肠黏膜5-HT表达和炎症的初步研究

结肠炎症是结肠肿瘤发生的危险因素,动物实验表明5．羟色胺（5-HT）与结肠炎症密切相关。结肠腺瘤患者结肠炎症与5-HT的关系尚未阐明。目的：探讨结肠腺瘤患者正常黏膜5-HT表达和炎症表现以及两者的相关性．方法：收集40例结肠腺瘤患者和17例对照组正常结肠黏膜。以免疫组化法检测上皮内淋巴细胞（IEL）和固有层CD3＋T细胞、5-HT阳性肠嗜铬（EC）细胞、嗜铬素A（CgA）阳性EC细胞计数．实时荧光定量PCR法检测肿瘤坏死因子-a（TNF-a）、环氧合酶-2（COX．2）和诱生型一氧化氮合酶（iNOS）以及色氨酸羟化酶I（TpHI）mRNA表达。结果：结肠腺瘤患者正常黏膜固有层CD3CF细胞、5-HT阳性EC细胞、CgA阳性EC细胞计数较对照组显著增高（P〈0．05）．IEL计数与对照组相比无明显差异（P=0．175）。结肠腺瘤患者正常黏膜TNF-a、COX．2、iNOS、TpHlmRNA表达较对照组显著增高（P〈0．05）,且TpHlmRNA表达与TNF-a、COX-2、iNOSmRNA表达均呈正相关（P〈0．05）。结论：结肠腺瘤患者正常黏膜存在炎症,肠道5-HT合成增加与腺瘤患者结肠黏膜炎症相关．     

结肠癌组织中Ku70、转录因子Sp1的表达变化及意义

目的：观察Ku70和特异性蛋白1（Sp1）在结肠癌组织中的表达变化,并探讨其意义。方法分别采用免疫组化SP法、RT-PCR法对结肠癌及对应癌旁正常组织中的Ku70和Sp1蛋白及mRNA进行检测,并分析二者间的相关性及与结肠癌临床病理参数的关系。结果结肠癌癌组织与癌旁正常组织中Ku70阳性表达率分别为68．9％（42/61）、36．1％（22/61）,二者比较,P＜0．05;Sp1阳性表达率分别为78．7％（48/61）、26．2％（16/61）,二者比较,P＜0．05。结肠癌和癌旁正常组织中Ku70 mRNA相对表达量分别为1．184±0．410、0．845±0．424,二者比较,P＜0．05;Sp1 mRNA相对表达量分别为1．280±0．311、0．912±0．362,二者比较,P＜0．05。 Ku70 mRNA和Sp1 mRNA在结肠癌组织中表达呈正相关（r＝0．398,P＝0．029）。 Ku70和Sp1蛋白表达水平与结肠癌肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关（P均＜0．05）。结论 Ku70和Sp1在结肠癌中高表达,与结肠癌的侵袭、转移有关,二者可作为结肠癌发生、发展的预测指标。     

聚集素、P糖蛋白在肝细胞癌中的表达及其相关性研究

目的探讨聚集素（Clusterin）蛋白在肝细胞癌（HCC）中的表达及其与P糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达的相关性。方法采用免疫组化S-P法检测凋亡抑制基因Clusterin在HCC、肝硬化和正常肝组织中的表达及P-gp蛋白在HCC中的表达。结果Clusterin蛋白在HCC中的阳性表达率为82．93％,在肝硬化和正常肝组织中表达阴性或弱阳性;Clusterin蛋白阳性表达与患者的年龄、性别及肝硬化无关,与Edmenson组织学分级有相关性。P-gp蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为70．73％。在HCC中,Clusterin蛋白的表达与P-gp蛋白表达呈正相关。结论Clusterin蛋白在HCC中呈高表达,与临床耐药密切相关,有望成为肝癌靶向治疗的一个新靶点。     

5-HT及其受体在大鼠肝再生过程中的作用

目的分析5-羟色胺（5-HT）及其受体在大鼠肝脏再生过程中的作用。方法将50只雄性Wistar大鼠随机分成实验组和对照组。实验组大鼠于肝大部分切除术后24、36、48和72h处死,对照组行假手术。采用流式细胞技术检测大鼠肝脏增殖细胞核抗原（PCNA）表达、免疫组化法检测Ki67及5-HT表达、实时荧光定量PCR检测5-HT2A、2B受体亚型的表达。结果肝大部切除术后大鼠肝脏重量逐渐增加,PCNA和Ki67表达于术后24和36h达高峰;在肝切除术后各个时间点5-HT2A、2B受体在肝脏中的表达均显著升高,以术后36h最高;术后36h空肠嗜铬细胞5-HT含量高于24h,且都高于正常大鼠。结论肝脏再生过程中5-HT合成及其受体表达均显著上调,可能与肝脏的再生有关。     

HCC和HepG2细胞表达HCV C蛋白、p14ARF、p21WAF1的意义探讨

目的检测HCVC蛋白、p14、p21在HCC和表达野生p53HepG2中的表达，初步探讨C蛋白在HCC和HepG2中对p14-p53-p21凋亡通路的作用。方法收集42例HCC石蜡组织，采用免疫组织化学EnVision法检测HCC组织中核心蛋白、p14和p21的表达，用统计学方法及临床联系分析它们之间的关系；用细胞化学EnVision法和免疫荧光法检测核心蛋白、p53、p14和p21在HepG2细胞中的表达。结果C蛋白、p14和p21的阳性表达主要定位于细胞核膜和细胞核中；HCC组织中C蛋白、p14和p21阳性率分别为40．5％、45．24％、19．05％；3组间的Kruskal-Wallis检验P=0．03，差异显著；C蛋白与p14、p21间及p14与D21间蛋白阳性强度相关性分析显示，P值分别为0．000、0．43、-0．34，相关系数rs分别为0．64、-0．29、-0．33。HepG2细胞有较高的C蛋白和p53表达及少量的p14、p21蛋白表达。结论在C蛋白阳性的HCC中p14的表达与C蛋白有关，HCC中D21表达缺陷是十分常见的；C蛋白在HCC中可能影响p53通路，下调p21的表达，阻止其凋亡作用；HepG2细胞永生化特性可能与HCV或HCVC蛋白有关。     

PAX6对肝癌细胞HNF1α基因表达的调控作用

背景：前期研究显示肝细胞核因子1α（HNF1α）在人肝细胞癌（HCC）中表达下调,上调HNF1α表达可显著抑制HCC细胞增殖和小鼠肝脏原位移植瘤生长。然而HNF1α在HCC中表达下调的机制仍有待明确。目的：探讨HCC细胞中HNF1α基因表达调控的分子机制。方法：应用JASPAR软件预测HNF1α启动子上潜在的转录因子结合位点。联合应用含HNF1α启动子的报告基因系统荧光素酶活性检测和点突变技术,研究JASPAR软件预测的配对盒基因6（PAX6）对HNF1α启动子转录活性的影响;以染色质免疫共沉淀实验检测PAX6与HNF1α启动子的相互作用,实时荧光定量RT—PCR（qRT—PCR）和蛋白质印迹法验证PAX6对HepG2细胞内源性HNF1α表达的影响;qRT—PCR检测PAX6、HNF1α在人HCC组织样本中的表达,并以Spearman等级相关系数分析两者间的相关性。结果：PAX6可直接结合至HNF1α的启动子区域,在转录水平促进HNF1α表达。人HCC组织中PAX6表达明显降低,并与HNF1α表达呈显著正相关（rs=0．7530,P〈0．0001）。结论：PAX6可调控HCC细胞中的HNF1α基因表达,其表达下凋可能与HCC的发生、发展有关。