转化生长因子β1正反义基因对人肺巨细胞癌细胞体内外增殖的影响

探讨人转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）正反义基因对人肺巨细胞癌细胞（ＰＬＡ－８０１Ｄ）增殖的影响及调控。方法通过基因转染方法,将ＴＧＦβ１正、反义基因分别导入ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞,观察转染和未转染细胞体内外增殖变化、ｎｍ２３基因和ｃ－ｍｙｃ基因表达以及细胞凋亡特征。结果与未转染细胞比较,正义ＴＧＦβ１基因转染细胞培养上清中ＴＧＦβ１活性增加,体外生长速度减慢,软琼脂细胞培养集落形成能力降低,裸鼠体内成瘤率下降约４７％,肿瘤的转移受到抑制。其机制可能与正义ＴＧＦβ１基因转染细胞ｎｍ２３基因表达增加,ｃ－ｍｙｃ基因表达减少以及诱发细胞凋亡有关。而反义ＴＧＦβ１基因转染细胞则出现相反结果。结论ＴＧＦβ１对ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞的体内外生长具有负调控作用     

nm23基因肿瘤转移抑制作用探讨

ｎｍ２３是人们研究比较多的一个肿瘤转移抑制基因。现已证实ｎｍ２３基因的低表达与包括乳腺癌、肝癌、恶性黑色素瘤和胃癌在内的许多肿瘤转移和预后有关。研究发现人类基因组中有两个ｎｍ２３基因,为ｎｍ２３Ｈ１和ｎｍ２３Ｈ２。普遍认为ｎｍ２３Ｈ１具有抑制癌转移作用。我们观察了ｎｍ２３基因在３组８种不同转移潜能人癌细胞系中的表达,进一步探讨ｎｍ２３在这些肿瘤细胞中的表达与转移的关系。材料与方法　（１）细胞培养：ＰＣ３、ＰＣ３Ｍ（人前列腺癌细胞系）;ＰＡａ、ＰＧ（人肺癌细胞系）;ＷＭ３５、ＷＭ１３４１ｂ、…     

人肿瘤鼠移植瘤株模型转移抑制基因nm23—H1 mRNA的表达

目的 ｎｍ２３基因与肿瘤移植瘤株转移的关系。 方法 应用地高辛标记的ｎｍ２３－Ｈ１反义ｃＲＮＡ探针原位杂交方法对人克隆化肝癌，人骨肉瘤，肾癌三种不同肿瘤的裸鼠移植瘤株模型（ＨＣＳ，Ｍ－ＯＳ，Ｍ－ＲＣＣ）中瘤内ｎｍ２３－Ｈ１进行检测。 结果ｎｍ２３Ｈ１ ｍＲＮＡ在在模型中均有不同程度快的表达，其中有较强转移能力的Ｈ－ＣＳ，和潜伏期短、侵袭生长速度快的Ｍ－ＲＣＣ杂交信号５０％为弱阳性，而Ｍ－ＯＳ仅有     

人肿瘤裸鼠移植瘤株模型转移抑制基因nm23-H1mRNA的表达

目的ｎｍ２３基因与肿瘤移植瘤株转移的关系。方法应用地高辛标记的ｎｍ２３┐Ｈ１反义ｃＲＮＡ探针原位杂交方法对人克隆化肝癌，人骨肉瘤，肾癌三种不同肿瘤的裸鼠移植瘤株模型（Ｈ┐ＣＳ，Ｍ┐ＯＳ，Ｍ┐ＲＣＣ）中瘤内ｎｍ２３┐Ｈ１进行检测。结果ｎｍ２３Ｈ１ｍＲＮＡ在三模型中均有不同程度快的表达，其中有较强转移能力的Ｈ┐ＣＳ，和潜伏期短、侵袭生长速度快的Ｍ┐ＲＣＣ杂交信号５０％为弱阳性，而Ｍ┐ＯＳ仅有２５％为弱阳性。结论ｎｍ２３的弱阳性表达可能和Ｈ┐ＣＳ生长速度及转移倾向有一定联系。     

壮骨镇痛胶囊对乳腺癌细胞ｎｍ２３-Ｈ１和ｃ-ｍｙｃ基因表达的影响

目的　观察壮骨镇痛胶囊对高转移人乳腺癌ＭＤＡ-ＭＢ-２３１细胞抑癌基因ｎｍ２３-Ｈ１和原癌基因ｃ-ｍｙｃ表达的影响,探讨壮骨镇痛胶囊抑制ＭＤＡ-ＭＢ-２３１细胞增殖和迁移的可能作用机制。方法　采用ＲＴ-ＰＣＲ法和免疫细胞化学法分别检测不同浓度壮骨镇痛胶囊含药血浆对ＭＤＡ-ＭＢ-２３１细胞ｎｍ２３-Ｈ１和ｃ-ｍｙｃ基因ｍＲＮＡ及其蛋白表达的影响,并分析其对ｎｍ２３-Ｈ１／ｃ-ｍｙｃ蛋白比值的影响。结果　５％壮骨镇痛胶囊含药血浆显著抑制了ＭＤＡ-ＭＢ-２３１细胞ｎｍ２３-Ｈ１和ｃ-ｍｙｃ基因的转录和翻译;１.２５％壮骨镇痛胶囊含药血浆抑制了ｎｍ２３-Ｈ１的转录和翻译以及ｃ-ｍｙｃ基因的翻译,对ｃ-ｍｙｃ基因的转录无显著影响;０.６３％壮骨镇痛胶囊含药血浆对ｎｍ２３-Ｈ１和ｃ-ｍｙｃ基因的转录和翻译均无明显影响;５％和１.２５％壮骨镇痛胶囊含药血浆显著提高了ＭＤＡ-ＭＢ-２３１细胞ｎｍ２３-Ｈ１／ｃ-ｍｙｃ蛋白比值,０.６３％壮骨镇痛胶囊含药血浆对ｎｍ２３-Ｈ１／ｃ-ｍｙｃ蛋白比值无显著影响。结论　不同浓度壮骨镇痛胶囊含药血浆对乳腺癌ＭＤＡ-ＭＢ-２３１细胞ｎｍ２３-Ｈ１和ｃ-ｍｙｃ基因的表达具有不同的作用,该药可能通过降低癌细胞ｃ-ｍｙｃ基因表达继而提高细胞中ｎｍ２３-Ｈ１／ｃ-ｍｙｃ蛋白比值来降低癌细胞的增殖和迁移能力。     

肿瘤血管生成与nm23基因表达及胃癌淋巴结转移的关系

目的 研究肿瘤血管生成与转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１的表达及胃癌淋巴结转移的关系。方法 对９３例胃癌手术切除标本,检测ｎｍ２３Ｈ１基因蛋白的表达,分析微血管密度和血管上皮生长因子的表达情况。结果 伴有淋巴结转移组ＭＶＤ、ＶＥＧＦ指数明显高于不伴有淋巴结转移组,而ｎｍ２３－Ｈ１的表达则相反同时ｎｍ２３低表达组的ＭＶＤ显著高于ｎｍ２３高表达组,Ｐ〈０．０５。结论ＭＶＤ、ＶＥＧＦ和ｎｍ２３在胃癌淋巴细胞     

nm23—H1等位基因缺失与大肠癌转移相关性研究

ｎｍ２３基因是近年来发现的与肿瘤转移表型抑制相关的基因，称之为转移抑制基因。ｎｍ２３基因的等位基因缺失、突变和低表达与多种人类肿瘤转移相关。ｎｍ２３基因包括ｎｍ２３－Ｈ１及ｎｍ２３－Ｈ２两种亚型。我们利用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术检测了２３例大肠癌及其相应正常粘膜基因组ＤＮＡｎｍ２３－Ｈ１等位基因缺失情况，结果发现５例存在ｎｍ２３－Ｈ１等位基因缺失。有淋巴结、肝或其它脏器转移者，ｎｍ２３－Ｈ１等位基     

正反义人乙酰肝素酶真核表达体系构建及其意义的研究

目的:构建正反义人乙酰肝素酶(HPA)的肝癌细胞克隆表达体系,研究其对肝癌细胞转移潜能的影响。方法:建立正反义人HPA真核表达载体,脂质体法转染高转移人肝癌细胞系HCC-P,G418选择培养,以RT-PCR和免疫组织化学检测HPA mRNA及蛋白表达。细胞计数,MTT实验测定细胞生长状况。裸鼠尾静脉注射转染肿瘤细胞,30 d后称肺脏质量,计数肺表面转移结节数,比较不同转染细胞的转移潜能。结果:限制性内切酶及测序证实载体构建成功;RT-PCR证实,转染正反义载体的细胞在HPA mRNA水平上相差10.13倍;免疫组织化学证实,HPA高效稳定表达于转染正义载体的细胞胞质及胞膜上;细胞生长曲线和MTT实验表明,转染基因对细胞生长无明显影响,P>0.05。注射转染反义肝癌细胞组荷瘤鼠肺脏质量和肺表面转移结节数较对照组显著减少,正义组则相反,P<0.01。结论:成功克隆正反义人HPA,并稳定转染HCC-P。HPA基因对肝癌细胞转移潜能具有促进作用,而反义基因则抑制肿瘤的生长。     

nm23－H1等位基因缺失与大肠癌转移相关性研究

ｎｍ２３基因是近年来发现的与肿瘤转移表型抑制相关的基因，称之为转移抑制基因。ｎｍ２３基因的等位基因缺失、突变和低表达与多种人类肿瘤转移相关。ｎｍ２３基因包括ｎｍ２３－Ｈ１及ｎｍ２３－Ｈ２两种亚型。我们利用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术检测了２３例大肠癌及其相应正常粘膜基因组ＤＮＡｎｍ２３－Ｈ１等位基因缺失情况，结果发现５例存在ｎｍ２３－Ｈ１等位基因缺失。有淋巴结、肝或其它脏器转移者，ｎｍ２３－Ｈ１等位基因缺失率为５７．１％（４／７），而无转移者为６．２％（１／１６）。两组比较差异有显著性意义（Ｐ＜０．００５）。ｎｍ２３－Ｈ１等位基因缺失与肿瘤大小、部位及分化程度无显著相关（Ｐ＞０．０５）。结果表明，ｎｍ２３－Ｈ１基因在抑制大肠癌转移方面起重要作用。     

妊娠滋养细胞肿瘤nm23H1和PCNA的表达及其临床意义

目的 观察ｎｍ２３Ｈ１表达与妊娠滋养细胞肿瘤转移及细胞地殖状态的关系，并观察化疗对滋养细胞肿瘤细胞增殖状态的影响。方法 采用免疫组化方法检测４８例妊娠滋养细胞肿瘤手术标本、１０全恶性循环葡萄胎和１０例正常早孕绒毛组织刮宫标本中ｎｍ２３Ｈ１和ＰＣＮＡ的表达。结果 正常早孕绒毛或葡萄胎的ｎｍ２３Ｈ１，表达较妊娠滋养细胞肿瘤强（Ｐ〈０．０１），妊娠滋养细胞肿瘤中侵蚀性葡萄胎较绒癌强（Ｐ，０．０５），ＷＯ     

人COX-2基因反义真核表达载体对胃癌转移的影响

目的：在成功构建人COX-2基因反义真核表达载体的基础上,研究COX-2基因对人胃癌细胞株SGC-7901转移能力的影响。方法：实验分为COX-2基因反义真核表达载体转染的人胃癌细胞株SGC-7901转染组、COX-2抑制剂SC236处理组（SGC-7901细胞培养基内含100μmol/L SC236）和对照组（SGC-7901细胞）,并分别采用细胞体外侵袭实验,内皮细胞体外迁移实验,观察各组细胞体外转移的情况。采用裸鼠皮下移植瘤抑制实验,用转染和未转染的SGC-7901细胞按每毫升5×10~7个的细胞悬液分别注射于BALB/C-nu/nu无胸腺裸鼠背部皮下,SC236处理组按3mg/（kg·d）剂量于接种SCC-7901细胞10min后,由尾静脉注射,隔日1次。各组6周后处死动物,观察皮下移植瘤的生长情况。并用Western blot法检测各组细胞VEGF及MMP-2蛋白的表达。结果：体外侵袭实验、促内皮细胞体外迁移实验结果显示,与对照组相比,转染组和SC236处理组迁移的肿瘤细胞和内皮细胞均减少（P〈0.01）;裸鼠皮下移植抑制实验结果显示,转染组和SC236处理组荷瘤鼠移植瘤的生长受到抑制;Western blot结果显示,转染组和SC236处理组细胞VEGF及MMP-2蛋白的表达下降。结论：反义COX-2基因能抑制SCG-7901细胞的转移能力,其机制可能与其抑制肿瘤的血管生成、减少MMP-2的表达有关。     

双调蛋白诱导乳腺癌细胞表达尿激酶型纤溶酶原活化物

目的:在人乳腺癌模型上研究双调蛋白与尿激酶型纤溶酶原活化物表达之间的关系.方法:乳腺癌NS2T2A1细胞经双调蛋白反义cDNA质粒转染后经潮霉素B筛选获得表达双调蛋白反义RNA的AR-AS1及AR-AS3两个细胞克隆,转染空载体获得NS2T2A1 V对照细胞,接种至裸鼠皮下形成肿瘤.测定细胞及肿瘤uPA表达水平,并研究uPA与细胞侵袭性之间的关系.结果:AR-AS1及AR-AS3细胞体外及体内uPA表达均被抑制.外源性双调蛋白可刺激对照细胞uPA的表达,并部分恢复AR-AS1及AR-AS3细胞uPA的表达水平.双调蛋白反义cDNA质粒转染及抗uPA抗体均导致乳腺癌细胞体外侵袭性的降低.结论:在乳腺癌模型上,uPA表达与肿瘤细胞的侵袭密切相关.双调蛋白反义RNA表达可有效地抑制uPA的表达,进而抑制肿瘤细胞的侵袭性.     

利用荧光素酶标记的肿瘤细胞建立活体成像动物模型

目的建立稳定表达荧光素酶的人乳腺癌细胞株并构建适用于小动物活体成像系统观察的裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用脂质体将携带荧光素酶基因的质粒转染到人乳腺癌细胞株MCF-7中,G418筛选出稳定表达荧光素酶的单克隆细胞株。扩增后接种于裸鼠,建立裸鼠皮下移植瘤模型,通过活体动物成像系统监测肿瘤的生长过程。结果获得了高水平稳定表达荧光素酶的乳腺癌单克隆细胞株,该单克隆细胞株与母细胞系MCF-7具有相似的生长特性。将稳定表达荧光素酶的克隆接种于裸鼠皮下可成瘤,小动物活体成像系统能准确监测肿瘤细胞在体内的生长过程。结论成功建立了稳定表达荧光素酶的乳腺癌单克隆细胞株。采用活体动物成像系统构建的裸鼠皮下移植瘤模型是拓展肿瘤体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型。     

血管内皮生长因子反义RNA对裸鼠食管癌细胞增殖和凋亡的影响意义

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）反义RNA对裸鼠食管癌移植瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法：将转染VEGF反义eDNA和空载体peDNA3．1的食管癌细胞株TE-1分别接种在裸鼠体内；应用免疫组化法、RT-PCR法检测移植瘤组织中VEGF蛋白和mRNA表达情况；流式细胞仪和透射电镜检测肿瘤细胞增殖及凋亡情况。结果：反义组肿瘤组织中VEGF蛋白和mRNA的表达降低，肿瘤细胞的细胞器发生扩张和肿胀、核染色质边集、凝集成块等凋亡形态学改变；Go／G，期细胞明显增多，S期细胞明显减少，细胞增殖指数降低；对照组和空载体组细胞凋亡较少。结论：VEGF反义RNA能抑制裸鼠食管癌细胞的增殖，诱导细胞凋亡，为食管癌基因治疗基础研究提供依据。     

VEGF反义RNA 抑制裸鼠体内食管癌细胞生长的实验研究

 目的 探讨VEGF反义RNA对食管癌细胞在裸鼠体内生长的影响。方法 观察转染VEGF反义RNA的食管癌细胞TE-1在裸鼠体内成瘤性；应用免疫组化法、RT—PCR法检测移植瘤组织中VEGF蛋白及mRNA表达和MVD；用流式细胞仪和透射电镜检测细胞凋亡情况。结果 转染VEGF反义RNA的TE-1细胞在裸鼠体内肿瘤形成的潜伏期明显延长，所形成肿瘤的重量和体积小于对照组及空载体组。肿瘤组织中VEGF蛋白和mRNA的表达降低，MVD降低；肿瘤细胞发生明显的凋亡形态学改变；G0／G1期细胞明显增多，S期细胞明显减少，细胞增殖能力降低。结论 VEGF反义RNA能抑制裸鼠体内TE-1细胞的生长，减少肿瘤内血管的生成，增加细胞凋亡；为食管癌的基因治疗提供了一定的实验依据。     

Stimulation of tumor growth by human soluble intercellular adhesion molecule-1

Because serum levels of soluble intercellular adhesion molecule-1 (sICAM-1) are elevated in cancer and sICAM-1 is angiogenic, we tested the ability of sICAM-1 to promote tumor growth. Our preliminary experiments showed that exogenous sICAM-1 significantly stimulated the growth of human tumors in vivo. Human fibrosarcoma transfectants, which express ICAM-1, produce ICAM-1 on the cell surface and release sICAM-1 into the medium without any apparent effect on cell growth in vitro. We found that conditioned medium from sense ICAM-1 transfectants compared with mock or antisense ICAM-1 transfectants stimulates endothelial cell migration in vitro and neovascularization in the chick chorioallantoic membrane assay. Tumor cells transfected with sense constructs form faster growing tumors than mock- and antisense-transfected cells in both chick embryos and nude mice models. Serum levels of human sICAM-1 from nude mice bearing sense ICAM-1 transfectants correlate positively with tumor weight. Sense ICAM-1 transfectants are more proliferative and induce more blood vessel formation than mock and antisense transfectants in nude mice. Because expression of ICAM-1 does not affect tumor cell growth in vitro, the angiogenic activity of sICAM-1 produced by sense ICAM-1 transfectants may be involved in the stimulation of tumor growth. Therefore, sICAM-1 may perform dual functions that are essential for tumor growth: angiogenesis and escape from immune surveillance.     

卵巢癌高频转移细胞模型中nm23-H1基因表达的相关性研究

目的筛选高频转移卵巢恶性肿瘤细胞,研究不同转移潜能的细胞和 nm23的相关性。方法通过反复动物接种和体外培养,观察动物肺转移状况,筛选高频转移细胞株,比较原发肿瘤和转移肿瘤的特征,并应用 North-ern-blot 方法测定各类肿瘤细胞 nm23 mRNA 表达水平。结果 8株卵巢恶性肿瘤细胞中4株有较高转移潜能。多次培养接种可筛选出高频转移细胞亚群。测定各类细胞 nm23 mRNA 表达水平与肿瘤转移特性呈负相关。结论由基因分子水平决定的肿瘤转移趋势在不同肿瘤种类及细胞亚群中有明显差异;卵巢癌中 nm23 mRNA 和蛋白的表达与其转移能力的降低有密切关系,可作为判定卵巢癌预后的敏感指标。     

Inhibition of ovarian cancer metastasis by adeno-associated virus-mediated gene transfer of nm23H1 in an orthotopic implantation model

Ovarian cancer is one of the most threatening malignant tumors in females due to the frequent occurrence of metastasis that precedes diagnosis. The present study explored the possibility of preventing ovarian cancer metastasis by promoting nm23H1 expression through adeno-associated virus (AAV)-mediated gene transfer. A cell line of high metastatic potential, SW626-M4, was derived by in vivo selection and used to establish an ovarian cancer metastasis model in the mouse. Liver metastasis and animal survival time were measured after transfer of a recombinant adeno-associated viral vector expressing nm23H1 (AAV-nm23H1) into the aforementioned model. Intraperitoneal injection of AAV-nm23H1 into this orthotopic implantation model of ovarian cancer resulted in (1) expression of the exogenous gene in more than 95% of tumor cells in situ in nude mice; (2) a 60% reduction in the number of animals developing liver metastases; and (3) a 35-day prolongation of median survival time compared with the untreated host group. In conclusion, the results support the feasibility of induction of nm23H1 expression through gene transfer as a therapeutic strategy for preventing metastases and prolonging host survival time, and indicate that AAV vectors deserve attention in the design of future gene therapy approaches to achieving long-term expression of curative genes in vivo.     

Comparison of the growth and metastasis of four human intestinal tumor cell line xenografts

The growth and metastasis of four human intestinal tumor cell lines: one duodenal adenocarcinoma (HTB-40) and three adenocarcinomas of the colon (CCL-218, CCL-222 and HT-29) have been compared in vitro and in vivo in nude mice. HTB-40 was the fastest growing cell line in vitro with a doubling time (DT) of 14.8 h. CCL-218 and CCL-222 grew more slowly in vitro with doubling times of 21.6 and 22.8 hours, respectively. All three of these tumors grew more slowly in vivo with doubling times ranging from 39.1 h (CCL-218 in male nude mice) to 65.3 h (CCL-222). The growth of CCL-218 cells was significantly slower in female nude mice DT 51.0 h). HT-29 was the slowest growing in vitro (DT 23.8 h) and in vivo (DT about 100 h). HT-29 also showed the greatest discrepancy between its DT measured in vivo as compared to in vitro, suggesting a greater clonogenic cell loss from HT-29 tumors in vivo. Histologic evaluation of these tumors grown subcutaneously in nude mice showed all to be anaplastic and to produce liver micrometastases. However, more extensive abdominal and liver metastases were observed in the nude mice injected with HT-29 cells, and some of these metastases had morphologic features of moderately well-differentiated epithelium. These results indicate the usefulness of the HT-29 tumor cell line as an experimental model of metastasis from a human colonic adenocarcinoma.