依曲替酸诱导上皮鳞癌细胞凋亡及相关信号途径的改变

目的：研究依曲替酸诱导上皮鳞癌细胞凋亡及其分子机制。方法：用MTT法观察依曲替酸对A431细胞的生长影响，电镜观察细胞形态，流式细胞仪检测凋亡峰的出现，Annexin-V染色证实凋亡的发生。同时用逆转录PCR法观察，经依曲替酸作用不同的时间后，A431细胞中信号传导和转录激活因子3（STAT3）、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p42／44丝裂原激活的蛋白激酶（p42／44MAPK）mRNA表达的改变；用蛋白印迹术，研究经依曲替酸作用不同的时间对A431细胞中磷酸化STAT3（p-STAT3）、CyclinD1蛋白表达的影响。结果：①随着依曲替酸作用时间的延长及剂量的增加，对A431细胞增殖的抑制作用增加。流式细胞仪检测显示，亚G1期凋亡峰明显增加，电镜观察和Annexin-V染色证实了凋亡的存在。②依曲替酸能明显抑制A431细胞中STAT3、CyclinD1 mRNA表达的改变，随着作用时间的延长，抑制作用增强，P〈0．05；并下调p-STAT3、CyclinD1蛋白的表达；下调p42／44MAPK mRNA的表达。③经依曲替酸作用后，A431细胞中CyclinD1 mRNA表达的下降与STAT3 mRNA表达的下降呈正相关，P〈0．05；p-STAT3、CyclinD1蛋白也同步下调，P〈0．05；而CyclinD1 mRNA表达的下降与p42／44MAPK mRNA的下调无相关性。结论：①依曲替酸具有抗上皮鳞癌细胞生长及诱导上皮鳞癌细胞凋亡作用。②依曲替酸抗上皮鳞癌细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡的机制，可能主要是通过调节JAK／STAT3信号途径而实现的。     

食管鳞癌中转录信号传导子与激活子3活化及其表达的意义

目的探讨转录信号传导子与激活子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)及STAT3 mRNA表达在食管鳞癌中的可能作用。方法采用免疫组化和原位杂交方法检测60例食管鳞癌组织中STAT3、p-STAT3在蛋白及mRNA水平的表达情况,并与正常食管黏膜组40例进行比较。结果食管鳞癌组组织中STAT3、p-STAT3蛋白和STAT3 mRNA的表达均明显高于正常食管黏膜组(P<0.01);随着细胞的不断活化STAT3呈高表达,STAT3蛋白与p-STAT3蛋白表达具有一致性(r=0.735,P<0.05);STAT3蛋白与STAT3 mRNA的表达存在一致性(r=0.564,P<0.05)。结论 STAT3的持续性活化可能在食管鳞癌发生过程中起一定的作用。     

EC9706和Eca109细胞中雷帕霉素靶蛋白信号通路激活状态观察

目的:观察低分化的食管鳞癌细胞EC9706和高分化的食管鳞癌细胞Eca109中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路的激活状态.方法:采用细胞免疫组织化学方法检测EC9706和Eca109细胞中mTOR及其下游靶分子p70S6K的表达和定位,并采用RT-PCR和Western blot方法分别从mRNA及蛋白水平检测此通路的活性.结果:在2种细胞中mTOR均有表达,且在EC9706细胞中的表达水平高于Eca109(P＜0.05);EC9706细胞中mTOR下游靶点的磷酸化水平高于Eca109细胞(P＜0.05).结论:在2种食管鳞癌细胞中,mTOR信号通路均特异性激活;但激活状态与细胞的分化程度有关,细胞分化程度低者通路的激活水平较高.     

JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中的作用

目的 探讨JAK2/STAT3通路在肝癌细胞QGY-7701侵袭及血管生成拟态中的作用.方法 JAK2抑制剂AG490(5、10 μmol/L)处理肝癌细胞48 h,Transwell小室、体外成管实验分别检测各组细胞的体外侵袭能力和成管能力,RT-PCR检测Twist1及MMP-2 mRNA表达差异,Western blot检测STAT3、p-STAT3、Twistl和MMP-2蛋白表达差异.结果 与对照组相比,Transwell小室穿膜细胞数减少,形成管道结构数目减少,Twist1及MMP-2 mRNA表达减少,Twist1、MMP-2和p-STAT3蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05),STAT3蛋白表达无差异(P＞0.05).结论 AG490能有效抑制肝癌细胞侵袭及成管的能力,JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中起促进作用.     

重组人白细胞介素17A对结肠癌细胞生长的影响及其作用机制

目的：探讨重组人白细胞介素17A （IL-17A）对结肠癌细胞生长的影响,并阐明其作用机制。方法：将结肠癌SW480细胞分为对照组和实验组,对照组细胞未经处理,实验组细胞加入50 μg·L^-1重组人IL-17A。采用CKK-8法检测2组SW480细胞增殖活性,采用ELISA法检测2组细胞中IL-17A水平,Western blotting法检测2组SW480细胞中信号传导及转录激活因子3（STAT3）和磷酸化信号传导及转录激活因子3（p-STAT3）蛋白表达水平。结果：与对照组比较,实验组细胞增殖活性明显升高（P<0.05）。与对照组比较,实验组SW480细胞中IL-17A水平、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论：重组人IL-17A可刺激结肠癌细胞SW480细胞的生长,其作用机制可能与激活STAT3信号通路有关。     

AG490对喉癌细胞STAT3信号传导通路的抑制作用

目的 探讨JAK激酶抑制剂AG490对人喉鳞癌细胞株Hep-2的增殖及凋亡的影响,揭示AG490对STAT3信号传导通路的抑制作用,探讨AG490在喉癌治疗中的意义.方法 应用AG490作用于Hep-2细胞,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,固定化蛋白质印迹法(Western b1ot)检测STAT3和p-STAT3蛋白的表达.结果 AG490能有效抑制体外培养的Hep-2细胞的增殖,该抑制作用具有时间与浓度依赖性的特点.AG490诱导喉癌细胞凋亡,且随作用时间延长,凋亡率增加.AG490能抑制STAT3和p-STAT3蛋白在Hep-2细胞的表达.结论 AG490可以下调Hep-2细胞中STAT3和p-STAT3蛋白的表达,抑制喉癌细胞增殖,促进喉癌细胞凋亡.     

诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达

 【目的】探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血管内皮生长因子（VEGF）在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达,为进一步研究iNOS和VEGF在舌鳞癌肿瘤血管生成中的作用提供实验基础。【方法】采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法和SP免疫组化方法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中iNOS和VEGF mRNA和蛋白表达情况进行检测。【结果】RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中iNOS／VEGF mRNA条带明显,SP免疫组化检测到iNOS／VEGF蛋白在舌癌细胞胞浆中呈强阳性表达。【结论】iNOS／VEGF mRNA和蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞株中呈高水平表达。     

IL-32α抑制胰腺癌细胞上皮间质转化和侵袭转移作用机制研究

目的观察IL-32α作用于人胰腺癌Panc-1、AsPC-1细胞后上皮间质转化（EMT）、侵袭转移及Jak2/STAT3信号通路的改变,并探讨其可能的作用机制。方法采用RT-PCR、Westernblot及细胞免疫荧光技术,检测不同浓度IL-32α处理24h后胰腺癌Panc-1、AsPC-1细胞的EMT相关标志物（E-cadherin、Vimentin、Zeb1）、侵袭转移相关分子标志物（MMP-2、MMP-9）mRNA与蛋白以及Jak2/STAT3信号通路相关蛋白p-Jak2、Jak2、p-STAT3、STAT3的表达情况。结果RT-PCR及Westernblot均显示胰腺癌Panc-1、AsPC-1细胞中E-cadherin的mRNA与蛋白表达水平均呈IL-32α剂量依赖性上调（均P＜0.05);Vimentin、Zeb1、MMP-2及MMP-9的mRNA与蛋白表达水平均呈IL-32α剂量依赖性下调（均P＜0.05);p-Jak2、Jak2、p-STAT3的表达水平均呈IL-32α剂量依赖性下调（均P＜0.05),STAT3无明显改变（P＞0.05）。细胞免疫荧光染色显示Vimentin蛋白表达于细胞质中,且荧光强度呈IL-32α剂量依赖性下调（均P＜0.05)。结论IL-32α在一定剂量范围内以剂量依赖性的方式抑制胰腺癌Panc-1、AsPC-1细胞的EMT和侵袭转移,可能与抑制Jak2/STAT3信号通路有关。     

当归补血微囊促血管新生中JAK2/STAT3通路的作用研究

目的 探讨JAK2/STAT3信号传导通路在当归补血微囊促血管新生中的作用。方法 建立人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）模型,分别采用CCK-8和流式细胞术检测HUVEC细胞活力和细胞凋亡情况;采用Western blot检测各组中p-STAT3、VEGF的表达情况;采用荧光定量PCR,检测各组中VEGF基因和miRNA-21的表达情况。结果 20μg/mL当归补血微囊作用于HUVEC 24h,可有效促进HUVEC的增殖,并上调p-STAT3、VEGF及miRNA-21的表达;AG490能有效抑制当归补血微囊对HUVEC的促增殖作用,并减少p-STAT3、VEGF及miRNA-21的表达。结论 当归补血微囊促进血管生成的作用确实与JAK2/STAT3信号途径有关。      

诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达

【目的】探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血管内皮生长因子（VEGF）在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达,为进一步研究iNOS和VEGF在舌鳞癌肿瘤血管生成中的作用提供实验基础。【方法】采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法和SP免疫组化方法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中iNOS和VEGF mRNA和蛋白表达情况进行检测。【结果】RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中iNOS／VEGF mRNA条带明显,SP免疫组化检测到iNOS／VEGF蛋白在舌癌细胞胞浆中呈强阳性表达。【结论】iNOS／VEGF mRNA和蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞株中呈高水平表达。     

黄连素对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究黄连素对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖和凋亡的影响以及机制. 方法 用不同浓度的黄连素 (0、10、20、40) g/ml处理人乳腺癌细胞株MCF-7,细胞培养72 h后,MTT法检测 MCF-7 细胞增殖抑制率;流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡的影响;Western blot法检测JAK2、p-JAK2、p-STAT3、STAT3、 Bax、 Bcl-2、 Cleavage-PARP 和 Cleavage-Caspase3表达. 结果 黄连素呈浓度依赖性地诱导MCF-7细胞的增值抑制和凋亡,上调Bax、Cleavage-PARP和Cleav-age-Caspase3表达,下调 p-JAK2、p-STAT3 和 Bcl-2,对 JAK2和STAT3表达无明显影响. 但高表达p-STAT3的MCF-7细胞可以抑制黄连素的减少增殖和促进凋亡作用. 结论 黄连素诱导MCF-7细胞增殖抑制和凋亡的机制可能是通过调节JAK2/STAT3信号通路.     

Janus激酶抑制剂AG490对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移的影响

目的 研究Janus激酶抑制剂AG490对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力的影响,探讨JAK2/STAT3信号通路在肝癌侵袭调控中的作用。方法实验分为对照组、实验组（5、10 μmol/L AG490处理的SMMC-7721细胞）。采用Transwell小室检测肝癌细胞的侵袭能力,RT-PCR检测MMP-2 m...     

STAT3基因在人肝癌细胞株HepG2、Bel7402、SMMC7721和肝癌组织中的表达及意义

目的：探讨STAT3基因异常活化在人原发性肝癌发生、发展中的作用及可能的机制。方法：应用免疫组化染色法、RT-PCR和Western blotting法检测人肝癌细胞株HepG2、Bel7402、SMMC7721和肝癌组织中STAT3基因的mRNA和蛋白水平表达。 结果：肝癌细胞株SMMC7721、Bel7402和HepG2中均有STAT3基因的高表达,3种肝癌细胞间表达量比较差异无显著性（P>0.05）。原发性肝癌组织和癌旁组织中均有STAT3的mRNA及蛋白水平的高表达,与正常肝组织比较差异有显著性（P<0.05）,而肝癌组织与癌旁组织比较差异无显著性（P>0.05）。肝癌组织中VEGF、survivin和c-myc 的mRNA表达上调,p53的mRNA表达下调。结论：STAT3
的异常活化可能发生在癌变的早期,在肝癌的形成和发展中可能起重要的促进作用。     

蛇床子素对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨蛇床子素对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法:人黑色素瘤细胞株A375细胞体外培养,将对数生长期的A375细胞以不同浓度的蛇床子素处理,MTT法检测A375细胞增殖;流式细胞术检测A375细胞凋亡;RTPCR法检测A375细胞Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达水平;Western blotting检测A375细胞IκB-α、p-NF-κB、NF-κB、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:蛇床子素可降低A375细胞增殖率以及Bcl-2 mRNA、p-NF-κB和Bcl-2蛋白表达水平,呈浓度依赖性;同时增加A375细胞凋亡率以及Bax mRNA、IκB-α、Bax蛋白表达水平,呈浓度依赖性,但对NF-κB表达无明显影响。结论:蛇床子素能诱导A375细胞增殖抑制和凋亡,呈浓度依赖性,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

H2-calponin在食管鳞癌中的表达及意义

目的: 探讨H2 钙调理蛋白(H2 calponin)在食管鳞癌中的表达及意义。方法: 免疫组化技术检测30例食管鳞癌患者癌组织及癌旁组织芯片中H2 calponin的表达水平;体外培养人食管鳞癌ECA109、TE 1细胞株和正常食管上皮Het 1a细胞;荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测食管鳞癌细胞株中H2 calponin的表达;将食管鳞癌TE 1细胞分为空白对照组（常规培养）、阴性对照组（转染空载体siRNA）和H2 calponin siRNA组（转染H2 calponin siRNA）,采用蛋白质印迹法测定细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、E 钙黏蛋白(E cadherin),波形蛋白以及基质金属蛋白酶 2(MMP 2)、MMP 9、内皮生长因子 A(VEGF A)、血管内皮生长因子 C(VEGF C)蛋白的表达;ELISA法测定各组细胞培养上清液中MMP 2,MMP 9和VEGF C含量;荧光定量PCR检测NF κB通路抑制剂PDTC处理前（0 h）及处理后0.5, 1, 2, 4, 8, 12 h H2 calponin mRNA的表达;蛋白质印迹技术检测H2 calponin及NF κB通路蛋白的表达。结果： 免疫芯片结果显示,食管鳞癌组织中H2 calponin表达量低于癌旁组织, H2 calponin阳性表达率与食管鳞癌患者性别、年龄、肿瘤部位及病理分级之间无明显相关性(P均>0.05);荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,食管鳞癌细胞中H2 calponin表达明显低于正常食管细胞(P<0.01);下调H2 calponin表达后,PCNA、E 钙黏蛋白和VEGF A表达无明显变化,而波形蛋白、MMP 2、MMP 9和VEGF C表达明显增加;ELISA结果显示,MMP 2、MMP 9和VEGF C分泌量明显增加(P<0.05);PDTC处理后可显著增加IκBα的蛋白表达进而恢复并上调H2 calponin的表达(P<0.01)。 结论： NF κB通路通过抑制H2 calponin表达保证波形蛋白,MMP 2,MMP 9,VEGF C持续表达,促进食管鳞癌细胞侵袭、转移发生。     

卵巢癌细胞对T细胞信号转导途径JAK-STAT的影响

目的　通过研究卵巢癌细胞对T细胞信号转导途径JAK STAT的影响 ,探讨其在卵巢癌免疫抑制中的作用。方法　分别采用MTT、流式细胞术、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法观察 3株卵巢癌细胞 (OVCAR3、CAOV3和SKOV3)培养上清液对CD8+ T细胞增殖和细胞周期及分泌细胞因子的影响 ;运用Western印迹方法检测在卵巢癌细胞培养上清液作用后CD8+ T细胞中JAK1、JAK3蛋白的表达和STAT3、STAT5的活化状态。结果　 (1 ) 3株卵巢癌细胞培养上清液皆能抑制CD8+ T细胞增殖 ,并使其阻滞在G1 /G0 期 ,分泌的细胞因子IFN γ显著降低 ,而白细胞介素 (IL) 1 0显著增高 ;(2 )与对照组比较 ,OVCAR3、CAOV3和SKOV3细胞培养上清液均能抑制CD8+ T细胞中JAK3的表达 ,JAK3蛋白平均吸光度 (A)值分别为 0 396± 0 0 1 2 ;0 40 0± 0 0 1 0 ;0 41 6± 0 0 1 5 ;0 656± 0 0 1 5 ;STAT5的活化也明显受抑 ,STAT5蛋白平均A值分别为 0 2 2 0± 0 0 1 0 ;0 2 1 6±0 0 0 5 ;0 2 2 3± 0 0 0 6 ;0 390± 0 0 0 1 ;对JAK1的表达无影响 ,只有OVCAR3细胞培养上清液使STAT3的活化受抑 (0 2 1 0± 0 0 1 0 ;0 393± 0 0 0 7)。结论　卵巢癌能抑制CD8+ T细胞信号转导途径JAK STAT的活化 ,从而抑制其增殖与活化 ,这可能是卵巢癌